人参皂苷Rb1对肺动脉高压大鼠钙库操纵性钙内流的影响

目的:观察在体人参皂苷Rb1预处理对慢性低氧(CH)肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞钙库操纵性钙内流(SOCE)的影响。方法:将30只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(control组)、CH肺动脉高压模型组(CH组)和Rb1(30 mg/kg)组,每组10只。检测各组右心室收缩压、右心室质量指数和肺动脉血管环张力。体外培养大鼠肺动脉平滑肌细胞,采用细胞动态荧光检测游离Ca^(2+)浓度。分别采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和western blotting检测基质相互作用分子2(STIM2)和钙释放激活钙调节因子2(Orai2)基因和蛋白表达。结果:与CH组比较,Rb1组大鼠右心室收缩压和右心室质量指数均明显降低(P<0.01),环匹阿尼酸(CPA)诱发的肺动脉收缩张力和钙内流量明显减少(P<0.01),STIM2和Orai2 mRNA和蛋白相对表达量明显降低(P<0.05)。结论:Rb1可明显改善CH肺动脉高压大鼠的肺动脉压,其作用机制可能与减弱肺动脉SOCE功能和STIM2和Orai2表达有关。

钙库操纵性钙内流参与调节ox-LDL诱导的血管内皮细胞通透性改变

目的利用体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),探讨钙库操纵性钙内流(store-operated calcium entry,SOCE)在氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的血管内皮细胞通透性改变中的作用。方法体外培养HUVECs,传代3次后,用于检测跨内皮电阻(transendothelial electrical resistance,TER)的细胞随机分为对照组和不同剂量ox-LDL(10、25、50、100μg/mL)干预组(n=3)。培养于载玻片上的细胞随机分为对照组和ox-LDL 24 h组、ox-LDL 48 h组,免疫荧光检测细胞骨架蛋白F-actin及细胞连接蛋白VE-cadherin的分布,免疫印迹检测VE-cadherin的含量。细胞孵育钙离子探针(Fluo-3/AM)后,激光共聚焦检测细胞内钙含量(对照组、ox-LDL组、ox-LDL+2APB组)以及SOCE(对照组、ox-LDL 24h组、ox-LDL 48 h组)。结果低剂量的ox-LDL(10、25μg/mL)对TER无明显影响,高剂量ox-LDL(50、100μg/mL)在6 h内对TER影响不明显,但在12 h引起TER降低(P<0.05),此效应在24 h和48 h更加明显(P<0.05)。Ox-LDL(100μg/mL)处理后24、48 h,VE-cadherin的表达减少(P<0.05),并影响F-actin的形态和分布;HUVECs的游离钙浓度显著增加(P<0.05),此效应被SOCE抑制剂2-APB阻断,2-APB能够减弱ox-LDL对TER的影响。ox-LDL(100μg/mL)处理48 h后,SOCE的振幅显著降低(P<0.05)。SOCE降支速度在ox-LDL处理24 h后呈现降低趋势,而在ox-LDL处理48 h后呈显著下降(P<0.05)。结论ox-LDL通过延长内皮细胞SOCE的持续时间上调细胞内游离钙浓度,影响细胞骨架的排列和细胞间连接的完整性,引起细胞通透性的增加。

异紫堇啡碱对血管平滑肌钙内流和钙释放的影响

目的研究异紫堇啡碱（ＩＳＯＣ）对血管平滑肌钙内流和钙释放的影响，以初步阐明其作用方式。方法利用兔胸主动脉螺旋条标本观察ＩＳＯＣ对去甲肾上腺素（ＮＡ）及ＫＣｌ量效曲线的影响和对无钙液中ＮＡ、ＣａＣｌ２复钙、咖啡因缩血管效应的影响。结果ＩＳＯＣ１０μｍｏｌ·Ｌ－１对ＮＡ的量效曲线呈非竞争性拮抗作用，而对高钾的作用则不明显。在无钙液中，ＩＳＯＣ１００μｍｏｌ·Ｌ－１能明显抑制ＮＡ所致的收缩及复钙后外钙内流诱发的收缩，ＩＳＯＣ１０及３０μｍｏｌ·Ｌ－１则只作用于前者；各实验浓度的ＩＳＯＣ对咖啡因在无钙液中的缩血管作用均无影响。结论ＩＳＯＣ抑制受体中介的钙释放和钙内流，但不是典型的钙拮抗剂。

芍药苷下调PC12细胞酸敏感离子通道1a的表达拮抗酸诱导的钙内流

酸敏感离子通道（acid sensing ion channels,ASICs）是一类能被细胞外H＋激活的阳离子通道,其中的ASIC1a亚基能介导钙的内流,参与了脑缺血缺氧。

钙池排空操纵的外钙内流决定甘草诱导MGC-803细胞凋亡

用 EGTA螯合胞外 Ca2 +和异搏定抑制钙通道 ,研究胞外 Ca2 +在甘草诱导 MGC- 80 3细胞中的作用 .流式细胞仪检测凋亡峰和 DNA ladder分析均表明 ,EGTA和异博定阻断细胞凋亡 .分别以 PI或 Rh1 2 3活染后的相应荧光强度表示细胞膜通透性和线粒性膜电位 (ΔΨm) .结果表明 ,细胞膜通透性增强和线粒体 ΔΨm 下降均为细胞凋亡的早期事件 ,EGTA和异博定均可抑制细胞膜通透性增强 ,但 EGTA促进线粒体 ΔΨm 下降 ,而异博定作用相反 .进一步经 PI和 Hoechst33342荧光双染后同时观察细胞膜通透性和细胞核形态 .结果表明 ,凋亡细胞均可 PI着色 ,EGTA和异博定完全阻断染色质凝聚 ,但不能完全抑制细胞膜通透性变化 .借助 Ca2 +探针 Fluo- 3/AM研究凋亡时胞内游离钙的时相变化 ,发现 Ca2 +升高也是细胞凋亡的早期事件 . EGTA和异博定轻微促进凋亡早期 Ca2 +升高 ,但抑制随后 Ca2 +的继续升高 .所有结果提示 ,钙池排空操纵的外 Ca2 +内流在甘草诱导 MGC- 80 3细胞凋亡中发挥决定性的作用 .

皂苷提取物宫血宁缩宫作用与细胞外钙内流关系的研究

目的探讨皂苷类提取物宫血宁引起的大鼠离体子宫收缩作用与细胞外钙内流的关系。方法应用离体子宫张力测定法,观察不同Ca2+浓度及Ca2+通道阻滞剂对宫血宁引起的大鼠离体子宫收缩作用的影响。结果无钙的台氏平衡液中,宫血宁的浓度从25μg/ml增至200μg/ml都不能引起大鼠离体子宫节律性收缩;在半钙和全钙的台氏平衡液中宫血宁能引起大鼠离体子宫节律性收缩,并与宫血宁的剂量呈显著正相关;Ca2+通道阻滞剂能明显抑制宫血宁和缩宫素引起的子宫收缩,但同缩宫素相比,宫血宁引起的子宫收缩对Ca2+通道阻滞剂更敏感。结论皂苷类提取物宫血宁的缩宫作用依赖于细胞外钙的存在,其作用机制可能是通过促进平滑肌细胞外钙内流来实现的。

硫酸链霉素对豚鼠螺旋神经节细胞膜钙内流的影响

目的 观察硫酸链霉素是否影响耳蜗螺旋神经节细胞 (spiralganglioncells,SGC)胞膜去极化时细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i)升高的能力 ,并观察这种影响在不同药物浓度下以及相同药物浓度对蜗轴不同部位的螺旋神经节细胞的作用的异同 ,旨在深入探讨硫酸链霉素急性耳毒性的分子生物学机制。方法 豚鼠全身麻醉后断头活杀 ,酶 机械法分离获得单离的SGC。 10 μmol L的钙敏荧光探针Fluo 3 AM负载 30min后用ACASUltima型激光扫描共聚焦显微镜观察各种条件下SGC[Ca2 + ]i的动态变化。结果 ①SGC[Ca2 + ]i在标准细胞外液灌流过程中保持稳定。② 15 0mmol L的高钾细胞外液灌流导致 12 14个细胞的 [Ca2 + ]i明显升高 ,而高钾无钙细胞外液灌流仅有 1 10个细胞[Ca2 + ]i 明显的升高。③经 1mmol L、0 .1mmol L、0 .0 1mmol L硫酸链霉素作用后 ,再灌流高钾细胞外液则分别有 0 9、6 14、7 13个细胞 [Ca2 + ]i 升高。④经 0 .0 2mmol L硫酸链霉素作用后 ,对来源于顶回和底回的SGC灌流高钾细胞外液分别有 5 10和 0 15个细胞 [Ca2 + ]i 升高。结论 高钾细胞外液灌流SGC[Ca2 + ]i 明显升高 ,钙升高的来源为细胞外钙离子的内流。硫酸链霉素可以阻断这种钙离子的内流 ,其阻断作用具有浓度和部位依赖性。

七氟烷吸入麻醉对大鼠认知功能影响的钙内流机制研究

目的:探讨七氟烷吸入麻醉对大鼠认知功能影响及细胞钙内流增强的参与作用。方法:SD大鼠随机分为4组:对照组、1.5%七氟烷吸入2h组(低剂量组)、3.0%七氟烷吸入2h组(高剂量组)及3.0%七氟烷吸入2h+钙通道阻滞剂硝苯地平组(硝苯地平组)。Morris型水迷宫测试各组大鼠认知功能,Western Blotting分析各组大鼠左侧海马IL-6/IL-8、TNF-α、细胞凋亡蛋白Bax/Bcl2及Caspase9的表达。结果:七氟烷组大鼠认知功能明显受到影响,IL-6/IL-8、TNF-α、细胞凋亡蛋白Bax及Caspase9表达明显上调,而Bcl2表达明显降低。硝苯地平组异常的认知功能及细胞凋亡蛋白得到明显恢复。结论:IL-6/8及细胞凋亡蛋异常表达及钙内流增强参与了七氟烷引起的大鼠认知功能障碍,硝苯地平可以明显恢复异常的大鼠认知功能障碍。

抗高血压因子对大鼠血管平滑肌钙内流的影响

实验观察了从原发性高血压病患者红细胞中提取的抗高血压因子(AHF)对自发性高血压大鼠(SHR)、肾性高血压大鼠(RHR)和正常血压的WKY大鼠和Wistar大鼠主动脉和肠系膜动咏平滑肌Ca^(2+)内流的影响。结果表明,SHR和RHR的肠系膜动脉Ca^(2+)内流显著高于主动脉;AHF可显著抑制SHR和RHR主动脉和肠系膜动脉Ca^(2+)内流,抑制作用呈剂量依赖性,且对肠系腆动脉Ca^(2+)内流抑制作用更明显;AHF也可抑制正常动物血管平滑肌Ca^(2+)内流。本工作提示,AHF的降压机制可能与其抑制血管平滑肌特别是小动脉血管平滑肌Ca^(2+)内流有关。

蛋白质酪氨酸磷酸化和氯通道参与瞬时受体电位蛋白介导钙池耗竭引起的钙内流

目的 探讨蛋白质酪氨酸磷酸化与Cl-通道对瞬时受体电位 (TRP)蛋白参与的Ca2 + 池耗竭引起的Ca2 + 内流(SOC)的调控作用。方法 采用脂质体转染和Fura 2 /AM荧光光度法 ,测定胞浆游离Ca2 +浓度 ( [Ca2 + ]i) ,比较转染人源性TRP1 (hTRP1 )和人源性TRP3 (hTRP3 )cDNA对毒胡罗卜素 (TG)引起的Ca2 + 内流的作用 ,并观察酪氨酸激酶抑制剂染料木黄酮、Cl-通道阻断剂呋塞米和 4,4 二异硫氰基芪 2 ,2 二磺酸 (DIDS)对其的影响。结果 HEK2 93细胞转染hTRP1cDNA后 ,TG引起的Ca2 + 内流显著增加 ;转染hTRP3cDNA则无明显影响。 5～ 3 0 μmol·L-1染料木黄酮、1～ 8μmol·L-1呋塞米、0 .5～ 1μmol·L-1DIDS对转染hTRP1cDNA细胞的TG诱发的Ca2 + 内流均有抑制作用。结论 hTRP1蛋白可能是HEK2 93细胞SOC的物质基础 ;酪氨酸激酶和Cl-通道均参与HEK2 93细胞SOC的调控 。

模拟缺血对心室肌细胞钙内流和钾外流的影响

目的观察模拟缺血对心室肌细胞L-型钙通道和ATP敏感钾通道的影响。方法实验用胶原酶酶解法急性分离豚鼠心室肌细胞,利用全细胞膜片钳的方法记录心室肌细胞的L-型钙电流(Ica.L)和ATP敏感钾电流(IKATP)。采用低氧、无糖、高钾、高乳酸和酸中毒综合方式模拟缺血灌流,造成细胞的模拟缺血。结果模拟缺血时,Ica.L明显受到抑制,IKATP增加,后一效应能被优降糖所阻断。结论模拟缺血时Ica.L明显受到抑制,IKATP增加,可能是导致心室肌细胞动作电位时程缩短的主要因素之一。

ET－1，NO和缺氧对肺动脉平滑肌细胞钙内流及胶原合成的影响

肺血管平滑肌细胞是肺血管收缩反应的主要执行者，也是肺血管结构重建的重要参与者。本研究观察了内皮素１（ＥＴ１），一氧化氮（ＮＯ）和缺氧对培养的新生小牛肺动肺平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）钙内流以及胶原合成的影响。结果表明ＥＴ１和缺氧可促进ＰＡＳＭＣ的钙内流，ＮＯ供应剂硝普钠（ＳＭＰ）可抑制ＥＴＩ诱导的钙内流，其作用呈剂量依赖性，ＳＮＰ还可以剂量依赖地抑制ＰＡＳＭＣ的胶原合成，而缺氧可促进ＰＡＳＭＣ的胶原合成。

丙泊酚通过促进小泛素化相关修饰蛋白1表达增加抑制神经母细胞瘤细胞系钙内流水平变化

目的立足于小泛素化相关修饰蛋白（SUMO）化修饰这一蛋白质翻译后修饰的全新角度，通过研究丙泊酚对细胞蛋白SUMO化修饰和钙内流的变化探讨丙泊酚的全身麻醉机制。方法采用Western印迹法观察丙泊酚对神经母细胞瘤细胞系（SHSYSY）SUM01化水平变化的影响。并通过脂质体转染法将SUMO特异性蛋白酶（SENP）1导入3×Flag—SUMOlSHSY5Y细胞系降低SUM01化水平，以观察丙泊酚对细胞钙内流变化的影响。采用Fluo一3AM钙离子荧光测定法测定细胞内钙离子浓度。结果以50“mol／L丙泊酚分别孵育3×Flag—SUM01一SHSY5Y细胞系0、30、60、120rain，随着处理时间的延长，SUMO化水平升高，且与蛋白结合状态的SUMO增加，游离态SUMO减少。以5、10、25、50ffmol／L丙泊酚孵育细胞60rain，细胞蛋白SUMO化水平随丙泊酚浓度增加而升高。临床浓度丙泊酚（50Ⅱtool／L）引起细胞钙内流呈双向性变化，在加入丙泊酚的最初数分钟，细胞内钙离子迅速增加，约10～15min达到峰值，后逐渐降低，以45～60min为转折点，随后逐渐低于对照组，与细胞内SUMO化水平变化趋势相同。与0umol／L相比，50、37．5、25ffmol／I。丙泊酚作用60min后细胞内钙离子荧光值显著降低（P值均d0．05），细胞内钙离子浓度明显受到抑制。转入野生型SENPl的细胞中丙泊酚（50~mol／L）对其钙内流影响的双向性消失，细胞内钙离子荧光值与溶剂对照组的差异无统计学意义（P〉O．05）；而在表达突变体SENPl和空载体的细胞中，丙泊酚对钙内流的抑制性影响仍然存在，细胞内钙离子荧光值均显著低于溶剂对照组（P值均d0．05）。结论丙泊酚通过诱导3×Flag—SUM01一SHsY5Y细胞系SUMO化水平表达增加抑制细胞钙内流变化，这也许是丙泊酚发挥抑制效应的全身麻醉机制之一。

视觉系统中钙库操纵钙内流通路的研究进展

钙库操纵的钙通道(store operated Ca2+channel,SOCC)和钙库操纵的钙内流(store-operated calcium entry,SOCE)普遍存在于细胞之中,是非兴奋细胞主要的钙内流方式,参与了机体众多的生理过程。许多眼科疾病的发生和发展与SOCE的异常密切相关。本文就近年来对SOCE途径的机制、STIM和Orai不同亚型的结构及在眼科疾病中的作用研究进行了回顾,以期为眼科疾病治疗提供新的思路。

高低转移性乳腺癌细胞STIM1表达与钙内流差异比较

目的探讨基质相互作用分子1(STIM1)在高低转移性的乳腺癌细胞中的表达差异以及对钙库调节钙内流(SOCE)的影响。方法选取常见的高转移性乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞与低转移性乳腺癌细胞MCF-7作为细胞模型,用划痕试验检测两种细胞的迁移能力,应用实时荧光定量PCR检测两种细胞中STIM1的mRNA表达,用Western blot检测其蛋白水平,用激光共聚焦显微镜检测两种细胞中SOCE的差异。结果划痕实验结果显示,MCF-7细胞在24 h和48 h的迁移细胞数都明显低于MDA-MB-231细胞24 h与48 h的迁移细胞数(P<0.01)。STIM1 mRNA在MCF-7细胞与MDA-MB-231细胞中的相对表达量分别为1.001 9±0.074 4和6.338 8±1.046 7,差异有统计学意义(P<0.05)。STIM1蛋白在MCF-7细胞与MDA-MB-231细胞中的相对表达量分别为0.530 2±0.177 8和1.296 8±0.075 8,差异有统计学意义(P<0.01)。MCF-7与MDA-MB-231细胞中SOCE引起的外钙内流相对比例分别为1.036 3±0.413 5和4.145 8±1.045 0,差异有统计学意义(P<0.01)。结论高转移性乳腺癌细胞中存在STIM1高表达和钙内流增高,这可能是其实现高转移性的机制之一。

库容性钙内流通道调节剂的研究进展

文摘:库容性钙内流(CCE)通道是目前研究较热门的一种离子通道,其开放与关闭由内质网/肌浆网中Ca2+贮量来调控。它广泛存在于兴奋性和非兴奋性细胞中,参与多种形式的细胞活动,如肌肉收缩、神经递质释放、突触适应、细胞分化和死亡等,具有重要的生理学意义。开发和研制特异性CCE通道调节剂,不仅可促进实验研究的深入,而且可能为临床治疗相关疾病提供新的思路。

容积性钙内流与花生四烯酸介导性钙内流之间的相互作用(英文)

目的 在人胚肾细胞 (HEK2 93cells)研究容积性钙内流和花生四烯酸激活性钙内流的相互作用。方法 采用荧光探针Fura2 /AM技术测定HEK2 93细胞内钙对花生四烯酸、Thapsigargin反应变化。结果 容积性钙内流可被花生四烯酸明显抑制 ,花生四烯酸所致钙内流亦可被容积性钙内流激动剂所抑制 ,这种交互抑制并非由药物化学性互相影响 ,肌浆网钙泵的抑制 ,钙池耗竭 ,或来自于容积性钙内流本身。相反 ,这种抑制可能与容积性钙内流激活过程和花生四烯酸激活过程相互作用有关。结论 容积性钙内流与花生四烯酸所致的钙内流呈现相互抑制作用 。

容量性钙内流通道的分子代表

细胞内钙库排空产生一种信号 ,诱导细胞膜上的钙库操纵的钙通道 (SOC)开放 ,使Ca2 + 由细胞外进入细胞内 ,称为容量性钙内流 (CCE) ,或钙释放激活的钙通道 (CRAC) ,可能由果蝇一过性受体电位 (trp)和trp样 (trpl)基因编码。钙库排空和通道开放之间的偶联机制不清 ,目前主要提出三种机制 :(1)弥散信使 ;(2 )蛋白质 蛋白质之间的相互作用 ;(3)囊泡分泌。本文综述了CCE的分子代表。

轴突损伤与变性中钙内流机制

神经轴突损伤、变性与Ca^(2+)失衡关系密切。大量实验证明,Ca^(2+)内流是触发不可逆的神经变性的重要因素。本文主要就Ca^(2+)内流相关离子、机制和模式进行较详细的综述。