青春前期女童钙感应受体基因多态性与骨量关系

目的了解我国青春前期女童钙感应受体（CASR）A986S基因多态性分布并探讨其对骨量的影响。方法选择153名9～11．5岁未月经初潮的健康女童，采用双能X线骨密度仪（DXEA）检测对象全身、L1—L4腰椎、左侧近端股骨的骨矿含量、骨密度以及体成分。采用等位基因特异性突变扩增PCR技术检测CASRA986S多态性。结果152名对象CASR基因A986S多态性基因型的分布频率分别为：野生型纯合子（AA）91．44％，杂合子（AS）7，89％，突变型纯合子（SS）为0．67％，研究对象基因型中含有s等位基因者TBBMD、TBBMC，L1-L4LSBMD均显著低于基因型中不含S等位基因者（P〈0．05）。其中含S等位基因者TBBMD比无S等位基因者低5％，TBBMC下降了约10％。结论CASRA986S基因多态性与骨量有关。有S等位基因者TBBMC、TBBMD显著低于无S基因者。

胞外钙调节成骨细胞和成骨前体细胞内甲状旁腺素相关肽表达

以往研究表明,甲状旁腺素相关肽在绝经后女性骨质疏松患者中骨的合成过程中发挥重要作用。在细胞水平上,甲状旁腺素相关肽能促进成骨细胞的募集并阻止成骨细胞和骨细胞的凋亡。在发挥骨吸收作用的破骨细胞周围,其钙离子浓度远大于血浆钙离子浓度。因此,在成骨细胞发挥再吸收活性的附近区域,其细胞外钙离子浓度可能有所升高。该研究意在估计细胞外钙对成骨细胞内甲状旁腺素相关肽表达的调节作用。成人间充质干细胞可以通过标准方法进行培养和分型。通过免疫放射分析测定释放到培养基里的甲状旁腺素相关肽,而通过实时PCR估计甲状旁腺素相关肽、骨钙素和Runx2mRNA的表达水平。把钙离子浓度从1mmol升高到5mmol并持续24h结果导致甲状旁腺素相关肽水平升高4～6倍。钙离子浓度的升高同样增加了甲状旁腺素相关肽mRNA的表达水平。钙对甲状旁腺素相关肽释放的刺激效应在提高钙离子浓度的60min内出现。细胞外钙感应受体激动剂新霉素能够模拟钙离子的作用,但是MEK/MAPK抑制剂PD98059却能消除钙离子和新霉素产生的效应。高水平的细胞外钙能够提高成人间充质干细胞的矿化作用和骨钙素的表达水平,但是新霉素不能模拟产生该效应。研究结果表明,在成人间充质干细胞中,细胞外钙离子水平的升高能增加甲状旁腺素相关肽及其mRNA的表达。细胞外钙感应受体的激活能模拟钙对甲状旁腺素相关肽的效应,而抑制MAPK信号通路又可减少该效应的发生。

白细胞介素6与钙感应性受体基因多态性对青春期女童骨量增长的交互作用

目的探讨白细胞介素6（interleukin-6，IL-6）与钙感应性受体（calcium sensing receptor，CASR）基因多态性对青春期女童骨量增长的交互作用。方法 选择228名9～11岁半未月经初潮的健康女童进行两年追踪，采用双能X线骨密度仪检测对象追踪前后全身、左侧近端股骨（包括股骨颈、大转子、粗隆间和华氏三角区）和L1-L4腰椎骨矿含量（bone mineral conlenl，BMC）和骨密度（bone mineral density，BMD），采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术检测IL-6—634C／G位点多态性，等位基因特异性突变分离扩增-PCR技术检测CASR A986S位点多态性。结果 176名女童完成整个研究。IL-6基因-634C／G和CASR基因A986S位点多态性与青春期女童骨量增长有关联，IL-6基因-634C／G位点CG＋GG基因型女童全身和股骨大转子BMD较CC基因型分别低25．7％和20．6％，CASR基因A986S位点AS＋SS基因型女童L1-L4腰椎BMC和华氏三角区BMD增长率较AA基因型分别低14．9％和51．3％，差异有统计学意义（P〈0．05）。交互作用分析发现，同时具有IL-6基因-634C／G位点G等位基因和CASR基因A986S位点S等位基因的女童，其股骨颈和L1-L4腰椎BMC增长率最低。结论同时具有IL-6基因-634C／G位点G等位基因和CASR基因A986S位点S等位基因的女童，可能是低骨量增长的危险人群。

基于转录组测序技术探究电针促进新西兰兔骨缺损愈合的作用机制

目的基于转录组测序技术观察电针促进骨折愈合过程中肾组织基因表达谱变化,揭示电针促进骨折愈合的分子生物学机制。方法将42只新西兰兔随机分为正常组6只、骨缺损组18只、电针组18只。骨缺损组与电针组使用咬骨钳在新西兰兔右前肢桡骨中段造成骨缺损模型。造模后,电针组在骨缺损肢体侧的合谷、曲池穴处,采用疏密波(频率2/100 Hz,电流2.1 mA)进行电针干预,30 min/次,1次/d,连续干预4周。分别在实验1,2,4周末对骨缺损组与电针组兔前肢进行X射线平扫,采用Lane-Sandhu X射线评分评估骨折愈合情况;在实验2周末每组随机选取3只兔,进行肾脏组织转录组测序以检测基因表达情况。结果实验1,2,4周末,电针组X射线骨形成评分、骨连接评分、骨塑形评分均较同期骨缺损组高,但仅2周末时X射线骨塑形评分与骨缺损组比较差异有统计学意义(P<0.05)。转录组测序显示:正常组与骨缺损组间有454个差异表达基因(上调基因255个,下调基因199个),骨缺损组与电针组间有444个差异表达基因(上调基因179个,下调基因265个)。钙感应受体(CASR)基因在骨缺损组和电针组的肾脏中差异表达,GO分析发现骨缺损组与电针组的差异基因富集在钙离子稳态和细胞钙离子稳态等生物学过程中。结论电针可显著促进新西兰兔骨折愈合,其作用机制可能与调节肾脏CASR基因表达和“钙离子稳态”通路有关。

有柄石韦中坝巴酸的通淋作用研究

目的研究黔产有柄石韦Pyrrosia petiolosa中坝巴酸的通淋作用。方法犬肾小管上皮细胞(MDCK)给予100μmol/L坝巴酸孵育24 h,MTT法检测坝巴酸对MDCK细胞活力以及脂多糖诱导的MDCK炎症模型细胞活力的影响。雄性昆明种小鼠随机分为正常组、模型组及坝巴酸低、高剂量(10、20 mg/kg)组和肾石通(4.5 g/kg)组,除正常组外,其余各组每日ig 1%乙二醇和1%NH_(4)Cl连续造模30 d,造模同时ig药物,末次给药后取小鼠尿液和肾脏,采用苏木素-伊红(HE)染色法检测肾组织病理变化;采用钙离子检测试剂盒检测尿钙、肾钙含量。利用Auto Dock软件对坝巴酸和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptorγ,PPARG)、WNK赖氨酸缺乏蛋白激酶1(WNK lysine deficient protein kinase 1,WNK1)、钙感应受体(calcium sensing receptor,CASR)、细胞色素P450家族24亚家族A成员1(cytochrome P450 family 24 subfamily A member 1,CYP24A1)蛋白进行分子对接并分析对接结果。结果体外实验结果显示,与正常组相比,100μmol/L坝巴酸对MDCK细胞活力无明显影响;在30 mg/mL脂多糖诱导的炎症细胞模型中,坝巴酸可以显著提高MDCK细胞活力(P<0.05)。体内实验结果显示,各给药组小鼠肾组织炎性细胞浸润得到改善,肾组织损伤评分显著降低(P<0.05);坝巴酸低剂量组和肾石通组小鼠肾钙含量较模型组显著降低(P<0.05),尿钙含量显著升高(P<0.05)。分子对接结果显示,PPARG、WNK1、CASR、CYP24A1蛋白与坝巴酸的分子对接能均小于-21 kJ/mol,对接效果均较好。结论黔产有柄石韦中坝巴酸具有较好的抗炎、抑制肾钙蓄积的作用,其通淋活性机制与PPARG、WNK1、CASR、CYP24A1蛋白的结合活性有关。