血管内皮生长因子165通过抑制钙敏感性受体减少缺血/再灌注心肌细胞凋亡

目的:探讨血管内皮生长因子165(vascu-lar endothelial growth factor 165,VEGF165)在缺血/再灌注损伤中的抗细胞凋亡作用及与钙敏感性受体(calciumsensing receptor,CaSR)表达下调的关系。方法:新生鼠心肌细胞在模拟心肌缺血状态下孵育2 h,然后在标准培养液中再培养24 h,从而建立一个模拟心肌缺血/再灌注模型。通过末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记(TUNEL法)检测心肌细胞凋亡。CaSR mRNA表达通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定。通过免疫印迹法(Westernblot)测定促凋亡蛋白Bax、抗凋亡蛋白Bcl-2含量。结果:模拟的缺血/再灌注后CaSR mRNA的表达(I/R组:2.6±0.4;对照组:1.0±0.3,P<0.01)和TUNEL阳性细胞增加(I/R组:15.3%±2.5%;对照组:2.9%±1.4%,P<0.01)。GdCl3、CaSR mRNA的表达(GdCl3组:4.5±0.6;I/R组:2.6±0.4,P<0.01)及TUNEL阳性细胞进一步增加(GdCl3组:25.4%±2.6%;I/R组:15.3%±2.5%,P<0.01),同时上调了Bax表达(GdCl3组:1.93±0.28;I/R组:1.50±0.21,P<0.01),下调了Bcl-2的表达(GdCl3组:0.82±0.18;I/R组:1.71±0.30,P<0.01)。VEGF165组Bax表达减少(GdCl3+VEGF165组:1.12±0.23;GdCl3组:1.93±0.28,P<0.05)和Bcl-2的表达增加(GdCl3+VEGF165组:2.56±0.54;GdCl3组:0.82±0.18,P<0.05),TUNEL阳性细胞减少(GdCl3+VEGF165组:11.8%±1.9%;GdCl3组:25.4%±2.6%,P<0.05),CaSR mRNA的表达下调(GdCl3+VEGF165组:1.5±0.4;GdCl3组:4.5±0.6,P<0.01)。结论:VEGF165通过抑制CaSR,促进Bcl-2和抑制Bax的表达来减少缺血/再灌注诱导的心肌细胞凋亡。

钙敏感性受体活化与心肌细胞缺血/再灌注损伤凋亡的关系

目的:探讨活化的钙敏感性受体与心肌细胞缺血/再灌注损伤凋亡是否有关。方法:新生鼠心肌细胞在模拟心肌缺血状态下,培养2 h后,在标准培养液中再培养24 h,从而建立一个模拟心肌缺血/再灌注模型。使用末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记(TUNEL),检测心肌细胞凋亡。钙敏感性受体mRNA表达通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定。采用免疫蛋白印迹法(Western blotting),测定Caspase-3和Bcl-2。结果:模拟I/R增强了钙敏感性受体表达及心肌细胞凋亡。GdCl3,一种特殊的CaSR激活剂进一步增强了钙敏感性受体表达及心肌细胞凋亡,而对Caspase-3和Bcl-2则分别起着正向及负向调节作用。结论:CaSR与新生鼠心肌细胞缺血/再灌注损伤及心肌细胞凋亡有关,其促进了Caspase-3而抑制了Bcl-2的表达。

吡那地尔预处理对缺氧/复氧大鼠心肌细胞钙敏感性受体的影响

目的探讨吡那地尔预处理对缺氧/复氧后心肌细胞钙敏感性受体(calcium-sensingreceptor,CaSR)的影响。方法通过离体大鼠心脏灌注装置,分离成年大鼠心肌细胞随机分为四组,其中正常组(N组)常规培养,另三组缺氧45min、复氧60min制作缺氧/复氧模型;C组不做预处理;吡那地尔组(P组)和格列苯脲组(G组)在缺氧前用吡那地尔30μmol/L预处理15min;G组在吡那地尔处理前用格列苯脲50μmol/L处理5min。采用RT-PCR及Westernblot方法检测心肌细胞CaSR基因及蛋白表达情况。结果 C、P、G组CaSR基因表达水平及蛋白表达量明显高于N组(P<0.01);P组CaSR基因表达水平及蛋白表达量明显低于C组(P<0.05);而G组明显高于P组(P<0.01)。结论吡那地尔预处理能抑制心肌细胞缺氧/复氧导致的CaSR基因表达上调,其作用可能与ATP敏感性钾通道的开放有关。

钙敏感性受体活化促进缺血/再灌注损伤心肌细胞的凋亡及炎症反应

目的:探讨钙敏感性受体活化与心肌细胞缺血/再灌注损伤后凋亡及炎症反应的关系。方法:缺氧/复氧法处理新生大鼠心肌细胞,建立心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)模型。新生大鼠心肌细胞随机分为对照组、缺血/再灌注组、GdCl3(CaSR激动剂)组、GdCl3+SB203058(p38MAPK特异抑制剂)组。TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定钙敏感性受体(calcium-sensing receptor,CaSR)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-6(IL-6)的mRNA表达;免疫蛋白印迹法(Western blot)测定Caspase-3、Bcl-2和丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)的蛋白表达。结果:模拟I/R增强了CaSR、TNF-α、IL-6、p38MAPK的表达及心肌细胞凋亡;GdCl3进一步增强了上述作用,而对Caspase-3和Bcl-2则分别起着正向及负向调节作用;与GdCl3组相比,GdCl3+SB203058组p38MAPK、TNF-α、IL-6的表达明显降低,而心肌细胞凋亡及CaSR的表达无明显改变。结论:CaSR激活不仅促进新生鼠心肌细胞I/R损伤后心肌细胞凋亡,且通过p38MAPK信号转导促进I/R区域的炎症反应。

Urocortin Ⅰ预处理增加缺氧/复氧心肌细胞钙敏感性受体表达研究

目的观察UrocortinⅠ(UCNⅠ)调控成年大鼠缺氧/复氧心肌细胞钙离子敏感性受体(Ca SR)表达的变化。方法离体成年大鼠心肌细胞分离、培养,随机分为正常组(NOR组,37℃95%O2+5%CO2培养箱中持续培养7 h)、UCNⅠ组、缺氧/复氧组[I/R组,正常培养0.5 h+UCNⅠ(1×10-8 mol/L)0.5 h、缺氧4.0 h、复氧2.0 h]、5-羟葵酸(5-HD)+UrocortinⅠ组[5-HD+UCNⅠ组,5-HD(5×10-9 mol/L)和UCNⅠ(1×10-8 mol/L)依次处理0.5 h后缺氧4 h、复氧2 h]。复氧结束即刻收集细胞运用实时荧光定量PCR(q PCR)检测Ca SR的表达。结果 UCNⅠ组和I/R组Ca SR表达量较NOR组明显增加,I/R组较UCNⅠ组表达量增加,差异均有统计学意义(P<0.01),5-HD+UCNⅠ组Ca SR表达量高于NOR组,但低于UCNⅠ组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论大鼠离体缺氧/复氧心肌细胞中Ca SR表达可受UCNⅠ调控减低,UCNⅠ升高Ca SR效应可部分被5-HD逆转,表明了UCNⅠ抗缺血再灌注损伤过程中可导致腺苷三磷酸(ATP)敏感性钾通道的开放。

CaSR在大鼠血管收缩/舒张反应性调节中的作用

目的研究钙敏感性受体(Ca SR)激动剂对大鼠肠系膜动脉收缩和舒张反应性的影响、以及内皮在其中的作用。方法采用内皮完整和内皮去除的大鼠肠系膜动脉,观察Ca SR特异性激动剂cinacalcet对血管基础张力和预收缩的血管张力的影响、以及不同剂量cinacalcet预处理对去甲肾上腺素(NE)诱导的血管收缩反应性和乙酰胆碱诱导的舒张反应性的影响。结果Ca SR激动剂cinacalcet对静息状态下内皮完整和内皮去除的血管基础张力均无明显影响。在内皮完整的血管环,cinacalcet对预收缩血管有明显的舒张作用,并呈剂量依赖性;内皮去除取消了cinacalcet的舒张作用。Cinacalcet预处理30 min,使内皮完整的血管的收缩反应性明显降低,而对舒张反应性无明显影响。对去除内皮的血管环,cinacalcet预处理对血管收缩/舒张反应性均无明显影响。结论 Ca SR在血管收缩反应性调节中有重要作用,并有明显的内皮依赖性。

CaSR抑制剂Calhex231通过PTH-AR途径参与创伤失血性休克大鼠血管低反应性的调节

目的:探讨钙敏感性受体(CaSR)抑制剂Calhex231(Cal)是否通过甲状旁腺素(PTH)-肾上腺素受体(AR)途径参与创伤失血性休克大鼠血管低反应性的调节。方法:检测Cal对创伤失血性休克大鼠血PTH水平的影响,并观察外源给予PTH对正常和休克大鼠血压的影响;Western blot法检测Cal对大鼠肠系膜上动脉(SMA)以及外源给予PTH对大鼠原代血管平滑肌细胞(VSMC)中2种AR亚型(α1-AR和β1-AR)蛋白表达水平的影响。结果:创伤失血性休克后大鼠血PTH水平显著升高,Cal治疗能够显著降低血PTH水平(P<0.01)。外源给予PTH能显著降低正常大鼠血压。在组织水平上,Cal能提高创伤失血性休克大鼠SMA中α1-AR蛋白表达水平(P<0.05);在细胞水平上,外源给予PTH能使大鼠原代VSMC中α1-AR蛋白表达水平降低,Cal能拮抗PTH降低α1-AR蛋白表达的作用(P<0.05)。结论:CaSR抑制剂Cal可通过降低血PTH水平、上调血管α1-AR蛋白表达水平而发挥改善休克后血管低反应性的作用。