Orai1蛋白介导钙池操纵的钙内流在脓毒症小鼠CD4^(+)T细胞免疫功能损害中的作用

目的探讨Orai1介导钙池操纵的钙内流(SOCE)在脓毒症小鼠CD4^(+)T细胞免疫功能损害中的作用。方法采用清洁级雄性Balb/c小鼠建立盲肠结扎穿孔(CLP)脓毒症模型,分别于术后1、3、5 d处死小鼠,无菌留取脾脏,免疫磁珠法分选CD4^(+)T细胞,Western印迹法检测各组脾脏CD4^(+)T细胞Orai1蛋白表达,流式细胞术检测SOCE,流式细胞术检测CD4^(+)T细胞凋亡,CCK-8细胞计数试剂盒检测CD4^(+)T细胞增殖,酶联免疫吸附法(ELISA)检测干扰素(IFN)-γ和白细胞介素(IL)-4水平。然后调节Orai1蛋白的表达,实验分为4组,sham组、CLP3组、Orai1下调组(Orai1-down组)、Orai1上调组(Orai1-up组),进一步检测小鼠脾脏CD4^(+)T细胞SOCE和免疫功能。结果sham组脾脏CD4^(+)T细胞Orai1蛋白的相对表达量为1.03±0.16,与sham组相比,CLP组的Orai1蛋白水平明显降低(F=19.64,P=0.0005)。与sham组相比,CLP组SOCE水平明显降低(F=30.01,P=0.001)。sham组的CD4^(+)T细胞早期和晚期凋亡比率为8.7%±1.5%,与sham组相比,CLP组明显升高(F=32.29,P=0.0001)。与sham组相比,CLP组小鼠脾脏CD4^(+)T细胞增殖能力明显降低,差异有统计学意义(F=7.26,P=0.0018)。与sham组相比,CLP组小鼠脾脏CD4^(+)T细胞分泌IFN-γ和IL-4的能力均明显降低,差异均有统计学意义(F=19.690、6.183,均P<0.05)。与sham组相比,CLP组IFN-γ/IL-4比值变小(F=11.23,P=0.0031)。与CLP3组相比,Orai1-down组CD4^(+)T细胞SOCE的水平明显下降,早期和晚期凋亡比率明显升高,脾脏CD4^(+)T细胞增殖能力显著下降,分泌IFN-γ和IL-4下降,IFN-γ/IL-4值下降,差异均有统计学意义(t=4.819、7.952、2.988、28.760、3.140、7.670,均P<0.05);而Orai1-up组则均获得相反的结果,差异亦均有统计学意义(t=2.983、6.796、9.390、19.670、3.692、15.870,均P<0.05)。结论Orai1介导SOCE减轻脓毒症小鼠CD4^(+)T细胞免疫功能障碍。