动脉平滑肌细胞的钙池操纵钙通道对细胞自噬的调节

目的探讨大鼠动脉平滑肌细胞A7R5上钙池操纵性钙通道(store-operated calcium channel,SOCC)对细胞自噬的影响。方法在293T细胞中包装含有STIM1、Orai1基因的慢病毒,将获得的慢病毒LV-STIM1、LV-Orai1感染大鼠A7R5细胞,Western blot检测感染前后STIM1、Orai1蛋白表达及细胞自噬调节蛋白Beclin-1的表达。慢病毒感染A7R5后饥饿处理6 h或雷帕霉素处理24 h,Western blot检测处理后各组自噬相关蛋白LC3的蛋白表达量。结果重组载体p LV-STIM1、p LV-Orai1经双酶切鉴定正确。在293T成功包装慢病毒LV-STIM1、LV-Orai1。病毒感染A7R5后,与对照组相比,STIM1、Orai1蛋白表达量分别上调96%和163%,而自噬调节蛋白Beclin 1下调64%。饥饿或雷帕霉素处理可明显增加细胞自噬水平,体现为自噬标志蛋白LC3-Ⅱ含量增加,而慢病毒感染STIM1、Orai1可明显抑制饥饿或雷帕霉素诱导的细胞自噬。结论在大鼠动脉平滑肌A7R5细胞过表达钙池操纵钙通道分子STIM1和Orai1可使细胞自噬水平降低。这一分子机制可能与肺动脉高压发病相关。

HT22细胞缺血再灌注损伤后钙池操纵钙通道蛋白中STIM的表达及意义

目的 探讨钙池操纵钙通道蛋白组成成分——基质相互作用因子（STIM）在细胞缺血再灌注损伤后的表达变化及意义. 方法 将HT22细胞系随机分为正常对照组及缺血再灌注损伤后1、3、6、12、24h组;正常对照组不做任何处理,缺血再灌注各组细胞通过无糖培养基和氮气箱内培养6h建模.利用荧光免疫组化法检测STIM1和STIM2的空间表达情况;利用实时定量PCR（RT-PCR）、Western blotting法检测STIM1和STIM2的蛋白及mRNA水平表达变化. 结果 （1）荧光免疫组织化学检测发现,缺血再灌注损伤后,特别是损伤后12 h,STIM1染色呈阳性,阳性染色呈颗粒状,分布在胞膜、胞浆和部分胞核上.而STIM2的阳性颗粒则主要表达在细胞核上;（2）RT-PCR检测发现,STIM1在正常对照组和缺血再灌注损伤后各组HT22细胞中高表达,但表达量差异无统计学意义（p＞0.05）.与正常对照组比较,STIM2则在缺血再灌注损伤后1h、6h和24 h有3个表达高峰,表达量差异有统计学意义（P＜0.05）.（3）Western blotting检测结果显示,STIM1持续稳定高表达,各组之间差异无统计学意义（p＜0.05）.STIM2蛋白在缺血再灌注损伤后各组中均明显升高,其中1h、3h、6h及12h组与正常对照组比较差异有统计学意义（p＜0.05）. 结论 缺血性损伤后,STIM1和STIM2均在HT22细胞上表达,但其空间和时间表达变化规律不同,可能通过影响钙库调控的钙内流等机制在脑缺血性损伤的病理生理过程中发挥作用.

钙池操纵的Ca^(2+)通道对炎症的调控

钙池操纵的Ca2+通道(store-operated Ca2+ channels,SOC)广泛存在于细胞膜上,是非兴奋性细胞胞外钙内流的主要通道之一,参与多种生理和病理生理过程。参与炎症和免疫反应的主要细胞多为非兴奋性细胞,SOC对它们的功能维系作用日益为人们所重视。

TRPC1/STIM1复合体调节人脐静脉内皮细胞钙池操纵性钙通道和受体操纵性钙通道介导的钙内流和NO生成

目的研究瞬时受体电位通道1(TRPC1)/基质交联分子1(STIM1)复合体在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)钙池操纵性钙通道(SOCC)和受体操纵性钙通道(ROCC)介导的钙内流和NO生成中的作用。方法取2~3代HUVEC,将构建的TRPC1和STIM1干扰质粒分别转染HUVEC,观察细胞转染效果的同时采用real-time PCR和Western blot检测TRPC1、STIM1 mRNA和蛋白的表达。将细胞分别与钙敏感受体(CaR)激动剂精胺、ROCC模拟剂(TPA)+CaR负性变构调节剂Calhex231、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220及经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967孵育后,用荧光探针Fura-2/AM及DAF-FM负载方法同步检测[Ca2+]i和NO生成的变化;随后用TRPC1和STIM1干扰质粒同时转染HUVEC,与精胺孵育后检测[Ca2+]i和NO生成,免疫共沉淀法检测TRPC1和STIM1的相互作用。结果与Control组相比,TRPC1转染组和STIM1转染组TRPC1、STIM1 mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05);在四种不同处理作用下,TRPC1转染组和STIM1转染组[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05);与Control组、TRPC1转染组及STIM1转染组相比,TRPC1和STIM1共转染组[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05);TRPC1与STIM1相互作用形成复合体,且在CaR激动剂的剌激下作用增强。结论 TRPC1/STIM1复合体共同调节CaR经SOCC和ROCC激活介导的钙内流和NO生成。

体外循环血浆对体外培养人脐静脉血管内皮细胞钙池操纵的钙通道电流的影响

目的探讨经体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)后人体炎性血浆对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVECs)的钙池操纵的钙通道电流(store-operated Ca2+currents,Isoc)的影响。方法CPB后血浆采自我科心血管外科手术患者,患者均知情同意。将已培养好的HUVECs按所加入的血浆不同分为4组,每组6例:即组Ⅰ(加入CPB刚开始0min时血浆的对照组)、组Ⅱ(加入CPB后25min的血浆)、组Ⅲ(加入CPB后50min的血浆)及组Ⅳ(加入CPB后50min含左旋精氨酸的血浆)。应用全细胞膜片钳记录技术测定并观察各组HUVECs的Isoc变化。结果在HUVECs上可记录到Isoc;当钳制电位为-100mV时,组Ⅰ~组Ⅳ中HUVECs的Isoc分别为(-302.38±35.13)pA、(-388.59±58.66)pA、(-577.04±93.69)pA及(-365.42±34.79)pA,各组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),其中组Ⅳ明显低于组Ⅲ(P<0.01)。结论CPB后人体炎性血浆可增强血管内皮细胞的钙通道电流,左旋精氨酸可减轻此作用,这对于进一步深入研究CPB围术期血管内皮细胞钙超载的发生机制和防治具有重要意义。

钙池操纵性钙通道抑制剂SKF96365对慢性哮喘小鼠气道重塑和气道高反应性的作用

目的:观察钙池操纵性钙通道抑制剂SKF96365对小鼠慢性哮喘模型气道重塑和气道高反应性的影响。方法:用鸡卵清白蛋白(OVA)致敏和激发小鼠,建立慢性哮喘模型,33只雌性BALB/c小鼠随机分为3组:对照组、哮喘组、SKF96365组,每组11只,其中SKF96365组于每次激发前30 min给予SKF96365(10mg/kg)干预。哮喘组和SKF96365组于第0、7、14 d腹腔注射(i.p)200μL致敏液(含OVA粉剂20μg、氢氧化铝凝胶2 mg);自第21天起,腹腔注射1%戊巴比妥钠(70mg戊巴比妥钠/kg小鼠体重)麻醉小鼠后,OVA(40μg)滴鼻(i.n),连续6周,每周3次,共18次。对照组则在相同时间给予相应剂量的生理盐水腹腔注射和滴鼻。最后一次激发后24 h,各组分别随机取5只小鼠用于检测组织病理学变化,另6只小鼠采用Buxco小动物肺功能仪检测气道高反应性。其中组织病理学检测计算杯状细胞(过碘酸希夫染色阳性,PAS+)、胶原细胞(Masson阳性)和平滑肌细胞(α-SMA阳性)阳染面积/支气管基底膜周长值来评估小鼠气道重塑;观察给予不同浓度乙酰甲胆碱雾化时的气道阻力(resistance index,RI)最大值,评估小鼠气道高反应性。结果:对照组未见PAS阳性染色区域,哮喘组和SKF96365组杯状细胞增生高于对照组(7.29±2.04,4.49±1.70 vs 0.00±0.00,均P<0.01),且SKF96365组低于哮喘组(P<0.05)。Masson染色显示哮喘组和SKF96365组上皮下胶原沉积高于对照组(9.23±1.41,7.30±1.33 vs 1.60±0.77,均P<0.01),且SKF96365组低于哮喘组(P<0.05)。α-SMA免疫组化显示哮喘组和SKF96365组平滑肌增生肥大高于对照组(4.54±1.05,3.15±0.57 vs 1.97±0.69,均P<0.05),且SKF96365组低于哮喘组(P<0.05)。当乙酰甲胆碱(Mch)≤6.25 mg/m L时,3组小鼠气道阻力无显著差异(P>0.05),当25 mg/m L>Mch≥12.25 mg/m L时,哮喘组小鼠气道阻力明显大于对照组小鼠(P<0.001),当Mch≥25 mg/m L时,哮喘组小鼠气道阻力大于SKF96365组(P<0.05)。结论:采用SKF96365干预后,慢性哮喘小鼠气道重塑和气道高反应性指标均有改善,提示SKF96365可能对哮喘气道重塑和气道高反应性具有抑制作用。

SK&F96365对大鼠肝缺血再灌注损伤后Kupffer细胞钙池操纵的钙通道电流的影响

目的:研究缺血再灌注损伤对大鼠肝Kupffer细胞钙池操纵的钙通道电流(ISOC)的影响,并筛选有效的钙通道阻滞剂进行拮抗．方法:建立SD大鼠肝缺血再灌注模型,利用低浓度胶原酶循环灌注、差速离心、选择性贴壁的方法急性分离肝Kupffer细胞,应用全细胞膜片钳记录技术,研究肝缺血再灌注损伤对大鼠肝Kupffer细胞ISOC的影响及钙通道阻滞剂SK&F96365的拮抗作用．结果:大鼠Kupffer细胞的ISOC为:假手术组-78．7±25．2 pA,缺血再灌注组-159．3±27．3 pA,两组有显著统计学差异(n=15,P<0．01)．5-50μmol／L的SK&F96365对Kupffer细胞ISOC的抑制呈浓度依赖性增强,ISOC由-152．7±42．5 pA依次降至-81．4±24．2 pA,-56．1±26．4 pA,-45．2±21．6 PA,-34．8±17．1 pA,-25．6±13．4 pA,SK&F96365对Kupffer细胞ISOC的抑制率逐渐增加,分别为43．9％±18．1％,59．2％±24．0％,66．3％±23．0％,73．8％±17．8％,80．9％±12．6％,其IC50值为6．53μmol／L．结论:缺血再灌注损伤可以促进SD大鼠Kupffer细胞上SOC的进一步开放,导致ISOC的增大,Kupffer细胞活化,进一步加重缺血再灌注损伤．SK&F96365对Kupffer细胞ISOC的抑制呈浓度依赖性增强,对肝细胞损伤具有保护作用．

钙池操纵的Ca^(2+)通道对人肝癌细胞增殖的影响

目的:对比研究人肝癌细胞与人正常肝细胞的钙池操纵的Ca2+通道(store-operated Ca2+ channel,SOC)功能改变,探讨SOC对肝癌细胞增殖能力的影响.方法:培养人肝癌细胞(SMMC7721)与人正常肝细胞(HL-7702),应用膜片钳技术检测两组细胞的细胞膜SOC电流,应用激光共聚焦显微镜检测两组细胞的细胞内游离Ca2+离子浓度,应用MTT法检测两组细胞的增殖能力,应用流式细胞仪检测两组细胞的增殖周期.结果:人肝癌细胞的SOC电流密度为19.36pA/pF±4.9pA/pF,明显高于人正常肝细胞的电流密度8.90pA/pF±2.78pA/pF;人肝癌细胞的细胞内钙荧光强度增加31.81%±8.89%,明显高于人正常肝细胞的21.58%±6.01%;MTT生长曲线显示从第3天开始,人肝癌细胞的增殖能力明显高于人正常肝细胞,且时间越长,增殖能力差别越大;流式细胞仪研究提示人肝癌细胞的S期细胞比例(S-phase cells ratio,SPF)、增殖指数(proliferation index,PI)明显大于人正常肝细胞,从而提示人肝癌细胞的增殖能力明显高于人肝细胞.结论:与人正常肝细胞相比,人肝癌细胞的SOC电流密度增大、细胞内游离Ca2+浓度升高、增殖能力增强,提示人肝癌细胞增殖能力提高与其SOC功能增强有关.

钙池操纵性钙通道与细胞增殖关系的研究进展

Ca2+是维持细胞正常生理功能的重要离子,参与细胞信息传递并调控一系列生命过程。钙池操纵性钙通道(SOCC)是细胞膜钙通道的一种。许多细胞内Ca2+主要通过SOCC机制影响正常细胞和肿瘤细胞的生长增殖。不同类型的细胞,SOCC通道相关蛋白的表达量及其相互作用存在差异,从而影响细胞内Ca2+浓度,造成细胞的增殖、凋亡和迁移等生物学功能的改变。

钙池操纵的钙通道在屋尘螨诱导哮喘小鼠气道上皮屏障破坏中的作用

目的:研究钙池操纵的钙内流(SOCE)在哮喘小鼠气道上皮屏障破坏中的作用及可能机制。方法:建立屋尘螨(HDM)致敏的C57BL/6急性过敏性哮喘小鼠模型,分为正常对照组、哮喘模型组和SOCE阻断剂BTP-2干预的哮喘模型组,剔除造模过程中死亡鼠和肺泡灌洗失败小鼠,每组10只。肺组织HE染色评估肺组织炎症,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-13和血清中IgE水平。右旋糖酐通透性实验评估屏障通透性,肺免疫荧光及肺组织化学染色评估连接蛋白(ZO-1和occludin)的分布和表达,RT-PCR和Western Blot评估肺组织中连接蛋白的表达。结果:与正常对照组相比,HDM致敏的小鼠气道炎症加重,肺组织ZO-1、occludin的mRNA和蛋白表达水平显著降低,同时右旋糖酐通透性增高(P<0.0001);与哮喘模型组相比,BTP-2干预组小鼠气道炎症减轻,ZO-1、occludin的mRNA和蛋白表达水平较哮喘组增高,右旋糖酐通透性亦明显下降(P<0.0001)。结论:SOCE及其介导的钙信号可能参与了HDM诱导的小鼠气道上皮屏障的破坏。

脂氧素A_4通过抑制Jurkat T细胞钙池操纵的钙通道电流而抑制其激活和增殖

目的通过研究脂氧素A4（LXA4）对Jurkat T细胞内游离钙离子浓度变化、钙池操纵的钙通道电流（Isoc）及细胞激活和增殖的影响，初步探讨其对T细胞的调节作用及机制。方法钙离子荧光探针Fluo-3／AM负载细胞后，用激光共聚焦扫描显微镜技术动态检测活细胞内游离钙离子浓度的变化；全细胞膜片钳技术记录Isoc；ELISA测IL-2水平；3^H-TdR掺入法测细胞增殖情况，并结合流式细胞仪进行细胞周期分析。结果（1）用含钙细胞外液时，LXA4降低正常Jurkat T细胞内游离钙离子浓度，而用无钙细胞外液时则无显著差异；（2）LXA4呈剂量依赖性抑制钙池操纵的钙通道（SOC）激活剂thapsigargin（TG）引起Jurkat T细胞内游离钙浓度的增高，100nmol／L LXA4也能抑制anti-CD3或植物血凝素（PHA）引起的细胞内钙离子浓度的增高，SOC阻滞剂2-aminoethoxydiphenylborate（2-APB）能显著抑制TG引起的钙内流；（3）膜片钳结果显示，LXA4抑制正常Jurkat T细胞Isoc，TG能显著增大Isoc，而LXA4呈剂量依赖性抑制TG引起的Isoc的升高；（4）LXA4剂量依赖性抑制anti-CD3和anti-CD28诱导的Jurkat T细胞IL-2表达及细胞增殖，细胞周期分析发现LXA4阻止Jurkat T细胞由GI1期进入S期，降低S期细胞比例。结论LXA4可能通过抑制Jurkat T细胞Isoc引起的胞质内游离钙离子浓度的升高而抑制其激活和增殖。

脂氧素A4对小鼠巨噬细胞钙池操纵的钙通道及活性氧的影响

目的研究脂氧素A4对LPS诱导的小鼠RAW 264．7巨噬细胞钙池操纵的钙通道活化及活性氧产生的影响，探讨脂氧素A4保护内毒素性肺损伤的具体机制。方法小鼠RAW 264．7巨噬细胞，随机分为对照组、LPS组、Thapsigargin组、脂氧素A4＋LPS组、脂氧素A4＋Thapsigargin组、2-Aminoethoxydiphenylborate ＋ Thapsigargin组。采用细胞内钙离子特异性荧光探针Flu03／AM和活性氧特异性荧光探针DCFH-DA标记小鼠巨噬细胞。激光共聚焦显微镜动态观察巨噬细胞游离钙浓度变化，流式细胞仪测定活性氧产生变化。结果脂多糖呈剂量依赖升高细胞内游离钙浓度和活性氧的产生。脂氧素A4抑制脂多糖引起的钙内流（抑制率为93％），脂氧素A4同时可抑制Thapsigargin激活钙池操纵的钙通道引起的钙内流（抑制率为75％）。脂多糖诱导巨噬细胞产生大量活性氧（阳性细胞百分比为28．87％±4．5％），脂氧素A4抑制脂多糖诱导巨噬细胞产生活性氧（阳性细胞百分比11．16％±2．5％，P〈0．05）。结论脂多糖通过促进内钙释放而开放钙池操纵的钙通道，大量细胞外钙内流引起钙超载，活性氧大量产生，组织细胞损伤。脂氧素A4可能通过抑制钙池操纵的钙通道，使外钙内流减少，保持细胞钙稳态，减少活性氧的生成而起到抗炎促炎症消退作用。

钙池操纵的钙离子通道在乙醇诱导的原代肝细胞钙超载及损伤中的作用

目的研究钙池操纵的钙离子通道（SOCs）在乙醇诱导的原代肝细胞钙超载及损伤中的作用。方法通过建立体外乙醇诱导原代肝细胞慢性损伤模型，检测SOCs通道蛋白分子：间质相互作用因子1（STIMl）及钙释放激活钙通道蛋白1（Orial）的表达量及胞质中游离钙离子浓度（[Ca2＋]。）的变化，并利用通道阻断剂鉴定SOCs在慢性乙醇诱导原代肝细胞钙超载及损伤中的作用。两组之间均数的比较采用f检验，多组之间的比较采用完全随机设计单因素方差分析。结果0～800mmol／L乙醇（刺激24h）浓度依赖性降低原代肝细胞的存活率；400mmol／L乙醇刺激时细胞存活率为57．34％±2．34％（MTT），因此选择400mmol／L乙醇作为下一步的刺激实验浓度。与正常对照组相比，400mmol／L乙醇刺激明显增加原代肝细胞STIMl及Orail的基因及蛋白表达量，且其表达增加持续至少72h；SOCs通道阻断剂EGTA、La”、二氨基乙氧基双苯萘酯（2-APB）干预降低400mmol／L乙醇刺激原代肝细胞增高的[ca2＋]。水平、增高原代肝细胞存活率，三者之间差异无统计学意义。结论乙醇可能通过增高原代肝细胞中SOCs通道蛋白分子表达，增加胞外钙离子内流而加重肝细胞钙超载及损伤。

环匹阿尼酸对大鼠远端肺静脉平滑肌细胞内钙浓度的影响

目的研究环匹阿尼酸(CPA)对大鼠远端肺静脉平滑肌细胞(PVSMC)细胞内钙浓度([Ca2+]i)的影响及可能机制。方法原代培养大鼠远端PVSMC,并通过形态学和免疫荧光染色鉴定,利用荧光显微镜和InCyte细胞内钙浓度检测系统观测高钾(60 mmol/L KCl)溶液及CPA对PVSMC的[Ca2+]i影响。结果原代培养的PVSMC表现出典型血管平滑肌细胞生长特征,并对平滑肌α-actin免疫荧光染色呈阳性反应;高钾溶液使PVSMC的[Ca2+]i显著升高,5μmol/L硝苯地平能完全阻断PVSMC的[Ca2+]i对高钾溶液的反应;10μmol/LCPA能使含5μmol/L硝苯地平的无钙Krebs溶液孵育的PVSMC的[Ca2+]i短暂小幅升高,恢复细胞外Ca2+至2.5 mmol/L后,10μmol/L CPA能使含5μmol/L硝苯地平的Krebs溶液孵育的PVSMC的[Ca2+]i迅速升高。结论 CPA能够使大鼠远端PVSMC的[Ca2+]i升高,其机制可能与Ca2+从肌浆网释放,并诱发细胞外Ca2+通过钙池操纵性钙通道(SOCC)内流有关。

STIM1及其相关蛋白在脂筏介导的细胞内钙信号中的作用机制

脂筏是膜脂双层内富含特殊脂质(胆固醇和鞘脂)和蛋白质的微区,脂筏作为独特的信号转导平台不仅可以为内部分子提供一个"交流"的环境,也有助于加快信号传递。Ca2+作为重要的信号分子,参与调控细胞许多生理功能。细胞内Ca2+浓度受各种信号分子,钙泵和钙池操纵的Ca2+内流等多种因素调节。最新研究发现:瞬时受体电位通道的一些成员、基质相互作用分子1以及Orai1在钙池操纵的钙通道介导的Ca2+内流过程中发挥着重要的作用。大量Ca2+通道和蛋白质(包括钙信号途径的关键蛋白)在脂筏微区集聚,脂筏功能越来越受到人们的关注。

钙池操纵的钙通道与支气管哮喘气道平滑肌功能调控

钙信号是调控气道平滑肌细胞功能的重要机制。细胞内钙离子浓度受肌浆网内钙释放和胞外钙内流的双重调控。钙池操纵的钙通道(SOC)是哮喘气道平滑肌细胞外钙内流的重要机制,在哮喘气道高反应性和气道重塑中具有重要作用。近年来,通过分子生物学方法 ,已经发现了SOC相关调控分子STIM1和通道组成分子Orai1,为深入研究气道平滑肌SOC的结构和功能关系,以及在哮喘防治中的作用提供了基础。本文就SOC及其与气道平滑肌功能的关系作一综述。

钙池操纵的钙通道与支气管哮喘气道平滑肌功能调控

钙信号是调控气道平滑肌细胞功能的重要机制。细胞内钙离子浓度受肌浆网内钙释放和胞外钙内流的双重调控。钙池操纵的钙通道（SOC）是哮喘气道平滑肌细胞外钙内流的重要机制，在哮喘气道高反应性和气道重塑中具有重要作用。近年来，通过分子生物学方法，已经发现了SOC相关调控分子STIMl和通道组成分子Orail，为深入研究气道平滑肌SOC的结构和功能关系，以及在哮喘防治中的作用提供了基础。本文就SOC及其与气道平滑肌功能的关系作一综述。

脂氧素A_4对Jurkat T细胞游离钙浓度变化及增殖的影响

目的研究脂氧素A4(LXA4)对Jurkat T细胞内游离钙离子浓度变化及细胞增殖的影响。方法钙离子荧光探针Fluo-3/AM负载细胞后,用激光共聚焦扫描显微镜动态检测活细胞内游离钙离子浓度的变化;CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,并结合流式细胞仪进行细胞周期分析。结果①采用含钙细胞外液时,LXA4降低正常Jurkat T细胞内游离钙离子浓度,而用无钙细胞外液时,细胞内游离钙离子浓度下降不明显;②LXA4呈剂量依赖性抑制钙池操纵钙通道(SOC)激活剂thapsigargin(TG)引起的Jurkat T细胞内游离钙离子浓度的增高,100 nmol/L LXA4也能抑制抗CD3单抗(a-CD3)引起的细胞内钙离子浓度的增高,SOC阻滞剂2-Aminoethoxydiphenylborate(2-APB)能显著抑制TG引起的钙内流;③LXA4呈剂量依赖性抑制a-CD3和抗CD28单抗(a-CD28)诱导的Jurkat T细胞增殖,细胞周期分析发现LXA4阻止Jurkat T细胞由G1期进入S期,降低S期细胞比例、细胞增殖指数(P I)和DNA含量。结论LXA4可能通过抑制Jurkat T细胞钙池操纵的钙通道引起的胞质内游离钙浓度的升高而抑制其增殖。

急性缺氧对环匹阿尼酸诱导的大鼠远端肺静脉平滑肌细胞内钙浓度升高的影响

目的：研究急性缺氧对Ca2＋-ATPase抑制剂——环匹阿尼酸（CPA）诱导的大鼠远端肺静脉平滑肌细胞（PVSMC）内钙浓度（[Ca2＋]i）升高的影响及机制。方法：选用6只雄性SD大鼠（体重200~250 g）,培养大鼠PVSMC,运用荧光显微镜和细胞内钙浓度检测系统观测CPA及急性缺氧（4%O2）对PVSMC的[Ca2＋]i影响及钙池操纵性钙通道（SOCC）阻断剂氯化镍（Ni Cl2）和SKF96365的干预作用。结果：含5μmol/L硝苯地平（电压依赖钙通道阻断剂）的无钙Krebs溶液孵育PVSMC,10μmol/L CPA使PVSMC的[Ca2＋]i小幅度升高,急性缺氧能使[Ca2＋]i升高幅度增加;恢复细胞外Ca2＋至2.5 mmol/L后,10μmol/L CPA使[Ca2＋]i显著升高,急性缺氧可导致CPA诱导的[Ca2＋]i升高显著增强;SOCC阻断剂Ni Cl2（500μmol/L）和SKF96365（50μmol/L）均能明显抑制急性缺氧条件下CPA诱导的[Ca2＋]i升高,但对高钾（60 mmol/L KCl）Krebs溶液引起的[Ca2＋]i反应无影响。结论：急性缺氧能够使CPA诱导的大鼠远端PVSMC的[Ca2＋]i升高增强,[Ca2＋]i升高可被SOCC阻断剂阻断,提示急性缺氧能够增强SOCC活性,使细胞外Ca2＋通过SOCC内流增强,从而导致大鼠远端PVSMC的[Ca2＋]i升高。

钙池操纵的钙通道在乙醇诱导HepG2细胞钙超载中的作用

目的研究乙醇诱导肝细胞钙超载的机制及钙池操纵的钙离子通道（SOes）在其中的作用。方法使用浓度梯度的乙醇处理HepG2细胞，并观察细胞外钙离子螯合剂乙二醇二乙醚二胺四乙酸（EGTA）及SOCs抑制剂2-APB对200umol／L乙醇刺激的干预效应。实验分为：（1）正常对照组：磷酸盐缓冲液刺激；（2）乙醇慢性刺激组：分别给予25、50、100、200、400、800μmol／L乙醇，刺激24h或200μmol／L乙醇，刺激24、48、72h；（3）EGTA处理组：200μmol／L乙醇＋0．5μmol／LEGTA，刺激24h；（4）2-APB处理组：200μmol／L乙醇＋50μmol／L2-APB，刺激24h。细胞计数CCK8试剂盒检测细胞存活率；全自动生物化学分析仪检测HepG32细胞培养上清液ALT、AST漏出量；流式细胞仪检测HepG2细胞胞浆Ca2＋浓度。荧光定量聚合酶链反应及蛋白质印迹法检测HepG2细胞中SOCs通道蛋白分子间质相互作用因子1及钙释放激活钙通道蛋白1的基因及蛋白表达。各组间均数的比较采用单因素方差分析或独立样本t检验。结果50、100、200、400、800μmol／L乙醇刺激24h使HepG2细胞的存活率分别降低为97．3％±2．9％、83．4%±3．3％、67．8％±4．4％、37．5％±3．o％、14．1％±4．9％，组间比较，F=99．945，P〈0．01，细胞存活率呈浓度依浓度依赖性；细胞培养基上清液ALT漏出量分别增加为（14．2±2．8）、（17．7±3．2）、（20．0±2．6）、（21．6±1．3）、（24．9±1．7）U／L，组间比较，F=15．286，P〈0．01；AST漏出量分别增加为（72．0±4．7）、（91．6±7．4）、（107．3±11．4）、（116．5±13．4）、（128．9±7．1）u／L，组间比较，F=39．674，P〈0．01;使HepG2细胞的[Ca2＋]i水平分别增高为正常对照组的（1．3±0．4）、（1．3±0．2）、（1．4±0．2）、（2．3±0．3）、（2．6±0．2）倍，F=56．978，P〈0．01。EGTA、2-APB干预使200μmol／L乙醇刺激后的HEN32细胞[Ca2＋]i水平分别降至正常对照组的（1．8±0．2）倍和（1．9±0．1）倍，t值分别为7．201和8．183，P值均〈0．01;同时将乙醇刺激后的细胞存活率分别增高至82．2％±3．9%和78．6%±1．5％，t值分别为6．692和6．124，P值均〈0．01）；使细胞培养基上清液ALT漏出量分别降低至（16．4±2．0）U／L和（17．2±1．9）U／L，t值分别为7．145和6．352，P值均〈0．01;AST漏出量分别降低至（86．4±8．8）U／L和（88．3±6．3）U／L，t值分别为9．337和8．704，P值均〈0．01。200μmol／L乙醇刺激明显增加HepG32细胞STIM1及Orail的基因及蛋白表达量，且其表达增加持续至少72h。结论乙醇增高SOCs通道蛋白分子表达，增加SOCs介导的Ca2＋内流，提示此可能是乙醇导致肝细胞[Ca2＋]增高及相关肝细胞损伤的重要分子机制。