转移抑制因子1和钙激活蛋白43在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨转移抑制因子1(MTSS1)和钙激活蛋白43(Cap43)在食管鳞状细胞癌(鳞癌)组织中表达,阐明其与食管鳞癌临床病理特征间的关系。方法:收集食管鳞癌标本80例和癌旁正常组织30例,采用免疫组织化学SP染色法和RT-PCR法检测食管鳞癌组织和正常组织中MTSS1、Cap43蛋白和mRNA的表达情况,分析MTSS1和Cap43表达与食管鳞癌临床病理特征之间的关系,分析两者在食管鳞癌组织中表达的相关性。结果:免疫组织化学SP染色法,MTSS1和Cap43在癌细胞的胞浆/细胞膜呈现棕黄色,MTSS1在正常组织和食管鳞癌组织中的阳性表达率分别为83.3%(25/30)和21.3%(17/80),Cap43在正常组织和食管癌组织中的阳性表达率分别为16.7%(5/30)和76.3%(61/80),组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。RT-PCR法检测,MTSS1mRNA在正常组织和食管鳞癌组织中表达水平分别为0.703±0.085和0.295±0.065,而Cap43mRNA在正常组织和食管鳞癌组织中的表达水平分别为0.236±0.052和0.693±0.078,组间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。食管鳞癌组织中MTSS1和Cap43的表达与食管鳞癌的浸润深度、淋巴结转移和临床TNM分期有关联(P<0.05),而与食管鳞癌患者的性别、年龄、肿瘤大小和组织类型均无关联(P>0.05);MTSS1与Cap43的表达呈负相关关系(r=-0.457,P<0.05)。结论:食管鳞癌组织中MTSS1的低表达和Cap43的高表达可能促进了肿瘤的浸润和转移,二者之间的平衡失调可能是食管鳞癌侵袭和转移的重要机制之一。

钙激活蛋白43在胶质瘤组织中表达及对细胞增殖和侵袭力的影响

目的探讨钙激活蛋白43(Cap43)在胶质瘤组织中表达,以及下调Cap43表达对人胶质瘤U251细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法选取2014年2月至2017年3月在我院经手术切除的初发患者91例,同期,选取因颅脑外伤切除的正常脑组织40例作为对照组,免疫组化法检测胶质瘤组织和对照组中Cap43蛋白表达,培养U251细胞并分为Cap43干扰组、对照序列组和空白组,Western blot检测细胞中Cap43蛋白表达,CCK8法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,构建裸鼠移植瘤模型,4周后,比较各组瘤体重量和体积。结果胶质瘤组织Cap43蛋白的IOD值低于对照组,差异有统计学意义(t=64. 055,P=0. 000);胶质瘤组织中Cap43蛋白的IOD值在不同WHO分级间差异有统计学意义(P <0. 05); Cap43干扰组细胞中Cap43 mRNA和蛋白相对表达量低于对照序列组和空白组(P <0. 05); Cap43干预组细胞在1～4d时吸光度A值均高于对照序列组和空白组(P <0. 05); Cap43干扰组迁移细胞数和侵袭细胞数均高于对照序列组和空白组(P <0. 05); Cap43干扰组裸鼠移植瘤重量和体积均高于对照序列组和空白组(P <0. 05)。结论 Cap43蛋白在胶质瘤组织中呈低表达,且与肿瘤恶性程度负相关,下调Cap43表达可促进细胞增殖、加速细胞迁移和侵袭,并可促进裸鼠移植瘤生长。

钙激活蛋白在镍接触肺腺癌患者和矽肺患者血清中的表达情况研究

目的探究镍接触肺腺癌患者和矽肺患者血清中钙激活蛋白(Cap43)的表达情况。方法研究对象为四川省攀枝花市第二人民医院2015年2月至2018年2月收治的17例镍接触肺腺癌患者、26例镍接触矽肺患者,以及同期28例镍接触工人、25例正常人,采集血清通过酶联免疫吸附试验法检测不同人群中Cap43的表达。结果正常人群、镍接触工人、镍接触矽肺患者及镍接触肺腺癌患者之间,血清Cap43表达呈上升趋势[(0.263±0.022)、(0.571±0.051)、(0.894±0.082)、(1.996±0.137)μg/L],两两比较差异均有统计学意义(均P <0.01)。结论血清Cap43表达有助于鉴别镍接触人群肺腺癌、矽肺情况,辅助临床确诊治疗。

温石棉及其代用纤维对鼠细胞钙激活蛋白43及B淋巴细胞瘤-2表达的影响

目的研究温石棉及其代用纤维对鼠细胞钙激活蛋白43(calciumactinated protein 43,CAP43)及B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymghoma,Bcl-2)表达的影响,探讨温石棉及其代用品的致癌性机制。方法将不同浓度的温石棉及其代用品[四川新康温石棉(A)、陕西陕南温石棉(B)、玻璃纤维(C)、陶瓷纤维(D)、硅灰石(E)、岩棉(F),阴性对照组(G)]暴露于V79细胞,使用免疫组织化学法检测CAP43及Bcl-2的表达,并使用SPSS 21.0对表达结果进行对比分析。结果 A、B组的仓鼠肺细胞中CAP43及Bcl-2表达增强较为显著,与其他组比较,差异有统计学意义(P<0.05);CAP 43及Bcl-2基因表达随着粉体浓度的增加,其OD值也呈上升趋势。结论温石棉及其代用纤维对于鼠细胞CAP43及Bcl-2表达有显著的增强作用。

钙卫蛋白、钙激活蛋白在结直肠腺瘤中的表达及意义

目的探讨钙卫蛋白、钙激活蛋白在结直肠腺瘤组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学法对结直肠腺瘤组织标本中钙卫蛋白、钙激活蛋白的表达进行检测。结果钙卫蛋白的表达与患者性别、肿瘤部位、组织类型无关(P>0.05)。钙激活蛋白的表达与患者性别、肿瘤部位、组织类型无关(P>0.05)。但不同病理异型性之间的差异具有统计学意义(χ2=7.882,P=0.019)。钙卫蛋白和钙激活蛋白表达无关联(r=-0.104)。结论钙卫蛋白的高表达及钙激活蛋白的低表达可成为早期预测腺瘤癌变的的分子生物学指标。

钙激活蛋白在结直肠癌及结直肠腺瘤中的表达及意义

钙激活蛋白（calcium actived protein,Cap43）基因又名N_myc下游调节基因（N_myc down regulated gene1,NDRG1）,可在多种类型的肿瘤中作为有效的诊治指标.本研究应用免疫组化法观察Cap43在正常结直肠组织、结直肠腺瘤及结直肠癌中表达的差异.

钙激活酶激活蛋白基因的克隆及其在原核生物中表达及条件的优化

构建钙激活酶激活蛋白基因(UK114)的原核表达载体并优化其表达条件,为其高效表达提供试验依据。以UK114 cDNA为模板,通过PCR方法扩增钙激活酶激活蛋白基因,将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-3中,酶切及测序鉴定重组体。将构建好的重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,在保持菌种不改变的前提下,分别改变IPTG的浓度、培养时间、菌体浓度、培养温度等来优化表达条件。结果显示,原核表达载体pGEX-4T-3-UK114成功构建,可在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达,得到相对分子质量约40 kD的GST-UK114融合蛋白。在IPTG浓度为0.3 mmol/L,诱导温度为32℃,诱导时间为4 h,菌体密度OD600为0.6的条件下,目的蛋白表达量最高。试验成功构建原核表达载体pGEX-4T-3-UK114且获高效表达,为研究UK114生物学活性及产品开发提供了试验基础。

PCR法扩增钙激活酶激活蛋白cDNA

钙激活酶激活蛋白是钙激活酶的激活蛋白, 可以促进钙激活酶活性的发挥, 从而促进肉的嫩化。采用PCR技术, 以山羊肝脏cDNA为模板经扩增得到钙激活酶激活蛋白(calpainactivator) 基因, 并进行了序列测定。该片段长1 017bp, 5′—端非翻译区长39bp, 3′—端非翻译区长567bp。编码区长411bp, 编码一个长137个氨基酸残基的蛋白质, 其理论分子量为14 298Da。与EdonMelloni等(1998) 报道的从牛脑中提取纯化的钙激活酶激活蛋白的氨基酸序列相比发现, 二者仅有五个位点不同。

钙激活酶激活蛋白cDNA的克隆与序列分析

钙激活蛋白酶(calpain)是动物宰后导致肉嫩化的主要蛋白酶。促进calpain活性的发挥,从而提高肉的嫩度,一直是肉类科学研究工作者的重要研究课题。最新的研究表明,钙激活酶激活蛋白(calpainactivator)———钙激活蛋白酶(calpain)系统的一个新成员,是calpain活性的主要调节者。Calpainactivator可以激活calpain,使其活性提高大约400倍。利用分子生物学方法克隆calpainactivator,为生物肉嫩化技术奠定基础,是食品领域应用生物技术提高生产效率的又一新的课题。本文利用PCR方法克隆了calpainactivatorcDNA序列,并对其进行了序列分析。结果表明,该片段长1017bp,5'—端非翻译区长39bp,3'—端非翻译区长567bp。编码区长411bp,编码一个长137个氨基酸残基的蛋白质,其理论分子量为14298Da。与EdonMelloniet.al1998年报道的从牛脑中提取纯化的钙激活酶激活蛋白的氨基酸序列相比发现,二者仅有五个位点不同。

钙激活酶激活蛋白的研究进展

钙激活酶激活蛋白是钙蛋白酶的正调节因子,是其最直接的调节者。本文就钙激活酶激活蛋白的研究历史、现状发展以及意义详细论述,重点论述了其结构和功能及在肉嫩化中的作用机理。

钙激活酶激活蛋白的研究进展

钙激活酶 (calpain)是促进宰后肌肉嫩化的主要的内源酶。钙激活酶激活蛋白 (calpainactivator)是钙激活酶系统的成员之一 ,是区别于钙激活酶抑制蛋白 (calpastatin)的钙激活酶的正调节蛋白。目前已对其激活特性、氨基酸序列及cDNA序列实行了研究 ;但其结构和激活机理还不清楚。

钙蛋白酶系统研究进展

阐述了钙蛋白酶系统的分类、结构,并且综述钙蛋白酶系统的一般生物学功能及影响因素。

钙蛋白酶系统及其对肉嫩度的影响

钙蛋白酶系统作为影响肉嫩度的重要因素引起了科研人员的广泛关注。钙蛋白酶系统是高度可调的复杂系统,包括钙激活酶、钙激活酶抑制蛋白和钙激活酶激活蛋白,三者相互作用,共同调控宰后肉的嫩化。本文综述了钙蛋白酶系统的结构及功能,并在此基础上阐述了其影响肉嫩度的作用机理。

镍接触工人中Cap43蛋白的过表达：一个潜在的筛查指标

目的通过检测钙激活蛋白43(Cap43)在镍接触工人尿液及血清中的蛋白表达情况,探讨Cap43表达在镍接触人群与非镍接触人群之间有无差异,及其表达高低与镍接触检体标本之间的关系。方法采用双抗夹心ELISA法检测150例镍接触工人[尿镍超标(>0.17μmol/ml)17例,尿镍未超标133例]及10例正常人群尿液及血清中Cap43的表达。结果尿液中Cap43的表达:尿镍超标组为(1.138±0.236)ng/ml,尿镍未超标组为(0.987±0.098)ng/ml,正常人群组为(0.609±0.012)ng/ml。血清中Cap43的表达:尿镍超标组为(2.4145±0.3475)ng/ml,尿镍正常组为(1.5614±0.5101)ng/ml,正常人群组为(1.2127±0.4135)ng/ml。结论Cap43表达与镍接触直接相关,尿中Cap43含量高低与血清中Cap43含量有正相关关系(r=0.7755,P<0.01),Cap43检测应以血清标本为宜,本实验结果为Cap43蛋白作为镍接触人群一个普查和疾病预防指标提供了有力的依据。

心房颤动犬心房肌Calpains mRNA与蛋白表达改变的研究

目的观察长期心房快速起搏诱发房颤犬心房肌CalpainⅠ、CalpainⅡmRNA和蛋白表达情况。方法RT-PCR和Western-blot方法检测对照组及房颤组犬心房肌CalpainⅠ和CalpainⅡmRNA及蛋白表达情况;光镜、电镜下,观察心房肌病理组织学和超微结构改变。结果房颤组犬心房肌CalpainⅠmRNA和蛋白表达较对照组犬显著上调(P<0.01,P<0.05);房颤组犬心房肌肌溶解明显。结论房颤组犬心房肌CalpainⅠmRNA和蛋白表达显著增加,可能通过引起心房肌肌溶解参与导致房颤心房结构重构。

辛伐他汀诱导K562细胞凋亡过程中细胞内钙离子浓度、Calbindin-D28K和calpain基因的变化

目的:观察辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时细胞内Ca2+浓度、Ca2+调节蛋白(Calbindin-D28K,D28K)和Ca2+激活蛋白(calpain)基因变化,以探讨K562细胞凋亡机制。方法:常规培养细胞24 h,20μmol/L辛伐他汀处理K562细胞48 h;流式细胞技术检测细胞凋亡率和Ca2+浓度,PCR技术检测D28K和calpain基因。结果:20μmol/L辛伐他汀作用K562细胞24、48、72 h凋亡率改变分别为(6.10±0.35)%、(14.15±0.42)%、(30.70±0.65)%,随药物作用时间延长细胞凋亡率增加;辛伐他汀作用K562细胞12、24、48、72 h,游离钙荧光强度变化为52.93±2.85、19.63±1.56、13.81±1.05、7.84±0.98,各处理组荧光强度与对照组相比升高(P<0.05);与相同时间对照组比较,calpain和D28K基因分别在辛伐他汀作用K562细胞24 h和48 h后上调(P<0.05)。结论:辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时细胞内Ca2+浓度显著升高,细胞内Ca2+浓度调节蛋白D28K和calpain基因上调,这些改变可能是辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的机制之一。

UK114蛋白研究进展

UK114蛋白(山羊肝脏肿瘤抗原)是由恶性肿瘤产生的一种肿瘤抗原。近年来,对UK114蛋白的结构和功能进行一系列的研究,为探索肿瘤的诊断及治疗,细胞的分化,蛋白的折叠和肉类的加工等方面开辟新的途径。

钙激活酶激活蛋白在肉嫩化中的初步研究

本文采用生物技术的方法对钙激活酶激活蛋白cDNA进行了克隆和测序,并构建了该基因的表达载体,对表达产物进行了酶切鉴定.

钙通道激活蛋白43在结直肠腺瘤和结直肠癌组织的表达及其临床意义

目的检测钙通道激活蛋白43（Cap43）在正常结直肠黏膜、不同病理类型的结直肠腺瘤和结直肠癌组织中的表达，探讨Cap43在预示结直肠腺瘤恶变的作用方法利用免疫组织化学方法及实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）方法检测Cap43在80例结直肠腺瘤、60例结直肠癌以及60例正常结直肠黏膜组织中的表达。结果Cap43在正常肠黏膜组、结直肠腺瘤组、结直肠癌组中表达差异有统计学意义（P＝0.000），其阳性表达率分别为31.7%、63.8%、91.7%；而在管状腺瘤、混合性腺瘤、绒毛状腺瘤中亦明显增高，其阳性表达率分别为52.5%、60.0%、90.0%，差异有统计学意义（P＝0.016）。FQ-PCR结果显示Cap43特异性扩增，Cap43在正常结直肠黏膜、结直肠管状腺瘤、结直肠混合性腺瘤、结直肠绒毛状腺瘤及结直肠癌组织中的表达量分别为1.119±0.871、3.660±1.309、7.323±2.131、13.018±2.417、19.552±6.338（F＝25.943，P＝0.028）。结论Cap43与结直肠腺瘤的恶变及结直肠癌的发生相关。

CAPS在钙离子触发的囊泡释放中的作用

钙离子依赖的分泌激活蛋白(Ca^(2+)-dependent activator protein for secretion,CAPS)是一类在进化中高度保守的促分泌蛋白,它存在两种异构体CAPS1和CAPS2,两者在不同发育阶段的表达水平及组织中的分布上均有所差异。以往的研究认为CAPS1作为磷脂酰肌醇二磷酸(phosphati-dylinositol diphosphate,PIP2)连接蛋白参与钙离子调节的大的致密核心囊泡(largedense-corevesci-cle,LDCV)与膜融合过程。最近的研究表明,CAPS1还作用于LDCV与膜融合的上游阶段,在分泌性囊泡的形成以及维持其稳定性方面发挥作用。