胃肠道间质瘤患者Ki-67和钙激活通道蛋白1表达与预后的关系

目的分析胃肠道间质瘤(GIST)患者Ki-67和钙激活通道蛋白1(DOG-1)表达与预后的关系。方法对杭州师范大学附属医院2018年1月—2021年12月收治的107例GIST患者的临床资料进行回顾性分析,通过Kaplan-Meier法绘制不同Ki-67和DOG-1表达水平下GIST患者的累积生存率曲线,通过ROC曲线分析Ki-67和DOG-1对GIST患者预后的预测价值。结果Ki-67高表达和DOG-1阳性表达与肿瘤直径、肿瘤转移、核分裂象计数、美国国立卫生研究院(NIH)危险度分级密切相关(均P<0.01);Kaplan-Meier分析显示,Ki-67低表达患者和DOG-1阴性患者累积生存率分别高于高表达患者和阳性患者,差异均有统计学意义(均P<0.05);ROC曲线分析显示,Ki-67和DOG-1表达水平预测GIST预后的AUC分别为0.847和0.940(P<0.01)。结论Ki-67和DOG-1对GIST预后分别具有中等和较高预测效能,可作为重要预后影响因子,结合核分裂象计数和NIH危险度分级综合评估患者预后,可增进患者获益。

基于钙激活氯离子通道的Piezo1通道调节剂高通量筛选模型的构建

目的构建基于钙激活氯离子通道蛋白1(ANO1)的Piezo1调节剂高通量筛选模型。方法RT-PCR和Western印迹法分别检测Fischer大鼠甲状腺上皮(FRT)细胞Piezo1 mRNA和蛋白表达。构建共表达增强型绿色荧光蛋白标记的ANO1(ANO1-EGFP)和黄色荧光蛋白双突变体(YFP-H148Q/I152L)的FRT细胞株(简称FRT模型细胞),倒置荧光显微镜检测ANO1-EGFP和YFP-H148Q/I152L在FRT模型细胞中的表达,加入ANO1激活剂离子霉素10μmol·L^-1,应用荧光淬灭动力学实验检测并计算FRT模型细胞相对荧光强度变化值。加入Piezo1调节剂Jedi1(200μmol·L^-1),Jedi2(150μmol·L^-1),Yoda1(20μmol·L^-1)和Gd3+(20μmol·L^-1),应用荧光淬灭动力学实验检测并计算FRT模型细胞相对荧光强度变化值。加入Piezo1激活剂Jedi1,Jedi2和Yoda1,按0.2,1,5,10,25,50,75,100,200,300,400,500,600,700,800,900和1000μmol·L^-1设置浓度梯度,应用荧光淬灭动力学实验检测并计算FRT模型细胞相对荧光强度变化值并绘制浓度依赖曲线。向FRT细胞中加入Yoda1,按同样的方法设置浓度梯度,通过Fura-2/AM荧光探针检测细胞内的钙信号随Yoda1浓度的变化,分析细胞内Ca^2+浓度与FRT模型细胞相对荧光强度变化值之间的关系。计算模型Z′因子及信噪比。结果RT-PCR、DNA测序比对和Western印迹结果表明,FRT细胞内源性表达Piezo1。ANO1-EGFP和YFP-H148Q/I152L表达清晰,位置正确,并且ANO1-EGFP被离子霉素激活后模型荧光淬灭,证实转染基因表达的蛋白具有生物学活性,FRT模型细胞构建成功。FRT模型细胞加入Jedi1,Jedi2和Yoda1荧光均淬灭,加入Gd3+后再加入Yoda1荧光不淬灭,证实模型可以用于筛选Piezo1通道调节剂;在FRT模型细胞中离子霉素的EC50为(7.76±0.53)μmol·L^-1,Yoda1的EC50为(17.27±1.21)μmol·L^-1,Jedi1的EC50为(200.60±4.46)μmol·L^-1,Jedi2的EC50为(158.10±4.65)μmol·L^-1。FRT模型细胞相对荧光强度变化值与细胞内Ca^2+浓度呈正相关,模型能敏感地反应细胞内钙信号变化。模型Z′因子为0.82,信噪比为13.29∶1,可用于Piezo1通道调节剂高通量筛选。结论成功构建了可快速、准确、便捷筛选Piezo1通道激活剂和抑制剂的高通量筛选模型。

钙离子感受蛋白STIM1与Orai1在钙敏感受体介导钙内流及NO生成中的相互作用

目的:研究Ca^(2+)感受蛋白[基质相互作用分子1(STIM1)与钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)]在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙敏感受体(Ca SR)介导的钙内流和一氧化氮(NO)生成中的相互作用。方法:将Ca SR激动剂精胺[钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)均激活]单用或与ROC模拟剂12-O-十四烷酰佛波醇-13-醋酸酯(TPA)+Ca SR负性变构调节剂Calhex 231(激活ROC、阻断SOC)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro 31-8220和PKCα/β1选择性抑制剂Go 6976(激活SOC、阻断ROC)联合孵育HUVECs;利用免疫荧光技术检测HUVECs中STIM1和Orai1的蛋白表达和共定位;免疫共沉淀法检测STIM1和Orai1之间的相互作用;取2~3代HUVECs随机分为特异性的质粒转染组(sh STIM1+sh Orai1组)、空质粒组(vehicle-STIM1+vehicle-Orai1组)和未转染组(control组),将3组细胞分别加入上述4组不同药物刺激,采用荧光探针Fura-2/AM检测HUVECs中Ca^(2+)浓度的变化,NO荧光探针DAF-FM DA负载方法同步检测HUVECs中NO生成的变化。结果:STIM1和Orai1蛋白表达共定位于胞浆,与control组相比,加入Calhex 231+TPA、Ro 31-8220和Go 6976刺激后,STIM1和Orai1在胞浆中的定位均减少,且二者的相互作用均减弱;在4种不同处理因素作用下,sh STIM1+sh Orai1组细胞内Ca^(2+)浓度和NO净荧光强度均明显降低(P<0.05)。结论:STIM1与Orai1以二元复合物的形式共同调节Ca SR,并通过激活SOC和ROC介导钙内流及NO生成。

血塞泰对缺血性脑卒中大鼠STIM1、Orai1蛋白表达的影响

目的研究血塞泰对缺血性脑卒中(ischemic stroke,IS)大鼠基质相互作用分子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)及钙释放激活钙通道蛋白1(calcium release-activated calcium channel protein 1,Orai1)的影响。方法选取60只SPF级雄性SD大鼠,随机分为假手术组10只、造模组50只,采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(medial cerebral artery occlusion,MCAO)模型。采用随机数字表法将造模成功的41只大鼠分为模型组、血塞泰低剂量组(12.6 g/kg)、血塞泰中剂量组(25.2 g/kg)、血塞泰高剂量组(50.4 g/kg)和阿司匹林肠溶片组(18 mg/kg),其中血塞泰低剂量组9只,其余每组各8只;假手术组和模型组给予等量生理盐水灌胃。每组连续干预7 d。采用改良神经功能损伤评分(modified Neurological Severity Score,mNSS)评估各组大鼠神经功能损伤情况,TTC染色法检测大鼠脑组织的梗死面积,ELISA法测定大鼠血清中的白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量,RT-PCR检测脑组织中STIM1、Orai1 mRNA的表达,免疫共沉淀检测脑组织STIM1、Orai1的蛋白相对表达水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠mNSS评分增加(P<0.01),脑梗死率增加(P<0.01),血清IL-6、TNF-α含量增加(P<0.01),脑组织STIM1、Orai1 mRNA表达水平和蛋白相对表达水平升高(P<0.01)。与模型组相比,血塞泰各剂量组和阿司匹林肠溶片组大鼠mNSS评分下降(P<0.05),血清IL-6、TNF-α含量下降(P<0.01),脑组织STIM1、Orai1 mRNA表达水平下降(P<0.01);血塞泰中、高剂量组和阿司匹林肠溶片组大鼠脑梗死率下降(P<0.01),脑组织STIM1、Orai1的蛋白相对表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。与阿司匹林肠溶片组相比,血塞泰低剂量组脑梗死率增加(P<0.01),血清IL-6、TNF-α含量增加(P<0.01),脑组织STIM1、Orai1 mRNA表达水平增加(P<0.05);血塞泰中剂量组血清IL-6、TNF-α含量明显增加(P<0.01),脑组织STIM1、Orai1 mRNA表达水平下降(P<0.05,P<0.01);血塞泰高剂量组脑梗死率下降(P<0.01),血清IL-6、TNF-α含量明显下降(P<0.01),脑组织STIM1、Orai1 mRNA表达水平明显下降(P<0.01)。与血塞泰低、中剂量组相比,血塞泰高剂量组mNSS评分下降(P<0.05,P<0.01),脑梗死率下降(P<0.01),血清IL-6、TNF-α含量下降(P<0.01),脑组织STIM1、Orai1 mRNA表达水平下降(P<0.01)。结论血塞泰能够抑制STIM1、Orai1的表达及结合,减轻炎症反应,改善MCAO大鼠神经功能缺损与降低神经元损伤,从而发挥抗IS的作用。

动脉平滑肌细胞的钙池操纵钙通道对细胞自噬的调节

目的探讨大鼠动脉平滑肌细胞A7R5上钙池操纵性钙通道(store-operated calcium channel,SOCC)对细胞自噬的影响。方法在293T细胞中包装含有STIM1、Orai1基因的慢病毒,将获得的慢病毒LV-STIM1、LV-Orai1感染大鼠A7R5细胞,Western blot检测感染前后STIM1、Orai1蛋白表达及细胞自噬调节蛋白Beclin-1的表达。慢病毒感染A7R5后饥饿处理6 h或雷帕霉素处理24 h,Western blot检测处理后各组自噬相关蛋白LC3的蛋白表达量。结果重组载体p LV-STIM1、p LV-Orai1经双酶切鉴定正确。在293T成功包装慢病毒LV-STIM1、LV-Orai1。病毒感染A7R5后,与对照组相比,STIM1、Orai1蛋白表达量分别上调96%和163%,而自噬调节蛋白Beclin 1下调64%。饥饿或雷帕霉素处理可明显增加细胞自噬水平,体现为自噬标志蛋白LC3-Ⅱ含量增加,而慢病毒感染STIM1、Orai1可明显抑制饥饿或雷帕霉素诱导的细胞自噬。结论在大鼠动脉平滑肌A7R5细胞过表达钙池操纵钙通道分子STIM1和Orai1可使细胞自噬水平降低。这一分子机制可能与肺动脉高压发病相关。

加味二仙丸对支气管哮喘大鼠钙离子通道的影响

目的:探讨加味二仙丸对支气管哮喘大鼠中钙库操控的钙离子通道(SOCC)的影响。方法:54只SD大鼠采用随机数字表法分成空白组9只,造模组45只。建立大鼠哮喘模型,造模成功后将造模组大鼠随机分成模型组、加味二仙丸低剂量组、加味二仙丸中剂量组、加味二仙丸高剂量组、固肾定喘丸组,每组6只。各药物组给予相应药物干预,模型组和空白组大鼠予以等容量的生理盐水进行灌胃,2次/d,连续给药28 d。通过HE染色判断哮喘模型是否制备成功,通过免疫组织化学法测基质相互作用分子1(STIM1)、钙释放激活钙通道蛋白1(ORAI1)的阳性表达,通过Western blotting法测STIM1、ORAI1蛋白相对表达量,通过荧光指示剂法观察钙离子平均荧光强度值,反映其钙离子浓度变化。结果:模型组大鼠支气管分支及其周围有大量以淋巴细胞为主的炎症细胞浸润,加味二仙丸低、中、高剂量组和固肾定喘丸组大鼠可见少量的炎症细胞浸润,各给药组大鼠损伤程度介于空白组和模型组之间,且各给药组损伤程度无明显差异。与空白组比较,模型组大鼠肺组织STIM1、ORAI1的平均光密度值和蛋白表达量、钙离子平均荧光强度值明显升高,加味二仙丸低剂量组大鼠肺组织STIM1的平均光密度值和蛋白表达量、ORAI1蛋白表达量、钙离子平均荧光强度值升高,加味二仙丸中剂量组和固肾定喘丸组大鼠肺组织ORAI1蛋白表达量升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,加味二仙丸高剂量组大鼠肺组织STIM1、ORAI1平均光密度值和蛋白表达量、钙离子平均荧光强度值明显降低,固肾定喘丸组大鼠肺组织STIM1和ORAI1蛋白表达量降低,加味二仙丸低、中剂量组大鼠肺组织ORAI1蛋白表达量降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:加味二仙丸能抑制哮喘大鼠肺组织中SOCC的激活,从而抑制钙离子内流,起到治疗支气管哮喘的作用。

膜蛋白KCNN1在昆虫细胞Sf9中的表达与纯化

目的:利用昆虫细胞表达系统真核表达并纯化小电导钙激活钾离子通道蛋白1(KCNN1)。方法:以基因重组方法构建杆状病毒穿梭质粒reBacmid-KCNN1,将其转染至杆状病毒/Sf9细胞表达系统表达目的蛋白,并用Western印迹鉴定KCNN1的表达水平;用Ni-IDA-Sepharose CL-6B亲和层析柱纯化裂解细胞上清中的KCNN1,并用Western印迹鉴定纯化结果。结果:KCNN1在Sf9细胞中高效表达,通过亲和层析获得了纯化的KCNN1。结论:膜蛋白KCCN1在昆虫细胞Sf9中的表达与纯化,为深入研究其分子生物学功能提供了材料,也为全长膜蛋白的体外表达提供了一套可借鉴的实验方法。

钙释放激活钙通道蛋白1和基质相互作用分子1对哮喘大鼠气管收缩的影响

目的研究钙释放激活钙通道蛋白1 (Orai1)和基质相互作用分子1(STIM1)对哮喘大鼠气管收缩的影响。方法将实验动物随机分为正常组与模型组,每组15只。正常组于第1,8天腹腔注射灭菌磷酸盐缓冲溶液(PBS),于第15~20天雾化吸入灭菌PBS,每天1次;模型组于第1,8天腹腔注射新鲜的卵清蛋白致敏液,并于第15~20天雾化吸入1%卵清蛋白,每天1次。用气管张力实验观察气管平滑肌钙库操纵的钙内流(SOCE)引起的气管收缩的改变,用蛋白质印迹法检测Orai1和STIM1蛋白表达水平的变化。结果造模成功后,正常组和模型组SOCE引起的气管收缩在高钾引起的收缩中占比分别为(64.16±30.74)%和(140.92±110.65)%,Orai1蛋白相对表达量分别为(42.00±20.00)%和(81.00±7.00)%,STIM1蛋白相对表达量分别为(66.00±6.00)%和(138.00±12.00)%,差异均有统计学意义(均P <0.05)。结论哮喘大鼠SOCE引起的气管收缩可能随着Orai1和STIM1蛋白表达的增高而增强。

SOCE通道在消化系肿瘤中的研究进展

钙库操纵性钙离子内流(store-operated calcium entry,SOCE)是介导胞外Ca2+进入细胞内的重要通道之一.其核心蛋白是位于内质网上的基质相互作用分子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)及位于细胞膜上的钙释放激活钙通道蛋白1(calcium release-activated calcium channel protein 1,CRCM1/Orai1).随着研究的不断深入,SOCE通道在肿瘤中的作用机制逐渐阐明并加以完善,同样在消化系肿瘤中SOCE通道也发挥了重要作用.本文重点对SOCE通道基本信息、及其在消化系肿瘤中研究概况进行综述,并初步分析其作用机制.

钙库操纵性钙通道蛋白在环磷酰胺诱导的膀胱过度活动症大鼠模型膀胱组织中的表达

目的制备膀胱过度活动症(overactive bladder,OAB)大鼠模型,探讨钙库操纵性钙通道蛋白在OAB大鼠膀胱组织中的表达。方法30只健康雌性SD大鼠,随机分为模型组和对照组各15只。模型组单次腹腔注射环磷酰胺200mg/kg制备OAB模型,对照组腹腔注射等量生理盐水。2组腹腔注射后24h行尿流动力学检查,观察排尿间期、排尿阈值、基础膀胱压力和平均逼尿肌压力。尿流动力学检查后立即处死大鼠,取膀胱组织,采用Western blot法检测膀胱组织钙释放激活钙通道蛋白1(calcium release-activated calcium channel protein 1,Oria1)、基质交联分子1(stromal interacting molecule 1,STIM1)蛋白相对表达量,实时荧光定量PCR法检测Oria1mRNA、STIM1mRNA相对表达量。结果对照组储尿期及排尿期逼尿肌收缩平稳、未见明显不稳定收缩,模型组在储尿期出现明显不稳定收缩;模型组排尿间期[(217.8±176.7)s]短于对照组[(412.8±276.4)s](P<0.05),排尿阈值[(10.0±2.6)cm H_(2)O]低于对照组[(14.3±2.7)cm H_(2)O](P<0.05),基础膀胱压[(11.4±3.7)cm H_(2)O]高于对照组[(7.5±2.6)cm H_(2)O](P<0.05),平均逼尿肌压力[(54.8±20.7)cm H_(2)O]与对照组[(43.2±8.2)cm H_(2)O]比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组膀胱组织Orai1蛋白(0.36±0.21)及STIM1蛋白(0.63±0.46)相对表达量、Orai1mRNA(1.92±0.80)及STIM1mRNA(0.42±0.22)相对表达量均高于对照组(0.21±0.13、0.44±0.31、0.59±0.06、0.16±0.02)(P<0.05)。结论环磷酰胺诱导的OAB大鼠模型膀胱组织中钙库操纵性钙通道相关蛋白Orai1及STIM1表达升高。

粉防己碱通过调控SOCE通路对L-精氨酸诱发的小鼠重症急性胰腺炎的防治作用

目的观察粉防己碱(Tetrandrine,Tet)对L-精氨酸(L-arginine)诱发的重症急性胰腺炎(SAP)小鼠胰腺组织钙库操纵的Ca2+通道(SOCE)的关键效应蛋白基质相互作用分子1(STIM1)及钙释放激活钙通道蛋白1(ORAI1)表达的影响,探讨粉防己碱防治重症急性胰腺炎的作用机制。方法将健康昆明小鼠40只随机分为4组:对照组、重症急性胰腺炎模型组、粉防己碱高剂量组及粉防己碱低剂量组,每组10只。除对照组外,其余小鼠均给予腹腔注射20%L-精氨酸复制重症急性胰腺炎模型(3.5 g·kg^(-1),共2次,间隔1 h),在模型复制4 h后粉防己碱治疗组给予腹腔注射粉防己碱高、低剂量治疗(120、60 mg·kg^(-1),每日2次,共3 d)。于模型复制72 h后麻醉动物,收集血清,检测血清淀粉酶水平;完整摘取小鼠胰腺及肺组织,胰腺称质量并计算胰腺脏体比;HE染色观察各组小鼠胰腺及肺组织形态学改变;免疫组化法观察胰腺组织STIM1及ORAI1的阳染表达;Western Blot法检测胰腺组织STIM1及ORAI1蛋白的表达;RT-qPCR法检测胰腺组织STIM1及ORAI1 mRNA的表达。结果与对照组比较,重症急性胰腺炎模型组小鼠血清淀粉酶及胰腺脏体比均明显增加(P<0.01);胰腺组织出现明显水肿,腺泡细胞大面积坏死伴胰腺间质出血及大量炎症细胞浸润,肺组织可见肺泡间隔明显水肿、增宽,并伴大量炎症细胞浸润及充血;胰腺组织STIM1及ORAI1的蛋白和mRNA表达水平均明显增高(P<0.01)。与重症急性胰腺炎模型组比较,粉防己碱高、低剂量组小鼠血清淀粉酶及胰腺脏体比明显降低,胰腺及肺组织损伤程度减轻,胰腺组织水肿、出血及坏死程度明显减轻,炎性细胞浸润减少,胰腺组织STIM1及ORAI1的蛋白和mRNA表达水平均明显降低(P<0.01)。结论重症急性胰腺炎小鼠胰腺组织SOCE信号通路活化,参与重症急性胰腺炎的病程进展;粉防己碱可通过抑制SOCE信号通路活化,进而减轻重症急性胰腺炎胰腺损伤程度。

肺纤维化大鼠肺微血管内皮细胞[Ca^(2+)]i变化及其机制探讨

目的:研究肺纤维化(PF)大鼠肺微血管内皮细胞内的Ca2+变化,探讨其在PF中的作用机制.方法:SD大鼠20只,随机分为PF组和对照组,每组10只动物,按5mg/kg体质量分别气管滴注博莱霉素及等量生理盐水,取外周肺组织原代培养肺微血管内皮细胞,利用激光扫描共聚焦显微镜测定细胞内[Ca2+]i及中电导钙激活钾通道蛋白1(IKca1)表达,计算机图像分析免疫细胞化学法IKca1的表达.结果:激光扫描共聚焦显微镜检测PMVECs内[Ca2+]i:PF组为(166.56±24.17)明显高于对照组(95.79±13.51),两组比较差异具有统计学意义(P<0.01).间接免疫荧光法检测IKca1表达:PF组为(679.29±206.98)明显低于对照组(958.75±188.84),两组比较差异具有统计学意义(P<0.01);免疫细胞化学检测IKca1表达:PF组(169.08±14.81)明显低于对照组(189.78±13.73),两组比较差异具有统计学意义(P<0.01).结论:PF时,肺微血管内皮细胞[Ca2+]i过载,其发生机制可能与IKca活性异常有关.

白藜芦醇调节STIM1抗动脉粥样硬化的机制

目的:实验利用apoE^(-/-)小鼠高脂喂养建立动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)模型,观察基质相互作用因子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)在白藜芦醇抗AS中的具体机制。方法:雌性apoE^(-/-)小鼠卵巢切除后高脂喂养建立AS模型,实验分为正常组、模型组、白藜芦醇低、中、高剂量(50,100,150 mg·kg^(-1))组及补充雌激素组(0.3 mg·kg^(-1))。分别检测各组小鼠血清中血脂4项,油红O染色观察胸主动脉形态改变,蛋白质免疫印迹(Western blot)分析各组小鼠血管组织中STIM1,钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)及雌激素受体α(ERα)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分析各组小鼠血管组织中STIM1及Orai1 mRNA表达情况。结果:与正常组比较,模型组血清中总胆固醇(CHOL),甘油三酯(TG)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)升高,而高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量明显下降(P<0.05),给予白藜芦醇及雌激素后可明显降低高脂饮食所致的CHOL,TG及LDL-C明显升高,并可明显增加HDL-C含量(P<0.05)。油红O染色显示:正常组血管结构完整、清晰、内膜连续;模型组内膜增厚、可见明显脂质斑块;而加入不同剂量白藜芦醇或雌激素后,内膜增厚减轻且内膜下脂质斑块显著减少。Western blot及Real-time PCR结果显示:与正常组比较,模型组STIM1,Orai1蛋白及mRNA表达明显升高(P<0.05),而加入不同剂量白藜芦醇或雌激素后STIM1,Orai1蛋白及mRNA表达较模型组均明显下降(P<0.05);同时Western blot结果还显示,与模型组比较,加入不同剂量白藜芦醇或雌激素后均可增加血管组织中ERα表达。结论:白藜芦醇可通过增加ERα表达,下调STIM1及Orai1表达,抑制钙池操纵性钙通道(SOCC)介导的钙内流,延缓AS发生。

干扰ORAI1表达对前列腺癌PC-3细胞迁移侵袭及上皮间质转化的影响

目的观察钙释放激活钙通道蛋白1(ORAI1)对前列腺癌PC-3细胞侵袭转移能力的影响并探讨其在上皮间质转化(EMT)过程中的作用。方法将携带ORAI1基因的小干扰RNA(shRNA)慢病毒载体LV-ORAI1-RNAi转染人前列腺癌PC-3细胞(KD组),同时设对照组(NC组),并添加转化生长因子β1(TGF-β1)。实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot验证抑制ORAI1表达的有效性。采用Celigo划痕实验及Transwell迁移、侵袭实验检测抑制ORAI1对细胞运动及迁移、侵袭能力的影响。采用Western blot检测EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波动蛋白(Vimentin)及smad3、p-smad3在各组细胞中含量的差异。结果与对照组相比,转染LV-ORAI1-RNAi后,细胞内ORAI1的mRNA及蛋白水平均降低。Celigo划痕实验显示,与NC组(14.38%±0.77%)比较,KD组(10.24%±1.17%)迁移率降低(P<0.05);与NC+TGF-β1组(26.21%±2.23%)比较,KD+TGF-β1组(12.44%±1.29%)迁移率降低(P<0.05)。Transwell迁移实验显示,与NC组(298±14.2)比较,KD组(229±8.4)迁移细胞数目降低(P<0.05);与NC+TGF-β1组(338±12.9)比较,KD+TGF-β1组(216±12.2)迁移细胞数目降低(P<0.05)。Transwell侵袭实验显示,与NC组(79±4.6)比较,KD组(46±3.4)侵袭细胞数目降低(P<0.05);与NC+TGF-β1组(123±5.1)比较,KD+TGF-β1组(66±5.5)侵袭细胞数目降低(P<0.05)。Western blot结果显示,与NC组比较,NC+TGF-β1组E-cadherin表达下降,N-cadherin和Vimentin表达升高;与NC+TGF-β1组比较,KD+TGF-β1组E-cadherin表达水平升高,N-cadherin、Vimentin和p-smad3表达下降。结论降低ORAI1表达后,PC-3细胞转移能力下降,可能通过TGF-β/smad3信号通路逆转EMT有关。