对吸入麻醉药敏感性不同的果蝇幼虫脑神经元钙激活钾电流的研究

目的神经元的兴奋性受钙激活钾电流(IKCa)调节,利用膜片钳技术,研究对吸入麻醉药具有不同敏感性的果蝇幼虫脑神经元的IKCa。方法分离制备对吸入麻醉药敏感(S)、耐药(R)和野生(H)果蝇品系脑神经元,以膜片钳技术记录其全细胞IKCa。结果在果蝇晚三龄幼虫脑神经元上只记录到外向钾电流,未见其他电流成分。三品系脑神经元膜电容(细胞大小)差异无显著性(P>0.05),而全细胞IKCa峰值差异有显著性:耐药>野生>敏感(P<0.05)。结论果蝇幼虫脑神经元IKCa峰值在三品系之间差异有显著性,这种差异可能解释三品系果蝇的不同耐药特性。

小剂量缓激肽对大鼠脑微血管内皮细胞和C6细胞钙激活钾电流的作用

目的研究小剂量缓激肽对大鼠脑血管内皮细胞和C6细胞钙激活钾电流的作用。方法应用膜片钳全细胞记录模式。结果指令电位为+60 mV时,1μmol.L-1缓激肽可使大鼠脑血管内皮细胞和C6细胞钙激活钾电流分别由给药前的(770±220)pA和(630±220)pA降至给药后的(370±40)pA和(308±19)pA(n=6,P<0.01)。结论小剂量的缓激肽通过抑制脑微血管内皮细胞和C6细胞的钙激活性钾电流,引起细胞的去极化。

缓激肽对胶质瘤血瘤屏障体外模型中钙激活钾电流的作用

目的建立胶质瘤血瘤屏障体外模型,研究缓激肽(BK)对胶质瘤血瘤屏障钙激活钾电流(Ikca)的作用,探讨BK开通血瘤屏障的机制。方法条件培养和共培养,膜片钳全细胞记录。结果条件培养的脑微血管内皮细胞(BMECs)形态无明显变化,胶质瘤C6细胞之间相互接触紧密。共培养的BMECs和C6细胞各自聚集,之间形成界面,1μmol.L-1缓激肽使BMECs和C6细胞界面内钙激活钾电流下降。结论1μmol.L-1的缓激肽抑制部分血瘤屏障体外模型BMECs和C6细胞的钙激活钾电流。

RNA干扰HeLa细胞IKCa1基因对中电导钙激活钾通道电流的影响

目的:本研究旨在探讨RNA干扰He La细胞IKCa1基因对中电导钙激活钾通道电流(IKCa1)的影响。方法:采用携带IKCa1基因的p Genesil-IKCa1质粒及p Genesil-HK对照质粒分别转染He La细胞。实验分为Control组(无质粒转染组),p Genesil-HK组和p Genesil-IKCa1组。在荧光显微镜下观察报告基因GFP在He La细胞中的表达情况并将GFP阳性率作为转染效率的评价指标,采用RT-PCR技术检测IKCa1基因的表达水平,应用膜片钳电生理技术记录IKCa1。结果:1 p GenesilHK组和p Genesil-IKCa1组转染率分别为75.3%和72.4%,两组之间阳性率差异无统计学意义(P>0.05);2 p Genesil-IKca1组IKCa1基因的m RNA表达水平明显低于Control组及p Genesil-HK组(P<0.01);3在He La细胞能记录到IKCal电流,该电流具有钙离子依赖性且能被Clotrimazole完全阻断,与Control组及p Genesil-HK组相比,p Genesil-IKCa1组的IKCa1电流电压曲线下移,钳制电压为+60 m V时电流密度为(10.05±3.37)p A/p F,明显低于Control组(21.78±5.54)p A/p F和p Genesil-HK组(20.54±5.29)p A/p F(P<0.01)。结论:通过RNA干扰能有效抑制宫颈癌He La细胞IKCa1电流,为今后开展以IKCal为靶点的宫颈癌的基因治疗提供新的靶点和电生理实验依据。

酶分离猪冠脉平滑肌细胞钙激活钾通道全细胞记录电学特性研究

目的 :观察急性酶分离猪冠脉平滑肌全细胞钙激活K+ 电流 (IKCa)特性及摸索可行的记录方法。方法 :采用常规膜片钳全细胞记录技术。结果 :分离的猪冠脉平滑肌细胞 (来自 15只猪的 4 7个细胞 ,膜电容 32 .3±8.8pF)上的主要K+ 电流为IKCa,此电流具电压依赖性和胞内游离Ca2 + 依赖性。IKCa选择性阻断剂Charybdotoxin(ChTX ,12 5～ 2 5 0× 10 - 9mol.L- 1 )可使外向电流降低 6 8± 8% (n =5 )。 10～ 2 0× 10 - 3mol.L- 1 TEA可阻断 74± 5 % (n =7)的外向电流。结论 :猪冠脉平滑肌细胞全细胞K+ 电流主要成分为IKCa,它与其它组织细胞报道的情况类似而又有独自的特点。我们的数据为猪冠脉平滑肌全细胞K+ 电流特性的认识提供了第一手资料 。

丹参素异丙酯对人肠系膜小动脉平滑肌细胞膜钙激活钾通道影响的研究

目的研究丹参素异丙酯[β-(3,4-二羟基苯基)-α-羟基丙酸异丙酯]对单个人肠系膜小动脉平滑肌细胞膜上钙激活钾通道的影响。方法取急性酶分离的人肠系膜动脉平滑肌细胞,用膜片钳技术记录其全细胞电流,在全细胞记录模式下,观察不同浓度丹参素异丙酯对全细胞钙激活钾电流的影响。结果①比较含三种不同钙浓度电极内液所记录到的外向电流,发现电流密度随钙浓度增加而增加;②丹参素异丙酯采用两种浓度:5mol/L、10mol/L;用药后5min两组IKCa增幅改变值分别为(13±3)和(36±7);③丹参素异丙酯使IKCaI-V曲线(I-V Curve)上移,用药后5min两组IKCa峰值电流密度增幅最大值分别为(19±2)和(40±3)。结论丹参素异丙酯具有激活钙激活通道,促进K+外流的作用,且有浓度依赖性,浓度高者作用更为明显。其促进K+外流的作用可能是其血管舒张的离子基础。

二性霉素B与β-escin混合穿孔电极液在人心房肌细胞SK2电流记录中的应用

目的:为研究钙离子对人心房肌细胞小电导钙激活钾通道电流(ISK2)的调节作用,建立用二性霉素B(amphotericin B)与β-escin穿孔的膜片钳(PPR)技术。方法:体外循环术中取得右心耳,应用急性酶分离获得单个人体心房肌细胞,用二性霉素B和/或β-escin作为穿孔电极液,进行穿孔膜片钳实验,在此模式下测试钙离子对人心房肌细胞SK2电流的调控作用,并用胞内钙测试系统验证穿孔前后胞内钙变化。结果:混合使用穿孔电极液6.88μg/mlβ-escin和150μg/ml二性霉素B与单独用150μg/ml二性霉素B或6.88μg/mlβ-escin相比,前一种方法细胞容易封接,能形成稳定的穿孔膜片钳记录模式,可观察到SK2电流有激活,且胞内钙测试系统检测时可观察到穿孔后电极液至细胞内的游离钙离子浓度的增加,F340/380增强。结论:适当浓度的二性霉素B与β-escin混合使用进行穿孔膜片钳实验是一种稳定的全细胞膜片的记录技术,可以用于胞内游离钙离子对SK2电流调控的研究。

冠状动脉平滑肌细胞大电导钙离子激活钾通道电流的特点

目的探讨正常大鼠冠状动脉平滑肌细胞大电导钙离子激活钾通道（BK通道）电流的特点，为研究疾病状况下冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流异常变化提供正常对照。方法酶消化法分离大鼠冠状动脉平滑肌细胞；采用不同阻滞剂，对冠状动脉血管平滑肌细胞上钾通道进行鉴定；采用全细胞和单通道膜片钳实验技术分别记录冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流，计算开放幅度和电导，观察BK通道电压敏感性和钙敏感性及加入特异性BK通道阻滞剂IBTX后BK通道电流的变化。结果正常冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流约占总钾离子流65％±4％（t／,=12），BK通道电导为（258±42）pS（n=6），在刺激电位150mV时，电流密度为（275±40）pA／pF（n=8）；在电极外液钙离子浓度为1μmol／L，刺激电位为0、20、40、60、80、100、120、140和160mV条件下，BK通道开放概率（NP0）分别为0、0．0002、0．0016±0．0005、0．0283±0．0081、0．05694±0．0102、0．3533±0．0514、1．4922±0．1578、2．5975±0．3632和4．6041±0．7834（P〈0．05，n=5）；在刺激电位60mV，电极外液钙离子浓度为0、0．001、0．01、0．1、1、10、50和100μmol／L条件下，BK通道NP。分别为0、0．0001、0．0031±0．0008、0．0042±0．0090、0．0808±0．0105、0．7591±0．1274、2．7242±0．4612和3．2366±0．5728（P〈0．05，n=6）。结论BK通道广泛分布于冠状动脉平滑肌细胞上，具有电压敏感性和钙敏感性，对冠状动脉血管张力调节起重要作用。

大电导钙激活钾离子通道与糖尿病视网膜动脉病变

大电导钙激活钾离子通道，即BK。通道，最早于1981年在牛嗜铬细胞中发现，1991年其仪亚基从果蝇中克隆并表达出来，由于Ⅸ亚基位点上的突变与肌肉和神经元的钙激活钾电流相关，因此又称为dSlo通道，随后在哺乳动物、人和线虫上也克隆了出来。后续研究证明，BK。通道广泛分布于各种组织细胞中，犬及人平滑肌细胞中最多怛。

柚皮素通过激活大电导钙激活钾离子电流对大鼠肠系膜动脉的松弛作用

目的研究柚皮素对大鼠离体肠系膜动脉的松弛作用,并探讨与大电导钙激活钾离子通道(BK_(Ca))的相关性。方法从SD大鼠分离得到肠系膜动脉,并分离其血管平滑肌细胞(VSMCs)。(1)将肠系膜动脉分为2组(及其进行张力测定):正常对照组(先用血管加压素或者KCl收缩血管,然后加入不同浓度的等量溶剂);实验组(先用血管加压素或者KCl收缩血管,然后加入不同浓度柚皮素,进行舒张)。将肠系膜动脉先用血管加压素或KCl收缩,记录其张力;然后在1×10^(-5)mol·L^(-1)柚皮素存在的情况下,再次加入血管加压素或KCl收缩,比较其张力变化。(2)正常对照组(提前孵育等量溶剂,然后加入血管加压素或者KCl收缩血管);实验组(提前孵育柚皮素,然后加入血管加压素或者KCl收缩血管)。(3)将肠系膜VSMCs分为2组观察记录其BK_(Ca)电流:正常对照组(先记录基础BK_(Ca)电流,然后加入溶剂后再次记录);实验组(先记录基础BK_(Ca)电流,然后加入1×10^(-5)mol·L^(-1)柚皮素后再次记录)。在记录基础BK_(Ca)电流之后,正常对照组加入溶剂,实验组加入1×10^(-5)mol·L^(-1)柚皮素。观察柚皮素对肠系膜动脉VSMCs BK_(Ca)电流的影响。结果 (1)用血管加压素收缩后,正常对照组和实验组的最大舒张百分比分别是(99. 08±4. 23)%和(38. 34±2. 57)%;用KCl收缩后,这2组的最大舒张百分比分别是(98. 93±3. 09)%和(35. 46±4. 05)%,组间比较差异均有统计学意义(均P <0. 01)。(2)孵育柚皮素前后,这2组的肠系膜动脉对血管加压素的收缩幅度分别为(3. 09±0. 27),(1. 75±0. 18) mN;这2组对KCl的收缩幅度分别为(3. 48±0. 31),(1. 48±0. 16) mN,组间比较差异均有统计学意义(均P <0. 01)。(3)这2组的大鼠肠系膜动脉VSMCs的BK_(Ca)电流最大电流密度分别为(25. 36±4. 12),(42. 58±3. 27) pA/pF,组间比较差异有统计学意义(P <0. 01)。结论柚皮素可以松弛大鼠肠系膜动脉,其松弛作用与增加BK_(Ca)电流有关。