钙磷脂结合蛋白Ⅱ在人肝细胞癌中的表达

目的:应用抑制差减杂交技术(supressionsubtractivehybridization,SSH)结合cDNA芯片筛选人肝细胞癌中差异表达基因。进一步探讨所筛选出的钙磷脂结合蛋白(annexinⅡ)在肝细胞中的表达及作用。方法:以肝癌组织和非肿瘤肝组织进行SSH,构建正、反向差减杂交文库,差减片断的PCR产物制备cDNA芯片,筛选出肝癌组织中差异表达基因。进一步应用荧光实时定量技术验证芯片结果,免疫组化方法分析annexinⅡ在肝细胞癌和正常肝组织中的表达。结果:成功构建了肝细胞癌差减杂交文库。芯片结果显示annexinⅡ在肝细胞癌中高表达并经荧光实时定量技术证实。免疫组化结果表明annexinⅡ在肝细胞癌和癌旁肝硬化组织中高表达,在正常肝组织中不表达(P<0.05)。在低分化肝细胞癌中annexinⅡ的表达有增高趋势。结论:SSH方法构建的肝细胞癌差减杂交文库富含肝细胞癌差异表达基因。肝细胞癌中高表达基因annexinII可能与肝细胞的恶性转化,肝癌细胞的转移和侵袭能力有关。

兔脑完全性缺血后再灌流时钙磷脂酶A_2和游离脂肪酸的变化

脑缺血后再灌流时发生的神经元损伤有多种致病因子参与。诸如:细胞内游离Ca^(2+)升高和组织钙总量增多,磷脂酶A_2(PLA_2)活化,细胞膜磷脂降解和游离脂肪酸(FFA)释放增加,曾先后见于文献报道。但是,如今存在的最大缺陷是对上述因子之间的相互关系尚无足够的认识。为了适当弥补上述缺陷和进一步认识它们在脑缺血后再灌流时的发病学意义。本研究采用“四血管式模型,在同一动物上同时检测了脑缺血后再灌流时上述因子的变化。

子宫内膜癌组织中钙磷脂结合蛋白Ⅱ的表达及其意义

目的研究子宫内膜癌组织中钙磷脂结合蛋白Ⅱ(AnnexinⅡ)的表达及其意义。方法用免疫组化检测86例子宫内膜癌组织中AnnexinⅡ的表达,分析AnnexinⅡ与临床病理特征的关系。结果子宫内膜癌组织中AnnexinⅡ表达阳性率高于正常子宫内膜组织,AnnexinⅡ表达与淋巴结转移、病理分级及临床分期有相关性,与肿瘤病理组织类型无相关性。结论AnnexinⅡ表达可能与子宫内膜癌生长和淋巴结转移有关。

钙磷脂结合蛋白Ⅰ及其与肿瘤的关系

钙磷脂结合蛋白Ⅰ (AnnexinⅠ ,LipocortinⅠ )是钙磷脂结合蛋白 (Annexins)超家族中的成员 ,作为表皮生长因子受体 (EGFR)酪氨酸激酶的底物 ,磷脂酶A2 (PLA2 )的抑制剂具有多种生物学功能 ,并在多种肿瘤发生早期出现表达水平的改变 ,尽管目前具体的机制还不清楚 ,但它为研究肿瘤的发生、发展、早期诊断。

钙磷脂结合蛋白Ⅱ在食管鳞癌组织中的表达及临床意义

目的研究钙磷脂结合蛋白Ⅱ(AnnexinⅡ)在食管鳞癌及癌旁组织中的表达,分析其与食管鳞癌临床病理特征间的关系。方法应用免疫组化法检测AnnexinⅡ在41例食管鳞癌组织及配对的癌旁组织、10例正常胃组织中的表达。结果 AnnexinⅡ蛋白在食管鳞癌组织中的表达明显高于癌旁组织及正常组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。食管鳞癌组织中AnnexinⅡ的表达水平与肿瘤分化程度及淋巴结是否转移相关(P<0.05),而与年龄、性别、浸润深度、临床分期无关(均P>0.05)。结论AnnexinⅡ的表达在食管鳞癌的发生、发展过程中起重要作用,有望作为食管鳞癌诊治的新靶点。

钙磷脂结合蛋白Ⅱ在人食管鳞状细胞癌中的表达

目的 探讨钙磷脂结合蛋白Ⅱ (annexinⅡ )在人食管鳞状细胞癌中的表达变化及其与食管鳞状细胞癌临床病理的相互关系。方法 应用半定量RT PCR、免疫组织化学和光密度扫描等方法 ,从mRNA和蛋白两个水平检测食管鳞状细胞癌中annexinⅡ的表达 ,并分析其与肿瘤分化程度的关系。结果 annexinⅡ在mRNA和蛋白水平上均在食管鳞癌组织中低表达 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ,在中分化和低分化肿瘤中 ,蛋白表达明显低于高分化肿瘤 (P <0 .0 5 )。结论 annexinⅡ在食管鳞状细胞癌中低表达 ,可能与鳞状细胞的分化程度有关。

钙磷脂结合蛋白Ⅰ及其相关基因蛋白在子宫内膜增殖症、不典型增生和子宫内膜腺癌中的表达和意义

目的 研究钙磷脂结合蛋白Ⅰ (Annexin Ⅰ ,AX Ⅰ )在子宫内膜病变中的表达及在交界病变鉴别诊断中的意义。方法 收集 3 7份子宫内膜不同病变标本 ,经HE染色 ,在光镜下按国内及国际妇产科联合会 (FIGO)标准分类 ,AX Ⅰ、雌激素受体、孕激素受体、表皮生长因子受体、胰岛素样生长因子 Ⅰ受体与c erbB 2的免疫组织化学染色采用LSAB法。结果 腺囊性子宫内膜增殖症 12例、子宫内膜不典型增生 (ATH) 10例、子宫内膜癌 (EC) 15例。免疫组织化学AX Ⅰ在腺囊性增殖症中 ,除 1例弱阳性外 ,均为阴性 ;在不典型增生组 9例为强阳性 ,1例弱阳性 ;内膜癌则 7例弱阳性 ,8例阴性 ;内膜鳞化或鳞癌区呈强阳性。c erbB 2蛋白在不典型增生组 9例为阳性 ,1例阴性。表皮生长因子受体 (EGFR)均呈强阳性 ,胰岛素样生长因子受体 Ⅰ受体的表达弱且无规律。p5 3表达在EC组较ATH组略强。结论 AX Ⅰ基因蛋白可能在肿瘤的发病初期起作用 ,癌变后其表达下降 ,甚至消失 ;AX Ⅰ强阳性对ATH与EC鉴别具有一定价值。另外 ,c erbB 2与AX Ⅰ的表达似乎存在一种平行的关系。

钙磷脂结合蛋白Ⅱ在人肝细胞癌组织的表达及其临床意义

目的观察钙磷脂结合蛋白Ⅱ（Annexinll）在人肝细胞癌（HCC）组织中的表达。方法采用荧光实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）方法检测33例HCC患者肝癌组织和配对的癌旁肝组织以及11例正常肝组织中AnnexinⅡmRNA表达；利用免疫组织化学方法检测104例HCC组织和配对的癌旁肝组织中AnnexinⅡ蛋白的表达。结果肝癌组织中AnnexinⅡmRNA表达量高于癌旁肝组织和正常肝组织，是癌旁肝组织的3．38倍（P〈0．01），是正常肝组织的4．42倍（P〈0．01）；AnnexinII蛋白表达明显高于配对的癌旁肝组织（P〈0．05）。年龄≤40岁的患者AnnexinⅡmRNA表达水平是年龄〉40岁患者的1．875倍（P〈0．05）。结论AnnexinII在人HCC患者肝癌组织中表达上调，可能成为肝细胞癌临床诊断的新的候选基因。

钙磷脂结合蛋白Ⅱ在卵巢腺癌中的表达及其意义

目的探讨钙磷脂结合蛋白Ⅱ（AnnexinⅡ）在卵巢腺癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测48例卵巢腺癌和10例卵巢腺瘤组织中AnnexinⅡ蛋白的表达，并对样本表达率进行Х^2检验。结果AnnexinⅡ蛋白阳性率在卵巢腺瘤组织中为50．00％（5／10），在卵巢腺癌组织中为81．25％（39／48），差异有统计学意义（Х^2=4．414，P〈0．05）；AnnexinⅡ蛋白在卵巢浆液性腺癌高、中分化组及低分化组中的阳性率分别为93．33％（14／15）和78．95％（15／19），差异无统计学意义（Х^2=1．383，P〉0．05）；AnnexinⅡ蛋白在卵巢浆液性腺癌Ⅰ、Ⅱ期及Ⅲ、Ⅳ期组织中的阳性率分别为60．00％（6／10）和95．83％（23／24），差异有统计学意义（Х^2=7．226，P〈0．05）；AnnexinⅡ蛋白在卵巢浆液性腺癌淋巴结转移组阳性率为90．00％（27／30），而在无淋巴结转移组为50．00％（2／4），差异有统计学意义（Х^2=4．502，P〈0．05）。结论AnnexinⅡ蛋白阳性表达与卵巢浆液性腺癌的发生、发展和淋巴结转移有关。

人重组钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅴ在大肠杆菌中的高效表达、纯化及细胞凋亡检测

目的 :为细胞凋亡研究提供快速可靠的实验方法。方法 :利用RT PCR技术从人外周血单核细胞系U937cDNA文库中扩增出编码钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅴ (AnnexinⅤ )cDNA ,并克隆到大肠杆菌表达载体中 ,在大肠杆菌中表达含凝血酶识别序列的MS2AnnexinⅤ融合蛋白。表达产物经凝血酶消化 ,可除去MS2细菌蛋白 ,再经离子交换层析纯化 ,可得成熟的AnnexinⅤ纯品 ,FITC标记后的AnnexinⅤ可用于细胞凋亡的检测。结果 :在大肠杆菌表达的人重组AnnexinⅤ占菌体蛋白的 5 6 % ,经纯化获得 99%纯度的非融合型AnnexinⅤ ,FITC标记的An nexinⅤ能有效地检测凋亡细胞。结论 :成功地建立了批量获取AnnexinⅤ的技术路线 。

胡蜂蜇伤患者早期血清钙非依赖磷脂酶 A2水平的变化及其临床研究

目的：探讨秦巴山区胡蜂蜇伤患者血清钙非依赖磷脂酶A2（iPLA2）水平的变化及其临床意义。方法将34例来我院就诊的胡蜂蜇伤患者，依据实验室检查分为非溶血组、溶血组，采集血清备用；另以10例健康体检者血清作为正常对照组。依据实验室检查和临床指征，比较非溶血组、溶血组患者多器官功能障碍综合征（MODS）的发生情况。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清 iPLA2、前列腺素 E2（PGE2）和血栓素 A2（TXA2）水平，各组之间比较并进行统计学分析。结果溶血组患者发生MODS比例明显高于非溶血组（16/19 vs.5/15，P＜0.01）。胡蜂蜇伤患者血清TXA2水平均明显高于正常对照组（P＜0.01）；溶血组TXA2水平高于胡蜂蜇伤非溶血组患者，但差异无统计学意义（P＞0.05）。溶血组患者血清 PGE2水平明显高于非溶血组患者（P＜0.01）。溶血组患者血清iPLA2水平明显高于胡蜂蜇伤非溶血组和正常对照组（P＜0.01）。胡蜂蜇伤患者iPLA2水平与PGE2水平呈正相关（r＝0.867，P＝0.000），也与TXA2水平呈正相关（r＝0.543，P＝0.004）。结论胡蜂蜇伤患者发生溶血是引起MODS重要因素之一。胡蜂蜇伤溶血患者血清iPLA2明显升高，它可能参与胡蜂蜇伤重症患者MODS的发生、发展，动态监测iPLA2水平的变化，可以评估患者病情、指导治疗及帮助判断患者的预后。

钙拮抗剂调节钙非依赖磷脂酶A_2拮抗心脏微血管内皮细胞缺氧/复氧损伤的研究

目的探讨经典钙拮抗剂维拉帕米(Ver)、硝苯地平(Nif)、地尔硫(Dil)及本课题组合成的新型钙拮抗剂-碘化N-正丁基氟哌啶醇(F_2)通过调节钙非依赖磷脂酶A_2(iPLA_2)抗心脏微血管内皮细胞(CMECs)缺氧/复氧(H/R)损伤的作用与机制。方法培养大鼠原代CMECs,制作H/R模型,在H/R的基础上,用不同浓度梯度的钙拮抗剂及F_2处理细胞,比色法测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的漏出反映细胞损伤程度;酶联免疫吸附法(ELISA)测定白介素-6(IL-6)和花生四烯酸(AA)的含量;TUNEL法检测细胞晚期凋亡水平;Real-time PCR检测iPLA_2mRNA表达,Western blot检测iPLA_2蛋白表达。结果钙拮抗剂F_2、Ver和Nif均可量效-依赖性地减少H/R过程中LDH漏出(P<0.05),降低IL-6和AA含量(P<0.05),减少细胞凋亡(P<0.05),而Dil对上述指标均无作用;同时,F_2和Ver均可量效-依赖性地降低iPLA_2mRNA和蛋白表达水平,Nif和Dil对H/R过程中iPLA_2mRNA和蛋白表达水平并无影响。结论H/R可导致CMECs损伤,钙拮抗剂F_2、Ver、Nif能保护CMECs抗H/R损伤,Dil无抗H/R损伤的作用;而F_2和Ver是部分通过调节iPLA_2抗H/R损伤作用的。

红黑二丸甾醇提取物通过非钙依赖磷脂酶A2介导的抗心肌细胞缺氧复氧损伤研究

目的:探讨红黑二丸甾醇提取物抗心肌细胞H/R损伤的作用与机制。方法:western blot检测不同H/R时间点iPLA2蛋白的表达,确定H/R的时间点;在H/R的基础上,用不同浓度梯度的红黑二丸甾醇提取物处理细胞,western blot检测iPLA2蛋白表达,MTT法检测细胞存活率,试剂盒检测LDH、SOD、MDA、TNF-α的含量,流式细胞术检测凋亡。结果:H60min/R30min,iPLA2蛋白表达最高(P<0.01),红黑二丸甾醇提取物量效依赖地降低了其蛋白表达,同时降低H/R时LDH、MDA、TNF-α的含量,减少凋亡,提高SOD的活性及细胞的存活率(P<0.05)。结论:红黑二丸甾醇提取物能通过i PLA2量效依赖地抗心肌细胞H/R损伤。

钙非依赖磷脂酶A_2参与非L型钙通道开放引起的心肌细胞缺氧复氧损伤

目的:探讨钙非依赖磷脂酶A2(iPLA2)是否参与胞外无钙缺氧复氧(H/R)损伤。方法:制作无钙H/R模型,观察不同H/R时间点iPLA2和超氧化物歧化酶(SOD)的表达。在无钙H/R条件下,利用iPLA2质粒转染心肌细胞株(H9C2)使iPLA2过表达,通过检测氧自由基指标SOD活性、丙二醛(MDA)浓度和炎症指标花生四烯酸(AA)分泌来观察细胞损伤情况;利用SiRNA干扰使iPLA2基因沉默,检测上述指标,观察细胞损伤情况。结果:无钙H45 min/R30 min时,iPLA2蛋白表达最高且SOD活性较正常组有显著性下降(P<0.05);在无钙H45min/R30min条件下,转染iPLA2的质粒后,可使iPLA2高表达,SOD活性降低,MDA、AA浓度升高(P<0.01);转染iPLA2的SiRNA进行干扰后,可使iPLA2低表达,提高SOD活性,降低MDA、AA浓度(P<0.01)。结论:iPLA2参与了无钙H/R损伤,高表达可加重损伤,低表达可减轻损伤。

钙非依赖磷脂酶A_2与心肌缺血再灌注关系的研究进展

钙非依赖磷脂酶A2(iPLA2)是磷脂酶A2(PLA2)家族的一大亚族,在信号转导与磷脂重构等方面发挥重要的作用。从1900年研究胰液和蛇毒中的PLA2开始到现在已过百年,但它在生理过程中的一些重要作用直到近20年才被逐渐认识,而近15年来,越来越多的研究表明,在心肌缺血再灌时,iPLA2被激活并发挥着重要作用。本文就iPLA2做一个简介并阐述其与心肌缺血再灌注有关的性质与功能。

钙非依赖性磷脂酶A_(2)在肾内动脉平滑肌收缩反应中的作用

目的探讨钙非依赖性磷脂酶A_(2)(calcium-independent phospholipase A_(2),iPLA_(2))在肾内动脉平滑肌收缩钙调控中的作用。方法利用离体小动脉张力测定方法,研究iPLA_(2)特异性抑制剂溴烯醇内酯(bromoenol lactone,BEL)对不同钙通道诱导小鼠肾内动脉张力影响,同时利用激光共聚焦测钙技术,探索BEL对花生四烯酸调节钙(arachidonate-regulated Ca^(2+),ARC)通道介导细胞内钙离子内流的影响。结果BEL可抑制血管收缩剂苯肾上腺素和5-羟色胺诱导的肾内动脉浓度依赖性收缩反应(P<0.01);BEL对CaCl_(2)诱导的收缩曲线也有抑制作用(P<0.05);在硝苯地平孵育后的无钙K-H溶液中,BEL对肌浆网钙释放和CaCl_(2)诱导SOC通道钙内流引起的肾内动脉血管收缩均有抑制作用(P<0.05);BEL可明显抑制硝苯地平孵育后人主动脉平滑肌细胞株的ARC通道介导的外钙内流(P<0.01)。结论iPLA_(2)通过调节L型钙通道、肌浆网钙释放、SOC通道及ARC通道功能介导肾内动脉血管的收缩反应。

钙非依赖型磷脂酶A_(2)介导心肌缺血再灌注损伤

目的:探讨钙非依赖型磷脂酶A_(2)(Ca^(2+)-independent PLA_(2),iPLA_(2))在小鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用。方法:采用CRISPR方法构建iPLA_(2)基因敲除(iPLA_(2)^(-/-))小鼠,通过结扎C57BL/6JNifdc小鼠的左冠状动脉前降支建立心肌缺血再灌注模型,采用蛋白质印迹法检测iPLA_(2)蛋白的表达;全自动生化分析仪检测血清心肌酶的活性;间接免疫荧光标记法检测CD68的表达。结果:野生型小鼠心肌缺血再灌注中,缺血45 min再灌注3 h时iPLA_(2)蛋白的表达最高。与野生型心肌缺血再灌注小鼠比较,iPLA_(2)^(-/-)小鼠心肌缺血再灌注损伤得到改善,表现为血清乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶的漏出减少和CD68阳性细胞数减少。结论:iPLA_(2)蛋白的高表达是小鼠心肌缺血再灌注损伤的重要原因,iPLA_(2)可能是治疗心肌缺血再灌注损伤的潜在靶点。

卵磷脂与细胞周期

卵磷脂作为哺乳动物细胞膜结构组成的重要成分,在细胞增殖过程中表现出周期性的变化.卵磷脂生物合成和分解代谢中关键酶的共同作用调节卵磷脂的变化规律,尤其是CTP:磷酸胆碱胞苷转移酶和非钙依赖的磷脂酶A2在其中起着非常重要的调节作用.在简述卵磷脂在细胞周期中的变化规律的基础上,详细阐述了卵磷脂周期性变化规律的调节机理,并就卵磷脂和细胞周期的关系及其重要生物学意义与相关疾病发生关系进行了探讨.

依赖性膜磷脂结合蛋白AnnexinⅡ对大鼠脊髓横断损伤的修复作用

目的在体内实验中观察钙依赖性膜磷脂结合蛋白AnnexinⅡ对大鼠脊髓损伤以及神经干细胞移植的作用。方法在成年大鼠全横断脊髓损伤的局部微量注射AnnexinⅡ,观察其对损伤的脊髓神经细胞存活、神经纤维生长和损伤后的功能恢复的影响,以及对联合移植的胚胎神经干细胞移植后存活和迁移的影响。结果在动物脊髓横断损伤6周,神经干细胞移植4周后,损伤局部微量注射AnnexinⅡ+NSC移植组实验动物的运动评分结果较空白对照组和单独进行NSC移植组都有明显增高(P<0.01),脊髓损伤处的空洞面积也较上述两组显著减小(P<0.01);注射AnnexinⅡ+NSC组损伤节段以上荧光金标记神经细胞数目较空白对照组明显增多(P<0.01)。结论AnnexinⅡ蛋白可能具有减小局部损伤空洞面积,保护损伤的神经元和神经纤维并防止其走向变性和死亡的效应,并对神经干细胞的移植效应有一定的促进和协同作用,使脊髓损伤大鼠的功能得到一定程度的恢复。