钙磷酸蛋白C对乳癌细胞MDA-MB-435S凋亡的影响

目的:研究钙磷酸蛋白C对乳癌细胞MDA-MB-435S凋亡的影响及相关机制。方法:采用倒置显微镜、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术等方法观察钙磷酸蛋白C处理前后MDA-MB-435S细胞形态、基因组DNA断裂和凋亡细胞数的变化;采用RT-PCR检测钙磷酸蛋白C处理前后MDA-MB-435S细胞凋亡相关基因bcl-XL、bcl-2、IAP-1、bax及Smac mRNA表达的变化;采用Western blotting法测定Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果:与MDA-MB-435S亲本细胞(对照组)相比,钙磷酸蛋白C处理后的MDA-MB-435S细胞(实验组)出现凋亡形态学特征(如胞膜发泡、染色质凝集、凋亡小体形成等)改变,显示特征性的DNA"梯状"断裂变化,凋亡细胞数明显增多。RT-PCR和Western blotting结果显示:与对照组相比,实验组细胞中促凋亡基因bax和Smac mRNA表达上调,抗凋亡基因bcl-2mRNA表达下调,但抗凋亡基因bcl-XL和IAP-1mRNA表达没有明显变化;实验组Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调。结论:钙磷酸蛋白C可诱导MDA-MB-435S凋亡,该作用可能与上调bax和Smac基因表达及下调bcl-2基因表达有关。

Calphostin C对乳腺癌细胞增殖的抑制作用及相关机制

目的研究Calphostin C对乳腺癌细胞MDA-MB-435S增殖的影响及初步机制。方法通过观察Calphostin C处理MDA-MB-435S细胞前后细胞的生长速度、倍增时间、克隆形成率和细胞周期分布等变化,探讨Calphostin C对MDA-MB-435S细胞增殖的影响;通过Western blotting、免疫细胞化学染色和RT-PCR等方法探讨Calphostin C影响MDA-MB-435S细胞增殖的初步机制。结果与MDA-MB-435S亲本细胞(对照组)相比,Calphostin C处理的MDA-MB-435S细胞(实验组)生长速度明显减慢,倍增时间明显延长(P<0.01),并且呈现浓度和时间依赖性;对照组和实验组细胞克隆形成率分别为(82.33±6.81)%和(22.00±1.73)%,差异有统计学意义(P<0.01);实验组细胞周期出现明显的G1期阻滞(P<0.01)。Western blotting和免疫细胞化学染色结果显示,与对照组细胞相比,实验组细胞中蛋白激酶Cα(protein kinase Cα,PKCα)表达没有明显变化,但活性状态(胞质转位至胞膜)的PKCα显著减少。West-ern blotting和RT-PCR结果显示,与对照组细胞相比,实验组细胞中p53、Cyclin A和Cyclin B表达没有明显变化,但p21表达上调,Cyclin E表达下调。结论Calphostin C可显著抑制乳腺癌细胞MDA-MB-435S的增殖,该作用可能与其抑制PKCα活性、上调p21表达和下调Cyclin E表达有关。