中电导钙激活钾离子通道在心脑血管疾病中的研究进展

在非传染性疾病中,心血管疾病(CVD)是导致死亡的主要原因。根据2023年更新的美国心脏学会报告,2017~2020年全球心血管疾病的患病率高达48.6%[1]。在中国,CVD的患病率和死亡率逐年上升,给社会带来巨大的经济负担。因此,心血管疾病的机制研究及诊治具有重要意义。

小电导的钙激活钾离子通道1的真核表达及其在乳腺癌细胞增殖中的作用

目的构建重组的真核表达质粒pENTER-小电导的钙激活钾离子通道1(small conductance calcium-gated K+channel 1,SK_(Ca)1),并研究其在乳腺癌细胞密歇根癌症基金会7号(Michigan cancer foundation-7,MCF-7)中的表达;观察SK_(Ca)1的亚细胞定位;检测SK_(Ca)1在乳腺癌细胞增殖中的作用。方法从MCF-7细胞中抽提总RNA并逆转录成cDNA;以cDNA为模板扩增SK_(Ca)1基因,通过无缝克隆技术将基因片段克隆至真核表达质粒pENTER中;质粒转染MCF-7细胞后,分别用Western blot和免疫荧光实验检测SK_(Ca)1的表达及亚细胞定位,用细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)实验测定SK_(Ca)1的细胞增殖效应。结果成功构建了带有标签的重组真核表达质粒pENTER-SK_(Ca)1,并在乳腺癌细胞MCF-7中高效表达;SK_(Ca)1主要分布于细胞质和细胞核,并能促进乳腺癌细胞增殖。结论成功制备了研究SK_(Ca)1的必要工具原料并对其分子机制进行了初步探索,为深入研究SK_(Ca)1在乳腺癌细胞中的信号转导作用奠定了基础。

人钙离子激活的氯离子通道的结构与功能

钙离子激活的氯离子通道(CLCA)是一种新型的氯离子通道,广泛分布于分泌型上皮组织中,介导一系列重要的病理生理功能。先后在牛、鼠、人和猪4个种属中发现,每一个CLCA家族成员在不同种属中有不同的表达部位和特定的功能。该文就4种人钙离子激活的氯离子通道—hCLCA1、hCLCA2、hCLCA3和hCLCA4进行综述,介绍结构和组织分布特点,简述在气道黏液高分泌、支气管哮喘、肺囊性纤维化、细胞周期控制、肿瘤发生发展、平滑肌收缩和视网膜病中的作用。

钙激活性中电导钾离子通道在宫颈癌组织中的表达及其在细胞凋亡中的作用

目的观察钙激活性中电导钾离子通道(IKCa1)在宫颈癌组织中的表达变化及其在宫颈癌HeLa细胞凋亡中的作用。方法用RT-PCR检测18例正常宫颈组织及15例宫颈癌组织中IKCa1 mRNA的表达;用IKCa1通道的阻断剂克霉唑处理宫颈癌HeLa细胞,用RT-PCR检测细胞IKCa1 mRNA的表达变化,MTT法观察细胞增殖抑制的变化。结果宫颈癌组织中IKCa1 mRNA的阳性表达率(73.33%)及表达水平(1.14±0.45)明显高于正常宫颈组织(11.11%和0.86±0.23)(P<0.05)。克霉唑以浓度和时间依赖的方式抑制HeLa细胞的增殖,下调IKCa1 mRNA的表达水平,诱导细胞凋亡。结论 IKCa1的异常表达可能与宫颈癌相关,降低其表达可能通过诱导细胞凋亡而抑制宫颈癌细胞的增殖。

神经病理性痛外周自发放电与钙激活钾离子通道的研究进展

神经病理性痛是一类特殊疼痛,其直接来源于影响躯体感觉系统的损伤或疾病,以自发性疼痛、痛觉过敏和痛觉超敏为特征[1]。正常神经纤维只传递信号,有研究[2]发现,大鼠外周神经损伤区域可以产生自发放电,这种异位放电发生于有髓传入神经纤维,以A类纤维为主。深入研究发现,在外周神经系统（peripheral nervous system）中有离子通道参与到不同性质疼痛的产生与维持中，

中电导钙激活钾离子通道在乳腺癌中的表达及其与临床病理指标的关系

目的探讨中电导钙激活钾离子通道(Intermediate-conductance calcium-activated potassium channel,SK4)在乳腺癌组织和细胞系中的表达及其临床意义。方法 42例乳腺癌组织标本,20例距肿瘤切缘2 cm的癌旁组织标本。免疫组织化学法(Immunohistochemistry,IHC)和Western Blot法(WB)检测SK4在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中的表达,并分析其与临床病理指标的关系。结果 SK4在癌组织中的表达高于癌旁组织。SK4在乳腺癌组织和癌旁组织中的表达阳性率分别为88.1%和35.0%(P<0.05);低、中、高分化肿瘤中SK4表达阳性率分别为100.0%、87.5%和75.0%(P<0.05);伴或不伴淋巴结转移的患者SK4的表达阳性率分别为69.2%和99.6%(P<0.05);在乳腺癌雌激素受体阳性和阴性中SK4的阳性率别为86.7%和91.7%(P>0.05)。SK4在乳腺癌细胞系MDA-MB-231和MCF-7中明显表达。结论 SK4在乳腺癌组织中表达增加;SK4的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移相关。

人宫颈鳞状上皮细胞癌组织中钙激活性中电导钾离子通道的表达

目的探讨人宫颈鳞状上皮细胞癌（简称鳞癌）组织中电导钾离子通道（IKCal）mRNA及其蛋白产物与正常宫颈上皮组织中钙激活性的差异。方法采用免疫组织化学法及RT-PCR法分别检测30例不同分化程度的宫颈鳞癌组织和18例正常宫颈上皮组织中IKCalmRNA及其蛋白产物的表达情况。结果（1）IKCalmRNA阳性表达率15例子宫颈鳞癌组织中分别为73．3％，表达水平为（1．2±n5），18例正常宫颈上皮组织中分别为11．1％，表达水平为（0．9±0．2），差异均有统计学意义；（2）30例宫颈鳞癌组织细胞核及细胞膜上IKCal蛋白产物均呈阳性表达；正常宫颈上皮组织中仅1例在鳞状上皮部位细胞膜部位有较弱表达，差异有统计学意义；（3）宫颈鳞癌组织中IKCal蛋白产物的表达与癌细胞分化程度呈正相关。结论IKCal的高表扶与宫颈鳞痛的发牛和发展密切相关．

中电导钙激活钾离子通道在肿瘤中的作用

恶性肿瘤是一类以分化障碍为特征的异常病理增生性疾病,其中细胞的过分化、增殖、肿瘤细胞的迁徙与新生血管生成等是恶性肿瘤生长、转移的重要原因之一。

神经病理性痛外周自发放电与钙激活钾离子通道

神经病理性痛是一类特殊疼痛，其直接来源于影响躯体感觉系统的损伤或疾病，以自发性疼痛、痛觉过敏和痛觉超敏为特征。正常神经纤维只传递信号，有研究发现大鼠外周神经损伤区域可以产生自发放电，这种异位放电发生于有髓传入神经纤维，以A类纤维为主。

大电导钙激活钾离子通道(BKca通道)与神经病理性疼痛

神经病理性疼痛是一种由于感觉神经系统的损伤或疾病直接造成的慢性疼痛，继发于多种疾病，如外周神经损伤，糖尿病等，临床发病率较高，严重影响患者生活质量。大电导钙激活钾离子通道（BKca通道）广泛存在于多种器官和组织，具有多样的生理功能，如调节神经细胞兴奋性、调控神经递质释放等。随着对神经病理性疼痛发病机制和BKca通道生理病理功能不断地深入研究，BKca通道对外周神经损伤后神经病理性疼痛发生发展的重要作用逐步得到认识。

小电导钙激活钾离子通道在心房颤动中的研究进展

小电导钙激活钾离子通道(small conductance Ca^(2+)-activated K^+ channels,SK通道)是广泛存在于心肌细胞中的仅受细胞内Ca^(2+)调控的离子通道,可以调节细胞膜电位平衡。近来研究发现,SK通道参与了心房颤动(房颤)的发生与发展,有望成为房颤治疗的新靶点。该文介绍了SK通道在房颤中的研究进展及SK通道阻滞剂的临床应用前景。

大菱鲆钙激活型钾离子通道基因TSKCa的克隆和序列分析

钙激活型钾离子通道蛋白（KCa）是位于细胞膜表面调节细胞功能的一类膜蛋白。通过设计特异性引物，以我国海水养殖大菱鲆（Scophthal musmaximus L．）血液cDNA为模板，利用RT-PCR技术克隆获得了一条基因片段。生物信息学分析证实该片段来自钙激活型钾离子通道基因SKCa（小电导钙激活型钾通道）家族。设计巢式PCR引物，通过5′RACE和3′RACE分别克隆得到了该基因的5′端序列和3′端序列。使用生物学软件拼接3段序列得到了大菱鲆钙激活型钾离子通道TSKCa基因的全长序列。TSKCa基因cDNA全长为1698bp，其中开放阅读框长度为1632bp，编码的TSKCa蛋白有544个氨基酸。比对TSKCa蛋白与GenBank中已有的SKCa蛋白序列，证实其序列同源性很高。使用网络DAS和srsbin服务器对TSKCa蛋白进行跨膜结构预测和疏水性分析，并结合已有的研究结果推测TsKCa蛋白的结构由S1-S6六个跨膜结构域和一个孔道区（P区）组成。

ERK1/2通路在低氧上调大鼠PASMCs钙激活性氯离子通道表达的作用

目的:探讨钙激活性氯离子通道(CLCA2)在大鼠低氧性肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)中m RNA和蛋白表达的变化及其与ERK1/2信号通路的关系。方法:PASMCs随机分为:常氧组(N组),低氧组(H组),DMSO对照组(D组),U0126干预组(U组),Staurosporine aglycone干预组(SA组),采用免疫印迹法检测CLCA2蛋白的表达;选用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定CLCA2 m RNA水平的表达。结果:PASMCs中CLCA2m RNA和蛋白的表达量,H组较N组明显上调(P<0.01);U组较D组明显上调(P<0.01);SA组较D组m RNA的表达显著下调(P<0.01),蛋白的表达轻微下调。结论:低氧可上调CLCA2中m RNA和蛋白在PASMCs的表达;ERK1/2通路激活剂-Staurosporine aglycone能下调CLCA2在PASMCs中m RNA和蛋白的表达量;ERK1/2通路抑制剂-U0126可上调CLCA2在PASMCs中m RNA和蛋白的表达量。

N-乙酰半胱氨酸通路对AGT-REN双转基因高血压小鼠心肌成纤维细胞中电导钙激活钾离子通道蛋白表达的影响及其意义

目的:探讨高血压过程中心肌成纤维细胞(CFs)氧化应激水平与中电导钙激活钾离子通道(KCa3.1)蛋白表达的关系,阐明KCa3.1在心肌纤维化中的作用及机制。方法:原代培养雄性AGT-REN双转基因高血压小鼠(dTH)CFs,另培养同品系野生C57B6小鼠CFs作为对照。dTH小鼠CFs随机分为高血压组(dTH)和N-乙酰半胱氨酸组(NAC),dTH小鼠CFs给予不同浓度NAC干预24h。MTT法检测细胞增殖情况,双氯荧光素(DCFH-DA)探针检测细胞活性氧(ROS)分子表达,Western blotting法检测细胞培养上清collagenⅠ、collagenⅢ和细胞中KCa3.1通道蛋白表达、PI3K信号通道蛋白磷酸化改变。结果:4、8和12月龄dTH小鼠CFs中ROS和KCa3.1通道蛋白表达水平与2月龄dTH小鼠比较均增加(P<0.05或P<0.01);MTT检测,应用1×10^(-6)、1×10^(-5)、1×10^(-4)和1×10^(-3) mol·L^(-1) NAC干预后,dTH小鼠CFs增殖率分别为165.9%、138.72%、110.92%和109.82%,与dTH组比较,1×10^(-4)和1×10^(-3) mol·L^(-1) NAC对CFs增殖抑制作用明显(P<0.01)。与对照组比较,1×10^(-4) mol·L^(-1) NAC组小鼠CFs中Ⅰ、Ⅲ型胶原合成明显减少(P<0.01);Western blotting检测,与对照组比较,1×10^(-4) mol·L^(-1) NAC组小鼠CFs中KCa3.1通道蛋白表达水平下降(P<0.01);dTH小鼠CFs中p-Akt/T-Akt表达水平较对照组增加(P<0.01),而1×10^(-4) mol·L^(-1) NAC组小鼠CFs中p-Akt/T-Akt表达水平下降(P<0.01)。结论:ROS清除剂NAC抑制dTH高血压小鼠CFs中KCa3.1通道蛋白表达,可能与其上调细胞中PI3K信号通道磷酸化水平有关。

视网膜动脉平滑肌细胞中大电导钙离子激活钾通道电流和钙离子浓度变化对糖尿病视网膜动脉收缩的影响

背景糖尿病视网膜病变（DR）是常见的视网膜微血管并发症，视网膜血管平滑肌细胞大电导钙激活钾离子通道（BK）是调节血管舒缩和血液动力的主要因素。目前关于视网膜动脉平滑肌细胞（RASMCs）上BK通道的功能变化在DR形成中的作用鲜有研究报道。目的研究正常及糖尿病模型大鼠RASMCs中BK通道电流、钙离子浓度及不同钙离子浓度下BK通道开放概率（NP0）的变化，探讨DR早期的血管损伤机制。方法采用随机数字表法将50只SPF级8～12周龄SD大鼠随机分为正常对照组和糖尿病模型组，糖尿病模型组40只大鼠腹腔内注射60mg／kg链脲佐菌素（STZ）法制作1型糖尿病模型，正常对照组大鼠10只同法注射枸橼酸钠溶液。采用酶消化法分离大鼠RASMCs，应用全细胞膜片钳技术记录大鼠RASMCs中BK通道电流；采用荧光探针法测定大鼠RASMCs内钙离子浓度；采用膜内向膜外型单通道膜片钳技术记录不同钙离子浓度条件下RASMCs中BK单通道NP。的变化。结果36只大鼠糖尿病造模成功，造模成功率为90％。刺激电压大于60mV时，糖尿病模型组大鼠RASMCs中BK通道电流密度明显下降，刺激电压为100mV时，正常对照组和糖尿病模型组大鼠RASMCsBK通道电流分别为（100±23）PA／PF和（50＋7）PA／PF，差异有统计学意义（t=19．80，P〈0．05）。当加入BK通道特异性阻滞剂非洲蝎毒素100nmol后，正常对照组的BK通道电流明显减弱，而糖尿病模型组BK通道电流无明显变化；正常对照组和糖尿病模型组大鼠RASMCs内钙离子浓度分别为（123±11）nmol／L和（255±10）nmol／L，差异有统计学意义（t=32．50，P〈0．05）。在刺激电位为60mV条件下，随着钙离子浓度增加，BK通道NP。增加，差异有统计学意义（F=15．28，P〈0．05）。结论糖尿病模型大鼠RASMCs中BK通道电流下降，细胞内钙离子浓度升高，BK单通道NP0下降。BK通道功能改变可能是导致糖尿病时视网膜动脉异常收缩的主要原因之一。

钙离子激活的氯离子通道蛋白TMEM16A在女性生殖系统中的研究进展

作为钙离子激活的氯离子通道(Ca CCs)分子基础的跨膜蛋白16A(TMEM16A)分布于人体多种组织器官中,对许多生理和病理过程具有重要意义。近年来,对TMEM16A在女性生殖系统中分布和作用的研究逐渐增多,比如参与子宫平滑肌的收缩、影响卵巢颗粒细胞雌激素的合成以及调节卵母细胞的形态等,这些都提示了TMEM16A在女性生殖系统中的生理重要性。现本文将就TMEM16A在女性生殖系统各方面的最新研究进展进行综述。

人钙离子激活的氯离子通道在慢性鼻窦炎鼻窦黏膜中表达的研究

目的观察人钙离子激活的氯离子通道1(hCLCA1)在慢性鼻窦炎筛窦黏膜中的表达,探讨其在慢性鼻窦炎发病机制中的作用。方法取慢性鼻窦炎患者筛窦黏膜10例,另取10例正常筛窦黏膜作为对照。应用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测各组鼻窦黏膜中hCLCA1mRNA的表达,应用免疫荧光方法观察hCLCA1蛋白在各组鼻窦黏膜中的表达,比较hCLCA1mRNA及蛋白在各组中的表达情况。结果 hCLCA1表达于鼻窦黏膜上皮的杯状细胞。慢性鼻窦炎组hCLCA1mRNA表达水平及阳性细胞面积比(51.6%±4.5%)高于对照组(7.2%±5.1%),差异有统计学意义(P<0.01)。结论在基因和蛋白水平上,hCLCA1在慢性鼻窦炎鼻窦黏膜中均有明显表达,其在慢性鼻窦炎的发病机制中可能具有重要作用,可能与上皮杯状细胞的增生及黏液高分泌有关。

线粒体大电导钙离子激活钾通道的研究进展

线粒体由内外两层膜封闭而成，其中线粒体内膜作用极为重要，呼吸链蛋白复合体附着于线粒体内膜，同时于此完成其生理功能。目前，线粒体内膜已鉴定出多种钾离子通道蛋白，如线粒体选择性钾离子通道。

血管紧张素(1-7)通过抑制中电导钙激活钾离子通道蛋白表达参与肾脏纤维化

目的探讨血管紧张素(Ang)(1-7)在肾纤维化过程中的保护作用与中电导钙激活钾离子通道(KCa3. 1)的关系。方法 60只雄性小鼠随机分为5组:对照组(WT);血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组:皮下注射AngⅡ[1. 4 mg/(kg.d)];注射AngⅡ的同时给予以下药物干预:AngⅡ阻断剂洛沙坦(Losartan)组:皮下注射Losartan[40 mg/(kg.d)];Ang (1-7)组:皮下注射Ang(1-7)[0. 14 mg/(kg.d)];血管紧张素转化酶2(ACE2)激动剂重氮氨苯脒乙酰甘氨酸盐(DIZE)组:皮下注射DIZE[10 mg/(kg.d)]。连续给药4周后对相关指标进行检测。Masson染色法检测肾组织胶原沉积变化;Western blotting法检测肾组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和KCa3. 1通道蛋白表达的变化。结果与对照组相比,AngⅡ组小鼠肾组织内胶原沉积量明显增加(n=12,P<0. 01),表明肾纤维化模型复制成功。AngⅡ使肾组织Ⅰ、Ⅲ型胶原合成显著增多(n=6,P<0. 01),同时促进了肾组织KCa3. 1通道蛋白的表达(P<0. 01),而Ang (1-7)及ACE2激活剂DIZE的应用抑制了肾组织内胶原沉积量、Ⅰ/Ⅲ型胶原合成及KCa3. 1通道蛋白的表达(n=12或6,P<0. 01)。结论 Ang (1-7)在肾纤维化过程中发挥保护作用,这一作用可能与其下调肾组织中KCa3. 1通道蛋白表达有关。

酸敏感离子通道对大电导钙激活钾通道的抑制及其相互作用

酸敏感离子通道（acid—sensing ion channels，ASICs）是神经细胞的非电压门控阳离子通道，广泛分布于中枢及外周神经系统，参与痛觉、触觉、酸味觉的形成。在突触可塑性、学习记忆功能、炎症及瞌缺血等生理病理过程中发挥重要作用。ASICs分别由5个亚基：ASIC1a、ASIC1b、ASIC2a、ASIC2b和ASIC3通过形成同聚体或异聚体构成。每个亚基都有2个跨膜区．1个大的富含半胱氨酸的胞外域和均位于胞内的N端与C端构成：ASICs属于NaC／DEG（epithelial Na’channel/degenerin）超家族。随着神经元的活动，或在许多病理状态下，细胞外pH会下降：当H＋浓度上升时，ASICs被激活，其离子通道开放形成内向电流，导致细胞膜去极化而产生兴奋性效应。