内质网钙离子结合蛋白1对肝细胞癌患者预后的预测价值及阈值效应分析

目的探讨内质网钙离子结合蛋白1(reticulocalbin-1,RCN1)对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者预后的预测价值。方法回顾性收集2020年1月至2021年6月河南科技大学第一附属医院收治的399例HCC患者作为研究对象,术后随访1年,根据预后情况将其分为预后良好组(n=310)和预后不良组(n=89)。收集入选患者的临床资料及实验室指标,采用多因素Logistic回归分析影响HCC患者预后的危险因素。采用平滑拟合曲线并进行阈值效应分析RCN1对HCC患者预后情况。结果RCN1≤42.36μg/g时,随着RCN1水平增加,患者预后不良率不受影响(OR=1.001,95%CI:0.815~1.958,P<0.001),RCN1>42.36μg/g时,随着RCN1水平增加,患者预后不良率明显增加(OR=1.239,95%CI:1.006~1.782,P<0.001)。列线图模型预测的准确性较高,临床适用性较好。结论RCN1对HCC患者预后情况有一定的预测价值,临床研究应加以重视。

钙离子结合蛋白A4和上皮型钙黏附蛋白在膀胱癌中的表达及临床意义

目的:探讨钙离子结合蛋白A4(S100A4)及上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin)在膀胱癌中的表达和临床意义。方法:应用免疫组化S-P法检测64例膀胱移行细胞癌组织及10例正常人膀胱组织中S100A4蛋白及E-cadherin的表达。结果:正常膀胱组织S100A4蛋白表达阴性,E-cadherin表达阳性。64例膀胱移行细胞癌组织中46例(71.9%)S100A4蛋白阳性表达,36例(56.3%)E-cadherin蛋白阳性表达。正常对照膀胱组织与膀胱移行细胞癌组织之间S100A4蛋白及E-cadherin表达差异有统计学意义(均为P<0.05)S100A4蛋白及E-cadherin在肿瘤组织中表达明显增高,与膀胱移行细胞癌的组织学分级、临床(T)分期和淋巴结转移有关,而与年龄、性别和肿瘤大小无关。结论:在膀胱移行细胞癌中,S100A4蛋白及E-cadherin的表达变化与肿瘤的进展密切相关,是判断其生物学行为,预测转移趋势极具价值的指标。

环糊精葡萄糖基转移酶钙离子结合位点结构与功能分析

通过多重序列比对和晶体结构分析发现,钙离子结合位点CaⅠ和CaⅡ普遍存在于环糊精葡萄糖基转移酶(CGT酶)中,且两个位点处氨基酸残基具有较高的保守性,而钙离子结合位点CaⅢ仅存在于少数CGT酶中.此外,研究发现,钙离子结合位点可能与CGT酶的环化活力、热稳定性和产物特异性密切相关.

热疗对人Tca8113细胞侵袭能力及基质金属蛋白酶-13和钙离子结合蛋白S100A4表达的抑制作用

目的研究热疗对Tca8113细胞的侵袭能力及侵袭转移相关蛋白——基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及钙离子结合蛋白S100A4(S100A4)表达的影响。方法 Tca8113细胞分别经43℃加热0、40、80、120 min及37、41、43、45℃加热80 min,用体外侵袭实验评价各组细胞的侵袭能力;Tca8113细胞爬片经43℃分别加热0、40、80、120 min,用免疫细胞化学染色法检测各组细胞MMP-13及S100A4的表达变化;Tca8113细胞分别经43℃加热0、40、80、120 min及37、41、43、45℃加热80 min,Western blot法检测各组细胞MMP-13及S100A4的表达变化。结果随加热时间延长或加热温度升高,Tca8113细胞侵袭率(即侵袭细胞数占全部细胞的百分比)依次递减,除43℃加热40、80 min组之间及41、43℃加热80 min组之间的差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各组间的差异均有统计学意义(P<0.05);随着加热时间延长,Tca8113细胞的细胞浆内MMP-13及S100A4的表达强度呈现递减趋势;随着加热时间延长或加热温度升高,Tca8113细胞的MMP-13及S100A4含量逐渐降低,除43℃加热40、80 min组之间及41、43℃加热80 min组之间外,其余各组间的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论热疗能抑制Tca8113细胞的侵袭能力,其机制可能与热疗抑制了细胞内MMP-13及S100A4的表达有关。

钙离子结合蛋白及其在神经系统疾病中的作用

钙离子作为第二信使参与多种途径的调控,钙离子结合蛋白在此过程中起着重要的作用.通过对钙离子结合蛋白的分布特征、结构分析,新的成员以及新的功能不断地被发现.在疾病发生过程中,钙离子结合蛋白动态平衡的破坏与线粒体的异常、自由基的损害有密切的关系,并已在多种疾病特别是神经系统的疾病中得到了证实.本文就钙离子结合蛋白的特征以及在主要神经系统疾病中作用的研究进展进行简要综述.

内质网钙离子结合蛋白在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者癌组织中内质网钙离子结合蛋白(reticulocalbin-1,RCN1)的表达及临床意义。方法:回顾性分析华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院2012年1月至2014年1月间收治的95例HCC患者临床资料,采用免疫组织化学法检测HCC癌组织中RCN1表达,根据免疫组织化学评分将患者分为RCN1高、低表达两组,采用Kaplan-Meier法和log-rank检验比较RCN1高、低表达组患者无瘤生存率和总生存率的差异,采用Cox比例风险模型分析影响HCC患者无瘤生存率和总生存率的危险因素。结果:95例HCC患者中RCN1高表达组有61例(64.2%),RCN1低表达组有34例(35.8%);RCN1表达与性别(P=0.031)、甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)(P<0.001)、肿瘤大小(P=0.032)、肿瘤结节数(P=0.028)、癌栓(P=0.011)和分化程度(P=0.001)显著相关;RCN1高表达组患者无瘤生存率(P=0.001)和总生存率(P<0.001)显著低于RCN1低表达组患者。单因素分析显示:RCN1表达(P<0.01)、AFP(P<0.01)、肿瘤大小(P<0.01)、肿瘤结节数(P=0.03)、癌栓(P<0.01)、TNM分期(P<0.01)和分化程度(P=0.04)为影响HCC患者无瘤生存率的危险因素;多因素分析显示RCN1(P=0.01)是影响HCC患者无瘤生存率的独立危险因素。单因素分析表明RCN1表达(P<0.01)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)(P<0.01)、AFP(P=0.01)、癌栓(P=0.01)和TNM分期(P<0.01)是影响HCC总生存率的危险因素,多因素分析显示RCN1表达(P<0.01)和TNM分期(P=0.02)是影响HCC患者总生存率的独立危险因素。结论:RCN1在HCC中高表达,RCN1高表达的HCC患者无瘤生存率和总生存率显著低于RCN1低表达患者,为影响HCC预后的分子标志物。

结直肠癌组织钙离子结合蛋白14、16的表达及与预后的关系研究

目的研究结直肠癌(CRC)组织中钙离子结合蛋白14(S100A14)、钙离子结合蛋白16(S100A16)的表达及临床意义。方法免疫组织化学法检测136例CRC患者癌组织及癌旁组织(距离癌组织边缘2 cm以上)中S100A14、S100A16的表达情况。采用Spearman相关分析CRC组织中S100A14与S100A16的相关性。分析CRC组织中S100A14、S100A16的表达与CRC患者临床病理参数的关系。采用Kaplan-Meier法及Log-Rank检验分析不同S100A14、S100A16表达情况CRC患者的生存情况。COX比例风险回归分析影响CRC患者预后的危险因素。结果与癌旁组织相比,CRC组织中S100A14、S100A16阳性表达率明显较低,差异有统计学意义(P<0.05)。CRC组织中S100A14和S100A16的表达呈正相关(r=0.595,P<0.001)。CRC组织中S100A14、S100A16表达与TNM分期、肿瘤分化程度有关(P<0.05)。S100A14、S100A16阴性表达的患者3年生存率明显低于S100A14、S100A16阳性表达的患者(P<0.05)。TNM分期Ⅲ期、S100A14阴性表达、S100A16阴性表达是影响CRC患者预后的危险因素(P<0.05,HR>1)。结论CRC组织中S100A14、S100A16阳性表达率降低,S100A14、S100A16表达与TNM分期、肿瘤分化程度有关,检测S100A14、S100A16表达情况可评估CRC患者预后。

柑桔钙离子结合蛋白基因克隆及植物表达载体构建

以伏令夏橙叶片中分离的总RNA为模板,经RT-PCR扩增到一条约600bp、含钙离子结合蛋白基因(CsCaBP)的片段,将此片段克隆到pMD-19T中,经测序分析该片段与甜橙基因组中的对应序列完全吻合。设计2对带有限制性内切酶位点的特异性引物,以cDNA为模板扩增到2个CsCaBP片段,并连接到TA克隆载体pMD-19T上;经双酶切消化后,分别以正反2个方向插入到植物表达载体pFGC5941的查耳酮合成酶(CHSA)内含子两侧,构建成功CsCaBP的RNA干扰载体,但未获得转基因植株。将CsCaBP的正向片段定向克隆到具有CaMV35S启动子的pF-GC5941表达质粒上,构建成功CsCaBP过量表达载体。将构建好的表达载体导入根癌农杆菌LBA4404菌株,转化酸橙下胚轴,经PCR检测,获得9株过量表达转基因植株,荧光定量PCR验证发现目的基因在转基因植株中有不同程度的表达。

罗非鱼皮酶解物钙离子结合能力及其结合物的抗氧化活性

该研究利用中性蛋白酶、Protamex1.5L和碱性蛋白酶酶解罗非鱼(Oreochromis mossambicus)鱼皮,研究了各种酶解产物对钙离子(Ca2+)的结合能力,比较了酶解物结合Ca2+后的抗氧化能力,并分析了结合物的傅里叶红外光谱(FT-IR)。结果显示,Protamex1.5L水解罗非鱼皮2 h的酶解产物具有最高的Ca2+结合率(87.79%);3种罗非鱼皮酶解产物均存在抗氧化性,其中Protamex1.5L酶解罗非鱼皮产物的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率、·OH自由基清除率和还原力最高分别为51.46%、17.26%和0.09;罗非鱼皮酶解物(TSH)结合Ca2+后,钙离子结合物(TSH-Ca)的DPPH自由基清除率和羟基自由基清除率减弱,还原力增强;FTIR分析结果表明了Ca2+与TSH中氨基氮原子和羰基氧原子发生了结合。

低表达S100钙离子结合蛋白A6促进食管腺癌SK-GT-4细胞的增殖和迁移

目的探讨S100钙离子结合蛋白A6(S100A6)对食管腺癌SK-GT-4细胞增殖和迁移的影响。方法慢病毒转染,构建稳定细胞系sh NC和sh S100A6,Real-time PCR检测S100A6 m RNA表达情况;倒置显微镜和MTT检测细胞的增殖能力,Transwell检测细胞的迁移能力及U0126(MER1/2的抑制剂)、LY294002(PI3K抑制剂)对细胞增殖、迁移的影响;Western blotting检测细胞中S100A6、p-ERK、p-Akt及其下游参与增殖、迁移的相关蛋白的表达情况,检测U0126、LY294002对p-ERK、p-Akt及其下游参与增殖、迁移的相关蛋白表达的影响。结果构建了敲低S100A6的稳定细胞系,敲低S100A6促进了细胞的增殖和迁移,p-ERK、p-Akt水平升高,细胞周期抑制蛋白p21表达量下降、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)表达升高,间质细胞标志蛋白——波形蛋白(vimentin)、β-连环蛋白(β-catenin)表达升高;U0126处理sh S100A6细胞后,对细胞的增殖无影响,抑制细胞的迁移,p-ERK、β-catenin表达下降;LY294002处理sh S100A6细胞后,抑制细胞的增殖和迁移,p-Akt表达下降,p21表达量升高,cyclin D1表达量下降,β-catenin表达下降。结论低表达S100A6促进细胞的增殖和迁移,其可能机制是通过p-Akt调控细胞周期的进程促进细胞增殖,通过激活p-Akt/p-ERK调控β-catenin促进细胞的迁移。

丙酮丁醇梭菌钙离子结合蛋白多样性研究

为了探讨钙离子对产溶剂梭菌的影响,通过生物信息学方法对丙酮丁醇梭菌(Clostridium acetobutylicum)ATCC824进行蛋白质组学分析,预测可能存在的钙离子结合蛋白(calcium binding proteins,CaBPs)。利用EF手型(EF-hand)、希腊钥匙(Greek key)、β桶状结构(β-roll)、免疫球蛋白质类似蛋白质(Big-like)结构域基序预测丙酮丁醇梭菌蛋白质组中含有钙离子结合区域的蛋白质,建立本地BLAST数据库,通过GO和KEGG数据库分析所预测到的蛋白质。研究最终预测出228个含有相关位点的蛋白质,利用GO注释在生物过程、细胞组分和代谢过程对蛋白质进行了功能分类。KEGG代谢通路分析表明,该类蛋白质主要参与代谢途径、生物抗性基因合成、次级代谢物生物合成和信号传导等过程。

烟粉虱MED隐种钙离子结合蛋白基因的RNAi及其生物学效应

【目的】前期研究发现烟粉虱Bemisia tabaci MED隐种2个钙离子结合蛋白(BtCaBP1和BtCaBP2)参与烟粉虱对溴氰虫酰胺的应激反应。本研究旨在通过RNAi干扰钙离子结合蛋白基因,系统揭示钙离子结合蛋白对烟粉虱的生物学影响。【方法】通过dsRNA饲喂法分别干扰烟粉虱MED隐种成虫钙离子结合蛋白基因BtCaBP 1和BtCaBP 2后,qPCR检测BtCaBP 1和BtCaBP 2的表达量;观测并比较了RNAi 3 d后处理组(分别饲喂ds BtCaBP 1和ds BtCaBP 2)和对照组(饲喂ds EGFP)间烟粉虱MED隐种亲代成虫(雌雄)寿命、单雌产卵量以及子一代的卵孵化率和成虫前期发育历期等生物学参数。【结果】分别饲喂ds BtCaBP 1和ds BtCaBP 23 d后,处理组烟粉虱MED隐种靶标基因BtCaBP 1和BtCaBP 2的表达量较对照组均显著降低。处理组中干扰BtCaBP 2后的亲代烟粉虱MED隐种成虫寿命(雌:15.46±1.24 d;雄:13.84±0.38 d)较对照组的(雌:13.25±0.58 d;雄:12.67±0.65 d)显著延长;处理组的单雌产卵量(39.53±3.04)比对照组的(76.06±4.76)显著降低;处理组子一代卵孵化率(81.58%±4.42%)比对照组的(87.22%±3.21%)显著降低;子一代成虫前期发育历期处理组(24.42±1.09 d)比对照组的(27.52±1.73 d)显著缩短。而干扰BtCaBP 1基因后,亲代及子一代上述生物学参数没有显著变化。【结论】干扰BtCaBP 1和BtCaBP 2对烟粉虱MED隐种具有不同的生物学效应,该结果为后续进一步研究钙离子结合蛋白的生物学功能提供了参考。

藏药十八味诃子利尿丸对雄性糖尿病大鼠脑组织离子钙结合衔接分子1及突触可塑性相关蛋白的影响

目的探讨藏药十八味诃子利尿丸对雄性糖尿病(Diabetes mellitus,DM)大鼠脑组织中小胶质细胞标记物离子钙结合衔接分子1(Ionized calcium binding adaptor molecule 1,IBA1)及突触可塑性相关蛋白的影响。方法30只雄性SD大鼠适应性喂养72 h后,取10只大鼠为对照组;另取20只制备DM大鼠,以高糖高脂饲料喂养12 w后于尾静脉一次性注射STZ溶液,其中10只为模型组、10只为藏药组(藏药组用十八味诃子利尿丸连续灌胃2 w),实验结束后断头取脑组织。用Western Blot法检测IBA1、IL-6、syn-1、PSD95、HIF-1α,用IHC法检测IBA1、IL-6、HIF-1α。对实验结果进行相关统计学分析。结果与对照组比较,模型组大鼠脑组织中的IBA1、IL-6、HIF-1α蛋白表达升高(P<0.05),syn-1、PSD95蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,藏药组大鼠脑组织中的IBA1、IL-6、HIF-1α蛋白表达降低(P<0.05),syn-1、PSD95蛋白表达量升高(P<0.05)。结论藏药十八味诃子利尿丸可能通过IBA1靶点降低DM大鼠脑组织中小胶质细胞的活化水平,并改善突触可塑性,从而对DM大鼠脑组织发挥保护作用。

肝细胞癌相关抗原编码基因HCA520与钙离子的结合分析

目的 :分析肝细胞癌相关抗原编码基因HCA52 0与钙离子的关系。方法 :通过PCR获得目的基因 ,构建至原核表达载体pGEX 4T 3中。在大肠杆菌中诱导表达后 ,用亲和层析法进行纯化。Westernblot对所获蛋白进行鉴定 ,Dotblot分析GST HCA52 0融合蛋白与钙离子的关系。结果 :琼脂糖凝胶电泳及测序鉴定表明 ,重组原核表达载体pGEX 4T 3中 ,HCA52 0基因的插入方向及序列完全正确。Westernblot分析显示 ,纯化的蛋白均含有GST部分 ,是所需的目的蛋白。HCA52 0融合蛋白能够以剂量依赖的方式与钙离子结合。结论 :HCA52 0基因原核表达的蛋白能够与钙离子结合 。

钙离子结合蛋白S100A4在肿瘤中表达及其临床应用进展

肿瘤的侵袭与转移是一个非常复杂的过程，涉及细胞黏附和分离、细胞外基质重建、细胞运动、血管生成等生命过程。许多基因及其表达产物都参与其中，最近对钙离子结合蛋白S100A4作用机制的研究结果表明，S100A4可促进肿瘤转移，对人类癌症发生和发展的预测具有一定的参考价值。

S100钙离子结合蛋白A14在乳腺癌中的表达及调控机制

目的：探讨S100钙离子结合蛋白A14（ S100A14）在乳腺癌组织中的表达以及表皮生长因子（ EGF）与S100A14的反馈调节机制。方法实时定量PCR检测51例乳腺癌组织和正常乳腺组织中S100A14 mRNA的表达以及EGF刺激或细胞外信号调节激酶（ p-ERK）抑制剂后细胞中S100A14 mRNA的表达。 Western blot 检测21例乳腺癌组织和正常乳腺组织中 S100A14蛋白的表达以及p-ERK抑制剂处理后细胞中S100A14蛋白的表达。 siRNA敲降S100A14后，采用Western blot检测细胞中S100A14、p-ERK和总ERK的表达。结果 S100A14 mRNA和蛋白在21例乳腺癌组织中的表达均升高（均P＜0．05）。 S100A14 mRNA高表达组乳腺癌患者的复发率高于 S100A14低表达组（P＝0．038）。 MDA-MB-453细胞中，1 ng／ml EGF组和10 ng／ml EGF组S100A14 mRNA相对表达水平分别为1．50±0．11和1．40±0．03，与对照组（1．00±0．09）比较，差异均有统计学意义（均P＜0．05）。 MCF-7细胞中，1 ng／ml EGF组和10 ng／ml EGF组S100A14 mRNA相对表达水平分别为1．66±0．08和1．71±0．17，与对照组（1．00±0．03）比较，差异均有统计学意义（均P＜0．05）。 TD47细胞中，1 ng／ml EGF组和10 ng／ml EGF＋U0126组S100A14 mRNA相对表达水平分别为1．56±0．04和1．00±0．10，与对照组（1．00±0．04）比较，差异均有统计学意义（均 P＜0．05）。敲降 S100A14能降低细胞 p-ERK 水平。过表达S100A14能够促进S100A14分泌。结论 EGF通过p-ERK信号通路促进S100A14 mRNA和蛋白的表达，EGF与S100A14之间可能存在反馈循环。

弓形虫钙离子结合蛋白的研究进展

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)作为顶复门中一种寄生原虫,可以感染有核细胞。研究表明,钙离子与弓形虫侵染、运动等生理活动相关。内质网中含有大量的钙离子,许多钙离子结合蛋白质在弓形虫的生理活动中起重要作用。钙离子结合蛋白质包含多种EF手型(EF-hand)结构域。目前记载在TOXO DB中含有EF-hand的蛋白质有55种;在Plasmo DB含有EF-hand的蛋白质有69种。本文对钙离子结合蛋白质的各种作用进行阐述。

钙离子结合蛋白A4和基质金属蛋白酶2在胰腺癌中的表达与浸润转移和预后的关系

目的研究钙离子结合蛋白A4（S100A4）、基质金属蛋白酶2（MMP2）在胰腺癌组织中的表达与临床病理因素及其浸润、转移和预后的关系。方法采用SP免疫组化法检测82例胰腺癌、43例胰岛素细胞瘤和21例正常胰腺组织中S100A4和MMP2的表达情况。结果S100A4、MMP2在胰腺癌组织中的阳性表达率分别为69．51％（57／82）和58．54％（48／82）；S100A4、MMP2蛋白在胰腺癌癌组织中表达明显高于正常组织和腺瘤（P〈0．05），S100A4、MMP2蛋白的表达与有无淋巴结转移、肿瘤的大小、TNM分期、分化程度以及CA199的值有关（P〈0．05）；两种蛋白在胰腺癌组织中的表达呈正相关（P〈0．05）。S100A4和MMP2的表达情况均对患者的生存期有显著影响（P〈0．05）。结论S100A4、MMP2在肿瘤侵袭转移中发挥了重要作用，检测S100A4和MMP2的表达可作为预测胰腺癌的转移趋势指标，并能有效的评估胰腺癌患者的预后。

钙离子结合酪氨酸磷酸化调解基因的特征及在肿瘤发病中的意义

目的总结钙离子结合酪氨酸磷酸化调解基因的特征及其在肿瘤发病中的意义。方法通过复习国内外文献,回顾分析钙离子结合酪氨酸磷酸化调解基因参与调节的信号通路及其在多种肿瘤中的研究现状。结果钙离子结合酪氨酸磷酸化调解基因通过多种机理诱导细胞增殖异常,多种肿瘤的发生与钙离子结合酪氨酸磷酸化调解基因的异常表达密切相关。在分布不同的上皮性肿瘤中,钙离子结合酪氨酸磷酸化调解基因参与调节的通路相同,作用靶点相似。结论钙离子结合酪氨酸磷酸化调解基因的进一步深入研究有望为阐明肿瘤的发生、发展机理提供新的途径,并且可以作为早期诊断及辅助治疗的重要手段。