钙离子调节亲环素配体及其不同剪接体的克隆及生物信息学分析

目的:克隆钙离子调节亲环素配体(CAML)及其不同剪接体,并应用生物信息学进行分析。方法:以Jurkat、HepG2细胞提取的cDNA为模板,PCR扩增CAML基因,选用pGEM-T-easy载体进行TA克隆,利用VectorNTI9.0软件与CAML基因所在染色体进行比对分析,并对CAML全长基因进行生物信息学分析。结果:CAML基因克隆成功,并证实CAML基因在细胞中存在3种剪接体,分别为缺失全长CAML cDNA序列中634~698、173~633和173~698 bp的CAML序列,大小分别为825、429和363 bp。这些剪接体的组成中均包含了CAML与其他蛋白相互结合的亲水的N末端,以及CAML发挥调节钙离子内流作用所必需的第2、3跨膜结构域,说明这些剪接体均具有发挥CAML基本功能的可能。结论:成功克隆了CAML基因,并首次证实CAML基因在细胞中存在不同剪接体。

钙离子信号调节亲环素配体研究进展

钙离子信号调节亲环素配体(CAML)作为亲环素B的结合蛋白于1994年被首次发现,尽管其具体作用机制目前还不十分清楚,但许多研究已证实其在T细胞受体及钙离子信号转导、细胞凋亡、免疫调节以及病毒感染等方面具有重要作用.目前已经报道与其相互作用的蛋白主要有:跨膜激活剂及钙调亲环素配体相互作用分子(transmembrane activator and CAML interactor,TACI)、EGF受体,血管紧张素ⅡⅠ型受体相关蛋白(AT1 receptor-associated protein,ATRAP)、人立早基因(immediate early geneX-1,IEX-1)、淋巴细胞特异蛋白质酪氨酸激酶(p56Lck)、常染色体隐性遗传性多囊肾疾病的相关基因PKHD1编码的蛋白fibrocystin,以及霍普金氏肉瘤相关疱疹病毒K7蛋白(KSHV)等.本文就CAML相关研究进展作简要综述.

抗人跨膜激活剂及钙调亲环素配体相互作用分子单克隆抗体的制备

目的 :制备抗人跨膜激活剂及钙调亲环素配体相互作用分子(TACI)单克隆抗体 (mAb) ,研究TACI分子的细胞分布。方法 :应用淋巴细胞杂交技术制备鼠源性抗TACImAb。用免疫荧光染色、流式细胞术及免疫组织化学染色法 ,对TACI在外周血单个核细胞 (PBMC)上的分布进行鉴定。结果 :获得两株分泌抗TACImAb的杂交瘤细胞株。mAb的腹水效价达10 -7,均为IgG1亚类 ,可识别T细胞表面天然的TACI分子 ,在PHA活化的模型中 ,TACI主要表达于活化的CD4 + T细胞上。结论 :获得两株能特异性识别天然TACI分子的mAb 。

跨膜激活剂及钙调亲环素配体相互作用分子对系统性红斑狼疮作用的研究进展

跨膜激活剂及钙调亲环素配体相互作用分子(TACI)对B淋巴细胞的稳态和自身免疫起负调控作用。敲除TACI基因的小鼠出现狼疮样自身免疫性疾病,同时TACI-Fc可影响B细胞的增生和存活,抑制抗体的产生,现已作为一种生物制剂用于治疗SLE,所以对TACI的研究及其在临床上的应用越来越受关注。本文就目前对TACI生物学作用及其应用于SLE的治疗研究进行综述。

丙型肝炎病毒非结构蛋白4A与钙离子信号调节亲环素配体的相互作用

目的应用酵母双杂交技术及免疫共沉淀技术证实HCV非结构蛋白4A(HCV NS4A)与钙离子信号调节亲环素配体(CAML)的相互作用。方法对CAML编码基因进行克隆,并构建其酵母表达载体.在酵母细胞中与HCV NS4A进行回交验证后,构建HCV NS4A及CAML真核表达载体,转染293细胞,行免疫共沉淀实验及Western印迹检测。结果成功克隆CAML基因,并构建CAML的酵母表达载体,在酵母细胞中回交验证HCV NS4A与CAML的相互作用,构建HCV NS4A及CAML的真核细胞表达载体,并利用免疫共沉淀技术验证了两者的相互作用。结论CAML与HCV NS4A的相互作用可能对HCV感染细胞的钙离子浓度、细胞凋亡等生物过程产生影响,从而在HCV感染慢性化过程中发挥作用。

HCV NS4A与钙离子信号调节亲环素配体相互作用位点的确定

目的明确丙型肝炎病毒非结构蛋白4A(HCVNS4A)与钙离子信号调节亲环素配体(CAML)相互结合的具体位点。方法构建CAML不同剪接体及缺失突变体的酵母表达载体,转化入酵母Y187菌株,分别与转化了HCVNS4A的酵母AH109菌株进行配合,在含X-α-gal的酵母四缺培养基上培养观察。结果转化了CAML不同剪接体及CAML缺失突变体pGADT7/CAML-1-211,pGADT7/CAML-1-57的酵母Y187菌株与转化了HCVNS4A的酵母AH109菌株配合后在四缺培养基上均有菌落生长,并且菌落呈现蓝色。转化了CAML缺失突变体pGADT7/CAML-58-211,pGADT7/CAML-234-296的酵母Y187菌株与转化了HCVNS4A的酵母AH109菌株配合后在四缺培养基上未见菌落生长。结论HCVNS4A与CAML的相互结合位点位于CAML的N-末端1～57位氨基酸残基,CAML不同剪接体与HCVNS4A均可以相互结合。

跨膜激活剂及钙调亲环素配体相互作用分子在免疫疾病中的研究进展

B细胞活化因子(B-cell activating factor,BAFF)和增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)在免疫疾病领域的研究已持续多年,且已取得许多研究成果.两者共有的特异性受体跨膜激活剂及钙调亲环素配体相互作用分子[transmembrane activator and calmodulin ligand(CAML)interactor,TACI]因在调节B细胞增殖,浆细胞分化及抗体类别转换方面的重要作用越来越受到重视.现就TACI自身特点,生理功能及其在免疫疾病中的研究进展进行综述.

骨质疏松分子生物学研究专家共识

骨质疏松分子生物学研究在骨代谢分子信号通路、骨质疏松易感基因、骨质疏松相关蛋白、骨质疏松靶向治疗等方向取得了很大进展。核因子κB受体活化因子/核因子κB受体活化因子配体/骨保护素(RANK/RANKL/OPG)信号通路、核因子κB受体活化因子(NF-κB)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶(MAPK/ERK)信号通路、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)信号通路、钙离子(Ca^(2+))信号通路、酪氨酸激酶、蛋白激酶B(Src、Akt)信号通路、蛋白激酶C(PKC)信号通路等骨代谢重要通路,维生素D受体(VDR)基因、低密度脂蛋白相关蛋白5(LRP5)基因、亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因、雌激素受体(ER)基因等易感基因,载脂蛋白E(Apo E)、Klotho蛋白(Klotho)、骨形态发生蛋白(BMP)、骨涎蛋白(BSP)等相关蛋白,以直接或间接的方式参与调控骨代谢,作用重叠相互联系,互为结果,已在本专业领域达成共识。

抑制HIV颗粒释放的细胞蛋白被鉴定

来、自美国Emory大学医学院、Vanderbilt大学医学院和Mayo医学院的研究人员鉴定出了一种抑制HIV颗粒释放的细胞蛋白。 钙离子调节亲环素配体（CAML）是一种可以抑制HIV生活史晚期步骤的蛋白，它可使病毒颗粒滞留在细胞膜上。但病毒的Vpu蛋白可抑制CAML的活性，导致病毒颗粒的释放。

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞增殖诱导配体及其受体的表达

目的 探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMC）中增殖诱导配体（APRIL）及其受体B细胞成熟抗原（BCMA）、跨膜激活剂及钙调亲环素配体相互作用分子（TACI）mRNA的表达和意义。方法 应用实时定量聚合酶链反应（real—time PCR）技术，检测66例SLE患者及25名正常人PBMC中APRIL及其受体mRNA的表达，采用2-AACT对目标基因的表达量进行评估。结果 SLE活动组和缓解组的APRIL mRNA、BCMA mRNA和TACI mRNA的表达水平均明显高于正常对照组（均P〈0．01）；且SLE活动组的APRILmRNA和TACImRNA的表达水平显著高于SLE缓解组（分别P〈0．01，P〈0．05），BCMA mRNA的表达在SLE活动组与缓解组之间比较差异无统计学意义；此外，APRILmRNA和TACImRNA在SLE肾损组的表达显著高于非肾损组（均P〈0．01）。结论 SLE患者PBMC中APRIL及其受体的表达水平增高，可能在SLE发病机制中发挥重要作用。

B淋巴细胞活化因子抗体在自身免疫性疾病治疗中的研究进展

近几十年来,自身免疫性疾病的治疗已从使用激素和常规免疫抑制药物转向使用生物制剂。B淋巴细胞的增殖及成熟对自身免疫性疾病的发病起到至关重要的作用。其中,肿瘤坏死因子超家族B淋巴细胞活化因子(B cell activating factor,BAFF)及其受体通过调控信号通路介导B淋巴细胞存活,因此BAFF及其受体是自身免疫性疾病的重要治疗靶点。文中阐述了BAFF及其受体在人体免疫系统中的作用机制,同时介绍了BAFF通路的过度活化如何促进系统性红斑狼疮、干燥综合征和类风湿关节炎等自身免疫疾病发展的最新观点。针对以上3种疾病,文中以3种主要的靶向BAFF抗体药物Belimumab、Tabalumab和Atacicept为例,介绍和讨论了其最新的临床试验及临床应用现状。最后提出靶向BAFF通路开发新型治疗自身免疫性疾病的方案和策略。