钙离子通道蛋白CatSper在吸烟小鼠模型中的表达

目的:建立吸烟小鼠模型,检测小鼠精子特异性钙离子通道蛋白CatSper在RNA和蛋白水平表达的变化,分析与精子活力之间的关系,为吸烟导致雄性生殖损害的分子机制研究提供可靠的实验数据。方法:建立吸烟小鼠模型,运用非连续密度梯度离心分离精子并进行活力检测,RT-PCR检测小鼠精子mRNA表达的变化,免疫组织细胞化学技术观察小鼠CatSper蛋白的表达,免疫印迹进一步对CatSper蛋白表达的变化趋势进行统计学分析。结果:正常对照组,轻、中和重度吸烟组(a+b)级精子百分率[(87.6±16.2)%vs(72.9±13.0)%vs(68.1±16.0)%vs(44.6±15.0)%,P<0.05]、CatSper mRNA相对表达量(0.915±0.202 vs 0.712±0.121 vs 0.522±0.126 vs 0.258±0.177,P<0.05)、免疫印迹相对表达量(0.882±0.208 vs0.693±0.202 vs 0.471±0.251 vs 0.263±0.198,P<0.05)均依次降低,免疫组化结果显示吸烟使CatSper蛋白在睾丸组织中表达降低;相关性分析结果表明(a+b)级精子百分率与CatSper mRNA和蛋白呈正相关。结论:吸烟明显抑制小鼠钙离子通道蛋白CatSper的表达,精子活力与CatSper的表达呈正相关,提示CatSper表达降低可能是吸烟导致雄性精子活力损伤的分子机制之一。

半夏泻心汤对小鼠Cajal间质细胞表型维持及相关钙离子通道蛋白的影响

目的通过观察小鼠胃Cajal间质细胞(interstitial cells of Cajal,ICC)表型变化及相关蛋白,讨论半夏泻心汤调节胃肠运动的细胞分子机制。方法制备半夏泻心汤药物血清,以去离子水灌胃所得血清为对照。取对数生长期的ICC,随机分为空白组、对照组、低浓度组(5%半夏泻心汤药物血清)、中浓度组(10%半夏泻心汤药物血清)和高浓度组(20%半夏泻心汤药物血清),分别给予相应药液,于12小时、24小时和48小时后进行指标检测。采用免疫荧光双染法检测ICC标记蛋白c-kit/α-SMA、c-kit/desmin和c-kit/SMMHC表达,镜下观察半夏泻心汤对小鼠ICC表型维持的影响;采用免疫印迹和实时荧光定量PCR法检测ICC中钙离子通道蛋白三磷酸肌醇受体(inositol 1,4,5-triphosphate receptors,IP3R)、兰尼碱受体(ryanodine receptor,RyR)、磷脂酶C(phospholipases C,PLC)及其mRNA的表达。结果与低浓度和中浓度组相比,高浓度组c-kit阳性表达显著增加(P<0.05),α-SMA阳性表达明显减少(P<0.01),SMMHC表达和desmin表达差异不显著(P>0.05)。与药物干预24小时、48小时组相比,12小时组c-kit阳性表达显著增加(P<0.05);与48小时组相比,12小时组α-SMA阳性表达明显降低(P<0.05);与24小时相比,12小时组α-SMA、desmin和SMMHC平均灰度值无明显差异(P>0.05)。与空白组、对照组比,药物组IP3R、RyR、PLC蛋白及mRNA表达均明显升高(P<0.05)。结论20%半夏泻心汤药物血清干预12小时能显著增强ICC表型的维持,加强c-kit表达,其机制可能与调节钙库受体蛋白IP3R、RyR、PLC表达水平,进而影响相关离子通道蛋白有关。

前列腺癌组织钙离子激活氯离子通道蛋白7的表达及其与术后生化复发的关系探讨

目的探讨前列腺癌组织钙离子激活氯离子通道蛋白7(ANO7)的表达及其与术后生化复发的关系。方法回顾性选取空军军医大学第一附属医院于2014年3月至2018年4月收治的168例行根治性切除术治疗的前列腺癌患者作为研究对象。采用免疫组化法检测患者的前列腺癌组织与癌旁组织ANO7的表达情况,并根据根治术后3年内生化复发情况将患者分为生化复发组(n=30)与未生化复发组(n=138),分析前列腺癌组织ANO7的阳性表达与患者术后生化复发的关系。结果前列腺癌组织ANO7的阳性表达率低于癌旁组织(P<0.05);生化复发组前列腺癌组织ANO7的阳性表达率低于未生化复发组(P<0.05);临床分期、术前血清前列腺特异性抗原(PSA)水平、标本Gleason评分、手术切缘是否阳性,有无包膜侵犯、精囊侵犯、神经周围侵犯、血管侵犯,以及前列腺癌组织ANO7表达均是前列腺癌患者术后生化复发的影响因素(P<0.05)。结论前列腺癌组织ANO7呈低表达,且ANO7阳性表达是前列腺癌患者术后发生生化复发的保护因素。

钙激活的氯离子通道蛋白A在肿瘤形成中作用的研究进展

钙激活的氯离子通道蛋白A(TMEM16A)是钙激活氯离子通道的基本分子构成,其在肿瘤形成中的作用越来越受到关注。TMEM16A的过表达与许多肿瘤的不良预后密切相关。在肿瘤诊断方面,TMEM16A被认为是高效的生物标记物。最近研究表明,TMEM16A是通过在离子通道中的作用促进肿瘤形成。随着研究不断进展,TMEM16A将来有可能成为癌症诊疗的有效靶点。

血管紧张素(1-7)通过抑制中电导钙激活钾离子通道蛋白表达参与肾脏纤维化

目的探讨血管紧张素(Ang)(1-7)在肾纤维化过程中的保护作用与中电导钙激活钾离子通道(KCa3. 1)的关系。方法 60只雄性小鼠随机分为5组:对照组(WT);血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组:皮下注射AngⅡ[1. 4 mg/(kg.d)];注射AngⅡ的同时给予以下药物干预:AngⅡ阻断剂洛沙坦(Losartan)组:皮下注射Losartan[40 mg/(kg.d)];Ang (1-7)组:皮下注射Ang(1-7)[0. 14 mg/(kg.d)];血管紧张素转化酶2(ACE2)激动剂重氮氨苯脒乙酰甘氨酸盐(DIZE)组:皮下注射DIZE[10 mg/(kg.d)]。连续给药4周后对相关指标进行检测。Masson染色法检测肾组织胶原沉积变化;Western blotting法检测肾组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和KCa3. 1通道蛋白表达的变化。结果与对照组相比,AngⅡ组小鼠肾组织内胶原沉积量明显增加(n=12,P<0. 01),表明肾纤维化模型复制成功。AngⅡ使肾组织Ⅰ、Ⅲ型胶原合成显著增多(n=6,P<0. 01),同时促进了肾组织KCa3. 1通道蛋白的表达(P<0. 01),而Ang (1-7)及ACE2激活剂DIZE的应用抑制了肾组织内胶原沉积量、Ⅰ/Ⅲ型胶原合成及KCa3. 1通道蛋白的表达(n=12或6,P<0. 01)。结论 Ang (1-7)在肾纤维化过程中发挥保护作用,这一作用可能与其下调肾组织中KCa3. 1通道蛋白表达有关。

地尔硫卓通过下调钙激活氯离子通道抑制肝癌细胞增殖和运动

目的观察钙离子通道抑制剂地尔硫卓对肝癌MHCC97H、7402细胞增殖和运动侵袭能力的作用,探讨其相应机制。方法采用不同浓度地尔硫卓(0、25、50、100、200、400μmol/L)干预肝癌MHCC97H、7402细胞不同时间(12、24、48 h)后,用MTT法测定地尔硫卓对肝癌细胞增殖的影响,体外细胞划痕实验检测处理后肝癌细胞运动侵袭能力;通过RT-PCR和免疫细胞化学检测地尔硫卓对肝癌细胞中TMEM16A mRNA和蛋白表达水平的影响。结果地尔硫卓能够有效抑制肝癌MHCC97H、7402细胞的增殖和运动侵袭能力,且具有一定的时间和浓度依赖性特点(P<0.05)。其中,100μmol/L浓度的地尔硫卓作用24 h对MHCC97H肝癌细胞抑制较明显,TMEM16A mRNA和蛋白表达减少(P<0.05),而50μmol/L浓度的地尔硫卓作用48 h对7402肝癌细胞抑制较明显,TMEM16A mRNA和蛋白表达减少(P<0.05)。结论地尔硫卓能一过性抑制MHCC97H、7402肝癌细胞侵袭,这种作用可能与其通过调节钙离子通道TMEM16A的mRNA和蛋白表达而发挥肿瘤抑制作用有关。

基于钙激活氯离子通道的Piezo1通道调节剂高通量筛选模型的构建

目的构建基于钙激活氯离子通道蛋白1(ANO1)的Piezo1调节剂高通量筛选模型。方法RT-PCR和Western印迹法分别检测Fischer大鼠甲状腺上皮(FRT)细胞Piezo1 mRNA和蛋白表达。构建共表达增强型绿色荧光蛋白标记的ANO1(ANO1-EGFP)和黄色荧光蛋白双突变体(YFP-H148Q/I152L)的FRT细胞株(简称FRT模型细胞),倒置荧光显微镜检测ANO1-EGFP和YFP-H148Q/I152L在FRT模型细胞中的表达,加入ANO1激活剂离子霉素10μmol·L^-1,应用荧光淬灭动力学实验检测并计算FRT模型细胞相对荧光强度变化值。加入Piezo1调节剂Jedi1(200μmol·L^-1),Jedi2(150μmol·L^-1),Yoda1(20μmol·L^-1)和Gd3+(20μmol·L^-1),应用荧光淬灭动力学实验检测并计算FRT模型细胞相对荧光强度变化值。加入Piezo1激活剂Jedi1,Jedi2和Yoda1,按0.2,1,5,10,25,50,75,100,200,300,400,500,600,700,800,900和1000μmol·L^-1设置浓度梯度,应用荧光淬灭动力学实验检测并计算FRT模型细胞相对荧光强度变化值并绘制浓度依赖曲线。向FRT细胞中加入Yoda1,按同样的方法设置浓度梯度,通过Fura-2/AM荧光探针检测细胞内的钙信号随Yoda1浓度的变化,分析细胞内Ca^2+浓度与FRT模型细胞相对荧光强度变化值之间的关系。计算模型Z′因子及信噪比。结果RT-PCR、DNA测序比对和Western印迹结果表明,FRT细胞内源性表达Piezo1。ANO1-EGFP和YFP-H148Q/I152L表达清晰,位置正确,并且ANO1-EGFP被离子霉素激活后模型荧光淬灭,证实转染基因表达的蛋白具有生物学活性,FRT模型细胞构建成功。FRT模型细胞加入Jedi1,Jedi2和Yoda1荧光均淬灭,加入Gd3+后再加入Yoda1荧光不淬灭,证实模型可以用于筛选Piezo1通道调节剂;在FRT模型细胞中离子霉素的EC50为(7.76±0.53)μmol·L^-1,Yoda1的EC50为(17.27±1.21)μmol·L^-1,Jedi1的EC50为(200.60±4.46)μmol·L^-1,Jedi2的EC50为(158.10±4.65)μmol·L^-1。FRT模型细胞相对荧光强度变化值与细胞内Ca^2+浓度呈正相关,模型能敏感地反应细胞内钙信号变化。模型Z′因子为0.82,信噪比为13.29∶1,可用于Piezo1通道调节剂高通量筛选。结论成功构建了可快速、准确、便捷筛选Piezo1通道激活剂和抑制剂的高通量筛选模型。

低强度脉冲超声对大鼠牙本质损伤修复过程中钙离子转运相关蛋白表达的影响

目的:研究低强度脉冲超声(LIPUS)辐照SD大鼠牙本质损伤模型后对成牙本质细胞及牙髓细胞上钙离子转运相关蛋白的影响。方法:40只SD大鼠[(360±13)g]右侧上颌第一磨牙备洞建立牙本质损伤模型,随机对其中20只大鼠备洞牙及剩余20只大鼠左侧上颌第一磨牙予以超声辐照(强度30 mw/cm^2,频率1.5 MHz,频宽200μm,重复率1 kHz),形成备洞组、备洞+LIPUS组、LIPUS组及空白对照组(n=10),超声辐照每日1次,持续20 min,分别在辐照1、3、7、14 d后处死实验动物,应用HE染色观察牙本质-牙髓复合体组织结构及细胞形态变化,免疫组化染色及图像分析检测钙离子转运相关蛋白(Cav 1.2、NCX1)的表达差异。结果:组织形态学分析发现牙本质损伤后LIPUS可协同炎症反应促进第三期牙本质的形成,而LIPUS辐照正常牙未见明显病理改变出现。免疫组化分析发现备洞+LIPUS组在1 d及3 d时较备洞组各蛋白表达明显升高(P<0.05);LIPUS组1 d时Cav1.2表达较空白对照组高(P<0.05),其余时间点两者无差异。结论:LIPUS可能在牙本质损伤早期积极调控钙离子转运相关蛋白,加快第三期牙本质修复进程,其作用机制可能与炎症反应及机械效应相关。

钙激活Cl^-通道蛋白在急性呼吸窘迫综合征患者体外气道上皮细胞中的表达及其作用实验研究

目的:探讨钙激活Cl^-通道蛋白(CLCA)在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)体外气道上皮细胞中的蛋白表达情况,并初步探讨其作用。方法:运用脂多糖(LPS)刺激16HBE细胞系,Western Blot检测hCLCA1蛋白表达水平与ARDS的时程关系;运用hCLCA1-siRNA干扰16HBE细胞系中hCLCA1的表达,real-time RT-PCR法检测细胞系中hCLCA1的mRNA和蛋白表达水平,验证siRNA是否对目的基因成功抑制。同时检测炎症因子的mRNA表达变化水平,观察CLCA的降低与炎症因子表达的关系。结果:Western Blot结果显示:16HBE细胞系加LPS(1μg/ml)刺激12h、24h后hCLCA1的蛋白表达量下降,且LPS刺激24h后hCLCA1的降低有统计学差异(P<0.05)。real-time RT-PCR检测证实hCLCA1-siRNA对目的基因成功抑制,表明成功构建hCLCA1低表达的16HBE细胞系;同时real-time RT-PCR结果显示TNF-α和IL-1β的mRNA表达水平升高(P<0.05)。结论:CLCA在LPS刺激后的培养HBE细胞系中蛋白表达水平下降,并表现为时间依赖性。抑制HBE细胞系hCLCA1的基因表达,则该细胞分泌炎症因子的水平升高,推测CLCA在ARDS体外气道上皮细胞分泌炎症介质过程中发挥负性调节作用。

山奈酚对缺氧/复氧损伤诱导心肌细胞凋亡的影响及机制研究

目的:探究山奈酚对缺氧/复氧损伤诱导心肌细胞凋亡的影响和机制。方法:利用随机数字法将H9C2大鼠心肌细胞随机分为三组,对照组细胞在常规孵箱培养,缺氧/复氧组细胞利用缺氧孵箱和常规孵箱交替培养,山奈酚组细胞在缺氧/复氧培养的基础上应用30μmol/L山奈酚。分别利用流式细胞仪和多核苷酸链断裂技术检测各组细胞凋亡水平,利用蛋白印迹技术检测凋亡相关蛋白和钙离子通道蛋白含量,利用免疫荧光技术检测细胞中钙离子浓度。结果:和对照组比较,缺氧/复氧组细胞凋亡增加,钙离子通道蛋白Cav1.2表达和细胞中钙离子含量增加(均P<0.05);和缺氧/复氧组比较,山奈酚组细胞凋亡减少,钙离子通道蛋白Cav1.2表达和胞内钙离子浓度减少(均P<0.05)。结论:山奈酚可能通过减少钙离子通道蛋白Cav1.2表达和胞内钙离子浓度抑制缺氧/复氧损伤诱导的大鼠心肌细胞H9C2凋亡。

小肠上皮细胞钙转运机制研究进展

钙离子跨上皮细胞转运分为细胞旁途径和跨细胞途径。前者是经紧密连接顺电化学梯度进行；后者则需要借助上皮细胞顶膜上的钙离子通道蛋白TRPV6、胞浆钙结合蛋白CB、基底侧膜上的质膜钙ATP酶（PMCA）与钠一钙交换体（NCX）介导。1，25-二羟维生素D3、甲状旁腺激索（PTH）、降钙素（CT）等钙调激素对钙离子跨膜转运发挥调节作用。

钙离子激活氯离子通道蛋白7在前列腺癌核因子-κB信号通路的表达及其临床意义

目的探讨钙离子激活氯离子通道蛋白7(ANO7)在前列腺癌核因子-κB(NF-κB)信号通路的表达及其临床意义.方法利用Tribbles同源蛋白1(TRIB1)过表达前列腺癌细胞株构建NF-κB信号通路激活细胞和动物模型,NF-κB信号通路抑制剂构建NF-κB信号通路抑制细胞模型.用蛋白质印迹法(Western blot)、实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和免疫组织化学(IHC)分析前列腺癌中NF-κB信号通路对ANO7表达的调控影响,分析临床数据中ANO7表达与前列腺癌临床病理特征之间的关系.结果在NF-κB信号通路激活细胞和动物模型中可见ANO7表达上调;在NF-κB信号通路抑制细胞模型中可见ANO7表达下调.组织芯片中ANO7在肿瘤组织和癌旁组织中高表达率分别为45.8%、85.7%,差异有统计学意义(χ^2=7.258,P<0.01).ANO7表达与Gleason评分、病理分级显著相关(χ^2=19.797,19.797,P<0.01),癌症基因组图谱(TCGA)与泰勒(Taylor)数据库得到相似的结果.运用Kaplan-Meier分析发现在Taylor数据库中ANO7与患者的预后明显相关(P<0.01).最后采用Cox回归模型进行多因素综合分析发现在影响前列腺癌预后的队列中,ANO7(P<0.05)、Gleason评分(P<0.01)和病理分级(P<0.01)都是前列腺癌的独立预测指标.结论NF-κB信号通路调控前列腺癌ANO7表达,且ANO7的表达与前列腺癌明显相关.

膜蛋白KCNN1在昆虫细胞Sf9中的表达与纯化

目的:利用昆虫细胞表达系统真核表达并纯化小电导钙激活钾离子通道蛋白1(KCNN1)。方法:以基因重组方法构建杆状病毒穿梭质粒reBacmid-KCNN1,将其转染至杆状病毒/Sf9细胞表达系统表达目的蛋白,并用Western印迹鉴定KCNN1的表达水平;用Ni-IDA-Sepharose CL-6B亲和层析柱纯化裂解细胞上清中的KCNN1,并用Western印迹鉴定纯化结果。结果:KCNN1在Sf9细胞中高效表达,通过亲和层析获得了纯化的KCNN1。结论:膜蛋白KCCN1在昆虫细胞Sf9中的表达与纯化,为深入研究其分子生物学功能提供了材料,也为全长膜蛋白的体外表达提供了一套可借鉴的实验方法。

人精子CatSper1 mRNA表达与精子活力的相关性研究

目的研究不同精子活力的人精子中精子特异性阳离子通道蛋白1(CatSper1)mRNA的表达差异,以及其与精子活力相关指标的相关性。方法分别收集少、弱精症患者精液标本和健康人对照精液标本各25份,用Trizol试剂提取精子中的总RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测CatSper1 mRNA表达改变。结果少、弱精症组CatSper1 mRNA表达水平与健康人对照组相比,差异具有统计学意义[(0.54±0.01)vs(1.13±0.05),P<0.01]。CatSper1 mRNA表达与精子活率以及a+b级精子百分率之间呈显著正相关。结论人精子CatSper1 mRNA表达与人精子活力呈正相关。

参松养心胶囊对兔心肌梗死后心肌细胞的保护作用

目的探讨参松养心胶囊对兔心肌梗死模型心肌细胞的保护作用及机制。方法取新西兰大耳白兔40只,随机分为假手术对照组(普食,8只),梗死组(普食,8只),梗死+普萘洛尔组(普食+普萘洛尔粉,8只),梗死+参松养心胶囊组(普食+参松养心原粉,8只),梗死+联合用药组(普食+普萘洛尔粉+参松养心原粉,8只),采用冠状动脉前降支结扎术建立心肌梗死模型,假手术对照组采取开胸后冠状动脉穿线,但不做结扎。8 w后处死动物,取心肌梗死周围心室组织,通过RT-PCR和Western印迹方法检测各组缝隙链接蛋白(Cx)43、钠钙交换体(NCX)及兰尼碱受体蛋白(RyR)2 mRNA和蛋白的相对表达水平。结果与假手术对照组相比,梗死组Cx43、NCX、RyR2 mRNA和蛋白相对表达水平显著降低(P<0.05);与梗死组相比,梗死+普萘洛尔组Cx43、NCX、RyR2 mRNA和蛋白相对表达水平无变化(P>0.05),梗死+参松养心胶囊组Cx43、NCX、RyR2 mRNA和蛋白相对表达水平均显著增加(P<0.05);与梗死+参松养心胶囊组相比,梗死+联合用药组Cx43、NCX、RyR2 mRNA和蛋白相对表达水平均显著增加(P<0.05)。结论参松养心胶囊可以改善心肌梗死后心功能不全及心律失常,可能与调节钙离子通道的开放,抑制钙超载有关;普萘洛尔具有增强参松养心胶囊保护心肌梗死后心肌细胞的作用。

CACNA1C基因表达水平对弥漫性大B细胞淋巴瘤利妥昔单抗耐药的预测价值

目的:探讨钙离子通道A1C(calcium voltage-gated channel subunit alpha1 C,CACNA1C)基因表达水平对弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)患者利妥昔单抗耐药的预测价值。方法:选取我院在2015年3月至2017年5月收治的DLBCL患者93例,均采用利妥昔单抗+CHOP方案化疗,随访2年,根据淋巴瘤化疗疗效评定标准,分为利妥昔单抗耐药组和敏感组;免疫组化法检测所有患者肿瘤组织的钙调蛋白CACNA1C基因、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,BCL-2)基因、PRDM1基因表达情况;绘制受试者工作曲线(receiver operating characteristic curve,ROC),分析CACNA1C基因、BCL-2基因、PRDM1基因水平在预测DLBCL利妥昔单抗耐药中的效能。结果:93例患者中共出现利妥昔单抗耐药病例26例,耐药率为27.96%;在一般资料方面耐药与敏感病例比较差异无统计学意义(P>0.05);耐药组患者CACNA1C着色细胞比例(40.12±15.44)%vs(69.62±17.65)%低于敏感组,BCL-2着色细胞比例(66.31±15.92)%vs(47.43±14.66)%高于敏感组,PRDM1着色细胞比例(73.42±21.64)%vs(56.73±18.59)%高于敏感组,差异具有统计学意义(P<0.05);ROC曲线显示,CACNA1C基因(AUC=0.848,95%CI=0.765~0.932)曲线下面积大于BCL-2基因(AUC=0.777,95%CI=0.673~0.881)和PRDM1基因(AUC=0.615,95%CI=0.486~0.744);CACNA1C与BCL-2基因表达联合预测的曲线下面积(AUC=0.915,95%CI=0.854~0.976)显著高于三种基因表达水平单独预测,其中CACNA1C基因的最佳截点值为58.61%,BCL-2的最佳截点值为48.33%,此时联合预测在预测利妥昔单抗耐药的敏感性和特异性分别为80.77%和89.55%。结论:CACNA1C基因表达水平在预测DLBCL患者利妥昔单抗耐药方面具有较好的价值,其中CACNA1C与BCL-2联合预测利妥昔单抗耐药价值更高。

哮喘与钙库操纵钙离子内流的关系研究进展

支气管哮喘是严重影响人类日常生活的慢性疾病之一，近年来全世界范围内儿童哮喘发病呈逐年上升的趋势，但目前哮喘的发生机制仍未十分明确。研究发现钙库操纵钙离子内流（store-operated calcium entry，SOCE）在机体生理活动中起着重要作用，在细胞生长中，SOCE活性的增强可以促进多种类型细胞的增殖、增生以及迁移，其中构成SOCE重要分子的基质相关作用因子1（stromal interaction mole—cule1，STIM1）和钙离子释放激活钙离子通道蛋白1（calcium release-activated calcium channel protein1，ORAI1）可能参与哮喘气道高反应性的发生及气道的重塑，与支气管哮喘的发生、发展有密切关系。

气道上皮细胞紧密连接在小鼠哮喘中的病理学改变

目的探讨小鼠支气管哮喘(哮喘)中气道上皮紧密连接的病理学改变。方法 10只小鼠随机分为对照组和哮喘组,每组5只。哮喘组于第0、7天腹腔注射鸡卵清蛋白(OVA)溶液,在第14、15、16天以雾化的OVA熏诱小鼠,1 h/次、1次/d;对照组用PBS溶液替代OVA;2组小鼠在第18天回收肺组织,采用免疫荧光染色法评价小鼠哮喘模型的有效性,荧光定量PCR检测紧密连接相关蛋白基因Claudin 1、Claudin 3、Claudin 4、Claudin 5、Claudin 7、Clau-din 10在肺组织中的表达。结果哮喘组Claudin 3、Claudin 4、Claudin 10 m RNA水平较对照组低(P<0.05),而Clau-din 1、Claudin 5、Claudin 7 m RNA水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论哮喘病理过程中气道上皮细胞紧密连接松散,提示气道上皮屏障破坏。

CLCA1在结直肠癌中的表达及其基因集富集分析

目的探讨钙激活的氯离子通道辅助蛋白1(CLCA1)在结直肠癌(CRC)中的表达及其与临床病理特征和预后的关系,分析其基因集富集情况。方法通过肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库下载CLCA1 mRNA表达数据,应用GSEA软件进行CLCA1不同表型的基因集富集分析。分析CLCA1 mRNA在CRC组织与癌旁组织中的差异表达,并分析其与临床病理特征的关联性。采用免疫组织化学染色法分析CLCA1在CRC组织和癌旁组织中的差异。结果CRC组织中CLCA1表达较癌旁组织明显降低。CRC组织的免疫组织化学染色评分显著低于癌旁组织[(2.46±1.09)分vs(5.65±0.49)分;t=6.458,P=0.000]。癌旁组织的CLCA1 mRNA表达水平显著高于临床Ⅰ~Ⅱ期CRC组织和临床Ⅲ~Ⅳ期CRC组织(P<0.05),临床Ⅰ~Ⅱ期CRC组织的CLCA1 mRNA表达水平显著高于临床Ⅲ~Ⅳ期CRC组织(P<0.05)。CLCA1高表达组临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、N分期为N0期以及M分期为M0期的人数比例显著大于CLCA1低表达组(P<0.05)。CLCA1高表达组的生存预后显著优于CLCA1低表达组(χ2=8.200,P=0.004)。基因集富集分析结果显示,有19个基因集显著富集于CLCA1高表达表型,未发现有基因集显著富集于CLCA1低表达表型。结论CLCA1在CRC组织中表达下调,并且与患者的临床病理特征及预后有关,具有作为CRC诊断、治疗和预后预测标志物的潜力。

分泌型钙激活Cl^-通道在ARDS小鼠肺组织表达的变化及规律

目的观察小鼠分泌型钙激活Cl^-通道(mCLCA3)在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)模型肺组织中的表达量及随时间的变化规律,探究其在急性肺损伤过程中的作用。方法18只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组和脂多糖(LPS)组ARDS小鼠(分为气道滴入LPS诱导6 h组、24 h组),每组6只。HE染色观察小鼠肺组织形态结构改变,并进行肺损伤评分;阿尔辛蓝-过碘酸雪夫(AB-PAS)染色观察小鼠气道上皮中杯状细胞的数量;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测小鼠肺组织中mCLCA3的mRNA表达水平;蛋白质印迹法(Western blot)法检测mCLCA3蛋白在ARDS小鼠肺组织及支气管肺泡灌洗液(BALF)中的表达。结果HE染色结果,与对照组相比,LPS组ARDS小鼠肺部正常结构明显被破坏,肺泡上皮呈弥漫性损伤,肺泡内出血并伴有大量炎性细胞浸润,肺间质蛋白质沉积,有透明膜形成;与对照组小鼠相比较,LPS组ARDS小鼠的肺损伤评分(对照组:1.40±0.54;LPS组:7.40±0.54,P<0.05)显著升高;AB-PAS染色观察小鼠气道上皮中杯状细胞的数量;real-time RT-PCR(RT-qPCR)和Western blot结果显示:相比于对照组小鼠,LPS组ARDS小鼠的肺组织中mCLCA3的基因表达量明显下降(P<0.05);mCLCA3蛋白在ARDS小鼠的肺组织和BALF中均显著降低,且差异有统计学意义(P<0.05),且下降水平呈时间依赖性。结论LPS诱导的ARDS小鼠模型中气道杯状细胞数量明显增加,而其肺组织及BALF中mCLCA3的mRNA及蛋白表达水平(评分)均明显下降,并表现为时间依赖性。气道杯状细胞产生的分泌型CLCA表达水平与ARDS损伤程度呈负相关,提示前者可能在肺部炎症机制中扮演着负性调节作用。