钙离子依赖型凝集素样受体2(CLEC-2)研究进展

钙离子依赖型凝集素样受体2(calcium-dependent lectin-like receptor 2,CLEC-2)是近年发现的血小板表面受体,相对分子质量(Mr)约32 000,是一种Ⅱ型跨膜受体。蛇毒蛋白Rhodocytin和唾液酸样糖蛋白Podoplanin是目前被分别鉴定出的CLEC-2的外源性和内源性配体。配体与受体相互作用后,通过Src及Syk依赖的酪氨酸激酶途径活化下游分子,最终激活PLCγ2,产生第二信使的生理效应,引起血小板活化聚集。研究表明CLEC-2与配体的相互作用和血栓性疾病、肿瘤转移和进展以及血小板捕获HIV-1并呈递给靶细胞等过程密切相关。因此,阻断两者相互作用可能成为治疗上述疾病的新靶点。

钙非依赖型磷脂酶A_(2)介导心肌缺血再灌注损伤

目的:探讨钙非依赖型磷脂酶A_(2)(Ca^(2+)-independent PLA_(2),iPLA_(2))在小鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用。方法:采用CRISPR方法构建iPLA_(2)基因敲除(iPLA_(2)^(-/-))小鼠,通过结扎C57BL/6JNifdc小鼠的左冠状动脉前降支建立心肌缺血再灌注模型,采用蛋白质印迹法检测iPLA_(2)蛋白的表达;全自动生化分析仪检测血清心肌酶的活性;间接免疫荧光标记法检测CD68的表达。结果:野生型小鼠心肌缺血再灌注中,缺血45 min再灌注3 h时iPLA_(2)蛋白的表达最高。与野生型心肌缺血再灌注小鼠比较,iPLA_(2)^(-/-)小鼠心肌缺血再灌注损伤得到改善,表现为血清乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌酸激酶同工酶的漏出减少和CD68阳性细胞数减少。结论:iPLA_(2)蛋白的高表达是小鼠心肌缺血再灌注损伤的重要原因,iPLA_(2)可能是治疗心肌缺血再灌注损伤的潜在靶点。

非胰岛素依赖型糖尿病合并高血压病的降压治疗

近年来,国内外研究均已表明,非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)合并高血压病的病人,存在着明显的胰岛素抵抗(ISR)和高胰岛素血症(HIS),并且NIDDM病人在ISR、HIS基础上合并高血压病是心血管疾病重要的发病危险因素。因此,继Reav-en提出的X综合征概念之后。

iPLA2β通过调控铁死亡减轻高糖诱导的人肾小管上皮细胞损伤

目的探讨钙离子非依赖型磷酸酯酶A2β(iPLA2β)在高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)中的表达,iPLA2β与铁死亡的关系以及iPLA2β对高糖诱导的HK-2细胞损伤的保护机制。方法用30 mmol/L葡萄糖刺激HK-2细胞,iPLA2β质粒转染构建过表达模型,铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)和铁死亡激活剂erastin作为铁死亡对照组。干预36 h后,试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、铁含量,DCF免疫荧光检测细胞内活性氧(ROS)水平。Western blot法检测铁死亡指标ACSL4、GPX4、LPCAT3、TFR1的表达。结果高糖刺激可以降低HK-2细胞内iPLA2β的表达,HK-2细胞内ROS、MDA水平升高,GSH、SOD水平降低。Western blot结果显示ACSL4、LPCAT3、TFR1表达增高,GPX4表达降低。Fer-1干预后上述指标改善。过表达iPLA2β后,可降低KIM-1表达,减轻HK-2细胞损伤。进一步研究发现,过表达iPLA2β后可抑制高糖诱导的HK-2细胞的氧化应激和铁死亡。另外,erastin减弱了iPLA2β对高糖诱导的HK-2细胞损伤的保护作用。结论iPLA2β通过调控铁死亡减轻高糖诱导的HK-2细胞损伤。

钙非依赖型磷脂酶A_2对过氧化氢诱导胰岛微血管内皮细胞凋亡的影响

目的用过氧化氢(H_2O_2)诱导大鼠胰岛微血管内皮细胞(IMECs)凋亡,观察钙非依赖型磷脂酶A_2(iPLA_2)对其凋亡的影响。方法 siRNA技术抑制IMECs iPLA_2表达,DNA ladder法检测H_2O2诱导后的DNA片段,Annexin V-FITC/PI双染色检测细胞凋亡率,DIOC_6(3)染色检测细胞线粒体膜电位。结果 (1)siRNA-iPLA_2可明显抑制IMECs内iPLA_2 mRNA的表达。(2)H_2O_2诱导后细胞DNA片段化程度随诱导时间的增加而增多,抑制iPLA_2表达后细胞的梯状条带明显增亮。(3)干扰组和未干扰组、干扰阴性对照组相比凋亡率明显升高(P均<0.01)。(4)与未干扰组比较,干扰组细胞线粒体膜电位明显下降(P<0.1)。结论抑制iPLA_2表达可促进H_2O_2诱导的IMECs凋亡。

三种离子通道分布对胞质内Ca^2＋螺旋波波头的影响

目的：研究细胞膜上3种非均匀离子通道分布对细胞质中Ca^2＋螺旋波波头的影响。方法采用具有双参数的Atri Ca^2＋模型并通过数值计算进行分析研究。结果不同的离子通道分布以及非均匀区域的大小对Ca^2＋螺旋波波头的吸引强度不同。结论离子通道浓度分布变化越快或非均匀区域越小，对螺旋波波头吸引力越强。

老年降糖药与钙离子拮抗剂联合用药的疗效观察

病例选择:年龄60—73岁,平均65岁,男性56例,女性2例.均按1982年全国糖尿病协作研究组扩大会议诊断标准确诊为非胰岛素依赖型糖尿病,其中伴发冠心病者56例,伴发高血压者2例.检测方法:治疗前后分别测空腹血糖并记录心电图及血压.治疗:除控制饭食外,54例服用优降糖,4例注射胰岛素,同时加服硝苯吡啶30—40mg/日.

沉默钙非依赖型磷脂酶A2β基因对间歇性高糖诱导胰岛微血管内皮细胞凋亡的影响

目的 通过小分子干扰（siRNA）技术沉默大鼠胰岛微血管内皮细胞（IMECs）的钙非依赖型磷脂酶A2（iPLA2）基因,研究不同葡萄糖浓度对IMECs iPLA2表达的影响及其与细胞凋亡之间的关系.方法 通过分离纯化大鼠胰岛,获取IMECs细胞,采用随机数余数分组法将其分为正常糖组（5 mmol/L）、恒定高糖组（28 mmol/L）及间歇高糖组（每24小时轮换培养于5mmol/L或28 mmol/L葡萄糖）;通过实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测葡萄糖浓度分别为恒定的5 mmol/L、28 mmol/L以及每24小时轮换的5 mmol/L或28 mmol/L培养条件下的IMECs iPLA2的基因表达;合成iPLA2的RNA干扰序列并转染至IMECs中,通过RT-PCR验证其是否转染成功;采用细胞DNA片段化检测和膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶（Annexin V/PI）流式细胞仪检测不同葡萄糖浓度条件下IMECs的凋亡.组间两两比较采用LSD检验,凋亡率采用随机区组设计的两因素ANOVA分析.结果 RT-PCR检测显示各组细胞iPLA2基因表达逐渐减弱,依次为1.90±0.23、0.90±0.05及0.23±0.03,且各组间差异有统计学意义（P＜0.05）.成功合成并转染iPLA2 siRNA后,IMECs间歇性葡萄糖培养组较正常糖组及恒定高糖组DNA片段化更为明显,间歇高糖组流式细胞凋亡率较正常糖组升高,差异有统计学意义（44.9±2.7比3.1±1.0,P＜0.05）.结论 间歇性高糖环境可抑制IMECsiPIA2基因表达,且通过小分子干扰技术抑制iPLA2基因表达能够促进细胞的凋亡,提示iPLA2表达减弱可能参与了间歇性高糖诱导的IMECs凋亡过程.

非钙依赖型磷脂酶A2相关性神经变性病5例并国内文献复习

目的探讨国内非钙依赖型磷脂酶A2相关性神经变性病(PLAN)临床表型和PLA2G6基因型特点。方法回顾性收集2016年6月至2019年5月复旦大学附属儿科医院确诊PLAN患儿的临床资料,并以"PLA2G6"和"脑组织铁沉积神经变性病"为检索词在"中国知网、万方、维普、Pubmed"数据库检索2006年1月至2020年3月我国学者报道PLAN病例的文献,总结分析国内PLAN表型和基因型特点。结果 5例患儿均为婴儿神经轴索营养不良(INAD),发病年龄中位数18月龄,首发症状中4例为发育倒退,1例为步态不稳,1例合并癫痫,表现为痉挛和局灶性发作。神经系统查体中除1例肌力正常外,4例肌力为1~4级,1例病理征阳性,4例深反射活跃,1例深反射亢进。头颅磁共振成像(MRI)检查中3例小脑萎缩。3例行肌电图均提示神经源性损害改变。4例进行随访,现存肌力0~3级,3例完全丧失语言能力。本组5例均具有PLA2G6复合杂合变异,共有10种不同变异,错义变异(50%),7种未在人类基因突变数据库(HGMD)中报道。文献复习:14年间共检索到12篇文献,报道43例PLAN,其中36例(83.7%)为INAD,3例(7.0%)为不典型INAD,4例(9.3%)为PLA2G6相关性肌张力障碍-帕金森综合征(PLAN-DP)。6例(14.0%)合并癫痫,5例癫痫发作类型为局灶性发作或全面性强直。10例临床诊断INAD,33例经分子遗传学明确诊断。43例共检测到PLA2G6基因49种变异类型,其中错义变异27种(55.1%)。结论 INAD是PLAN最常见的临床表型,同时存在周围神经和中枢神经损害,且病情进展迅速是其主要特点。PLA2G6以错义变异为主,未发现热点变异位点,目前尚无有效治疗方法。

Annexin A2与肺癌

Annexin A2是钙依赖性磷脂结合蛋白Annexins家族中的一员,在上皮细胞、巨噬细胞和单核细胞等多种组织和细胞上表达。Annexin A2具有钙离子依赖性,能够结合磷脂、细胞骨架蛋白,参与人类许多疾病的发生发展,如心血管疾病、炎症性疾病及肿瘤等。目前研究发现Annexin A2与肺癌密切相关,本文重点综述Annexin A2的生物学功能及其与肺癌的关系。

Clec2在骨髓增生异常综合征患者中的表达及其与TPO的相关性

目的:探讨clec2在骨髓增生异常综合征(MDS)患者中的表达,并分析clec2与TPO的相关性。方法:应用ELISA方法检测47例MDS患者及20例正常人血浆中clec2的表达,分析MDS患者临床特征与clec2表达的相关性;同时检测42例MDS患者血浆TPO的表达水平,并分析clec2与TPO的相关性。结果:Clec2在正常人中表达水平为171.5±57.6 ng/ml,在MDS患者中的表达水平为347.9±121.5 ng/ml(P<0.01)。其中初治MDS患者clec2表达水平为375.4±124.3 ng/ml,复治患者的表达水平为288.6±98.7 ng/ml(P<0.05)。Clec2与患者性别、年龄、外周血细胞数、骨髓原始细胞数均无相关性。进一步分析发现,clec2与TPO存在正相关关系(r=0.419)。结论:Clec2在MDS患者中表达增高,且与TPO呈正相关,2者相互作用可能在MDS疾病的发生、发展中起着重要作用,其可能是该病的新的分子机制及靶向治疗机制。

箬竹叶氯仿部提取物对小鼠气管平滑肌的舒张作用及其机理

使用高钾溶液(80 mmol/L KCl)和乙酰胆碱(100μmol/L ACh)对小鼠离体气管环进行了预处理诱导气道异常收缩,进而研究了箬竹叶氯仿部提取物(CEIT)对气管的舒张作用及其机理.结果表明:CEIT能够抑制高钾和ACh诱导的预收缩,且呈剂量依赖性.此外,CEIT阻断了VDCCs电流,抑制了细胞外Ca^(2+)内流.在ACh诱导的收缩反应中,不仅VDCCs通道参与其中,还有其他离子通道的参与.CEIT能够抑制NSCCs通道,从而抑制内钙释放.CEIT能够通过阻断VDCCs通道和NSCCs通道抑制外钙内流和细胞内钙释放,从而舒张小鼠气管平滑肌.提示CEIT中的活性成分可以作为一种治疗气道异常收缩的药物.

番茄红素对饮水型氟中毒大鼠肾损伤STC1、UCP2的表达干预作用

肾脏是机体代谢排出氟最主要的脏器,同时也是氟中毒的靶器官,也是氟中毒非骨相系统研究的热点之一,但其损伤机制仍不明确。本研究通过复制氟中毒肾损伤大鼠模型,观察与氧化应激、钙离子代谢密切相关的两种蛋白UCP2、STC1表达及番茄红素对其影响,探讨番茄红素对氟中毒肾损伤从线粒体层面的保护作用,为进一步研究番茄红素对氟中毒大鼠肾抗氧化能力影响的分子机制提供科学的理论依据。

iPLA2β在胰岛β细胞中的表达和作用

钙离子非依赖性磷脂酶A2β（iPLA2β）能够催化磷脂sn-2酯酰键水解，释放出游离不饱和脂肪酸和溶血磷脂，在生命活动中发挥重要作用。iPLA2β的基本结构中包含锚蛋白重复序列、丝氨酸酯酶共有序列和钙调蛋白结合位点等，其活性受钙调蛋白、蛋白激酶C和ATP等多种因素调节。近年来研究发现，该酶在胰岛β细胞表达水平较高，并参与葡萄糖刺激的胰岛素分泌的调节，其活化、水解膜磷脂释放花生四烯酸（AA），AA作为信号分子引起钙内流和胰岛素分泌。iPLA2β在β细胞的增殖和凋亡中发挥重要的调节作用，其表达和活性异常导致细胞周期G1期阻滞和细胞凋亡，提示iPLA2β可能与糖尿病的发生、发展密切相关，通过对该酶深入的研究能够为糖尿病的基因治疗和改良胰岛移植治疗提供新的途径。

Lp-PLA2真核表达载体的构建及其生物学功能研究

Lp-PLA2是磷脂酶超家族的一员,又称为血小板活化因子水解酶(PAF-AH),是钙离子非依赖性的磷脂酶,在动脉粥样化形成过程中由多种炎症细胞(单核细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞和肥大细胞)产生并分泌。在小鼠血液循环中,Lp-PLA2主要与HDL结合,水解PAF,抑制动脉粥样硬化形成,并降低心肌梗塞、中风的发生率;而在人体血液循环中,Lp-PLA2与LDL结合,