miRNA-144靶向调节钙粘蛋白11对间充质干细胞成骨分化的抑制效应

目的证实miRNA-144靶向调节钙粘蛋白11(Cad-11)表达,抑制间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSCs)的成骨分化。方法通过双荧光素酶报告系统对Cad-11与miRNA-144的靶基因关系进行鉴定;将pre-miR-144及anti-miR-144分别转染MSCs,成骨诱导7、14 d后,实时定量PCR和蛋白印迹方法检测细胞中Cad-11及成骨标志物Runx2、ALP的表达情况,分析其与MSCs成骨分化的变化关系。黏附实验检测miRNA-144对MSCs成骨分化过程中黏附的影响。结果 Cad-11是miRNA-144的靶基因;miRNA-144在成骨诱导第7、14天可明显抑制Cad-11、Runx2和ALP的表达(P<0.05),同时降低MSCs的黏附性。结论 miRNA-144通过抑制Cad-11的表达对间充质干细胞的成骨分化起负向调控的作用。

钙粘蛋白11在头颈部鳞癌中相关作用的研究

目的:研究钙粘蛋白11(cadherin 11,CDH11)在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)细胞中的表达情况,以及CDH11对HNSCC细胞功能的影响。方法:应用Western印迹法(Western blot)检测在HNSCC细胞系及正常细胞中CDH11的表达差异,检测应用转染技术降低CDH11表达后,HNSCC细胞中上皮间充质转化标志物表达水平的变化情况,并对转染后的细胞形态、增殖能力及侵袭能力进行测定。结果:HNSCC细胞中的CDH11及E-钙粘蛋白(E-cadherin)表达高于正常细胞,Twist家族转录因子-1(Twist family BHLH transcription factor 1,Twist-1)表达低于正常细胞,提示高水平CDH11可能抑制上皮间充质转化过程。转染后,HNSCC细胞中E-钙粘蛋白表达降低,Twist-1表达升高,且细胞间粘附降低;细胞增殖能力较转染前均增强(P<0.05);细胞侵袭能力较转染前有所提高(P<0.05)。结论:CDH11通过抑制HNSCC细胞的上皮间充质转化过程,进而抑制了HNSCC的增殖和侵袭行为,提示CDH11在HNSCC中可能作为抑癌基因起作用。

美沙拉嗪通过调节钙粘蛋白11对克罗恩大鼠肠上皮细胞凋亡和炎症反应的影响

目的探究美沙拉嗪对克罗恩大鼠肠上皮细胞凋亡和炎症反应的影响及机制。方法用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)3 mL·kg^(-1)灌肠的方法构建大鼠克罗恩病模型。将30只雄性SD大鼠分为对照组、模型组和实验组,每组10只。模型组和实验组大鼠构建克罗恩病模型,对照组大鼠给予0.9%氯化钠3 mL·kg^(-1)灌肠。随后模型组和对照组大鼠灌胃0.9%氯化钠溶液2 mL·kg^(-1),实验组大鼠灌胃美沙拉嗪2 mL·kg^(-1)。(1)组织实验:用酶联免疫吸附法(ELISA)测定大鼠结肠组织白细胞介素8(IL-8)、IL-1β、IL-4和IL^(-1)0的含量;用蛋白免疫印迹法检测大鼠结肠组织内钙粘蛋白11(CDH11)的表达水平。(2)细胞实验:用CCK-8实验检测各组细胞存活率;用Transwell法检测各组细胞侵袭能力;用原位末端标记检测法检测各组细胞凋亡率。结果(1)组织实验结果:对照组、模型组和实验组大鼠结肠组织内IL-8含量分别为(378.21±2.64),(614.55±2.17)和(416.35±2.24)pg·mL^(-1);这3组CDH11蛋白的表达水平分别为1.00±0.41,2.53±1.25,1.67±0.12。(2)细胞实验结果:对照组、模型组和实验组大鼠结肠上皮细胞在72 h细胞存活率分别为(100.00±0.00)%,(57.45±4.06)%和(64.65±6.07)%;这3组细胞侵袭数目分别为(85.45±9.47),(100.45±9.35)和(91.12±8.47)个;这3组细胞凋亡率分别为(9.12±1.13)%,(27.71±2.53)%和(15.57±1.86)%。上述指标,对照组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01);模型组和实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论美沙拉嗪可通过抑制CDH11的表达,改善TNBS诱导的克罗恩大鼠炎症反应和肠上皮细胞损伤。

上调钙粘蛋白P11可增强人乳腺癌细胞增殖及迁移能力

目的 研究过表达钙粘蛋白P11对人乳腺癌细胞增殖及迁移能力的影响.方法 通过转染实验在MCF-7细胞株中构建钙粘蛋白P11过表达细胞株MCF7-pKvenus-P11和阴性对照细胞株MCF7-pKve-nus,行Western blot检测过表达细胞株中钙粘蛋白P11蛋白表达,验证钙粘蛋白P11过表达模型是否构建成功,行CCK-8细胞活性实验检测MCF7-pKvenus-P11的增殖活性是否变化,并行细胞划痕实验及transwell侵袭实验检测MCF7-pKvenus-P11的迁移能力是否发生改变.结果 Western blot显示,过表达细胞株MCF7-pKvenus-P11中钙粘蛋白P11的蛋白表达明显升高（P〈0.05）,提示钙粘蛋白P11过表达细胞株MCF7-pKvenus-P11建立功;钙粘蛋白P11过表达后MCF-7增殖及迁移能力明显增强（P〈0.05）.结论钙粘蛋白P11可促进人乳腺癌细胞的增殖及迁移.

miR-144过表达慢病毒对关节炎模型小鼠滑膜组织病理进程的影响

目的探讨miR-144过表达慢病毒对于关节炎模型小鼠滑膜组织病理进程的作用及其可能的机制。方法将Ⅱ型胶原乳剂注射至BALB/c小鼠尾根部皮下构建由Ⅱ型胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠模型,再以miRNA-144高表达慢病毒进行尾静脉注射,然后对模型小鼠滑膜组织进行免疫组化检测Cadherin-11和TNF-α的表达和分布,并用HE染色检测滑膜组织的病理变化特点。结果模型小鼠滑膜组织表现出与类风湿性关节炎病理学进程相似的特点,miRNA-144高表达慢病毒处理较生理盐水和空载慢病毒处理组模型小鼠的滑膜组织的炎症反应明显减轻,且TNF-α表达较生理盐水和空载体慢病毒处理组显著下调(P<0.05),进一步检测Cadherin-11的表达亦显著降低(P<0.05)。结论机体中miRNA-144增加可减弱或抑制关节炎模型小鼠中滑膜组织的炎症反应,并下调其TNF-α的表达,且这一作用可能是miRNA-144抑制滑膜细胞中Cadherin-11的效应。