N-钙黏蛋白与Wnt/β-catenin通路在骨髓间充质干细胞与白血病干细胞中的耐药机制研究

【目的】探讨N-钙黏蛋白(N-cadherin)与Wnt/β-catenin通路在骨髓间充质干细胞(MSC)与白血病干细胞(LSC)中的耐药机制研究。【方法】65例急性髓系白血病(AML)患者,完全缓解41例,未缓解24例,比较两组CD34+CD38-干细胞中N-cadherin的表达差异。根据不同MSC或去甲氧柔红霉素(IDA)处理下将CD34+CD38-Kg1α细胞分为6组,检测细胞增殖和凋亡情况及N-cadherin、β-catenin水平,检测细胞黏附及抗凋亡能力。【结果】未缓解患者的N-cadherin表达水平高于完全缓解者(P<0.01);LSC+IDA组(B组)细胞凋亡率显著高于LSC与MSC直接共培养+IDA组(D组)(P<0.05);在IDA浓度为100 nmol/L、200 nmol/L时,B组的细胞增殖抑制率显著高于D组(P<0.05);B组的集落形成率显著低于D组(P<0.05)。Western blot结果显示:N-cadherin及β-catenin在MSC直接接触培养条件下表达高于单独培养或分离培养;LSC在MSC共培养条件下,N-cadherin及β-catenin表达水平上升,伴随细胞核内β-catenin水平上升。【结论】骨髓微环境的MSC可以通过N-cadherin与LSC的黏附作用支持LSC的增殖能力,同时促进LSC Wnt/β-catenin通路的激活,对化疗药物产生耐药性。

S100分子结合域缺失对钙周期结合蛋白生物学功能影响的研究

目的:探讨S100结合域的缺失对钙周期素结合蛋白(CacyBP/SIP)生物学功能的影响。方法:构建野生型CacyBP/SIP及S100结合域截短突变的真核表达载体(分别为pFLAG-CacyBP和pFLAG-△S100),脂质体法转染至人胃癌细胞系MKN45,四唑盐(MTT)比色法观察细胞生长,平板克隆实验及裸鼠成瘤实验检测转染细胞的体外和体内成瘤性。结果:成功构建了野生型CacyBP/SIP及△S100截短突变的真核表达载体并转染MKN45细胞。野生型CacyBP/SIP及△S100截短突变的CacyBP/SIP均能抑制胃癌细胞MKN45的增殖,使MKN45细胞的体外及体内成瘤性降低,但是截短突变CacyBP/SIP抑制胃癌细胞增殖及成瘤性的作用更强。结论:CacyBP/SIP能够抑制胃癌细胞的恶性表型,而阻断S100分子与CacyBP/SIP的结合能增强CacyBP/SIP这种抑制作用。

钙结合蛋白S100A1在正常卵巢与卵巢癌组织中的表达研究

目的 比较正常卵巢与卵巢癌组织中钙结合蛋白S100A1表达的差异，探讨其在卵巢癌组织中的临床意义。方法 收集南通大学附属医院2013年7月至2014年7月的卵巢癌石蜡包埋手术标本51例，其中卵巢浆液性囊腺癌31例、非浆液性卵巢癌20例；另选取正常卵巢组织石蜡包埋标本20例作为对照。采用免疫组织化学SP法检测正常卵巢与卵巢癌组织中S100A1表达，并分析其与卵巢癌的临床病理特征之间的关系。结果 卵巢癌组织和正常组织中S100A1表达的累积吸光度（IA）值分别为（5.88±0.66）和（1.87±0.54），差异有统计学意义（P〈0.01）。卵巢浆液性囊腺癌组织中S100A1表达IA值为（5.98±0.35），非浆液性卵巢癌组织中S100A1表达IA值为（5.35±0.45），差异有统计学意义（P〈0.05）。卵巢浆液性囊腺癌中S100A1的表达与手术病理分期及淋巴结转移无相关性（均P〉0.05）；但随病理分级增加，S100A1表达明显增强，差异有统计学意义（P〈0.05）。非浆液性卵巢癌中S100A1表达与手术病理分期、病理分级以及淋巴结转移均无相关性（均P〉0.05）。结论 钙结合蛋白S100A1在卵巢癌组织中高表达，与卵巢浆液性囊腺癌的病理分级密切相关，S100A1表达越高，恶性程度就越高。

H1-钙结合蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的分析H1-钙结合蛋白(H1-calponin)在胃癌组织中的表达,探讨其与基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达的关系及临床意义。方法应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western印迹分析检测胃癌组织(n=20)及癌旁正常组织中H1-calponin的mRNA和蛋白表达水平;RT-PCR和明胶酶图检测胃癌组织及癌旁正常组织中MMP-2的mRNA水平及酶活性。结果 Western印迹灰度扫描显示,胃癌组织中H1-calponin表达水平显著低于癌旁正常组织(0.98±0.28vs 3.11±1.37,t=-6.833,P<0.01),而MMP-2的活性显著高于癌旁正常组织(3.48±1.25vs 1.26±0.39,t=7.556,P<0.01),胃癌组织中H1-calponin表达水平与MMP-2活性呈负相关(r=-0.623,P<0.01)。结论 H1-calponin在胃癌组织中表达下调且与MMP-2活性呈负相关,表明其在胃癌发生过程中发挥重要作用。

大鼠钙结合蛋白S100A9基因克隆、表达及纯化研究

目的构建大鼠钙结合蛋白S100A9的原核表达质粒并获得纯化重组蛋白。方法根据大鼠S100A9基因mRNA序列,设计PCR引物,常规扩增后重组连入原核表达载体pET32a,并进行序列测定。利用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)和不同温度诱导表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定结果,并亲和层析纯化重组蛋白。结果 PCR扩增获得的条带与预期的DNA表达片段大小一致,克隆构建了pET-32a-S100A9原核表达载体,测序结果与预期完全一致,经亲和层析纯化获得毫克级纯化重组蛋白,并发现该蛋白在21℃有比较强的表达。结论为进一步探讨S100A9蛋白生物学功能奠定基础。

钙结合蛋白与帕金森病

帕金森病(PD)是一种病因不清、机制未明的以中脑多巴胺能神经元减少为特征的退行性病变。神经细胞钙稳态失调在其发病中具有重要作用,而细胞内Ca2+浓度是由钙结合蛋白(CaBP)、Ca2+通道以及Ca2+泵共同维持。CaBP中的微清蛋白(PV)、维生素D依赖的钙结合蛋白28k(CB-D28k),和钙视网膜蛋白(CR)等缓冲蛋白具有缓冲Ca2+和神经保护作用。同时PD存在上述CaBP表达的减少,但它们之间究竟存在何种联系尚不清楚,现就近年来CaBP与PD关系的研究进展作以下综述。

钙结合蛋白在老年人海马CA1和CA3区的分布

目的 探讨老年人海马中钙结合蛋白 (CalbindinD 2 8K ,CaBP)的分布及表达 ,并分析其在人衰老过程中对神经元的生理、病理变化的影响。方法 收集 12例 6 0岁以上老年人非脑部疾病尸检左侧大脑半球的海马组织 ,经病理常规处理后 ,切片 ,用免疫组织化学ABC染色法检测海马CA1与CA3区CaBP的分布。结果 CaBP阳性产物出现在神经元的细胞质中 ,CA1区的CaBP免疫阳性细胞数多于CA3区。结论 CaBP在老年人海马CA1、CA3中均有表达 ,但有差别。提示CaBP在老年人海马的功能活动中可能起重要作用。

血清肠型脂肪酸结合蛋白和血钙水平评估重症急性胰腺炎治疗效果的应用价值

【目的】探讨急性冠脉综合征（ACS）患者择期经皮冠状动脉介入治疗（PCI）术中冠脉内应用替罗非班对患者血小板微粒水平的影响。【方法】选取2015年1月至2016年12月本院收治的行择期PCI术的72例ACS患者为研究对象，采用随机数表法将其分为观察组和对照组，每组各36例。对照组术中通过外周静脉进行给药，观察组术中首先在冠脉内进行给药，在2min内在罪犯血管内注射10．0μg／kg的替罗非班，然后通过外周静脉以相同剂量持续泵入替罗非班36h。比较两组患者给药前、给药后10min罪犯血管处、给药后24h和停药12h后外周动脉处的血小板微粒水平，以及出血、血小板减少、术中完全血管重建率、住院期间和出院后6个月内有无发生主要心脏不良事件（MACE）。【结果】两组给药后血小板微粒水平迅速下降，且给药后10min观察组的血小板微粒水平显著低于对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）；但两组在给药后8h、24h及停药后12h的血小板微粒水平比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。两组的术中完全血管重建、血小板减少、出血、住院期间和出院3个月内的MACE发生率和再次入院率比较，差异均无统计学意义（P〉0．05）。【结论】ACS患者择期PCI术中冠脉内应用替罗非班能更有效、快速地抑制血小板聚集，此方法安全可靠，值得临床推广应用。

牙龈缺损修复中钙结合蛋白和胶原酶-1的浓度变化

目的检测富血小板纤维蛋白(PRF)膜与胶原膜修复拔牙术后牙龈缺损各时间节点的分泌物中钙结合蛋白和胶原酶-1的水平,评价PRF对牙龈缺损的修复和调节局部炎性反应的能力。方法选取2013年8月至2014年12月到成都军区机关医院种植修复临床专科中心就诊,需拔除磨牙并同期进行位点保存的患牙16例,随机分为PRF膜组和胶原膜组,各8例。拔牙后,牙槽窝内植入Bio-Oss骨替代材料,表面分别覆盖PRF膜或胶原膜。通过ELISA检测术区在术后3、7、14、21、28 d创面分泌物中胶原酶-1和钙结合蛋白的水平,动态评价PRF对牙龈缺损的修复和调节局部炎性反应的能力。结果钙结合蛋白水平在术后3、7 d胶原膜组均明显高于PRF膜组,差异均有统计学意义(P<0.05);术后14、21、28 d胶原膜组稍高于PRF膜组,但差异无统计学意义(P>0.05)。胶原酶-1水平在术后3、7 d PRF膜组均明显高于胶原膜组,差异均有统计学意义(P<0.05);术后14、21、28 d PRF组稍高于胶原膜组,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论PRF能促进牙龈缺损的修复,减轻术区局部炎性反应。PRF膜是一种有一定抗感染能力的生物活性再生平台材料,有一定的临床价值。

钙结合蛋白S100家族成员与肿瘤的关系

肿瘤是体细胞自律性、无目的过度增殖。S100蛋白家族是钙结合蛋白中最大的亚族之一,拥有20余个成员,包括S100A1-A5、S100B、S100P等。因可在中性饱和硫酸铵溶液中100%溶解而得名。S100蛋白通过改变Ca2+浓度而影响蛋白磷酸化,从而作用于某些离子通道及神经电生理过程。尽管众多研究已经报道了一些成员的物理性质、功能及表达,但对其他成员知之甚少。研究发现S100蛋白参与一些生物过程,如细胞周期调控、细胞生长、分化和胞外活动。许多报道认为S100蛋白在大量肿瘤中高表达,与肿瘤细胞的增值、浸润及疾病的发展密切相关。本文对近年国内外S100蛋白与肿瘤发生、发展的关系研究进行综述。

血清S100钙结合蛋白12与急性非静脉曲张性上消化道出血严重程度的相关性

目的研究血清S100钙结合蛋白12(S100A12)与急性非静脉曲张性上消化道出血严重程度的相关性。方法选取2017年2月至2018年8月就诊于潍坊医学院附属医院经急诊胃镜诊断明确并收治入院的急性非静脉曲张性上消化道出血病人90例。根据急性非静脉曲张性上消化道出血严重程度进行分级,分为轻度(n=27)、中度(n=42)、重度(n=21)。采集所有研究对象清晨空腹血清的S100A12值及血红蛋白值,同时进行Blatchford评分、Rockall评分,根据Blatchford评分将研究对象分为低危组和中高危组,用ROC曲线分析血清S100A12在中高危组急性非静脉曲张性上消化道出血严重程度的预测价值。结果轻、中、重度三组血清S100A12水平分别为(34.85±8.28)、(62.78±17.65)、(153.05±22.42)ng/mL,各组S100A12随着病情加重逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05)。中高危组S100A12值[(92.87±47.00)ng/mL比(15.53±4.22)ng/mL]、Rockall评分[(3.37±0.49)分比(1.93±0.55)分]明显高于低危组,差异有统计学意义(P<0.05)。中高危组血红蛋白低于低危组[(77.14±12.41)g/L比(132.63±7.57)g/L],差异有统计学意义(P<0.05)。③血清S100A12与Rockall评分、Blatchford评分呈正相关,与血红蛋白呈负相关。ROC曲线下面积:血清S100A12(AUC=0.952)、Rockall评分(AUC=0.935)、血红蛋白(AUC=0.823)。结论急性非静脉曲张性上消化道出血病人中S100A12显著升高,与出血严重程度密切相关。

钙结合蛋白S100A12水平与慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者严重程度的相关性

目的探讨血清钙结合蛋白S100A12水平与慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)病情严重程度的关系及其在AECOPD严重程度中的诊断价值。方法选取2016年11月至2017年2月在甘肃省人民医院呼吸科住院的AECOPD患者40例,并以同期健康体检者20例作为对照。收集AECOPD患者就诊当天及治疗缓解后出院前天空腹检测的超敏C反应蛋白(hs-CRP)、降钙素原(PCT)值,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测入组当天及治疗后出院前天血清钙结合蛋白S100A12水平。结果 AECOPD组治疗前血清钙结合蛋白S100A12水平显著高于治疗后(P<0.05),且高于健康对照组(P<0.05);AECOPD组治疗前血清钙结合蛋白S100A12水平与hs-CRP、PCT呈正相关(r=0.414,P<0.01;r=0.326,P<0.05),治疗后与hs-CRP、PCT无相关性。结论钙结合蛋白S100A12水平可用作AECOPD病情严重程度的评估及诊断指标。

S100钙结合蛋白A12在炎症性肠病中的研究进展

S100钙结合蛋白A12(S100A12)是近年发现的S100蛋白家族成员,主要来源于中性粒细胞,具有促炎、调节免疫、抗微生物、参与信号转导等多种生物学功能,在多种炎症情况下表达明显增加。近年研究发现,炎症性肠病(IBD)患者的肠黏膜、血液和粪便S100A12含量均明显升高,由此提示其可作为本病诊断和鉴别诊断的指标之一,且可能在预测疾病活动度和治疗效果等方面具有重要作用。本文就S100A12在IBD中的研究进展作一综述。

国产多孔钽对MG63细胞中Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2和钙结合蛋白A4表达的影响

背景:目前有证据已证实国产多孔钽具有良好的生物相容性及促成骨性能,但具体的成骨机制及对成骨因子的影响尚不明确。目的:观察国产多孔钽材料对MG63细胞Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2及钙结合蛋白A4表达的影响。方法:将对数生长期的MG63细胞接种于24孔板,分3组培养:空白组加入常规培养基,钽浸提液组加入多孔钽材料浸提液,钽支架组加入多孔钽材料与常规培养基。培养第1,3,5,7,9天,CCK-8法检测各组细胞增殖;培养第5天,采用ELISA酶联免疫吸附法检测各组细胞分泌Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2和钙结合蛋白A4的水平,Western-blot法检测各组细胞中钙结合蛋白A4、Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2蛋白的表达。结果与结论:(1)随着培养时间的延长,各组细胞数量呈逐渐增加趋势,3组不同时间点的细胞增殖比较无差异(P> 0.05);(2)钽支架组Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2分泌高于空白组、钽浸提液组(P <0.05),钽浸提液组Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2分泌高于空白组(P <0.05);钽支架组钙结合蛋白A4分泌低于其他两组(P <0.05);(3)钽支架组中Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2蛋白表达均高于空白组、钽浸提液组(P <0.05),钽浸提液组中Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2蛋白表达高于空白组(P <0.05);钽支架组钙结合蛋白A4蛋白表达均低于空白组、钽浸提液组(P <0.05);(4)结果表明,国产多孔钽材料可促进MG63细胞分泌Ⅰ型胶原、谷氨酰转氨酶2,抑制其分泌钙结合蛋白A4。

钙结合蛋白S100B对骨性关节炎模型兔软骨损伤修复中炎性递质表达影响

目的探讨钙结合蛋白S100B对骨性关节炎(OA)模型兔软骨损伤修复中炎性递质表达的影响及其机制。方法应用膝关节制动法制备兔OA模型。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法分别检测兔关节液中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,用Real-time PCR(RT-PCR)方法及Western blot法检测兔软骨组织中S100B、成纤维细胞生长因子(FGF2)及成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)的表达。利用小干扰RNA(siRNA)技术,构建S100B的siRNA干扰载体和过表达载体以及FGFR1的siRNA干扰载体,用慢病毒转染方法,将S100B的siRNA干扰载体和过表达载体以及FGFR1的siRNA干扰载体转入人滑膜成纤维细胞内。采用ELISA方法检测各组滑膜成纤维细胞中IL-1β和TNF-α水平,用RT-PCR和Western blot法检测FGF2和FGFR1的表达。结果与对照组比较,模型组兔关节液中IL-1β、TNF-α水平显著增加(t=4.042、6.408,P<0.05),兔软骨组织中S100B、FGF2、FGFR1表达显著增加(t=4.091～7.229,P<0.05)。S100B过表达及干扰实验显示,LPS+vehicle control组、LPS+S100B过表达组细胞IL-1β、TNF-α水平较空白对照组升高,且LPS+S100B过表达组高于LPS+vehicle control组,差异均有统计学意义(F=32.019、27.377,P<0.05);而LPS+S100BsiRNA组细胞IL-1β、TNF-α水平与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。FGFR1拮抗实验显示,LPS+vehicle control组、LPS+S100B过表达组细胞IL-1β、TNF-α水平较空白对照组升高,且LPS+S100B过表达组高于LPS+vehicle control组,差异均有统计学意义(F=30.548、20.244,P<0.05);LPS+S100B过表达+FGFR1siRNA组细胞IL-1β、TNF-α水平虽高于空白对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。LPS+S100B过表达+FGFR1siRNA组细胞FGF2表达较空白对照组显著升高(F=11.002、13.147,P<0.05),但FGFR1表达与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论钙结合蛋白S100B能够调节滑膜成纤维细胞炎症反应并可能影响OA软骨损伤修复,其机制可能与激活FGF2/FGFR1信号通路有关。

钙结合蛋白S100A4基因的研究进展

S100蛋白家族是一类EF-手型钙结合蛋白，通过对钙离子的调节及与靶蛋白的相互作用,在体内发挥多种生物学作用，参与细胞周期活动、细胞分化、肿瘤生长以及细胞外基质分泌活动等过程。其分布具有细胞、组织特异性，其中多个S100成员在肿瘤中表达异常，并与肿瘤的浸润和转移密切相关。S100A4就是其中一员，又称为p9Ka、calvasculin、CAPL等。

钙蛋白酶10基因多态性与2型糖尿病胰岛素抵抗的研究

目的:观察天津地区汉族人群中是否存在钙蛋白酶10(CAPN10)UC SNP43G/A等位基因多态性,并探讨与2型糖尿病(T2DM)及胰岛素抵抗(IR)的关系。方法:随机抽取正常人125例(对照组)和2型糖尿患者255例(T2DM组)外周血白细胞基因组DNA,采用PCR-RFLP方法对CAPN10 UC SNP 43G/A基因多态性进行筛查,对突变基因进行克隆测序分析。根据T2DM组中是否有CAPN10 UC SNP43基因突变,分为CAPN10 UC SNP43(G/G型)和CAPN10 UC SNP43(G/A+A/A型)2组。结果:T2DM组和对照组G等位基因的频率比较差异无统计学意义(P>0.05)。G/G型组和G/A+A/A型组的BMI、空腹胰岛素(FINS)、HOMA-IR指数、空腹C-肽(C-P)、三酰甘油(TG)2组之间差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),G/G型组高于G/A+A/A型组。结论:在中国天津地区汉族人群中存在CAPN10 UC SNP 43 G/A基因多态性,但与天津地区汉族人群T2DM无相关性,与IR相关的一些代谢指标相关,可能部分造成了2型糖尿病胰岛素抵抗。

钙蛋白酶活性对颅脑创伤大鼠海马神经细胞凋亡和学习记忆的影响

目的:探讨钙蛋白酶活性对重型闭合性颅脑创伤大鼠海马神经细胞凋亡和学习记忆功能的影响。方法:采用重型闭合性颅脑创伤模型。将120只SD大鼠随机分为创伤组、治疗组、假手术组及对照组,前3组各36只分为伤后6、12、24、48、72h5个时相组,每亚组6只,进行钙蛋白酶活性测定及凋亡检测,余6只进行Morris水迷宫测试;对照组12只,其中6只进行钙蛋白酶活性测定及凋亡检测,另6只进行Morris水迷宫测试。治疗组各亚组在致伤前1d经侧脑室注射MDL28170(10μL),创伤组、假手术组及对照组给予生理盐水(10μL)。结果:创伤组大鼠海马在伤后6h钙蛋白酶活性升高,于24h达到高峰,治疗组各时相点海马区钙蛋白酶活性均较创伤组明显下调(P<0.01);创伤组大鼠伤后6h海马CA2区即出现少量凋亡阳性细胞,伤后24h明显增多,于伤后72h达高峰;治疗组凋亡细胞密度高峰较创伤组明显下调(P<0.01);定位航行能力测试结果表明治疗组搜索安全岛潜伏期较治疗组明显缩短(P<0.01);空间探索能力测试结果表明治疗组于第四象限的航行时间较创伤组明显延长(P<0.05)。结论:脑创伤后钙蛋白酶活性增加可能参与了神经细胞凋亡与学习记忆功能障碍的过程。

CD47和钙网织蛋白在紫杉醇诱导的乳腺癌细胞凋亡中的表达

目的探讨CD47、钙网织蛋白(CRT)在乳腺癌细胞凋亡过程中表达的变化和意义。方法用不同浓度的紫杉醇(0.1、1.0、10.0、100.0μmol/L)作用于MDA-MB-231细胞。在不同的处理时间点(24、48、72、96 h),噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞抑制率变化,流式细胞术测定CD47、CRT的表达。结果 MDA-MB-231细胞的生长抑制率和紫杉醇浓度呈一定的剂量、时间相关性。各处理组在培养24 h时CD47的表达均显著高于对照组,其中10.0μmol/L组表达高于1.0μmol/L组(F=34.71,P<0.05);各处理组在培养48 h时CD47的表达均显著高于对照组,其中10.0μmol/L组表达高于1.0μmol/L组和0.1μmol/L组(F=24.272,P<0.05);1.0μmol/L组在培养72 h时CD47的表达高于对照组和10.0μmol/L组(F=3.713,P1=0.023,P2=0.02,P<0.05);0.1μmol/L组在培养96 h时CD47的表达高于对照组、1.0μmol/L组和10.0μmol/L组(F=5449,P1=0.022,P2=0.009,P3=0.008)。各处理组在培养24 h时CRT的表达均显著高于对照组,其中0.1μmol/L组和1.0μmol/L组的表达又高于10.0μmol/L组(F=48.007,P<0.05);各处理组在培养48 h时CRT的表达均显著高于对照组,其中0.1μmol/L组和1.0μmol/L组的表达又高于10.0μmol/L组(F=98.683,P<0.05)。结论CD47和CRT随着乳腺癌细胞发生凋亡其表达相应增加,和细胞抑制率存在一定的相关性。