大鼠坐骨神经结扎后脊髓钙结合蛋白Calbindin D-28k的表达变化

目的:研究大鼠坐骨神经结扎模型的钙结合蛋白(Calbindin D-28k,CB)在脊髓的时空变化规律,为探讨其在神经再生中的作用与机制提供实验依据。方法:SD大鼠随机分为假手术对照组和坐骨神经结扎组,实验组结扎后分别存活1,3,7,14或21d,免疫组化结合图像分析技术观察CB在脊髓的表达变化。结果:在对照组,CB阳性神经元主要分布于腰髓背角Ⅰ、Ⅱ层,Ⅲ～Ⅵ层只观察到少量散在分布的CB样阳性神经元,脊髓前角Ⅷ层和Ⅸ层内也可见少量多极的大型阳性神经元。术后各时间点CB样阳性神经元表达下降,14d下降最显著,21d表达有所上升,但还是低于7d组。脊髓后角CB免疫阳性产物灰度值测定结果显示:术后14d后角CB表达最低,与对侧和对照组以及1、3d组相比有统计学意义(P<0.05)。结论:坐骨神经结扎后CB表达变化呈现一定的时空模式,为进一步揭示CB在神经系统疾病中的作用提供实验依据。

钙结合蛋白d28k基因在鸡子宫中表达变化的研究

[目的]研究鸡子宫中钙结合蛋白d28k基因的变化规律。[方法]采集不同产蛋阶段蛋鸡的子宫组织,利用RT-PCR方法检测钙结合蛋白d28k mRNA在子宫的表达情况。[结果]蛋进入子宫前2、1 h检测到钙结合蛋白d28k的表达,随着蛋壳的形成和钙化程度的加速,蛋进入子宫后5、15 h钙结合蛋白d28k的表达量逐渐增加,在蛋进入子宫后15 h达到最高水平,在产蛋后1、2 h没有检测到该基因的表达。[结论]钙结合蛋白d28k是影响蛋壳钙化的重要基因。

钙结合蛋白Calbindin-d28k在雌(女)性生殖中的作用

钙结合蛋白Calbindin-d28k(CaBP-d28k)是一种维生素D依赖性钙结合蛋白,参与了多种生殖事件。本文综述了CaBP-d28k的结构特点,在雌(女)性生殖系统的表达、作用及其调节。

钙结合蛋白Calbindin-D28K在人健康和龋坏牙齿中免疫定位

目的 :探讨Calbindin -D2 8K(CaB)在牙髓损伤修复过程中的作用。方法 :用免疫组化ABC法观察CaB在健康和龋坏人恒牙牙髓中的表达 ,并用图像分析系统进行半定量分析。结果 :CaB在正常和龋病牙髓中成牙本质细胞、前期牙本质、血管内皮细胞及神经纤维中均有表达。在中龋和深龋组部分牙髓细胞CaB弱阳性表达。中龋组成牙本质细胞数目增多 ,胞浆、胞突及部分胞核强阳性。深龋组前期牙本质层变薄 ,成牙本质细胞空泡变性 ,见单层扁平的成牙本质样细胞 ,胞浆及核染色强阳性。成牙本质细胞浆中CaB含量在中、深龋组明显增加。血管内皮细胞中三组间CaB含量无显著性差异。结论

帕金森病小鼠相关脑区内钙结合蛋白D28kmRNA的表达

目的 研究钙结合蛋白 D2 8k(Ca BP)在帕金森病(PD)发病机制中的作用 .方法 将 1-甲基 - 4-苯基 - 1,2 ,3,6 -四氢吡啶 (MPTP)按 30 mg·kg- 1剂量腹腔注射给 C5 7BL 小鼠 ,建立 PD鼠模型 .用反转录 PCR及原位分子杂交方法检测 PD鼠和正常鼠脑内 Ca BP m RNA的表达变化 .结果 与正常鼠对比 ,Ca BP m RNA在 PD鼠的海马、纹状体、黑质等脑区的表达水平明显下调 .结论 Ca BP可能通过对特定脑区神经元的保护作用来抵御

鸡D28k钙结合蛋白cDNA的克隆与序列分析

根据已发表的鸡D28k钙结合蛋白(CaBP-D28k)基因序列设计合成1对引物,利用RT-PCR技术从新扬州鸡小肠组织RNA中扩增出鸡CaBP-D28kcDNA,并克隆至pGEM-T中,经PCR、Xho 和BamH 双酶切鉴定测序后,用DNAStar软件对克隆出的cDNA进行同源性分析。结果表明:新扬州鸡CaBP-D28k基因片断长为18.5kb,与Gen-Bank中的CaBP-D28k基因具有高度的同源性(99.2%),在开发阅读框内仅有一个碱基的差别,中间没有出现缺失和插入,证明所得到的是鸡CaBP-D28kcDNA。

脑苷肌肽对APPswe/PS1dE9双转基因小鼠脑内β-淀粉样蛋白42和钙结合蛋白-D28K表达的影响

目的观察脑苷肌肽(cattle encephalon glycoside and ignotin injection,CEGI)对APPswe/PS1d E9双转基因痴呆模型小鼠脑内β-淀粉样蛋白42(amyloidβ-peptide,Aβ42)和钙结合蛋白-D28K(calbindin-D28K,CB)表达的影响,探讨CEGI对阿茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的防治作用。方法 APPswe/PS1d E9双转基因AD模型小鼠共48只,随机分为脑苷肌肽低剂量组[Tg+CEGI-L组,腹腔注射CEGI 6.6 ml/(kg·d)]、高剂量组[Tg+CEGI-H组,腹腔注射CEGI 13.2 ml/(kg·d)]、阳性药盐酸多奈哌齐组[Tg+Donepezil组,Donepezil灌胃2 mg/(kg·d)],模型组(Tg组,腹腔注射等体积0.9%氯化钠注射液),每组12只;同月龄同背景非转基因野生型C57BL/6J小鼠12只作为正常对照组(n Tg组,腹腔注射等体积0.9%氯化钠注射液)。小鼠自5月龄开始腹腔注射给药1个月,然后进行Morris水迷宫实验检测小鼠的学习记忆能力,硫黄素S荧光染色和免疫组织化学染色检测皮质区Aβ42表达,免疫组织化学染色检测海马CA1区及CA3区CB表达的变化。结果行为学实验,与Tg组比较,Tg+CEGI-L组小鼠空间学习和记忆能力有明显改善(P<0.05);小鼠大脑皮质Aβ42的表达数目在Tg组显著高于Tg+CEGI-L组和Tg+CEGI-H组(43.00±10.03 vs 24.63±10.61/24.89±6.81,P<0.05);小鼠海马CA1区神经元保护性蛋白CB在Tg+CEGI-L组显著高于Tg组(0.056±0.023 vs 0.031±0.001,P<0.05)。结论 CEGI能抑制Aβ42在大脑中的聚集沉积、CB过表达来降低神经元损伤,进而改善APPswe/PS1d E9双转基因痴呆模型小鼠的学习记忆能力。

D28k钙结合蛋白cDNA的克隆及序列分析

利用RT PCR技术从鸡小肠组织RNA中扩增鸡D2 8k钙结合蛋白cDNA ,以进一步研究D2 8k钙结合蛋白促进肠钙吸收的机理。结果表明 ,鸡肠道D2 8k钙结合蛋白cDNA的开放阅读框由 789个碱基对组成 ,编码由 2 6 2个氨基酸组成的多肽 ,分子质量约为 2 7.9ku ;禽类D2 8k钙结合蛋白基因长 18.5kb ,10个间插序列将其分成 11个编码外显子 ,启动子区以GC为主 (6 0 %～80 % )。D2 8k钙结合蛋白氨基酸序列的同源性在鼠和人之间达到 98.5 % ,在蟾蜍和鸡之间达到80 .9% ,在人和鸡之间为 79.8% ,在鼠和鸡之间为 79.5 %。不同种属的动物之间D2 8k钙结合蛋白的氨基酸序列存在较高的同源性。

美金刚对癫痫大鼠空间学习记忆能力及钙结合蛋白-D28K表达的影响

目的探讨美金刚(MEM)对戊四氮(PTZ)点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及钙结合蛋白-D28K(Ca-28)表达的影响。方法将大鼠分为正常对照组、PTZ组和MEM干预组,采用PTZ慢性点燃癫痫模型,应用Morris水迷宫试验观察各组大鼠空间学习记忆能力,RT-PCR方法测定Ca-28 mRNA表达,Western blot方法测定Ca-28表达。结果PTZ组大鼠空间学习记忆能力受损,Ca-28 mRNA表达较正常对照组降低,Ca-28水平较正常对照组减少(P均<0.05);与PTZ组比较,MEM干预组空间学习记忆能力好转,Ca-28 mRNA及蛋白表达升高(P均<0.05)。结论PTZ点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力受损,同时存在海马Ca-28表达异常;MEM可以改善癫痫大鼠的学习记忆能力,提高Ca-28的表达。

乙醇诱导大鼠脑损伤时小脑维生素D依赖性钙结合蛋白28K表达及山莨菪碱的影响

目的探讨乙醇诱导大鼠脑损伤时小脑维生素D依赖性钙结合蛋白28K(CaBP)表达及山莨菪碱的保护作用。方法2月龄SD雄性大鼠分别腹腔注射生理盐水、乙醇、山莨菪碱+生理盐水、山莨菪碱+乙醇(均n=18),8d后行Morris水迷宫测试,免疫组化结合图像分析系统计数小脑CaBP阳性表达的蒲肯野细胞平均面积百分比和灰度值。结果乙醇组Morris水迷宫潜伏期较其他3组延长(P<0.05),游泳距离较生理盐水组和山莨菪碱+生理盐水组延长(P<0.05),与山莨菪碱+乙醇组有延长的趋势,但无显著性差异(P>0.05)。乙醇组小脑CaBP阳性表达的蒲肯野细胞计数、平均阳性细胞面积百分比和灰度值均少于其他3组(P<0.05),山莨菪碱+乙醇组阳性细胞数与生理盐水组和山莨菪碱+生理盐水组无显著性差异(P>0.05),但平均阳性细胞面积百分比和灰度值降低(P<0.05)。结论乙醇可使小脑蒲肯野细胞的CaBP的表达减少;山莨菪碱对此具有一定保护作用。

老年大鼠耳蜗核中钙结合蛋白D28k的表达

建立D-半乳糖衰老大鼠模型获取老年大鼠耳蜗核标本并以正常青年大鼠作对照,用免疫组化SP法检测老年大鼠和青年大鼠耳蜗核中钙结合蛋白D28k的表达。结果显示,老年大鼠耳蜗核钙结合蛋白D28k的积分光密度明显大于对照组(P<0.01)。认为老年大鼠耳蜗核钙结合蛋白D28k含量升高。

钙结合蛋白D-9K基因原核表达载体的构建、表达产物纯化及其多克隆抗体的制备

本研究构建了pBV220/CabpD-9k-βhCG表达质粒,在大肠杆菌TG-1中进行表达,得到了CabpD-9k-βhCG融合蛋白。SDS-PAGE分析显示融合蛋白的分子量约为34.5KD。West-ern blot结果表明,融合蛋白与兔抗人hCGIgG特异结合。用纯化的融合蛋白免疫C57BL小鼠,制备了多克隆抗体,这为进一步研究钙结 合蛋白D-9k在着床中的功能和子宫内膜Ca^(2+)信号转导奠定了基础。

电针对绝经后骨质疏松症模型大鼠肠黏膜钙结合蛋白-D9kmRNA和蛋白表达的影响

目的观察电针对去卵巢大鼠模型肠黏膜钙结合蛋白-D9k(CaBP-D9K)mRNA和蛋白表达的影响,探讨针灸治疗绝经后骨质疏松症可能机制。方法将60只3月龄SD健康雌性大鼠随机分为手术组和假手术组,3个月造模成功后将手术组随机分为模型组、假电针组、电针组、药物组。干预治疗12星期后,测定腰椎及股骨骨密度(BMD),然后处死大鼠,提取小肠黏膜,采用荧光实时定量PCR和Western blotting检测CaBP-D9K mRNA和蛋白表达。结果成功复制绝经后骨质疏松症模型,经电针组和药物组干预治疗12星期后,其大鼠骨密度与模型组相比均有明显提高,荧光实时定量PCR和Western blotting检测结果显示电针组和药物组大鼠小肠黏膜CaBP-D9K mRNA和蛋白表达上调,但电针组上调CaBP-D9K mRNA的水平不及药物组。结论针灸治疗绝经后骨质疏松症机制之一可能与上调小肠黏膜CaBP-D9K mRNA和蛋白表达量,从而增强肠钙吸收有关。

甲状旁腺素、维生素D_3对Caco-2细胞钙结合蛋白D9k mRNA表达的影响

目的 探讨甲状旁腺素（PTH）对小肠细胞钙结合蛋白（CaBP）D9k mRNA表达的影响以及探讨PTH是否影响1，25-（OH）2-D3，对Caco-2细胞钙结合蛋白D9k mRNA表达的促进作用。方法 以人结肠癌上皮细胞株caco-2细胞作为小肠细胞体外模型，PTH分三个剂量：10^-8、10^9和10^-12。mol／L分别干预Caco-2细胞5、10、20、40和80min；10^-8mol/L 1，25-（OH）2，-D3，干预Caco-2细胞2、4、8、16和24h，溶剂时照为0．1％乙醇；10^-8mol／L 1，25-（OH）2，-D3，联合以上三剂量PTH干预Caco-2细胞2、4、8、16和24h，溶剂对照亦为0．1％乙醇。运用RT-PCR方法 进行CaBP-D9k mRNA测定，以GAPDH作为内对照。结果 10^-8mol／LPTH作用20rain，10^12mol／L作用10min，CaBP-D9k mRNA表达量高于空白组，其余时间点低于空白组；10^-8mol／L 1，25-（OH）2．D，干预Caco-2细胞2、4、8、16和24h，CaBP．D9kmRNA的表达均高于溶剂对照（0、1％乙醇）；与10^-8mol／L1，25．（OH）2-D3单独作用比较，10^-8mo/L 1，25-（OH）2-D3，联合以上三剂量PTH作用，CaBP-D9k mRNA相对表达量均低于单独作用的表达量。结论 10^-8mol／L、10^-12mol/L PTH可能促进Caco-2细胞CaBP-D9k mRNA瞬时（1～20min）合成增加；10^-8mol／L 1，25-（OH）2，-D3，可明显诱导Caco-2细胞CaBP-D9k mRNA的表达；PTH可能抵消或者抑制1，25-（OH）2，-D3，促进Caco-2细胞CaBP-D9k mRNA表达的作用。

甲氧滴滴涕对小鼠着床期子宫钙结合蛋白D9k基因表达的影响

目的:研究甲氧滴滴涕(MXC)对小鼠着床期子宫钙结合蛋白D9k(Calbindin-D9k)基因表达的影响.方法:将真孕及假孕小鼠于孕1～3 d(发现阴栓为孕0日)每日给予不同剂量的MXC(0,100,250,500 mg/kg)灌胃,对照组(MXC 0mg/kg)只给芝麻油溶剂.采用RT-PCR检测各组孕鼠子宫Calbindin-D9k基因mRNA的表达;免疫组化染色和图像分析技术检测Calbindin-D9k蛋白表达.结果:①孕鼠经MXC染毒3 d后,250,500 mg/kg MXC组孕鼠子宫Calbindin-D9kmRNA的表达量与对照组相比有显著降低(P<0.05),然而,100 mg/kg MXC组Calbindin-D9k mRNA的表达与对照组相比虽有所减低,但无统计学意义(P>0.05);②Calbindin-D9k蛋白在孕5日主要表达在子宫内膜上皮细胞和腺上皮细胞.与mRNA的表达水平一致,250,500 mg/kg MXC组孕鼠子宫Calbindin-D9k蛋白的表达量与对照组相比显著降低(P<0.05),而100 mg/kg MXC组Calbindin-D9k蛋白的表达与对照组相比无明显差异(P>0.05).结论:MXC可以降低小鼠着床期子宫Calbindin-D9k基因的表达,这可能是其干扰胚胎着床的一个毒性机制.

辛伐他汀诱导K562细胞凋亡过程中细胞内钙离子浓度、Calbindin-D28K和calpain基因的变化

目的:观察辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时细胞内Ca2+浓度、Ca2+调节蛋白(Calbindin-D28K,D28K)和Ca2+激活蛋白(calpain)基因变化,以探讨K562细胞凋亡机制。方法:常规培养细胞24 h,20μmol/L辛伐他汀处理K562细胞48 h;流式细胞技术检测细胞凋亡率和Ca2+浓度,PCR技术检测D28K和calpain基因。结果:20μmol/L辛伐他汀作用K562细胞24、48、72 h凋亡率改变分别为(6.10±0.35)%、(14.15±0.42)%、(30.70±0.65)%,随药物作用时间延长细胞凋亡率增加;辛伐他汀作用K562细胞12、24、48、72 h,游离钙荧光强度变化为52.93±2.85、19.63±1.56、13.81±1.05、7.84±0.98,各处理组荧光强度与对照组相比升高(P<0.05);与相同时间对照组比较,calpain和D28K基因分别在辛伐他汀作用K562细胞24 h和48 h后上调(P<0.05)。结论:辛伐他汀诱导K562细胞凋亡时细胞内Ca2+浓度显著升高,细胞内Ca2+浓度调节蛋白D28K和calpain基因上调,这些改变可能是辛伐他汀诱导K562细胞凋亡的机制之一。

噪声暴露对大鼠ABR反应阈及下丘中小清蛋白、钙视网膜蛋白及钙结合蛋白表达的影响

目的探讨噪声暴露后听觉损伤的可能机制。方法将22只正常雄性SD大鼠随机分为噪声组(14只)和对照组(8只),对照组不作任何处理,噪声组大鼠左耳外耳道口暴露于中心频率16kHz、带宽一个倍频程、声强116dB SPL噪声环境中1小时,右耳用耳模橡胶封堵;于暴露前及暴露后第7天分别检测两组大鼠双耳听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)反应阈,采用蛋白质印迹(Western blot)方法检测噪声暴露后第7天大鼠下丘中小清蛋白(parvalbumin,PV)、钙视网膜蛋白(calretinin,CR)及钙结合蛋白D-28K(calbindin D-28K,CB)表达水平的变化。结果噪声组大鼠在噪声暴露后第七天暴露耳8、12、16、20、24、32kHz ABR反应阈较暴露前显著提高(P<0.001),非暴露耳及对照组大鼠各频率ABR反应阈无明显变化;噪声暴露后第七天,噪声组暴露侧下丘中PV和CR的表达量(PV 0.81±0.24,CR 0.82±0.33)较非暴露侧(PV 0.67±0.19,CR 0.62±0.23)显著增加(P<0.05),且噪声组大鼠非暴露侧下丘中PV及CR表达量较对照组双侧平均表达量(PV 0.41±0.10,CR0.53±0.18)亦显著增加(P<0.05);噪声组两侧下丘中CB的平均表达量(0.63±0.10)较对照组(0.79±0.12)下降(P<0.05)。结论噪声暴露使大鼠暴露耳ABR反应阈升高,且导致下丘中PV、CR表达水平升高及CB表达水平下降,其改变可能与噪声暴露后耳聋、耳鸣的发病机制有关。

钙结合蛋白S100A12在急性呼吸窘迫综合征患儿血清中的表达及检测价值

目的:观察钙结合蛋白S100A12在急性呼吸窘迫综合征(ARDS)患儿血清中的表达,并探讨其检测的临床价值。方法:选取2015年2月-2018年8月本院收治的ARDS患儿85例为ARDS组,同期选择本院30例健康足月儿为对照组。85例ARDS患儿根据相关标准将分为轻度组28例,中度组27例及重度组30例,根据患儿28 d预后情况分为存活组58例和死亡组27例。比较各组血清S100A12、降钙素原(PCT)、D-二聚体(D-D)表达水平,分析血清S100A12与PCT、D-D的相关性关系以及对ARDS患儿预后的预测价值。结果:ARDS组血清S100A12、PCT及D-D表达水平均明显高于对照组(P<0.05);不同病情程度ARDS患儿血清S100A12、PCT及D-D表达水平比较差异均有统计学意义(P<0.05),且随着病情严重程度加重,血清S100A12、PCT及D-D表达水平均呈明显升高趋势(P<0.05);死亡组血清S100A12、PCT及D-D表达水平均明显高于存活组(P<0.05);血清S100A12与PCT、D-D呈正相关性关系(r=0.613、0.675,P<0.05);血清S100A12 ROC曲线下面积(AUC)优于PCT、D-D。结论:钙结合蛋白S100A12在ARDS患儿早期诊断、病情严重程度判断及预后预测方面均具有较高的临床价值,尤其是预后预测方面优于PCT、D-D等传统实验室指标,值得临床广泛应用。