干细胞诱导、细胞系诱导和原代分离3种提取成骨细胞的方法比较

背景:成骨细胞是骨组织构建的重要组织细胞之一。成骨细胞取材困难,不同方法获得的成骨细胞纯度及钙化能力不尽相同。目的:比较小鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导、细胞系MC3T3-E1成骨诱导和小鼠颅骨原代细胞培养3种方法获得的成骨细胞的纯度及钙化能力。方法:采用贴壁纯化法分离出小鼠骨髓间充质干细胞,传至3代后用成骨诱导培养基诱导21 d;将前成骨细胞系MC3T3分别用成骨诱导培养液1和成骨诱导培养液2诱导21 d;使用Ⅰ型胶原酶消化法取得乳鼠颅骨原代成骨细胞。对3种方法获得的成骨细胞进行茜素红钙结节染色,观察其成骨特性。结果与结论:(1)骨髓间充质干细胞诱导后钙结节平均为16.3个/低倍镜视野;(2)前成骨细胞系MC3T3诱导培养液1组可观察到稀疏的钙结节,平均为1.7个/低倍镜视野,诱导培养液2组可观察到密集的钙结节,平均为44.6个/低倍镜视野,两种诱导液相比钙结节形成能力差异有显著性意义(P<0.01);(3)原代成骨细胞钙结节平均为0.6个/低倍镜视野;(4)除MC3T3诱导液1组与原代成骨细胞相比差异无显著性意义外,其余两两相比成骨能力差异均有显著性意义(P<0.01);(5)由于骨髓间充质干细胞分离培养具有更多不可控因素,因此MC3T3细胞用含有地塞米松的诱导培养液2进行成骨诱导方法较好。