钙蛋白酶抑制剂减少大鼠局灶性脑缺血再灌注模型海马CA1区神经元凋亡

目的:研究钙蛋白酶抑制剂calpeptin干预治疗对大鼠局灶性脑缺血再灌注模型海马CA1区神经元凋亡的影响及其可能机制。方法:选择健康成年雄性SD大鼠128只作为研究动物,采用随机数字表法将其分为MACO组、calpeptin组、DMSO组及sham组,制作大鼠左侧大脑中动脉缺血再灌注模型,缺血2 h后分别再灌注6、12、24 h及48 h后进行神经功能学评分,免疫组化检测海马CA1区神经元caspase-3的表达,TUNEL法检测原位细胞凋亡,观察海马CA1区神经元凋亡。结果:DMSO组的各项检测指标与MACO组比较差异无统计学意义(P>0.05);calpeptin组的神经功能评分及caspase-3表达均低于同时间点MCAO组及DMSO组,比较差异均有统计学意义(P<0.05);再灌注12、24、48 h后,calpeptin组神经元凋亡情况优于同时间点MCAO组及DMSO组,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:calpeptin可减少大鼠局灶性脑缺血再灌注模型海马CA1区的神经元凋亡,对脑缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与抑制caspase-3的表达有关。

钙蛋白酶Ⅰ通过糖原合成酶激酶3β对脊髓损伤后炎症纤维化的调节作用

目的 观察钙蛋白酶Ⅰ （Calpain Ⅰ）通过糖原合成酶激酶3β（GSK3β）对脊髓损伤后炎症纤维化的调节作用.方法 将20只SD大鼠随机分为对照组、模型组.通过反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot、苏木素-伊红（HE）染色检测各组差异.结果 与对照组比较,模型组大鼠脊髓损伤后炎症纤维化显著,钙蛋白酶Ⅰ、GSK3β、Ⅰ型胶原（Collagen Ⅰ）、Ⅲ型胶原（CollagenⅢ）的表达均显著升高（0.92±0.04、0.91 ±0.06、1.19±0.02、1.07±0.03,P＜0.05）.应用蛋白酶抑制剂SJA6017干预后,大鼠脊髓瘢痕面积缩小[对照组比模型组（3.37 ±0.04） mm2比（1.13±0.01） mm2,P＜0.05]、损伤部位炎症因子[对照组比模型组（350±41） ng/L比（46 ±7） ng/L,P＜0.05]及纤维化蛋白表达[对照组比模型组（290±16） μg/L比（19 ±3） μg/L,P＜0.05]改善,GSK3β表达降低为0.42 ±0.02和0.35 ±0.03（P ＜0.05）.结论 钙蛋白酶Ⅰ通过GSK3β对脊髓损伤后炎症纤维化的调节发挥作用.

钙蛋白酶引起神经元死亡的机制

多种病因引起钙蛋白酶的异常激活可导致神经元死亡。钙蛋白酶对细胞骨架蛋白如脑血影蛋白、锚蛋白等的过度降解以及破坏溶酶体膜引起组织蛋白酶释放可使神经元发生坏死。钙蛋白酶可促进 Caspase-3激活,并直接激活促凋亡蛋白Bax,抑制细胞内Bcl-2表达,引发神经元凋亡。对钙蛋白酶活性的抑制可能是预防和治疗多种神经系统疾病的重要途径。

阿托伐他汀对谷氨酸引起大鼠神经元损伤保护作用机制的研究

目的探讨阿托伐他汀对谷氨酸所致培养大鼠皮层神经元损伤保护作用的机制。方法 MTT法测定细胞存活率;Hoechst33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变;Western blot检测活性的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)和钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达水平。结果谷氨酸(100μmol.L-1)可使神经元细胞存活率下降,细胞凋亡百分比明显增加,活性的caspase-3和钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达增加。阿托伐他汀明显对抗谷氨酸诱导的神经元存活率下降及细胞凋亡百分比增加,同时明显抑制活性的caspase-3和钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达增加。磷酯酰肌醇-3激酶(phos-phoinositide3-kinase,PI3K)/磷酸化蛋白激酶B(protein ki-nase B,Akt)通路特异性阻断剂LY294002(10μmol.L-1)能抑制阿托伐他汀对抗谷氨酸引起神经元细胞存活率下降,细胞凋亡百分比增加及活性caspase-3和钙蛋白酶Ⅰ蛋白表达增加的作用。结论阿托伐他汀能够明显对抗谷氨酸引起的皮层神经元损伤作用,这种作用可能与激活PI3K/Akt信号转导通路有关。

肝纤维化过程中calpain2与caspase-3表达变化及意义

目的探讨大鼠肝纤维化过程中钙激活中性蛋白酶2(calpain 2)与半胱氨酸天冬氨酸酶3(caspase-3)表达变化及其在肝纤维化发生发展中作用。方法雄性Wistar大鼠40只,随机分为对照4、8周组和肝纤维化模型4、8周组,每组各10只;肝纤维化组按0.3 mL/100g皮下注射40%CCl4植物油溶液,每隔3 d注射1次,对照组给予等量植物油;测定肝脏指数、血清谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)含量,苏木素伊红(HE)染色观察肝组织病理学改变;免疫组织化学法及western blot检测肝组织中calpain 2与活化的caspase-3蛋白表达含量;聚合酶链反应检测肝组织中calpain 2 mRNA表达。结果肝纤维化4、8周组大鼠血清ALT、AST分别为(727.00±249.70)、(1 260.00±579.25)和(616.00±209.98)、(1 167.00±318.18)U/L,均高于对照组(P<0.01);肝纤维化组大鼠肝组织发生明显的纤维化改变,其中以8周组更为明显;与对照组比较,肝纤维化8周组大鼠肝组织中calpain 2蛋白(23.1±3.77)和mRNA(167.93±50.39)表达均升高(P<0.01),而在肝纤维化4、8周组活性caspase-3蛋白表达[(18.76±3.54)、(25.46±4.77)]均增加(P<0.01)。结论 calpain 2与caspase-3在蛋白及基因水平表达变化,可能参与了肝纤维化的发生发展过程。

关节镜下不同缝合修复方法对3度半月板损伤患者手术效果、膝关节本体感觉及BGP、IGF-Ⅰ、MMP-1水平的影响

目的:探讨关节镜下不同缝合修复方法对3度半月板损伤患者手术效果、膝关节本体感觉以及骨钙素(BGP),胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)、基质金属蛋白酶1(MMP-1)水平的影响。方法:选取2018年1月-2019年10月期间我院收治的3度半月板损伤患者120例,根据随机数字表法分为A组(n=60,关节镜下外内缝合法)和B组(n=60,关节镜下全内缝合法),比较两组患者手术指标、并发症发生情况、国际膝关节评分委员会(IKDC)评分、Lysholm评分、视觉疼痛模拟量表(VAS)评分、膝关节本体感觉以及BGP、IGF-Ⅰ、MMP-1水平。结果:B组手术时间短于A组(P<0.05);两组住院时间、术中出血量比较无差异(P>0.05)。两组术后6个月IKDC评分、Lysholm评分较术前升高,VAS评分以及BGP、IGF-Ⅰ、MMP-1水平,15°、45°、75°膝关节本体感觉差值较术前降低(P<0.05);B组术后6个月IKDC评分、Lysholm评分高于A组,而VAS评分以及BGP、IGF-Ⅰ、MMP-1水平,15°、45°、75°膝关节本体感觉差值则低于A组(P<0.05)。两组并发症发生率比较差异未见统计学意义(P>0.05)。结论:与关节镜下外内缝合法相比,关节镜下全内缝合法可缩短手术时间,更好的改善患者膝关节功能,提高膝关节本体感觉,还能有效降低BGP、IGF-Ⅰ、MMP-1水平,安全可靠。

丹芍化纤胶囊对肺纤维化干预作用及机制

目的探讨calpain-2与caspase-3在肺纤维化中的变化及丹芍化纤胶囊对肺纤维化的干预作用机制。方法选取SD大鼠30只,随机分为对照组、模型组和丹芍组,每组各10只,模型组和丹芍组气管内一次性灌注博来霉素5 mg/kg诱导肺纤维化,丹芍组于造模第2 d给予丹芍化纤胶囊混悬液灌胃(0.8 g/kg),于实验第28 d处死大鼠;采用免疫组织化学方法检测肺组织中calpain-2与caspase-3蛋白的表达情况;运用荧光实时定量PCR(real-time PCR)检测肺组织中calpain-2及caspase-3 mRNA的表达变化。结果模型组大鼠肺组织中calpain-2,caspase-3的蛋白及mR-NA表达分别为(0.35±0.06)、(0.41±0.12)、(210±86)、(614±106),明显高于对照组(P<0.01);经丹芍化纤胶囊干预后,肺组织中calpain-2蛋白(0.18±0.03)、mRNA(97±71)及caspase-3蛋白(0.22±0.04)、mRNA(315±92)的表达较模型组明显减少(P<0.05或P<0.01)。结论 calpain-2及caspase-3在肺纤维化的发生发展中作用明显,丹芍化纤胶囊干预肺纤维化的机制可能与减少肺组织中calpain-2与caspase-3的表达有关。