乙肝病毒X蛋白突变体(HBxΔ127)通过ERK上调钙蛋白酶小亚基1促进肝癌细胞迁移

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)X蛋白(HBx)对肝癌的发生发展具有十分重要的作用.我们前期研究发现,HBx突变体(HBxΔ127)与肝癌的增殖和迁移有密切的关系.钙蛋白酶小亚基1(calpain small subunit 1,Capn4)具有促进细胞迁移、增殖和分化的作用.本研究对HBx突变体(HBxΔ127)促进肝癌细胞迁移的分子机制进行了研究.实验结果显示,HBxΔ127可明显激活Capn4的启动子活性和上调Capn4蛋白表达.应用ERK抑制剂PD98059作用肝癌细胞后,可明显抑制HBxΔ127对Capn4的上调作用,提示HBxΔ127可通过磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)上调Capn4.应用伤口愈合实验进一步证实,HBxΔ127促进肝癌细胞迁移的作用与Capn4和p-ERK1/2有关.本研究结果表明,HBxΔ127促进肝癌细胞迁移的作用是通过p-ERK1/2上调Capn4实现的.这一发现对进一步揭示HBx突变体HBxΔ127促进肝癌细胞转移的分子机制具有重要意义.

骨桥蛋白通过NF-κB上调钙蛋白酶小亚基1促进肝癌细胞迁移

骨桥蛋白(osteopontin,OPN)参与调控多种信号途径激活转移相关基因,进而促进细胞迁移.钙蛋白酶小亚基1(calpain small subunit1,Capn4)与肿瘤转移密切相关,在许多肿瘤及其转移组织中高表达.为了探讨OPN促进肝癌细胞迁移的分子机制,应用报告基因检测、RT-PCR、免疫印迹及"伤口愈合"等方法检测了肝癌细胞中OPN对Capn4的调控作用及其对肝癌细胞迁移的影响.结果显示,在HepG2细胞中过表达OPN后,Capn4的启动子转录活性显著增强,同时mRNA及蛋白质表达水平也明显上调.在HepG2细胞中应用siRNA干扰OPN的表达可导致Capn4启动子转录活性受到明显抑制,同时mRNA及蛋白质表达水平也显著下调.应用核转录因子-κB(NF-κB)的抑制剂PDTC可抑制由过表达OPN导致的HepG2细胞中Capn4的上调."伤口愈合"实验显示,OPN可以通过上调Capn4促进肝癌细胞迁移.因此,研究发现,OPN通过NF-κB上调Capn4的表达,进而促进肝癌细胞的迁移,这一发现对进一步阐明肝癌细胞迁移的分子机制具有重要意义.

钙蛋白酶小亚基1与肿瘤发生发展的关系研究进展

钙蛋白酶（calpains）是一种胞内半胱氨酸蛋白酶,主要由胞内Ca2＋浓度的升高所激活.近年研究发现calpains与肿瘤细胞凋亡有关,活化后的calpains可通过剪切有关凋亡分子蛋白如Bcl-2、Bax、Bid和p53等,以及直接剪切并活化caspase-3、caspase-7等方式,从而参与调控肿瘤细胞凋亡的病理过程.calpains是由大小2个亚基共同构成,28道尔顿的钙蛋白酶小亚基1（calpain-s1,capn4）是其调节性小亚基,与80道尔顿的大亚基以异二构体的形式存在.capn4与肿瘤的关系日益受到重视[1-3].现将近年来有关capn4与肿瘤发生发展的关系做一综述.

钙蛋白酶小亚基1与核因子κB在乳腺癌中的表达及与患者临床特征的关系

目的探讨钙蛋白酶小亚基1(CAPN4)与核因子κB(NF-κB)在乳腺癌中的表达及与患者临床特征的关系。方法取98例乳腺癌患者的乳腺癌组织和相应的癌旁组织,免疫组化法检测CAPN4、NF-κB蛋白的表达情况,分析其与乳腺癌患者临床特征的关系。采用Spearman法分析CAPN4和NF-κB蛋白表达的相关性。随访1年,比较不同CAPN4、NF-κB蛋白表达情况乳腺癌患者同侧乳腺癌复发率和术后肿瘤细胞转移率。结果乳腺癌组织中CAPN4、NF-κB蛋白的高表达率均明显高于癌旁组织(P﹤0.01)。TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、中低分化程度、雌激素受体表达阳性、有淋巴结转移乳腺癌患者乳腺癌组织中CAPN4、NF-κB蛋白高表达率均高于TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、高分化程度、雌激素受体表达阴性、无淋巴结转移的乳腺癌患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Spearman相关分析结果显示,CAPN4蛋白的表达与NF-κB蛋白的表达呈正相关(P﹤0.05)。术后随访1年,CAPN4高表达患者同侧乳腺癌复发率为17.31%,高于CAPN4低表达患者的4.35%(P﹤0.05),术后肿瘤细胞转移率为19.23%,高于CAPN4低表达患者的4.35%(P﹤0.05);NF-κB高表达患者同侧乳腺癌复发率为18.18%,高于NF-κB低表达患者的2.33%(P﹤0.05),术后肿瘤细胞转移率为18.18%,高于NF-κB低表达患者的4.65%(P﹤0.05)。结论CAPN4和NF-κB蛋白在乳腺癌患者乳腺癌组织中均呈高表达,与TNM分期、分化程度、雌激素受体表达情况和淋巴结转移情况密切相关,二者可能协同促进了乳腺癌的发生发展。

钙蛋白酶小亚基1在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨钙蛋白酶小亚基1(Capn4)在乳腺癌组织中的表达及其临床意义.方法收集上海市第一人民医院2015年5月至7月收治的12例乳腺癌患者的肿瘤组织及相应癌旁正常组织存档蜡块标本,运用免疫组织化学法检测其中Capn4的表达情况.收集上海市第一人民医院2009年1月至2011年9月收治的70例乳腺癌患者的肿瘤组织存档蜡块标本并检测其中Capn4的表达情况,探讨其与乳腺癌TNM分期、病理学分级、分子标志物及预后的相关性.结果乳腺癌组织中Capn4的表达均高于相应癌旁正常组织.Capn4的表达水平与乳腺癌患者的TNM分期(P=0.002)、T分期(P=0.004)、N分期(P=0.004)、M分期(P=0.025)、雌激素受体状态(χ^2=4.787,P=0.029)、生存状态(χ^2=5.826,P=0.016)均相关.Kaplan-Meier法显示Capn4高表达患者的中位生存时间(90个月)短于Capn4低表达患者(未达到),差异有统计学意义(χ^2=4.351,P=0.037).结论Capn4在乳腺癌组织中表达上调,其表达差异与乳腺癌TNM分期、病理学分级、雌激素受体状态、生存预后相关,提示其可能成为乳腺癌治疗新的靶点和分子标志物.

结直肠癌组织中Krüppel样因子5和钙蛋白酶小亚基1的表达及临床意义

目的检测Krüppel样因子5(KLF5)和钙蛋白酶小亚基1(Calpain-s1,Capn4)的表达,并探讨其与结直肠癌临床病理因素的关系。方法收集广东医科大学附属医院2015年4月至2019年1月病理科归档资料完整的99例结直肠癌组织和癌旁组织标本,应用免疫组织化学法检测上述组织中KLF5蛋白和Capn4蛋白的表达水平。应用SPSS19.0统计软件分析,组间比较差异性分析采用t检验。结果KLF5蛋白在结直肠癌组织中的阳性表达率为80.81%(80/99),明显高于癌旁组织中阳性表达率25.25%(25/99),两者差异有统计学意义(t=61.336,P<0.01),KLF5蛋白表达水平与结直肠癌组织学分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移呈明显相关(分别为t=5.916,P<0.05;t=5.075,P<0.05;t=5.647,P<0.05;t=8.894,P<0.05);Capn4蛋白在结直肠癌组织中的阳性表达率为71.72%(71/99),明显高于癌旁组织中的阳性表达率[15.15%(15/99)],两者差异有统计学意义(t=64.465,P<0.01),Capn4蛋白表达水平与结直肠癌浸润深度、TNM分期、淋巴结转移呈明显相关(分别为t=4.746,P<0.05;t=4.489,P<0.05;t=7.231,P<0.05)。结论KLF5和Capn4的高表达可能与结直肠癌的发生发展有关。

CAPN4与食管鳞形细胞癌增殖和迁移关系的体外研究

目的探讨钙蛋白酶小亚基1(calpain small subunit 1,CAPN4)在食管鳞形细胞癌细胞系中的表达水平,分析其与食管鳞形细胞癌细胞增殖和迁移能力的相关性。方法挑选人正常食管上皮细胞系HEEC及食管鳞形细胞癌细胞系EC109与KYSE510,应用Western blot检测细胞系中CAPN4蛋白质水平,应用RNA干扰下调EC109与KYSE510中CAPN4的表达水平,通过CCK-8与Transwell实验分别检测细胞增殖与迁移能力的变化。同时用Western blot检测细胞系中增殖和迁移相关蛋白质水平。结果CAPN4在EC109与KYSE510中的蛋白质水平显著高于HEEC,下调EC109与KYSE510中CAPN4蛋白质水平后,细胞增殖与迁移能力均显著降低(P<0.05),MMP-2蛋白质水平下调。结论 CAPN4在食管鳞形细胞癌中高表达,促进食管癌增殖和迁移,并与下游分子MMP-2的表达水平密切相关。

Capn4通过黏着斑激酶磷酸化激活核转录因子-κB信号调控人肾癌细胞增殖

目的探讨钙蛋白酶小亚基1（Capn4）的表达对肾透明细胞癌（ccRCC）增殖、迁移、侵袭的影响及其分子作用机制。方法选取Capn4高表达ccRCC细胞株786-0和低表达的Caki-1细胞株，采用慢病毒转染技术构建Capn4稳定低表达的786-0细胞株（786-0-shCapn4）和稳定过表达Capn4的Caki-1细胞株（Caki-1-Capn4），通过荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）验证Capn4在转染肾细胞癌（RCC）细胞株中的表达。通过细胞增殖实验、划痕实验及Transwell实验观察Capn4对肾癌细胞增殖、侵袭迁移能力的影响。通过Westernblot法验证黏着斑激酶（FAK）、磷酸化FAK、核转录因子-κB（NF-κB）和磷酸化NF-κB的表达。结果细胞计数试剂盒（CCK-8）结果显示，Capn4过表达后细胞增殖能力过表达组高于对照组（P=0．010），而转染Capn4短发卡RNA（shRNA）后细胞增殖能力下调组低于对照组（P=0．010）；划痕实验结果表明，24hCakil-Capn4细胞的迁移距离过表达组高于对照组（P=0．001），786-O-shCapn4细胞的迁移距离下调组低于对照组（P=0．001）；Transwell结果表明，24hCakil-Capn4细胞的侵袭细胞数量过表达组高于对照组（P=0．001），786-0-shCapn4细胞的迁移距离下调组低于对照组（P=0．001）；Westernblot结果显示：Cakil-Capn4组FAK及NF-κB磷酸化水平较各自对照组上调（P=0．010），而786-0-shCapn4组FAK及NF-κB磷酸化水平较各自对照组下调（P=0．010）；FAK特异性抑制剂（PF573228）或者NF-κB抑制剂QNZ均可抑制由Capn4过表达引起的癌细胞生长速度的增加。结论Capn4通过激活FAK和下游信号通路，从而激活NF-κB，进而促进RCC细胞生长。