日粮不同蛋白质水平对猪骨骼肌钙蛋白酶抑制蛋白和钙蛋白酶基因表达及嫩度的影响

为研究饲料不同蛋白质含量对calpastatin和μ-calpain mRNA在骨骼肌中的表达量,选用54头约50kgLY(长×大)二元杂交去势公猪,随机分为3个处理,每个处理3个重复,每个重复3头猪,分别饲喂蛋白质水平为10%、18%和26%的日粮,各日粮能量及氨基酸模式保持一致,饲养76d后屠宰取样,用荧光相对定量PCR测定猪背最长肌中calpastatin和μ-calpain mRNA在骨骼肌中的表达量,及其对剪切力的影响。结果表明,日粮不同蛋白质水平对calpastatin和μ-calpain mRNA在骨骼肌中的表达量有显著影响(P<0.01)。calpastatin mRNA在骨骼肌中的表达量随日粮蛋白质水平的升高而升高。μ-calpain mRNA在骨骼肌中的表达量随日粮蛋白质水平的升高而下降。骨骼肌剪切力与calpastatin表达量显著正相关,骨骼肌中calpastatin mRNA的表达量越高,骨骼肌剪切力值越高(P<0.01),相关系数为0.859。骨骼肌剪切力与μ-calpain显著负相关,骨骼肌中μ-calpain mRNA的表达量越高,骨骼肌剪切力值越低(P<0.05),相关系数为-0.748。骨骼肌中calpastatin mRNA的表达量与μ-calpain mRNA的表达量显著负相关,calpastatin mRNA表达量越高,μ-calpain mRNA的表达量越低(P<0.01),相关系数为-0.875。即日粮不同蛋白质水平对calpastatin和μ-calpain mRNA在骨骼肌中的表达量有显著影响。

不同饲喂方式对猪背最长肌钙蛋白酶抑制蛋白和钙蛋白酶基因表达及剪切力的影响

为研究不同饲喂方式对猪背最长肌钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin)和μ-钙蛋白酶(μ-calpain)mRNA丰度,以及对肌肉剪切力的影响,54头约60kg的杜×长×大三元杂交去势公猪被随机分为3个组,每组3个重复,每个重复6头猪。第1组为对照组,自由采食;第2组为补偿生长组,前20d限饲30%,后20d自由采食;第3组为限饲组,全期限饲30%。所有猪饲养40d后屠宰取样,用实时定量PCR测定猪背最长肌中calpastatin和μ-calpain mRNA相对丰度。结果表明,背最长肌calpastatin和μ-calpain mRNA相对丰度在自由采食组和补偿生长组间差异不显著(P>0.05);在补偿生长组和限饲组间差异显著(P<0.05);在自由采食组和限饲组间差异极显著(P<0.01)。背最长肌剪切力与calpastatin表达量显著正相关,相关系数为0.5059。背最长肌剪切力与μ-calpain相对丰度显著负相关,相关系数为-0.4757。背最长肌中calpastatin mRNA相对丰度与μ-calpai nmRNA相对丰度负相关,相关系数为-0.0559。结果表明补偿生长和限饲均可以增强calpastatin和μ-calpain基因在转录水平的调控。

猪钙蛋白酶抑制蛋白基因PCR-RFLP多态性与肉质性状及背膘厚间的关系分析

钙蛋白酶抑制蛋白(CAST)是钙蛋白酶系统的内源性抑制剂,并且已经被确定能影响宰后肉的嫩度。本研究采用PCR-RFLP技术,分析了CAST基因在125头PIC杂交猪中的多态性分布及其与肉质性状和背膘厚间的相关。结果发现,CAST基因在本研究所检测的位点均具有多态性。进一步分析表明,CASTA2A2基因型个体与其相应的另外两个基因型个体相比肌内脂肪含量有显著差异,CASTB1B2基因型个体对于肌内脂肪含量的影响也有相同的趋势;CASTB1B2基因型个体与其相应的另外两个基因型个体相比背膘厚有显著差异,CASTC1C2基因型个体和CASTD1D2基因型个体对于背膘厚的影响也有相同的趋势。因此可以把CAST基因作为影响猪肉质性状和屠体性状的候选基因。

猪钙蛋白酶抑制蛋白基因的多态性分析

钙蛋白酶抑制蛋白的638位氨基酸由丝氨酸(Ser)突变为精氨酸(Arg)可改善猪的肉质,是一个有重要育种应用前景的分子标记。本研究采用PCR-RFLP技术对47头莱芜猪,53头大白猪,45头杜洛克和60头商品杂交猪共205个个体钙蛋白酶抑制蛋白Ser638Arg突变的多态性进行了分析。结果表明:4个猪群均检测到AA、CA和CC3种基因型。其中莱芜猪突变等位基因A频率最低,为0.415;大白猪、杜洛克和商品杂交猪A的频率分别为0.632、0.800和0.750。莱芜猪A的基因频率极显著低于其他4个猪种(P<0.01)。所检测的4个猪群在该突变位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。

苏尼特羊钙蛋白酶抑制蛋白基因表达规律及其与肉质的相关性研究

选取40只苏尼特羊为研究对象,采用相对定量PCR技术对不同月龄苏尼特羊背最长肌、臂三头肌、股二头肌中CAST基因的表达规律与肉质相关性进行研究,分析基因表达量与肉质指标的关联。结果表明:CAST在三个实验部位中的表达规律相同,5、6、8月龄有不同程度的增高,12月龄降到最低。4个月龄中,CAST基因的表达量为臂三头肌(Q)>股二头肌(H)>背最长肌(B)。5月龄时股二头肌(H)和背最长肌(B)表达量基本相同,8月龄时,臂三头肌(Q)和股二头肌(H)表达量基本相同。在8、12月龄时,臂三头肌(Q)中CAST基因的表达量显著高于背最长肌(B)。在背最长肌中,CAST基因表达量与剪切力(r=-0.449)、黄度值(r=-0.753)、p H2(r=-0.245)呈负相关;与红度值呈显著负相关(r=-0.950,p=0.050);与亮度值(r=0.171)、p H1(r=0.387)呈正相关;在股二头肌中,CAST基因表达量与剪切力(r=0.520)、黄度值(r=0.846)呈正相关;与红度值(r=-0.091)、亮度值(r=-0.193)、p H1(r=-0.446)、p H2(r=-0.446)呈负相关。在臂三头肌中,CAST基因表达量与剪切力(r=0.333)呈正相关;与红度值(r=-0.494)、黄度值(r=-0.465)、亮度值(r=-0.317)、p H1(r=-0.814)、p H2(r=-0.629)呈负相关。

钙蛋白酶抑制蛋白功能结构域Ⅳ在大肠杆菌中的表达、纯化及其抗血清的制备

为了研究钙蛋白酶系统在细胞发育及其它生理过程的功能 .应用 PCR从鼠钙蛋白酶抑制蛋白 ( calpastatin) c DNA中扩增了保守的具有功能的结构域 ( 40 4 bp) ,克隆于 p GEX- KG载体 .重组质粒 p GEX- Calp4在大肠杆菌中经 IPTG诱导可表达分子量约 4 5 k D融合蛋白 GST- Galp4 .诱导表达后的菌体超声裂解液经谷胱甘肽 - Sepharose4 B亲和层析柱得到纯化的 GST- Calp4融合蛋白 ,纯度达电泳纯 .纯化的 GST- Calp4免疫兔 8周后 ,抗血清的效价达 1∶ 64 .Western- blot分析表明制备的抗血清确实可以与肌细胞中分子量为 1 4 0 k D左右蛋白 (亦即完整 calpastatin)发生特异的免疫交叉反应 。

钙蛋白酶抑制蛋白与肉嫩度相关性

钙蛋白酶蛋白系统是影响肌肉生长和宰后肉嫩化的一个重要因素,主要由钙蛋白酶(μ-calpain和m-cal-pain)、钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin,CAST)及骨骼肌特异性钙蛋白酶(muscle specific calpain,P94)组成,钙蛋白酶抑制蛋白是一种内源性专一抑制钙蛋白酶(calpain)活性的蛋白,参与了调控肌原纤维蛋白的降解并在其中发挥了关键作用。本文概述了钙蛋白酶系统、钙蛋白酶抑制蛋白的结构、功能及其对提高肉嫩度的作用。

猪钙蛋白酶抑制蛋白基因的基因型与肉质性状的关联性分析(英文)

钙蛋白酶抑制蛋白基因是影响肉质性状的候选基因之一.本研究以125头地方猪和117头外来猪为材料,研究CAST基因的多态性.结果在CAST基因上检测到一个多态性位点(A876G),并引起了氨基酸残基的改变Lys250 Arg.在地方猪种中仅检测到G(Arg)等位基因,而在外来猪种中A(Lys)和G(Arg)两个等位基因均检测到.基因型与肉质性状的关联性分析结果表明,CAST基因型与肌肉的嫩度,屠宰45 min后的pH值及滴水损失存在强相关.又由于地方猪种与外来猪种的肉质性状间存在显著差异,因此,在CAST基因上检测到的多态型位点Lys250Arg的基因型效应有待于进一步研究,并将其有效应用于商品猪生产中.

福建白兔钙蛋白酶抑制蛋白基因的克隆及其表达差异研究

为了解福建白兔钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin, CAST)基因分子基础,应用RT-PCR和克隆测序从肌肉组织总RNA中克隆出福建白兔CAST基因的cDNA序列并进行分析。通过荧光定量PCR测定福建白兔不同组织CAST基因mRNA表达谱。结果显示:该基因序列长度为2 505 bp(GenBank登录号:MT457404),其中5′非翻译区128 bp, 3′非翻译区223 bp, 2 154 bp的开放阅读框,编码717个氨基酸;序列分析表明,福建白兔与已报道的兔(NM;01082270.1)、人(NM;01750.7)、猴(XM;12638821.1)、猩猩(XM;14344954.2)、小鼠(NM;01301153.1)、大鼠(NM;01033716.1)、猫(XM;11284752.3)、狗(XM;05618083.3)、猪(NM;14067.1)、牛(NM;01030318.3)、绵羊(NM;01009788.1)、山羊(XM;18050015.1)和马(XM;23617937.1)的氨基酸序列同源性分别为99.5%、79.1%、80.4%、79.2%、71.6%、72.6%、77.6%、77.8%、76.8%、76.2%、75.9%、75.9%和78.2%。对13种组织的实时荧光定量PCR分析发现,90日龄福建白兔CAST mRNA表达量以肠组织最高,且极显著高于其他各组织(P<0.01);各组织CAST基因的相对表达量总体趋势为:肠>肺>心、脾、垂体(后三者间表达差异不显著);肾中CAST mRNA表达量显著低于肠、肺、心、脾和垂体(P<0.05),显著高于背肌、下丘脑、胃和肝(P<0.05)。研究结果为进一步开展CAST基因在肉兔肉质改善提供理论参考。

急性肝衰竭大鼠肝组织中钙蛋白酶/钙蛋白酶抑制蛋白的表达及乌司他丁对其的影响

目的:探讨钙蛋白酶/钙蛋白酶抑制蛋白在急性肝衰竭模型中的表达情况及乌司他丁对其表达的影响。方法:通过腹腔注射D-氨基半乳糖(D-Gal)及脂多糖(LPS)建立大鼠急性肝衰竭模型。大鼠随机分为对照组、模型组及乌司他丁干预组。采用免疫组织化学方法检测钙蛋白酶/钙蛋白酶抑制蛋白表达情况。结果:D-Gal/LPS联合注射成功诱导大鼠急性肝衰竭模型,与对照组相比,模型组钙蛋白酶及钙蛋白酶抑制蛋白表达增加(P<0.05),但经乌司他丁干预后,钙蛋白酶表达较模型组明显减少(P<0.05),而钙蛋白酶抑制蛋白的表达无明显变化(P>0.05)。结论:乌司他丁可能通过抑制钙蛋白酶活性,同时保持钙蛋白酶抑制蛋白活性,从而减轻肝脏炎症损伤。

不同饲喂方式对生长猪背最长肌中钙蛋白酶抑制蛋白表达量以及肉嫩度的影响

为研究不同饲喂方式对猪背最长肌钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin)表达量以及肉嫩度的影响,选用54头约60kg的三元杂交生长肥育猪,随机分为3个处理,每个处理3个重复,每个重复6头猪,分别按照自由采食组(对照)、限饲组(30%)、补偿生长组(前20d限饲30%后20d自由采食)进行不同的饲养。试验结果表明:自由组、补偿生长组、限饲组的肌纤维剪切力和钙蛋白酶抑制蛋白表达量依次显著升高,且随着钙蛋白酶抑制蛋白表达量的增多,剪切力值有上升的趋势。

钙蛋白酶抑制蛋白基因作为肉质候选基因的研究进展

钙蛋白酶抑制蛋白(Calpastatin CAST),是钙蛋白酶系统的成员之一,对畜禽肌肉的嫩度等肉质性状有调节作用。本文阐述CAST基因的结构特征、表达与定位、调节机理、多态性及其与肉质性状的相关研究进展。

钙蛋白酶抑制蛋白对猪肉品质的影响

钙蛋白酶蛋白系统是影响肌肉生长和宰后肉嫩化的一个重要因素,主要由钙蛋白酶(μ-calpain和m-calpain)、钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin,CAST)及骨骼肌特异性钙蛋白酶组成,钙蛋白酶抑制蛋白是一种内源性专一抑制钙蛋白酶活性的蛋白,参与了调控肌原纤维蛋白的降解并在其中发挥了关键作用。本文概述了钙蛋白酶抑制蛋白的结构、功能及其对肌肉蛋白质的增加、提高肉嫩度的作用。

三个猪品种钙蛋白酶抑制蛋白基因多态性研究

采用3种限制性内切核酸酶对杜洛克、内江猪和荣昌猪共153头的钙蛋白酶抑制蛋白(CAST)基因进行PCR-RFLP分析。结果表明:①HinfI、MspI和RsaI均检测到多态性,同时还发现一个杜洛克个体的HinfI-RFLP出现120bp突变片段。②X2检验表明,HinfI、MspI和RsaI酶切所产生的基因及基因类型处于Hardy-Weinberg平衡状态(p<0.05);杜洛克、内江猪和荣昌猪三个品种猪的优势基因型分别为ABCCEE、AACCEE、AACCFF,在99%程度上分别与相应的品种有关。

钙蛋白酶抑制蛋白对猪肉肉质的影响

钙蛋白酶系统主要由钙蛋白酶(u2-calpain,CAPN1;m2-calpain,CAPN2)及钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin)组成,calpain是存在于细胞质中的依赖于Ca2+的钙中性蛋白酶,蛋白酶系统是主要的蛋白质降解物。calpastatin是钙蛋白酶的内源性抑制蛋白。研究表明,Calpastatin在肌原纤维蛋白降解中起着重要作用。因此,对肌肉生长和嫩度有重要影响。本文综述了钙蛋白酶抑制蛋白的结构组成,对肉嫩度影响的机理和钙蛋白酶抑制蛋白基因的定位。

牛钙蛋白酶抑制蛋白基因的研究进展

钙蛋白酶抑制蛋白基因被认为是肉质嫩度的候选基因。文章对牛钙蛋白酶抑制蛋白基因结构、钙蛋白酶抑制蛋白基因多态性以及钙蛋白酶抑制蛋白基因活性影响牛肉肉质嫩度的研究进展进行了综述,并对未来该基因与嫩度的研究进行了展望,旨在为该基因与牛肉肉质嫩度的深入研究提供理论参考。

钙蛋白酶抑制蛋白可抑制屠宰后肌肉蛋白水解

钙蛋白酶蛋白系统在细胞内普遍存在,并参与机体生长与代谢过程,主要由钙蛋白酶(u-calpain和m-calpain)、钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin)及骨骼肌特异性钙蛋白酶(musclespecificcalpain,P94)组成。钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin)是钙蛋白酶的内源性抑制蛋白,对调控calpains的活性有重要意义。本文对钙蛋白酶蛋白系统的概况、钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin)基因的结构、特性、功能及其研究进展进行了综述,并对其研究前景进行了展望。

钙蛋白酶抑制蛋白基因过表达Balb／C小鼠的繁育及鉴定

目的:建立钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin,CAST)基因过表达Balb/C小鼠的培育方法,并探讨碱性裂解液提取基因组DNA在子代鼠基因型鉴定中的价值。方法:将雄性C57BL/6-CAST^(+/-)转基因小鼠与雌性Balb/C野生型小鼠杂交,将雄性CAST^(+/-)杂合子代小鼠与雌性Balb/C野生型子代小鼠杂交,连续杂交至消除C57BL/6小鼠遗传背景。取子代小鼠鼠尾组织,采用碱性裂解液提取基因组DNA,PCR法扩增CAST基因片段,琼脂糖凝胶电泳鉴定结果。采用柯萨奇B3病毒(CVB3)感染Balb/C-CAST^(-/-)小鼠以建立急性病毒性心肌炎小鼠模型。结果:C57BL/6-CAST^(+/-)转基因小鼠与雌性Balb/C野生型小鼠连续杂交10代可消除C57BL/6小鼠遗传背景。采用碱性裂解液提取的基因组DNA数量、纯度能够满足后续实验需要,且产物大小与目的片段一致。成功建立Balb/C-CAST^(-/-)基因型小鼠急性病毒性心肌炎模型。结论:成功建立Balb/CCAST基因过表达小鼠,为后续研究奠定了基础;碱性裂解液提取基因组DNA简便、高效,值得推广。

猪钙蛋白酶抑制蛋白基因外显子9多态性检测及其对山西白猪背膘厚的影响

本研究采用PCR-SSCP方法检测了杜洛克猪、大白猪、长白猪、山西白猪、山西黑猪和马身猪6个品种共416头个体的钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin,CAST)基因外显子9的多态性,在扩增片段内检测到5个SNPs,分别是第37位的T→G突变、150位的A→G突变、167、193和256位点的C→T突变,其中第193和256位点的C→T突变位于外显子9内,为错义突变,分别引起苏氨酸→异亮氨酸和苏氨酸→蛋氨酸的转变;5个SNPs位点形成A、B、C、D、E、F和G 7种单倍型,其分布与猪的经济类型相一致。在引入猪种大白猪和杜洛克猪群体中,有3种单倍型A、B和C,单倍型B频率较高,分别为0.40和0.53;长白猪群体中只有B和C 2种单倍型,单倍型C频率较高,为0.72;马身猪除含有A、B、C 3种单倍型外,还含有单倍型E,频率为0.16。统计分析结果表明,CAST基因单倍型类型对山西白猪6月龄活体背膘厚无显著影响。

钙蛋白酶和钙蛋白酶抑制蛋白系统在雄性生殖调控中的研究进展

钙蛋白酶(calpain)是一族钙离子依赖性的、水解半胱氨酸的蛋白酶,钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin)是钙蛋白酶的特异性抑制蛋白.钙蛋白酶-钙蛋白酶抑制蛋白系统在多种细胞中发挥作用,本文就国内外对该系统在雄性生殖调控中的作用的研究情况作一概括,为人们进一步了解该系统奠定基础.