钙蛋白酶-1在胶质瘤组织中的表达及其对U87细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨钙蛋白酶-1在人脑胶质瘤组织中的表达及其对U87胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响。方法收集2015年1月至2018年3月手术切除的胶质瘤组织和瘤旁正常脑组织各57例。体外培养U87细胞,将阴性对照小干扰RNA(NC组)和钙蛋白酶-1小干扰RNA(钙蛋白酶-1组)转染至人胶质瘤细胞株U87,以未转染的U87细胞为对照组。采用RT-PCR和免疫印迹法检测mRNA和蛋白表达水平,Transwell实验检测U87细胞侵袭能力,划痕实验评估U87细胞迁移能力。结果胶质瘤组织钙蛋白酶-1 mRNA和蛋白表达水平均显著高于瘤旁正常脑组织(P<0.05)。钙蛋白酶-1组U87细胞钙蛋白酶-1 mRNA和蛋白表达水平、细胞侵袭数目、细胞迁移率以及转化生长因子-β、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9 mRNA表达水平均明显低于对照组和NC组(P<0.05),而对照组和NC组均无统计学差异(P>0.05)。结论钙蛋白酶-1在人脑胶质瘤中表达升高,而抑制钙蛋白酶-1表达可能通过影响上皮间质转化,抑制胶质瘤细胞侵袭和迁移。

钙蛋白酶-1表达水平与结直肠癌患者病理特征及疾病进展风险的相关性

目的探讨钙蛋白酶-1表达水平与结直肠癌患者病理特征及疾病进展风险的相关性。方法选取2017年2月至2018年9月就诊的107例结直肠癌手术患者,入院时收集患者临床病理资料及钙蛋白酶-1水平,所有患者均成功手术,随访1年截至末次随访时间2019年9月共有3名患者因不同原因失访,剩余104例患者均完成随访,其中36例患者出现疾病进展定义为进展组,68例未出现疾病进展定义为无进展组;对比分析两组患者临床资料,分析钙蛋白酶-1表达水平与结直肠癌病理特征;术后均根据患者肿瘤分期及部位等接受术后辅助治疗;采用多因素logistic回归分析结直肠癌患者疾病进展风险的独立预测因素;绘制工作特征曲线(ROC)评估钙蛋白酶-1表达水平对结直肠癌患者疾病进展风险的预测价值。结果两组病理特征肿瘤部位、N分期、M分期、肿瘤分化程度等比较差异无统计学意义(P>0.05);两组钙蛋白酶-1、淋巴转移、T分期比较,差异有统计学意义(P<0.05),多因素分析显示T分期(OR=2713.809)、淋巴转移(OR=118.177)、钙蛋白酶-1(OR=23.749)是结直肠癌患者疾病进展风险的独立预测因素,ROC曲线分析显示,钙蛋白酶-1结直肠癌患者疾病进展风险的AUC为0.716,高于T分期、淋巴转移(P<0.05)。结论钙蛋白酶-1在疾病进展患者中高表达,可作为预测结直肠癌患者疾病进展风险的标志物。

钙蛋白酶及其抑制蛋白在女性压力性尿失禁患者尿道周围组织中的表达

目的分析钙蛋白酶及钙蛋白酶抑制蛋白在压力性尿失禁(SUI)患者尿道周围组织中的表达及定位,探讨两者在压力性尿失禁发病中起的作用。方法选取20例行阴道无张力尿道中段悬吊术的SUI患者(SUI组)和20例行阴道壁囊肿剥除术的非SUI患者(对照组),采用免疫组化En Vision染色法对两组患者尿道周围组织石蜡切片中钙蛋白酶-1、钙蛋白酶-2和钙蛋白酶抑制蛋白的表达区域及水平进行检测。结果 SUI组和对照组尿道周围组织中的上皮细胞、平滑肌细胞中均有钙蛋白酶-1、钙蛋白酶-2和钙蛋白酶抑制蛋白的表达,但间质细胞中未见这三种蛋白的表达。钙蛋白酶-1的表达水平在SUI组和对照组上皮细胞和平滑肌细胞中的表达分别为2.71±0.45 vs2.41±0.41,2.01±0.40 vs 2.09±0.43,两组间比较,差异均无统计学意义(t分别=1.80、-0.46,P均>0.05)。钙蛋白酶-2的表达水平在SUI组和对照组上皮细胞和平滑肌细胞中的表达分别为3.07±0.36 vs 2.67±0.47,2.50±0.42 vs 2.08±0.51,两组间比较,差异均有统计学意义(t分别=2.35、2.28,P均<0.05)。钙蛋白酶抑制蛋白的表达水平在SUI组和对照组上皮细胞和平滑肌细胞中的表达分别为2.91±0.42 vs 3.23±0.39,2.69±0.43 vs 3.09±0.45,两组间比较,差异均有统计学意义(t分别=-2.19、-2.35,P均<0.05)。结论钙蛋白酶/钙蛋白酶抑制蛋白表达失衡可能参与压力性尿失禁的发生,钙蛋白酶-2对SUI的发病有促进作用,钙蛋白酶抑制蛋白对SUI的发病有保护作用。

哺乳期多溴联苯醚-153染毒对成年大鼠皮质细胞内钙离子浓度和钙激活相关酶的影响

目的研究哺乳期多溴联苯醚-153（BDE-153）染毒对成年大鼠皮质细胞内钙离子浓度和钙激活相关酶水平的影响，为研究多溴联苯醚的神经发育毒性提供科学依据。方法40只雄性新生乳鼠按体重和窝别随机分成1、5、10mg／kgBDE-153组和橄榄油溶剂对照组，每组10只。在出生第10天，染毒组按0．1ml／10g体重-次腹腔注射染毒BDE-153，橄榄油溶剂对照组给予同剂量橄榄油。染毒后2个月时处死大鼠，冰皿上迅速分离大脑皮质，用流式细胞仪测定细胞内caz＋浓度，用比色法测定钙调神经磷酸酶（CaN）、Ca，Mg2-ATP酶活力，实时荧光定量PCR法和蛋白免疫印迹法（Western．blot）检测钙激活蛋白酶calpain-1和calpain-2的基因和蛋白表达。结果对照组、1、5和10mg／kgBDE-153组大鼠皮质细胞内caz＋平均荧光强度分别为10．83、1．48、1．93和0．62，各染毒组细胞内caz＋浓度均明显低于对照组，差异有统计学意义（P〈O．05）。各染毒组CaN酶活力、Ca2＋-Mg2_ATP酶活力、calpain-1基因和蛋白表达量与对照组的差异无统计学意义（P〉0．05）。随着BDE．153染毒剂量的增加，BDE．15染毒组calpain-2蛋白的表达量逐渐升高，与对照组f基因：（0．81±0．26），蛋白：（0．15±0．07）]比较，5、10mg／kgBDE-153组calpain-2的基因[5mg／l（gBDE-153组：1．16±0．52，10mg，kgBDE．153组：1．32±0．23]及蛋白表达量[5mg／kgBDE．153组：0．31±0．07，10mg／kgBDE-153组：0．37±0．061明显升高，差异有统计学意义（P〈0．05）；10mg／kgBDE．153组calpain-2的蛋白表达量（0．37±0．06）明显高于1mg／kgBDE-153组（0．22±0．07），差异有统计学意义（P（0．05）。结论ca：价导的calpain-2激活可能是BDE-153神经毒性的主要机制之-。

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征腭帆张肌失神经变化

目的通过研究阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）患者腭帆张肌中钙蛋白酶-1（calpain 1）和神经细胞黏附分子（neural cell adhesion molecule,NCAM）的表达以及运动终板形态改变，探讨OSAHS患者上气道扩张肌失神经变化。方法选取30例OSAHS患者作为实验组，10例排除OSAHS的慢性扁桃体炎患者作为对照组。通过乙酰胆碱脂酶（acetylchelin esterase,AchE）染色法显示运动终板形态变化，免疫组化Elivison二步法检测腭帆张肌中calpain 1和NCAM的表达。结果①OSAHS组运动终板数量明显减少甚至消失：②calpain-1和NCAM的表达水平明显高于对照组，差异有显著性意义（P〈0．05）；③calpain1和NCAM的表达水平均与呼吸紊乱指数呈正相关（r=0．811，P=O．000：r=0．692，P=0．000）。结论OSAHS患者上气道扩张肌存在失神经支配病变，且病情越重失神经的程度也越严重。

黄芪甲苷通过calpain-1/NF-κB信号通路对低氧诱导的肺动脉高压小鼠的保护作用

目的:探究黄芪甲苷通过calpain-1/NF-κB信号通路对低氧诱导的肺动脉高压小鼠的保护作用。方法:40只C57BL/6小鼠随机分为5组:常氧对照组、低氧模型组、低氧NF-κB抑制剂组(5 mg·kg^(-1))、低氧ASIV低剂量组(40 mg·kg^(-1))、低氧ASIV高剂量组(80 mg·kg^(-1))。16只calpain-1敲除鼠随机分为2组:常氧calpain-1敲除组、低氧calpain-1敲除组。低氧组置于10%O的低氧舱内造模28 d。造模结束后测定小鼠右心室收缩压(RVSP)和右心室肥厚指数(RVHI);酶联免疫法(ELISA)检测血清中ET-1、IL-6、TNF-α含量;苏木素-伊红(HE)染色观察肺小动脉结构,测量肺小动脉血管面积占总面积的百分比(WA)和血管厚度占血管外径的百分比(WT);免疫组化(IHC)观察肺组织PCNA蛋白的表达;免疫蛋白印迹法(Western blot)检测肺组织calpain-1、p65、p-p65、PCNA、VCAM1、ICAM1蛋白的表达。结果:与常氧对照组比较,低氧模型组小鼠的RVSP、RVHI、WA和WT升高(P<0.01),血清中ET-1、IL-6、TNF-α含量升高(P<0.01),肺组织中calpain-1、p-p65、PCNA、VCAM1、ICAM1蛋白表达升高(P<0.05);与低氧模型组相比,低氧calpain-1敲除组、低氧NF-κB抑制剂组、低氧ASIV给药组小鼠的RVSP、RVHI、WA和WT明显降低(P<0.05),血清中ET-1、IL-6、TNF-α含量降低(P<0.05),肺组织中calpain-1、p-p65、PCNA、VCAM1、ICAM1蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:黄芪甲苷可能通过calpain-1/NF-κB信号通路对低氧诱导的肺动脉高压小鼠发挥保护作用。

黄芪甲苷通过Calpain-1/HIF-1α改善野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠氧化应激

目的:研究黄芪甲苷对野百合碱诱导的肺动脉高压(PAH)大鼠的保护作用并探讨其作用机制。方法:SD大鼠通过单次腹腔注射野百合碱0.06 g/kg建立PAH模型,黄芪甲苷40 mg/kg、80 mg/kg组连续灌胃4 w,腹腔注射钙蛋白酶-1(Calpain-1)抑制剂(MDL-28170,20 mg/kg)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)抑制剂(2ME2,16 mg/kg)。右心室导管插管检测右心室压力(RVSP)和平均肺动脉压(mPAP),采用苏木素-伊红(HE)染色法和马松三色法观察肺组织病理形态,超氧化物阴离子探针(DHE)染色法检测肺组织活性氧(ROS)形成情况,酶联免疫(ELISA)法检测血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)和Calpain-1的水平,比色分析法(WST-1)、硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid, TBA)法分别检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量,免疫组化法观察肺组织Calpain-1蛋白的表达情况,免疫蛋白印迹法(Western blot)检测肺组织HIF-1α的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组中RVSP、mPAP、右心肥厚指数、血管壁面积比(WA)、肺组织纤维胶原沉积面积、肺干湿重、肺组织中ROS含量、血清中MDA水平、肺组织中Calpain-1和HIF-1α蛋白表达显著升高(P<0.01),血清中SOD的生成和GSH-px释放量显著降低(P<0.05或P<0.01);与模型对照组相比,MDL-28170组、2ME2组和黄芪甲苷40、80 mg/kg组中RVSP、mPAP、右心肥厚指数、血管壁面积比(WA)、肺组织纤维胶原沉积面积、肺干湿重、肺组织中ROS含量、血清中MDA水平、肺组织中Calpain-1和HIF-1α蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01),血清中SOD的生成和GSH-px释放量显著升高(P<0.01)。黄芪甲苷对野百合碱的抑制作用与MDL-28170和2ME2作用相似。结论:黄芪甲苷改善MCT诱导的PAH大鼠氧化应激,且可能通过Calpain-1/HIF-1α信号通路发挥其改善作用。