钙调磷酸酶-活化T细胞核因子信号通路抑制剂的研究进展

钙调磷酸酶(Ca N)是人体免疫调节中的关键酶,其最重要的靶标蛋白是活化T细胞核因子(NFATc)。Ca N抑制剂(CNI)如环孢素A和他克莫司的免疫抑制作用的发现克服了器官移植中的免疫排斥难题,使器官移植发生了根本性的改变,迄今这两种药物仍然广泛应用于临床和基础研究,但严重的肾毒性和神经毒性也限制了它们在临床上的使用。因此,查找新的特异性更高、在临床上副作用更小的CNI是一个研究热点。本文从药物-亲和素复合物阻断底物、直接抑制Ca N活性和特异性干扰Ca N-NFATc相互作用三方面对最近几十年来天然的和人工合成的CNI作一综述。

钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子信号通路与系统性红斑狼疮关系的研究进展

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种以多种自身抗体产生为特点的侵犯多系统多脏器的自身免疫性疾病,其发病机制尚未明确,目前认为T淋巴细胞异常是SLE的发病的关键。钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子(Calcineurin-nuclear factors of activatedT cells,CaN-NFAT)信号通路作为T细胞内重要的生物信号转导通路,在T细胞活化中起到调节枢纽的作用,本文就CaN/NFAT信号途径在SLE中的作用及目前相关主要治疗药物的研究现状作一综述,为SLE的基础研究及临床治疗提供依据。

饲粮蛋白质水平对肥育猪肌肉嫩度及背最长肌钙调磷酸酶-活化T细胞核因子信号途径的影响

本试验旨在研究饲粮理想蛋白质水平对背最长肌嫩度及钙调磷酸酶-活化T细胞核因子(CaN-NFAT)信号途径相关蛋白和钙蛋白酶抑制蛋白(CAST)mRNA表达量的影响。选择初始重约50kg的杜洛克×长白×大白三元杂交猪90头,随机分配到3个处理,每个处理3个重复,每个重复10头,公母各占1/2。3个处理分别采用12%、16%、20%理想蛋白质水平的饲粮,饲粮能量水平相同。正试期58d,结束后屠宰取样,测定肌肉剪切力并利用实时定量PCR法测定猪背最长肌CAST、CaN、钙调蛋白(CaM)和NFAT mRNA表达量。结果表明:1)饲粮高蛋白质水平显著提高背最长肌剪切力(P<0.05)、极显著提高CAST和CaN mRNA表达量(P<0.01)。2)背最长肌剪切力与CAST mRNA表达量正相关(相关系数为0.713,P<0.01);CaN、CaM与CAST mRNA表达量正相关(相关系数分别为0.594、0.596,P<0.05);NFAT、CaM与CaN mRNA表达量正相关(相关系数分别为0.536、0.546,P<0.05);CaM与NFAT mRNA表达量正相关(相关系数为0.623,P<0.05)。结果提示,饲粮高蛋白质水平显著降低背最长肌嫩度、提高CAST和CaN mRNA表达量;背最长肌嫩度与CAST mRNA表达量正相关,与CaN-NFAT信号途径无相关性。

钙调磷酸酶-活化T细胞核因子信号途径在骨骼肌细胞生长和发育中生理作用的研究进展

钙调磷酸酶-活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)信号途径作为肌肉细胞内重要的生物信号转导途径,在肌肉细胞中起到调节枢纽的作用,与肌肉生长及肌纤维的类型有密切关系。而肌肉组织降解在动物肌肉嫩化过程中具有重要的意义。因此,钙调磷酸酶-NFAT信号途径可能与肌肉嫩化有密切关系,深入研究其调控肌肉组织降解的分子机制将有助于揭示肌肉嫩化的深刻机理。

钙调磷酸酶/活化T细胞因子信号通路在有氧运动诱导高血压大鼠血管平滑肌细胞K_V2.1通道表达上调中的作用

目的探讨钙调磷酸酶/活化T细胞因子（CaN/NFAT）信号通路在有氧运动诱导原发性高血压大鼠（SHR）肠系膜动脉血管平滑肌细胞电压依赖性钾通道（KV2.1）表达上调中的作用。方法选用3月龄雄性WKY和SHR大鼠各24只,随机分为WKY安静组和运动组（WKY-SED组、WKY-EX组）、SHR安静组和运动组（SHRSED组、SHR-EX组）。运动干预前和12周运动结束后分别测量大鼠安静状态下的心率和血压。分别采用免疫组化和Western blot检测KV2.1、CaN在肠系膜动脉的分布以及KV2.1、CaN、p-NFATc3、A型激酶锚定蛋白（AKAP150）和钙调蛋白（CaM）的蛋白表达。结果 （1）12周有氧运动后,与SHR-SED组相比,SHR-EX组心率、收缩压和平均动脉压均显著降低（P〈0.01）;与WKY-SED组相比,WKY-EX组收缩压显著降低（P〈0.05）。（2）与WKY-SED组相比,SHR-SED组KV2.1在肠系膜动脉的蛋白表达显著减少（P〈0.01）;与SHR-SED组相比,SHR-EX组KV2.1的蛋白表达显著增加（P〈0.01）。（3）与WKY-SED组相比,SHR-SED组CaN在肠系膜动脉的蛋白表达显著增加（P〈0.01）,p-NFATc3的蛋白表达显著减少（P〈0.01）;与SHR-SED组相比,SHR-EX组CaN的蛋白表达显著减少（P〈0.01）,p-NFATc3的蛋白表达显著增加（P〈0.01）。（4）与WKY-SED组相比,SHR-SED组的AKAP150蛋白表达显著增加（P〈0.01）;与SHR-SED组相比,SHR-EX组的AKAP150蛋白表达显著减少（P〈0.01）。（5）与WKY-SED组相比,SHR-SED组的CaM蛋白表达显著增加（P〈0.01）;与SHR-SED组相比,SHR-EX组的CaM蛋白表达显著减少（P〈0.01）;相比WKY-SED组,WKY-EX组CaM的蛋白表达量显著升高（P〈0.05）。结论钙调磷酸酶/活化T细胞核因子信号通路表达上调是高血压引起KV2.1通道功能下降的重要原因,有氧运动可以有效抑制这种作用,这可能是有氧运动缓解高血压及重塑血管功能的机制之一。

沙库巴曲缬沙坦对自发性高血压大鼠心肌钙调神经磷酸酶/活化T细胞核因子3信号通路的影响

目的 探讨沙库巴曲缬沙坦对自发性高血压大鼠(SHR)心肌钙调神经磷酸酶/活化T细胞核因子3(CaN/NFAT3)信号通路的影响。方法 选择16只16周龄雄性SHR完全随机分为模型组(8只)和治疗组(8只),选择相同周龄的8只血压正常的Wistar-Kyoto大鼠作为对照组。治疗组大鼠给予沙库巴曲缬沙坦65 mg/kg,对照组和模型组大鼠给予等容积0.9%氯化钠溶液,均每天1次灌胃,连续4周。干预4周后,超声心动图检测各组大鼠心脏舒张期室间隔厚度(IVSd)和左心室舒张期后壁厚度(LVPWd);组织病理学评估心肌细胞形态及心肌纤维化程度;免疫组织化学染色和蛋白质印迹法检测心肌组织CaN和NFAT3蛋白表达情况。结果 干预后,模型组大鼠IVSd、LVPWd均高于对照组[(2.53±0.35)mm比(1.28±0.14)mm、(2.32±0.29)mm比(1.31±0.12)mm],而治疗组大鼠IVSd、LVPWd[(2.02±0.15)mm、(1.85±0.14)mm]均低于模型组(均P<0.01)。模型组心肌细胞横截面积和心肌胶原纤维百分比均明显高于对照组,而治疗组心肌细胞横截面积和心肌胶原纤维百分比均低于模型组(均P<0.01)。免疫组织化学染色结果显示,模型组心肌组织CaN蛋白表达水平高于对照组,治疗组CaN蛋白表达水平低于模型组(均P<0.01)。蛋白质印迹法检测结果显示,模型组CaN蛋白和NFAT3蛋白表达水平均高于对照组[(0.95±0.05)比(0.55±0.05)、(0.84±0.04)比(0.53±0.05)],而治疗组CaN蛋白和NFAT3蛋白表达水平[(0.65±0.05)、(0.65±0.03)]均低于模型组(均P<0.01)。结论 沙库巴曲缬沙坦能够减轻SHR心肌纤维化及抑制心肌肥厚,其作用机制可能与抑制CaN/NFAT3信号通路有关。

中药提取物对钙调磷酸酶-活化T细胞核因子通路的抑制作用

通过研究多种具有清热解毒、除湿功效的中草药提取物对钙调磷酸酶-活化T细胞核因子（Ca N-NFAT）信号通路的抑制作用发现天然的Ca N-NFAT通路抑制剂。采用荧光素酶报告基因方法,检测多种中药提取物对Ca N-NFAT信号通路影响;采用CCK8法检测中药提取物的非特异性细胞毒性。实验发现：多种中药提取物在1 mg/m L浓度时对PMA/A23187刺激的K562细胞内Ca N-NFAT通路具有抑制作用,并且没有显著的细胞毒作用;其中部分中药提取物在0.25~1 mg/m L剂量范围内对Ca N-NFAT通路具有剂量依赖性的抑制作用,结果提示这些中药提取物中可能含有能够有效抑制Ca N-NFAT信号通路的活性成分。

芪白平肺胶囊可降低慢性阻塞性肺疾病钙调磷酸酶和活化T细胞核因子c3(NFATc3)的水平

目的通过建立慢性阻塞性肺疾病(COPD)痰瘀阻肺证大鼠模型,观察益气化痰祛瘀方-芪白平肺胶囊(QPC)对钙调磷酸酶(Ca N)-活化T细胞核因子c3(NFATc3)信号分子表达的影响,探讨QPC对COPD肺血管重构的干预机制。方法雄性SD大鼠60只,随机分为正常组、模型组、高、中、低剂量QPC组和硝苯地平组。采用游泳、烟熏、低氧,建立COPD痰瘀阻肺证大鼠模型;观察QPC对肺功能参数和大鼠的肺血管形态学的影响;通过实时荧光定量PCR检测大鼠肺组织Ca N和NFATc3mRNA的表达、Western blot法检测Ca N和NFATc3的蛋白表达。结果模型组大鼠第0.3秒用力呼气容量(FEV0.3),用力肺活量(FVC)和FEV0.3/FVC等肺功能参数值显著下降,高、中、低剂量QPC组和硝苯地平组的肺功能参数值均有不同程度的上升。模型组大鼠肺血管的管壁增厚,代偿性肺气肿形成。高、中、低剂量QPC组和硝苯地平组也存在血管壁增厚、肺泡扩张,但程度较轻。与正常组相比,模型组肺组织Ca N和NFATc3的mRNA和蛋白表达水平显著增加;与模型组相比,高、中、低剂量QPC以及硝苯地平组的Ca N和NFATc3的mRNA和蛋白表达量显著减低。结论 QPC可降低COPD肺组织Ca N、NFATc3的水平。

钙调神经磷酸酶和NFAT在T细胞活化中的作用

钙调神经磷酸酶（Ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ，ＣａＮ）是目前所知的唯一依赖Ｃａ２＋ ／钙调素（Ｃａｌｍ ｏｄｕｌｉｎ，ＣａＭ ）的Ｓｅｒ／Ｔｈｒ 磷蛋白磷酸酶，在细胞内Ｃａ２＋ 信号传递中起着重要作用。转录因子ＮＦＡＴ（Ｎｕ－ｃｌｅａｒ Ｆａｃｔｏｒ ｏｆＡｃｔｉｖａｔｅｄ Ｔ ｃｅｌｌ，活化Ｔ 细胞核因子）应答于ＣＡ２＋ －ＣａＮ 信号转位到核内，从而参与早期免疫应答基因的活化。ＣａＮ 使ＮＦＡＴ 氨基端保守氨基酸脱磷酸化，从而使其抑制区失活，核定位信号（ＮＬＳｓ）去掩蔽并转移到核中，进而活化ＩＬ－２ 基因。此外，ＣａＮ 还通过作用于ＮＦＡＴ 而调控其他细胞因子如ＧＭ －ＣＳＦ、ＩＬ－３、ＩＬ－４ 和ＴＮＦ－α等的基因表达。

钙调神经磷酸酶信号途径参与大鼠PTA术后再狭窄的形成

目的研究钙调神经磷酸酶(CaN)信号途径在经皮血管成形术(percutaneous translum inal angiop las-ty,PTA)后再狭窄血管中的表达,探讨该途径在血管再狭窄发生中的作用。方法雄性SD大鼠16只,随机分为对照组(n=10)和实验组(n=6)。实验组球囊损伤术后30 d取材,对照组仅行颈部正中切开,正常喂饲30 d后取材,血管组织作HE染色,免疫组化检测CaN在血管壁中的表达,光学显微镜观察病理学改变。Real-tim e PCR法检测血管组织中CaN和活化T细胞核因子c3(NFATc3)的表达。结果球囊损伤后血管壁出现新生内膜,形成的新生内膜厚度不均;实验组与对照组比较,内膜厚度、内膜/中膜厚度明显增加(P<0.05);免疫组化检测实验组血管壁上CaN表达明显增强,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);实验组血管壁组织CaN、NFATc3表达明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论球囊损伤后血管组织中CaN及其下游NFATc3表达增加,提示该途径参与PTA术后血管再狭窄的形成。

钙调神经磷酸酶依赖的信号通路在致心肌肥大中的作用

心肌细胞内持续的Ca^(2+)平台激活钙调神经磷酸酶(CaN),使活化T细胞核因子c(NF-ATc)去磷酸化并进入胞核。去磷酸化的NF-ATc再与锌指转录因子(GATA_4)等相互作用,活化多种心肌肥厚的相关基因,导致心肌肥厚。免疫抑制剂环胞素A(CsA)、FK506等可抑制CaN活性,消除心肌肥厚而改善心衰。

钙调神经磷酸酶信号通路及负调控信号糖原合成酶-3β对大鼠经皮血管成形术后再狭窄的作用

目的研究钙调神经磷酸酶(CaN)-活化T细胞核因子(NFAT)信号通路及此通路抑制因子糖原合成酶-3β(GSK-3β)在大鼠腹主动脉球囊损伤后再狭窄中的作用,为防治血管再狭窄提供新的理论依据。方法选取雄性SD大鼠24只,随机分为假手术组(n=12)和球囊组(n=12)。在球囊组,将球囊导管自左颈总动脉插至腹主动脉末端扩张回抽,造成损伤;假手术组仅行颈部正中切开。两组均在术后30 d取材,常规组织切片观察血管病理学改变,RT-PCR法检测血管组织中GSK-3β和白细胞介素-2(IL-2)的mRNA表达变化,Western blot法检测CaN、活化T细胞核因子1(NFATC1)、GSK-3β、磷酸化GSK-3β(P-GSK-3β)在血管壁中的蛋白表达水平。结果球囊组损伤后血管壁内膜明显增殖,新生内膜厚度不均;球囊组较假手术组内膜/中膜厚度明显增加(P<0.01)。球囊组IL-2 mRNA表达量比假手术组表达升高(P<0.01),球囊组GSK-3βmRNA表达量与假手术组差异无统计学意义(P>0.05)。球囊组血管组织CaN和NFATC1、P-GSK-3β蛋白表达量均较假手术组明显升高(P<0.05)。结论球囊损伤后血管内膜增殖,伴随CaN-NFAT信号通路及其负调控信号GSK-3β途径的活化。

活化的T细胞核内因子(NFAT)的调节及其在神经系统中的功能

活化的T细胞核内因子(nuclear factor of activated T-cells,NFAT)作为细胞信号转导通路中的一类重要的转录因子参与细胞功能的调节.NFAT的活化主要是通过细胞内钙/钙调神经磷酸酶(Ca2+/calcineurin)的刺激启动,它脱磷酸后发生核转位并与DNA的特定序列结合,同时通过与其它转录因子的协同作用,调节目的基因的特定表达.NFAT在免疫系统中所调节的基因表达已经得到了充分的研究.近年实验研究发现,NFAT的转录因子家族在脊椎动物的神经系统中也发挥着非常重要的作用.本文综述了NFAT家族蛋白的分类、结构、磷酸酶与激酶对其出入核的调节及在神经系统中的研究进展,使得能够更加全面地认识calcineurin/NFAT信号通路的作用.此外,由于环孢菌素A(cyclosporin A)等药物在神经系统应用的局限性,对于NFAT调节深入研究,也将为筛选或者开发更为高效、低毒药物提供新的思路.

CD137-CD137L信号通过CaM-CaN通路调控小鼠血管平滑肌细胞NFATc1表达

目的:探讨CD137-CD137L信号是否通过钙调蛋白-钙调神经磷酸酶(Calmodlin-Calcineurin,CaM-CaN)通路调控小鼠血管平滑肌细胞活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activated T cells c1,NFATc1)的表达。方法:采用改良组织贴块法原代培养小鼠血管平滑肌细胞。实验分两部分,第一部分细胞分组:对照组、CD137刺激组(激动型CD137抗体10μg/m L)和CD137抑制组(抑制型CD137抗体10μg/m L预孵30 min后+激动型CD137抗体10μg/m L);第2部分细胞分组:对照组、CD137刺激组(激动型CD137抗体10μg/m L)、si CaM组(si-CaM+CD137刺激组)和si CaN组(si-CaN+CD137刺激组)。分别采用蛋白质印迹和RT-PCR检测平滑肌细胞CaM、CaN及NFATc1的蛋白和mRNA表达水平。结果:(1)蛋白质印迹和RT-PCR结果显示,与对照组相比,CD137刺激组小鼠平滑肌细胞CaM、CaN及NFATc1表达明显升高(P<0.05);与CD137刺激组相比,CD137抑制组CaM、CaN及NFATc1表达显著降低(P<0.05)。(2)通过si-RNA技术分别沉默CaM和CaN后,与CD137刺激组相比,si CaM组CaM、CaN及NFATc1表达水平明显降低(P<0.05);si CaN组的CaM无明显改变(P>0.05),而CaN及NFATc1表达明显降低(P<0.05)。结论:CD137-CD137L信号可能通过CaM-CaN通路调控NFATc1的表达。

压力负荷下缬沙坦对钙调神经磷酸酶介导心肌肥大通路的影响

目的 :探讨压力超负荷模型下血管紧张素 ( Ang )受体拮抗剂缬沙坦对钙调神经磷酸酶 ( Ca N)介导心肌肥大通路的影响及 Ang 的致心肌肥厚作用。方法 :腹主动脉缩窄法建立大鼠压力超负荷模型 ,放射免疫法检测血浆、心肌 Ang 浓度 ,Western Blot检测心肌 Ca N,活化 T细胞核因子 ( NFAT3 )蛋白表达 ,发色底物法检测 Ca N比活性 ,并测定左室重量指数。结果 :缬沙坦组血浆 Ang 浓度高于对照组 ( P<0 .0 5 ) ,心肌 Ang 浓度则相反 ( P<0 .0 5 ) ,缬沙坦组 Ca N表达及活性低于对照组 ( P<0 .0 1) ,NFAT3 表达低于对照组 ( P<0 .0 5 ) ,两组各项指标与假手术组相比均差异显著。结论 :Ang 参与激活压力负荷下钙调神经磷酸酶通路 。

活化T细胞核因子家族与破骨细胞发育和分化

该文简要介绍了引起破骨细胞发育和分化的重要信号传导通路活化T细胞核因子/钙调神经磷酸酶通路及活化T细胞核因子家族成员促进破骨细胞发育和分化的分子机制。

基于钙调磷酸酶-活化T细胞核因子3信号转导通路探究四逆汤治疗心力衰竭的分子机制

目的:分析钙调磷酸酶-活化T细胞核因子3(CaN-NFAT3)信号转导通路在四逆汤治疗心衰过程中的分子机制。方法:取SPF级SD大鼠60只,分10只作为空白对照组外,余50只采用连续ip盐酸阿霉素(0.002 5 g.kg-1,每周1次,连续6周)方法复制大鼠心力衰竭模型,待造模成功后将动物分为模型对照组与四逆汤高、中、低剂量(5.6,2.8,1.4 g.kg-1)治疗组,用四逆汤水煎液治疗8 d后,分别检测CaN的活性、心肌钙含量、去磷酸化NFATc蛋白的相对表达。结果:四逆汤水煎液高、中剂量治疗组CaN活性均明显低于模型组(P<0.01)、钙含量明显升高(P<0.01)、大鼠心肌组织中去磷酸化NFATc/β-actin吸光度比值较模型对照组显著降低(P<0.01)。结论:CaN-NFAT3信号转导通路的抑制为四逆汤治疗心力衰竭的关键分子机制。

参附汤对心阳虚型慢性心力衰竭钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子3信号转导通路的影响

目的:观察参附汤对心阳虚型慢性心力衰竭大鼠的影响。方法:大鼠随机分为4组,正常组,模型组,地高辛组,参附汤组(按生药量计为5 g·kg-1,ig),除正常组外,均采用大鼠ip阿霉素4 mg·kg-1的方法建立心阳虚型慢性心力衰竭模型,每周1次,共6周。在造模的同时给药组每天ig给药1次,持续7周,末次给药后测心功能,取标本检测血清超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)含量,心肌钙调神经磷酸酶(CaN)含量、钙含量、活化T细胞核因子3(NFAT3)蛋白的相对表达。结果:与正常组比较,模型组心功能降低,体重降低,心脏指数升高,SOD活性降低,MDA含量升高,心肌CaN含量、钙含量、大鼠心肌组织中NFAT3/β-actin吸光度比值显著升高(P<0.01);与模型组比较,参附汤组心功能升高,体重增加,心脏指数降低,SOD活性升高,MDA含量降低,CaN含量、钙含量、大鼠心肌组织中NFAT3/β-actin吸光度比值降低(P<0.05);参附汤组对受损伤的心肌组织和心阳虚症状有一定的改善作用。结论:参附汤通过抑制CaN-NFAT3信号转导通路治疗心阳虚型慢性心力衰竭。

钙／钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子信号通路与T细胞活化及支气管哮喘关系的研究进展

钙／钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子信号通路作为T细胞内重要的生物信号转导通路，在T细胞活化中起到调节枢纽的作用，与Th细胞的分化及多种细胞因子的产生有密切关系；而T细胞的浸润和活化在支气管哮喘（简称哮喘）气道慢性炎症及气道重塑的发生、发展过程中具有重要的意义，因此，钙／钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子信号通路可能与哮喘的发生有密切关系，其在哮喘T细胞活化机制中的研究对于揭示哮喘的发病机制和治疗有重要的意义。

以活化T细胞核因子为靶点的免疫抑制剂的研究进展

免疫抑制剂环孢素A(CsA)和FK5 0 6都是通过与细胞中一个蛋白质家族亲免素家族 (im munophilinsfamily)受体结合形成免疫复合物来发挥作用。亲免素家族典型代表有亲环素 (cy clophilins)和FK5 0 6结合蛋白 (FK5 0 6bindingproteins ,FKBP) ,它们分别与CsA和FK5 0 6结合 ,药物 亲免素复合物形成后作用于它们的细胞靶点钙调磷酸酶 (CaN) ,继而又作用于它们的连锁靶点 ,即转录因子活化T细胞核因子 (NF AT)。NF AT从此引起广大学者的关注 ,本文综述了以NF