参麦注射液对大鼠心肌肥大模型血管紧张素Ⅱ介导的钙调神经磷酸酶通路的干预效应

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)介导的钙调神经磷酸酶(CaN)信号通路在大鼠心肌肥大中的作用,及参麦注射液逆转心肌肥厚可能的分子机制。方法腹主动脉缩窄法建立压力超负荷大鼠心肌肥大模型。实验动物按随机原则分为模型组、假手术组、参麦注射液治疗组、缬沙坦治疗组。放免法测定血清和心肌组织中的AngⅡ的含量,测定左室质量指数、心系数,应用免疫印迹(Western blot)法检测CaN蛋白表达。结果与假手术组比较,其它各组左室质量指数和心系数明显升高;缬沙坦组、参麦注射液组左室质量指数和心系数明显低于模型组。模型组、缬沙坦组、参麦注射液组血浆AngⅡ含量均高于假手术组;模型组、参麦注射液组心肌AngⅡ含量均高于假手术组;与模型组比较,缬沙坦组血浆AngⅡ含量显著升高,心肌AngⅡ含量降低。模型组CaN蛋白表达量显著高于假手术组,参麦注射液组、缬沙坦组CaN蛋白表达量低于模型组。结论证实过度激活的肾素血管紧张素(RAS)系统是心肌肥大发生发展的重要机制之一,AngⅡ介导的CaN信号通路在压力超负荷大鼠心肌肥大中起重要作用;参麦注射液对CaN信号通路致心肌肥大有抑制作用。

白念珠菌TFP1基因与钙调神经磷酸酶通路的相关性分析

目的构建白念珠菌TFP1基因敲除株,并初步分析白念珠菌TFP1基因与钙调神经磷酸酶通路相关基因的关系。方法通过融合PCR将白念珠菌TFP1基因上下游和营养缺陷筛选标记连接组成基因敲除组件,再运用醋酸锂转染法将一条基因敲除组件转入白念珠菌工程菌SN152,在营养缺陷平板上筛选出TFP1^(+/-)菌株,再运用同样的方法敲除第2条等位基因。采用实时荧光定量PCR的方法检测TFP1^(-/-)菌株、TFP1^(+/-)菌株以及SN152菌株RTA2和CRZ1基因的表达量。结果成功构建白念珠菌TFP1双等位基因敲除株,并且双等位基因敲除株中RTA2和CRZ1基因表达量均下降。结论敲除白念珠菌TFP1基因影响钙调神经磷酸酶通路相关基因RTA2和CRZ1的表达。

钙调神经磷酸酶信号通路相关抑制因子研究进展

钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)信号通路是介导心肌肥厚的一条重要通路,随着研究的不断深入, 其相关抑制因子的研究也受到了更多关注.综述了Ca2+CaN-NFAT信号通路上、下游及CaN本身的部分抑制因子在抗心肌肥大过程中的作用,这些因子的研究开发对心肌肥厚的治疗具有重要意义.

人参总皂苷抑制钙调神经磷酸酶信号通路参与其抗血管平滑肌细胞增殖作用

目的我们先前报道人参总皂苷(total ginsenosides,TG)具有抗血管平滑肌细胞(VSMC)增殖作用,本工作重点探讨该作用是否与其抑制钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)信号通路有关。方法采用来自大鼠胸主动脉的培养VSMCs,以real time RT-PCR检测CaN的mRNA表达,并用Western blotting检测CaN的催化亚基CnA的蛋白表达。结果 TG在抑制VSMC增殖的浓度(0.05 mg/mL和0.1 mg/mL)能显著抑制AngⅡ所引起的CaN mR-NA和CnA蛋白表达的升高。结论 TG抑制CaN信号通路可能是其抗VSMC增殖的分子机制之一。

当归挥发油对血管紧张素Ⅱ所致肥大心肌细胞CaN信号通路和T型钙通道的影响

目的观察当归挥发油对血管紧张素Ⅱ诱导的肥大心肌细胞内Ca^(2+)浓度、钙调神经磷酸酶(CaN)信号通路及T型钙通道相关基因Cav3.1、Cav3.2表达的影响,探讨当归挥发油抑制血管紧张素Ⅱ诱导心肌细胞肥大的作用机制。方法选择H9c2心肌细胞株,实验分为5组:正常组采用无血清培养液培养;血管紧张素Ⅱ组加入终浓度为10^(-4)mg/L的血管紧张素Ⅱ培养建立心肌细胞肥大模型;当归挥发油低、中、高剂量组均先加入终浓度为10^(-4)mg/L血管紧张素Ⅱ孵育2 h,后分别加入终浓度为5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L的当归挥发油培养;各组均培养24 h。激光扫描共聚焦显微镜观察各组心肌细胞内Ca^(2+)表达情况(以荧光强度表示其浓度),Western blot法检测心肌细胞中CaN、Cav3.1、Cav3.2蛋白表达情况。结果血管紧张素Ⅱ组心肌细胞存活率、心肌细胞内Ca^(2+)荧光强度和心肌细胞中CaN、Cav3.1、Cav3.2蛋白相对表达量均明显高于正常组(P均<0.05);当归挥发油各组心肌细胞存活率、心肌细胞内Ca^(2+)荧光强度和当归挥发油高、中剂量组细胞中CaN、Cav3.1、Cav3.2蛋白相对表达量均明显低于血管紧张素Ⅱ组(P均<0.05)。结论Ca^(2+)超载和CaN、Cav3.1、Cav3.2蛋白的过度表达与血管紧张素Ⅱ引起的心肌细胞肥大相关;当归挥发油可能通过拮抗血管紧张素Ⅱ引起的Ca^(2+)超载,下调CaN、Cav3.1、Cav3.2蛋白表达,抑制心肌细胞肥大。

川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠心脏成纤维细胞纤维化的影响

目的探讨川芎嗪(ligustrazine)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心脏成纤维细胞纤维化的机制及影响。方法体外培养SD大鼠乳鼠CFs,实验分为5组,A组(对照组):培养时不加干预药物;B组(AngⅡ组):加AngⅡ10-6mol/L;C组(川芎嗪低剂量组):AngⅡ10-6mol/L+川芎嗪5 mg/L;D组(川芎嗪中剂量组)AngⅡ10-6mol/L+川芎嗪10 mg/L;E组(川芎嗪高剂量组)AngⅡ10-6mol/L+川芎嗪20 mg/L,干预48 h后,采用RT-PCR法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及钙调神经磷酸酶催化亚基Aβ亚型(Cn Aβ)mRNA的表达情况;Western Blot法检测α-SMA及活化T细胞核因子3(NFAT3)的蛋白表达情况。结果与A组比较,B组α-SMAmRNA、Cn AβmRNA表达均显著增高,差异有统计学意义(P<0.05),α-SMA、NFAT3蛋白的表达也显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);与B组比较,C组α-SMAmRNA、Cn AβmRNA表达差异无统计学意义(P>0.05),α-SMA、NFAT3蛋白表达无统计学意义(P>0.05),D组和E组α-SMA、Cn Aβ的mRNA表达均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),α-SMA、NFAT3蛋白表达显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在一定浓度范围,川芎嗪以剂量依赖方式抑制AngⅡ诱导的SD大鼠CFs心肌纤维化过程,其机制可能与心脏成纤组细胞纤组化川芎嗪抑制CFs的钙调神经磷酸酶(Ca N)信号通路有关。

人参皂苷Rb1抗血管平滑肌细胞增殖与calcineurin通路及抗氧化作用的关系

目的观察人参皂苷Rb1(Rb1)抗血管平滑肌细胞增殖效应与钙调神经磷酸酶(CaN)信号通路的关系,并探讨该药抗增殖效应是否与其抗氧化作用有关。方法采用球囊导管损伤血管内皮造成大鼠颈动脉内膜增生,ip Rb1两周后,取血样测定过氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量变化;在培养的血管平滑肌细胞(VSMC)中加入血小板衍化生长因子-BB(PDGF-BB)诱导其增殖,给予Rb1 24 h后,观察VSMCs增殖和CaN mRNA表达的改变。结果 10、30 mg·kg-1·d-1Rb1给药两周使球囊损伤而变窄的大鼠颈动脉管腔面积明显扩大,伴有SOD活性升高和血中MDA水平的降低;在培养VSMCs中,加入抗增殖浓度Rb1(25、50、100μg·mL-1)后,显著下调PDGF-BB所致CaN mRNA的过度表达。结论 Rb1抗VSMC增殖效应至少部分与其抗氧化作用有关,并可能涉及其对CaN通路的抑制。