人钙调神经磷酸酶Aα RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

目的:构建人CaNAα(钙调神经磷酸酶催化亚基α异构体,calcineurin catalytic subunit alpha isoform)RNAi慢病毒载体PPP3CA-RNAi-LV并鉴定。方法:根据CaNAαmRNA选择靶区、设计合成shRNAs及无关对照序列,酶切连接pGCSIL-PUR载体,经测序鉴定阳性克隆,提取质粒、转染SBC-5细胞,经real-timePCR及Western blot检测CaNAα沉默水平;选择高沉默效率的pGCSIL-PUR-shRNA3进行慢病毒颗粒包装,浓缩纯化并滴定浓度后,-80℃保存备用。结果:与对照组相比,pGCSIL-PUR-shRNA3沉默效率最高,成功包装慢病毒颗粒,滴定浓度为1×109TU/ml。结论:成功构建人CaNAαRNAi慢病毒载体PPP3CA-RNAi-LV,为后续功能研究奠定基础。

钙调神经磷酸酶Aβ小干扰RNA筛选及对心肌细胞肥大的抑制

目的在细胞水平上筛选钙调神经磷酸酶(CaN)Aβ基因(mRNA)的小干扰RNA(siRNA)的干扰序列,为研究抑制在体心肌肥大的方法提供理论基础。方法针对CaNAβmRNA,参照siRNA设计原则,应用软件设计候选干扰序列,构建相应的小发夹RNA表达载体(si1053,si1280,si1539)。培养乳鼠心肌细胞,分为6组:空白对照组,肥大模型组(醛固酮诱导),肥大+si1280组,肥大+si1539组,肥大+si1053组,肥大+siGFP阴性对照组(转染针对GFP特定序列的shRNA质粒)。48h后显微镜下测量心肌细胞直径、CaNAβ及心房利钠因子(ANF)、β-重链肌球蛋白(β-MHC)mRNA水平。结果肥大模型组心肌细胞直径以及心肌组织CaNAβ、ANF、β-MHCmRNA表达水平较空白对照组明显增加(P<0.05)。肥大+si1053、肥大+si1280、肥大+si1539组细胞直径以及CaNAβ、ANFmRNA水平均较肥大模型组及肥大+siGFP阴性对照组降低(P<0.05),3组之间的CaNAβmRNA水平无明显差异(P>0.05),其中肥大+si1280组的细胞直径、ANF及β-MHCmRNA水平较肥大+si1053组、肥大+si1539组有明显减低(P<0.05)。结论成功构建CaNAβmRNA的小发夹RNA表达质粒,siRNA抑制CaNAβmRNA的表达,可抑制细胞水平醛固酮诱导的心肌细胞肥大;其中1280(21bp)为RNA干扰的相对更有效片段。

钙调神经磷酸酶Aβ在缺氧性右心室心肌肥厚中的表达及作用

目的 :探讨钙调神经磷酸酶Aβ(CalcineurinAbeta ,CnAβ)在大鼠慢性缺氧所致右心室心肌肥厚中的作用及抑制CnAβ活性对心肌肥厚的影响。方法 :SD大鼠 18只 ,采用随机分组设计 ,分为缺氧组、环孢菌素A(CsA)处理组及正常对照组。缺氧组、CsA处理组大鼠均置于缺氧仓内连续缺氧 14d ,缺氧第 1天始分别用CsA和生理盐水腹腔注射 ,每天 1次 ,共 14d ,同时与正常组作比较 ,观察缺氧及CsA对大鼠心肌肥厚程度的影响 ,用RT PCR半定量方法分析CnAβmRNA、ANPmRNA、β MHCmRNA、MLC 2mRNA表达的变化。结果 :①缺氧组大鼠右室与左室加室间隔的质量比 [R/(L +S) ]、右室质量 /体质量 (R/BW )高于正常组大鼠 (P <0 .0 1) ,CsA处理后R/(L +S)和R/BW值均低于缺氧组 (P <0 .0 1) ,与正常组大鼠比较差异无显著性意义 ;②缺氧组大鼠CnAβmRNA、ANPmR NA、β MHCmRNA、MLC 2mRNA表达均高于正常组大鼠 (P <0 .0 1) ,CsA处理后CnAβmRNA、ANPmRNA、β MHCmRNA、MLC 2mRNA表达水平均明显低于缺氧组 (P <0 .0 1) ,与正常组比较差异均无显著性意义 (P >0 .0 5 )。结论 :CnAβ参与慢性缺氧性大鼠右心室心肌肥厚 ,抑制CnAβ活性可预防其心肌肥厚 ,本研究为利用CnAβ受体抑制剂治疗心肌肥厚提供了实验依据。

应用siRNA抑制由醛固酮诱导的大鼠肥大心肌细胞中钙调神经磷酸酶AβmRNA的表达

目的:本研究通过应用RNA干扰的方法,观察了钙调神经磷酸酶(CaN)在醛固酮(A ld)诱导的大鼠心肌细胞肥大时其AβmRNA表达水平。方法:在A ld诱导心肌细胞肥大模型上同时转染CaN AβmRNA靶标siRNA及其阴性对照进行转染。通过免疫荧光染色及RT-PCR方法检测CaN Aβ蛋白及mRNA的表达,同时测定心肌细胞面积变化。结果:A ld组CaN AβmRNA表达较对照组显著升高,细胞表面积显著增加;CaN AβmRNA靶标siRNA组细胞浆中绿色荧光表达比siRNA阴性对照组少,即CaN蛋白表达量siRNA组较siRNA阴性对照组减少,RT-PCR检测结果显示siRNA组CaN AβmRNA表达较siRNA阴性对照组受到明显抑制,细胞面积siRNA阴性对照组较siR-NA组增加。结论:siRNA可抑制钙调神经磷酸酶AβmRNA的表达,对于心肌细胞中基因功能的研究,RNA干涉可以作为应用工具。

钙调神经磷酸酶Aβ基因沉默的乳鼠肥大心室肌细胞内向整流钾电流和动作电位的变化

目的观察钙调神经磷酸酶Aβ亚基(Cn Aβ)基因沉默的乳鼠肥大心室肌细胞内向整流钾电流(Ik1)和动作电位的变化。方法 1天龄SD乳鼠,分离心室肌细胞,培养48 h后换为无血清培养基,将细胞分为A、B、C、D组。A组加入MOI=50的腺病毒空载体,感染6 h时更换成2倍体积新鲜无血清DMEM,培养48 h。B组加入MOI=50的腺病毒空载体,感染6 h换为2倍体积新鲜无血清DMEM,感染24 h时加入终浓度为100μmol/L的PE,培养48 h。C组加入MOI=50的A1,感染6 h时换成2倍体积新鲜无血清DMEM,感染24 h时加入终浓度为100μmol/L的PE,培养48 h。D组加入MOI=50的重组腺病毒sh RNA干扰载体介导沉默编码Cn Aβ的基因(AdCn Aβsh RNA1,A1),感染6 h时换成2倍体积新鲜无血清DMEM,培养48 h。采用Western blotting法检测各组心室肌细胞Cn Aβ蛋白,采用全细胞膜片钳实验检测Ik1,观察并记录动作电位复极20%、50%和90%(APD20、APD50、APD90)时的动作电位。结果 A、B、C、D组心室肌细胞Cn Aβ蛋白相对表达量分别为1. 0±0. 01、2. 59±0. 30、1. 00±0. 16、0. 82±0. 16; B组与A组比较,P <0. 05; C组与B组比较,P <0. 05。与A组比较,B组-140 m V～-90m V时心室肌细胞Ik1电流密度降低(P均<0. 05);与B组比较,C组心室肌细胞Ik1电流密度升高(P均<0. 05)。与A组比较,B组心室肌细胞APD20、APD50、APD90均延长(P均<0. 05);与B组比较,C组B组心室肌细胞APD20、APD50、APD90均缩短(P均<0. 05)。结论 Cn Aβ基因沉默的乳鼠肥大心室肌细胞Ik1电流密度升高,心室肌细胞APD20、APD50、APD90均降低。Cn Aβ可能通过调节Ik1电流密度减小、APD延长参与心室肥大的发生发展。

新型钙调神经磷酸酶抑制药伏环孢素临床研究进展

伏环孢素是一种口服新型钙调神经磷酸酶抑制药,是环孢素A的衍生物,主要用于治疗自身免疫性疾病,如银屑病、非感染性葡萄膜炎和器官移植后排斥反应。2021年1月,基于两个Ⅱ期和Ⅲ期临床试验的积极结果,FDA批准伏环孢素与标准治疗方案联合用于治疗成人活动性狼疮肾炎。目前,也有研究在探索伏环孢素用于新型冠状病毒感染的肾移植患者。本文对伏环孢素的作用机制、药动学和药效学、用法用量、联合用药和疾病中应用进行归纳总结,为其临床用药提供参考。

钙调神经磷酸酶在老年子宫内膜癌中的表达及其相关性分析

目的:探讨钙调神经磷酸酶(CN)在老年子宫内膜癌中的表达及其相关性。方法:选取本院收治的50例老年子宫内膜癌患者作为研究对象,另选取50例正常子宫内膜组织样本作为对照组,采用免疫组化方法检测正常子宫内膜组织和子宫内膜癌组织中CN的表达,比较子宫内膜癌患者不同病理特征中CN阳性表达率的差异。采用多因素Logistic回归分析CN阳性表达的影响因素;Kaplan-Meier法分析CN表达与预后的相关性。结果:子宫内膜癌组织CN的阳性表达率显著高于正常子宫内膜组织。FIGOⅢ-Ⅳ期患者的CN阳性表达率显著高于FIGOⅠ-Ⅱ期患者(P<0.05)。肌层浸润深度>1/2患者的CN阳性表达率显著高于肌层浸润深度<1/2患者(P<0.05)。CN阴性的子宫内膜癌患者平均生存时间显著高于CN阳性的患者(P<0.05)。结论:老年子宫内膜癌组织中CN的表达与FIGO分期、肌层浸润深度及患者的预后密切相关。

钙调神经磷酸酶依赖的信号通路参与血管紧张素Ⅱ刺激的心肌细胞肥大

本研究观察了钙调神经磷酸酶（CaN）依赖的信号通路在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠心肌细胞肥大中的作用。在AngⅡ刺激的大鼠心肌细胞肥大模型上，应用环孢素A（CsA）阻断CaN通路，观察心肌细胞3H-亮氨酸掺入、CaN、MAPK及PKC活性的变化。结果表明，AngⅡ（10－7mol/L）刺激大鼠心肌细胞3H-亮氨酸掺入校对照组增高46％（P＜0．01），CsA（0．5－5μg/ml）可以浓度依赖性方式抑制AngⅡ刺激的心肌细胞3H-亮氨酸掺入；同时观察到AngⅡ刺激的大鼠心肌细胞CaN及PKC活性分别较对照组增高39％和280％（P＜0．001），CsA可明显抑制AngⅡ刺激的心肌细胞CaN活性增加，但对PKC活性没有明显影响。实验还观察到MAPK特异性抑制剂PD098059亦可显著抑制AngⅡ刺激的心肌细胞3H-亮氨酸掺入。结果提示，CaN依赖的信号通路可能在AngⅡ诱导的心肌细胞肥大中起重要作用。

钙调神经磷酸酶在大鼠不同组织中的分布及活性

目的 :观察钙调神经磷酸酶 (CaN)在大鼠不同器官组织中的活性和蛋白分布。方法 :取正常大鼠不同器官组织 ,应用Westernblot及免疫组织化学方法测定CaN催化亚单位α亚型 (CnAα)在各组织中的蛋白含量及分布 ,并用 [32 P]标记的底物肽测定各组织的CaN活性。结果 :①Westernblot结果显示 ,CnAα在大鼠脑组织中有丰富表达 ,心脏、骨骼肌和肺中亦有表达 ,但肾脏及主动脉未检测出有CnAα表达。②免疫组织化学显示 ,大鼠脑组织、心肌细胞胞浆内、肺内巨噬细胞及细支气管周围的结缔组织、主动脉外膜、肾小血管周围结缔组织及肾远曲小管及集合管的外壁中存在免疫反应阳性产物。③CaN活性在脑组织最高 ,其次为骨骼肌、心肌和肺组织 ,主动脉和肾脏最低。结论 :钙调神经磷酸酶在体内具有广泛分布 。

钙调神经磷酸酶信号通路在AngⅡ刺激的大鼠VSMCs增殖中的作用

目的:探讨钙调神经磷酸酶（calcineurin,CaN）依赖的信号通路在血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）刺激的大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖中的作用。方法:采用组织贴块法,体外原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞;Ang Ⅱ刺激培养的大鼠 VSMCs增殖;CaN特异性抑制剂环孢素 A（CsA）阻断Ang Ⅱ刺激的大鼠VSMCs中CaN依赖的信号转导通路;观察各因素对CaN活性、细胞增殖活度、增殖细胞核抗原（PCNA）表达水平的影响。结果:在一定范围内,Ang Ⅱ（10-8～10-6mol/L）以浓度依赖性方式增加VSMCs的CaN活性,同时细胞增殖活度（AMTT值）增高,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.01或P<0.001）。CsA（1 μmol/L）抑制CaN活性后,明显降低Ang Ⅱ（10-7mol/L）刺激的VSMCs增殖活度及核内PCNA的表达水平（OD值）,与Ang Ⅱ组比较,差异显著（P<0.001）。结论:CaN依赖的信号通路在Ang Ⅱ刺激的血管平滑肌细胞增殖中发挥重要作用。

钙调神经磷酸酶在耐力运动大鼠骨骼肌纤维类型和大小转变中的作用

目的:探讨钙调神经磷酸酶(CaN)在耐力运动时骨骼肌纤维类型和大小转变中的作用。方法:雄性SD大鼠(150~200g)随机分成对照组和运动组。运动组大鼠进行6周无坡度跑台训练(20m/min^28m/min),并在第3周末进一步随机分成2组:运动+环孢素组,皮下注射环孢素(CSA,15mg/kg体重/day)3周;单纯运动组,注射等量生理盐水。各组大鼠第6周末取比目鱼肌和趾长伸肌,分别用SDS-PAGE电泳法和肌纤维ATP酶染色法测定肌球蛋白重链(MHC)组成比例和肌纤维横断面积,同时用比色法测CaN活性,并用Westernblotting法测CaN和活化T细胞核因子2(NFAT2)蛋白含量。结果:单纯运动组大鼠比目鱼肌MHCⅠ比例(93.4±6.0%)显著高于对照组(82.7±6.6%),而运动+环孢素组大鼠MHCⅠ比例(79.3±8.4%)无增加,但其Ⅰ型肌纤维横断面积显著小于对照组和单纯运动组(P<0.05)。单纯运动组大鼠趾长伸肌胞浆CaN活性及胞核NFAT2蛋白含量显著高于对照组(P<0.05),但纤维比例无显著改变(P>0.05);运动+环孢素组大鼠趾长伸肌肌原纤维蛋白浓度显著高于单纯运动组(P<0.05),且该组各型肌纤维横断面积均显著小于对照组和单纯运动组(P<0.05)。结论:CaN参与了耐力运动骨骼肌纤维类型和大小的调控,且具有肌肉特异性。

钙调神经磷酸酶信号通路参与前列腺素F_(2α)诱导的心肌肥厚(英文)

利用野百合碱(monocrotaline,MCT)诱导大鼠右心室肥厚模型和培养乳鼠心肌细胞,研究前列腺素F2α(prostaglandin F2α,PGF2α)在心肌肥厚中的作用及钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)信号通路在其中的作用。在雄性Sprague-Dawley大鼠中,用MCT(60 mg／kg)单次i．p．诱导右心室肥厚,同时用塞来昔布(20 mg／kg)预防／治疗给药2周。用病理检测、电镜观察等方法观察心肌肥厚时组织病理改变;EIA试剂盒检测心肌组织PGF2α含量;RT-PCR检测心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide, ANP)和CaN mRNA的表达;用蛋白免疫印迹法检测CaN及其下游因子NFAT3和GATA4蛋白质的表达。以心肌细胞直径、蛋白含量和ANP mRNA表达的变化为0．1μmol／L PGF2α诱导心肌细胞肥大的指标。以CaN mRNA表达作为该信号通路的主要指标,并观察CaN抑制剂环孢素A对PGF2α所致心肌细胞肥大和CaN mRNA表达的影响。结果显示:MCT注射2周(M2W 组),右心室肥厚指数(RVHI)、右心室／体重比及肺重／体重比分别增加了47％、53％和118％;注射后4周(M4W组)增加了 64％、94％及156％。电镜观察发现右心室组织损伤。同时,右心室组织PGF2α含量在M2W和M4W组分别增加了44％和 51％,与RVHI、ANP和CaN的mRNA表达,及CaN／NFAT3／GATA4的蛋白质表达均呈正相关。环氧酶抑制剂塞来昔布预防和治疗给药均明显改善MCT诱导的组织病理学改变。在离体细胞培养中,PGF2α(0．1μmol／L)明显使心肌细胞增大,蛋白质含量增加,ANP和CaN mRNA表达增强;同时,CaN抑制剂环孢素A明显抑制PGF2α诱导的心肌细胞肥大和CaN mRNA 表达。上述结果提示:心肌组织局部PGF2α参与了MCT诱导的心肌肥厚过程,CaN信号通路是其细胞内信号转导通路之一。

钙调神经磷酸酶介导碱性成纤维细胞生长因子诱导的大鼠心肌细胞肥大

目的 :观察钙调神经磷酸酶 (calcineurin ,CaN)在碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)诱导心肌细胞肥大中的作用。方法 :在原代培养的大鼠心肌细胞上 ,应用双波长荧光光度计检测心肌细胞游离Ca2 +浓度 ;应用对硝基苯磷酸 (p nitrophenylphosphate,PNPP)作底物测定CaN活性 ;根据3H 亮氨酸参入水平评估各种信号通路阻断剂对bFGF刺激的心肌细胞蛋白质合成速率的影响。结果 :bFGF刺激心肌细胞 2 4h后 ,胞内游离Ca2 +浓度较对照组增高 2 72 % (P <0 .0 1) ;同时 ,bFGF刺激的心肌细胞CaN活性较对照组增高 173 %(P <0 .0 1)。bFGF( 6 0 μg·L-1)刺激的心肌细胞3H 亮氨酸参入较对照组增高 10 6 % (P <0 .0 1) ;CsA( 0 .1～ 10 μmol·L-1)可以浓度依赖的方式抑制bFGF刺激的心肌细胞3H 亮氨酸参入。此外H7(PKC抑制剂 )和 5 0 μmol·L-1PD980 59(MAPK抑制剂 )亦可完全阻断bFGF刺激的心肌细胞3H 亮氨酸参入。结论 :Ca2 +/CaN信号通路参与bFGF诱导心肌细胞肥大的信息传递。另外 。

大鼠局灶脑缺血后钙调神经磷酸酶活性和含量变化

目的 研究大脑中动脉闭塞后钙调神经磷酸酶 (Calcineurin,Ca N)的活性和含量变化规律 ,探讨Ca N在脑缺血中的作用。方法 制备大鼠大脑中动脉永久性闭塞模型 ,分别测定缺血后不同时间点病灶侧大脑皮质和海马 CA1 区 Ca N的活性和含量。结果 皮质组织在缺血 6h及其后各时间点 Ca N的含量下降 ,其活性于缺血后 4h、6h和 12 h短暂性增强。海马 CA1 区 Ca N的含量于缺血后 2 4h开始降低且不恢复 ;Ca N的活性在缺血后 2 h、4h和 6h减弱 ,12 h始恢复至正常水平。可见 ,Ca N的活性与含量分离。结论 局灶脑缺血后 Ca N独特的时间变化规律显示其参与介导缺血性神经元损伤 。

钙调神经磷酸酶在L-精氨酸抗心肌肥厚中的作用

目的研究L-精氨酸抗右心室心肌肥厚作用及其与钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)信号通路的关系。方法利用野百合碱(monocrotaline,MCT)诱导大鼠右心室心肌肥厚模型和前列腺素F2α(prostaglandin F2α,PGF2α)诱导心肌细胞肥大模型,分别以右心室肥厚指数(right ventricle hypertro-phy index,RVHI,即右心室/左心室+室间隔)、心肌细胞直径、蛋白含量和心房利钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)mRNA表达为心肌肥厚指标。用RT-PCR法检测mRNA的表达;Western blot法检测蛋白表达;荧光法检测细胞内钙[Ca2+]i的变化情况。结果L-精氨酸200mg.kg-1.d-1预防和治疗给药均明显抑制MCT诱导的大鼠心肌肥厚,降低MCT所致心肌CaN mRNA和蛋白及其下游因子NFAT3及GATA4蛋白表达的增加。L-精氨酸1mmol.L-1也明显抑制PGF2α100nmol.L-1诱导的大鼠心肌细胞肥大和[Ca2+]i升高,阻遏其诱导的CaN mRNA及CaN-,NFAT3-,GATA4-蛋白表达升高。在体和离体实验中一氧化氮合成酶抑制剂NG-硝基-L-精氨酸-甲酯均可完全阻断L-精氨酸的作用。结论L-精氨酸可能通过降低[Ca2+]i,从而抑制CaN信号转导通路而产生抗右心室心肌肥厚作用。

钙调神经磷酸酶在血管紧张素Ⅱ刺激的心脏成纤维细胞增殖中的作用

本研究观察了钙调神经磷酸酶 (CaN)在血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )刺激的大鼠心脏成纤维细胞增殖中的作用。在培养的大鼠心脏成纤维细胞上 ,应用双波长荧光光度计检测Fura 2标记的细胞游离Ca2 +浓度 ;应用对硝基苯磷酸 (PNPP)作底物测定钙调神经磷酸酶 (CaN)活性 ;根据 3H 胸腺嘧啶掺入法评估CaN特异性抑制剂环胞素A(CsA)对AngⅡ刺激的心脏成纤维细胞DNA合成的影响。结果表明 ,AngⅡ (10 -7mol/L)刺激培养的大鼠心脏成纤维细胞 3H 胸腺嘧啶掺入较对照组增高 72 % (P <0 0 1) ,CsA可以抑制AngⅡ刺激的细胞 3H 胸腺嘧啶掺入。AngⅡ刺激的大鼠心脏成纤维细胞胞内Ca2 +浓度及CaN活性较对照组分别增高 112 % (P <0 0 1)和 17% (P <0 0 5 )。结果提示 ,CaN在一定程度上参与AngⅡ诱导的心脏成纤维细胞增殖的信号传递。

替米沙坦对大鼠动脉血清钙调神经磷酸酶的影响

目的研究替米沙坦对动脉血清钙调神经磷酸酶(CaN)影响。方法92只同龄SD大鼠随机分为对照组(N)、假手术组(S)、2K1C+蒸馏水组(K)、2K1C+替米沙坦组(T)。N组不加任何干预,S组分离左肾动脉不缩窄,K组和T组缩窄左肾动脉,建立肾血管性高血压模型。术后第3周始,T组灌胃给替米沙坦10mg.(kg.d)-1,K组灌胃给蒸馏水10mg.(kg.d)-1。在术后第4、6、10周末,超声心动图观察心脏结构及功能,每组至少取6只开腹,经腹主动脉插管测血压,收集腹主动脉血后处死,分离血清,酶联免疫吸附技术(ELISA)检测CaN水平,比色法测CaN活性。结果①与N组、S组比较,K组血压(收缩压、舒张压)明显升高(P<0.01),经替米沙坦治疗后,血压明显降低(P<0.01);②K组舒张末期室间隔厚度、收缩末期室间隔厚度、舒张末期左室后壁厚度、收缩末期左室后壁厚度明显增加(P均<0.01),替米沙坦治疗后,左室壁厚度均明显下降(P均<0.01);③K组动脉血清CaN水平明显升高(P<0.01),替米沙坦治疗后,动脉血清CaN水平明显降低(P<0.01)。结论外周动脉血CaN水平在左室肥厚中也发生改变;替米沙坦抑制左心室重构作用,其机制可能与其降低循环中CaN水平有关。

钙调神经磷酸酶调节因子RCANs的研究进展

钙调神经磷酸酶(calcineurin,CN)作为机体中的一种丝/苏氨酸磷酸酶,在关键的生物学过程中发挥着重要作用.RCANs(regulators of calcineurin)是CN的一类内源调节因子,其家族成员在细胞中能够通过与CN在结构上的相互结合,起到调节CN活性的作用.而近来研究发现,该调节因子还可参与到CN-NFAT信号通路中发挥功能,从而与CN依赖的生理和病理过程的调控密切相关.因此,有必要对RCAN基因、RCANs蛋白与CN的相互作用以及该家族成员在病理条件下的重要功能作一个较为全面的综述,这些基础研究工作的进展将有助于为寻找新的疾病治疗方法和药物开辟新的途径.

日本血吸虫钙调神经磷酸酶B基因的获得和分析

目的 从日本血吸虫 (Schistosomajaponicum ,Sj)成虫cDNA文库中获得并分析日本血吸虫新的蛋白基因 ,为日本血吸虫病的防治提供侯选疫苗和药物靶点。方法 构建日本血吸虫成虫cDNA文库 ,挑取重组阳性克隆进行测序 ,对部分序列进行步移法测序获取全长cDNA ,并进行生物信息学分析和登录。结果 获得了 1个日本血吸虫新基因 -钙调神经磷酸酶 (Calcineurin ,CaN)基因B(AY2 2 0 75 1) ,长 12 6 6bp ,编码 16 9个氨基酸 ,含有 2个“EF -hand”Ca+2 结合区域 ,与曼氏血吸虫CalcineurinB有 84 %的同源性。

外源性醛固酮调控大鼠心肌钙调神经磷酸酶的研究

目的 研究外源性醛固酮诱导的心肌内肥大信号分子———钙调神经磷酸酶(CaN)活性和分布变化及其调控机制。方法 取雄性Wistar大白鼠 2 1只 ,随机分为 3组 ,醛固酮 (Ald)组 (以Ald 1 8μg/d腹腔内注射 4周 )、螺内酯组 (以Ald处理同时予螺内酯2 0mg·kg-1 ·d-1 灌胃 4周)及正常对照组。以放免法测血Ald、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和内皮素 (ET)浓度 ;以硝酸盐法测定血NO浓度 ;以改良底物发色法测得心肌组织CaN活性 ;以免疫组化法观察CaNAβ抗原在心肌细胞内的分布。结果 Ald组大鼠血Ald浓度较对照组上升了 1 6 2倍 ;血NO-3 浓度明显下降 ;而Ald /NO-3 上升了 2 95倍 ,心肌组织CaN活性升高了 1 4 7倍 ;CaNAβ抗原分布于细胞浆 ,在近胞膜处及细胞核周CaNAβ染色加深。螺内酯干预使血AngⅡ浓度下降、NO-3 浓度明显升高 ;Ald/NO-3 、ET/NO-3 、AngⅡ/NO-3 和心肌组织CaN活性均明显下降 ;近胞膜处及细胞核周CaNAβ染色减轻。结论 醛固酮可能是内皮活性物质稳态失衡及心肌细胞内信号分子 CaN激活的重要刺激因子。目的 研究外源性醛固酮诱导的心肌内肥大信号分子———钙调神经磷酸酶(CaN)活性和分布变化及其调控机制。方法 取雄性Wistar大白鼠 2 1只 ,随机分为 3组 ,醛固酮 (Ald)组 (以Ald 1