脂多糖、钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂对TNBS诱导BALB/C小鼠炎症性肠病的影响

目的探讨脂多糖、钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN62预处理对三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的小鼠炎症性肠病的影响。方法将BALB/C雌性小鼠随机分为4组:正常对照组(NC组)、模型对照组(UC组)、脂多糖组(LPS组)、钙/钙调素依赖性蛋白激酶抑制剂组(KN62组)。LPS组、KN62组、UC组小鼠分别预先腹腔注射LPS溶液(5mg/kg)、KN62溶液(25ng/小鼠)、生理盐水,再予2,4,6-三硝基苯磺酸(100mg/kg)乙醇溶液(共100μl)灌肠;NC组予等体积生理盐水灌肠。观察指标包括:疾病活动指数(DAI)、结肠黏膜病理组织学损伤评估(HI),RT-PCR法检测各组结肠黏膜中IL-6mRNA表达的水平,流式细胞仪检测结肠固有层单个核细胞MHC-Ⅱ类分子活性的表达水平。结果模型对照组(UC)的DAI、结肠黏膜病理组织学评分明显高于正常对照组(NC组)差异有统计学意义;LPS组DAI、结肠黏膜病理组织学评分高于UC组,差异有统计学意义;KN62组的DAI、结肠黏膜病理组织学评分低于UC组;UC组结肠黏膜的IL-6mRNA及MHC-Ⅱ类分子活性的表达都高于NC组,均P<0.05,差异有统计学意义;各项检测指标在LPS组高于UC组均P<0.05;KN62组明显低于UC组,差异有统计学意义。结论钙/钙调素依赖性蛋白激酶抑制剂(KN62)干预后,该组小鼠的临床症状减轻、结肠黏膜病理组织学表现改善,IL-6mRNA、MHC-Ⅱ类分子活性的表达均较模型对照组明显降低,提示KN62可减轻结肠炎症反应,对机体有保护作用。

钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂对心房肌细胞钙超载的影响

目的探讨钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ,CaMK Ⅱ)抑制剂KN93对大鼠心肌细胞钙超载及CaMK Ⅱ蛋白表达的影响。方法培养大鼠心房肌细胞原代细胞,应用钙离子导入剂ionomycin(1.0μmol/L)诱导心肌钙超载模型,KN93(0.25、0.5、1.0μmo/L)作用下,Fluo-3/AM负载心房肌细胞,激光共聚焦显微镜观察心房肌细胞的收缩频率及细胞游离[Ca2+]i的动态变化,计算平均钙瞬变幅度;采用Western blot法检测CaMKⅡ表达水平。结果 KN93可抑制ionomycin诱导的心肌细胞钙超载,且其抑制率与KN93呈剂量依赖关系,KN93可使心房肌细胞CaMKⅡ表达下降。结论 CaMK Ⅱ抑制剂KN93可纠正ionomycin诱发的大鼠心房肌细胞的钙超载,并下调细胞CaMKⅡ表达水平。

钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ及其抑制剂

钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ是一种多功能的蛋白激酶。由α、β、γ、δ四种亚单位组成,编码十多种同工酶。CaMK Ⅱ在不同组织中的分布及在不同细胞中的基因表达不同。在调节神经元的活动、肌肉的收缩、细胞周期的控制、细胞的分泌、DNA损伤的修复、碳水化合物的代谢、基因的表达等方面有着重要的生物学作用。CaMK Ⅱ的抑制剂是研究CaMK Ⅱ生理功能的有效途径之一。CaMK Ⅱ的抑制剂有多种,目前报道的有人工合成的抑制剂和鼠细胞来源的抑制剂。

小分子细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制剂flavopiridol联合泰素治疗卵巢癌的实验研究

目的:检测flavopiridol联合泰素对人卵巢癌细胞系SKOV3、裸鼠人卵巢癌皮下及腹腔移植瘤模型的治疗作用。方法:应用CCK-8法、流式细胞术和原位细胞凋亡检测法(TUNEL)检测flavopiridol和泰素作用后卵巢癌细胞系SKOV3的细胞存活率和凋亡率;应用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测作用前后细胞中cyclinD1的表达:应用ELISA法检测细胞中活性caspase-3的表达。建立裸鼠人卵巢癌皮下及腹腔移植瘤模型,观测flavopiridol和泰素治疗前后裸鼠肿瘤体积的变化并计算抑瘤率,用TUNEL和免疫组化法分别检测作用前后肿瘤组织中的凋亡情况和微血管密度(MVD)值。结果:flavopiri-dol(300nmol/L)或泰素(1μmol/L)单独应用24h均能显著降低细胞存活率,增强caspase-3活性,诱导细胞凋亡,并下调细胞中cyclinD1的表达。Taxol先作用24h再用flavopiridol作用24h的联合用药对二者的上述作用产生显著的协同效应:联合用药后细胞存活率为(5.2±0.8)%,凋亡率为(51.10±2.52)%,caspase-3活性相对值为0.602±0.008,cy-clinD1相对表达水平为0.264±0.076。Flavopiridol和泰素单独应用均能显著抑制皮下移植瘤生长(抑瘤率分别为84.5%和85.7%),并降低肿瘤组织MVD值(分别为12.4±4.7vs 35.2±10.3和15.2±2.9 vs 35.2±10.3)。二者联合应用抑瘤作用稍差(抑瘤率68.9%),抑制MVD作用(23.0±5.1 vs 35.2±10.3)也不及单药治疗。结论:Flavopiridol和泰素均能通过致凋亡作用显著抑制卵巢癌细胞及移植瘤生长,二者联合应用对体外培养的卵巢癌细胞具有协同杀伤作用,但体内治疗中无协同抑瘤作用。

小分子3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1抑制剂研究进展

3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)是AGC激酶家族中的成员之一,能激活AGC激酶家族中多种其他激酶。PDK1也是PI3K/Akt信号转导途径的重要成员,在细胞生长、增殖及代谢过程中发挥着重要作用,PDK1的异常活化与肿瘤的形成密切相关。因此,PDK1抑制剂的研究对癌症治疗新型药物的发现有一定推动作用。本文主要对近年以PDK1为靶标的小分子激酶抑制剂的研究进展进行综述。

钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ及其抑制剂在心力衰竭中的研究进展

心力衰竭(HF)是多种心脏疾病的终末共同通道,患者病死率高,生存质量差,已成为重要的公共卫生问题之一。在HF发展过程发生的大量分子变化中,蛋白激酶途径的改变通常起关键的介导作用,蛋白激酶将上游病理应激信号与下游调节程序联系在一起,从而影响心肌结构和功能的完整性。钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)是一种重要的蛋白激酶,它控制着各种各样的钙离子依赖性过程。在心肌细胞中,CaMKⅡ直接调节许多离子通道和钙转运调控蛋白,并控制越来越多的转录本及其下游产物的表达。CaMKⅡ是心脏应激时电生理和收缩反应的中心介质,在心脏疾病中的过度激活与HF和心律失常有关。

钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱα对阿片诱导痛觉过敏大鼠中央杏仁核抑制性突触后电流的影响

目的探讨钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱα(CaMKⅡα)对阿片诱导痛觉过敏(OIH)大鼠中央杏仁核(CeA)抑制性突触后电流的影响。方法实验一:取雄性SD大鼠12只,随机分为对照组和KN93组,每组右侧CeA立体定位置管恢复1周后经颈皮下注射芬太尼(60 μg/kg×4次,间隔15 min)造OIH模型,随后对照组及KN93组大鼠CeA区分别注射50%DMSO 0.5 μl或CaMKⅡα抑制剂KN93 10 nmol,记录给药前后大鼠机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。实验二:另取雄性SD大鼠32只,随机分为Con-1组、Con-2组、OIH-1组和OIH-2组,建模成功后制成脑片,其中Con-1组与OIH-1组用膜片钳记录CeA区神经元自发抑制性突触后电流(sIPSCs);Con-2组和OIH-2组记录CeA区神经元微小抑制性突触后电流(mIPSCs),观察加用KN93 10 μmol/L前后上述电流幅值和频率的变化。结果实验一:与造模前比较,造模后两组MWT和TWL均明显降低(P < 0.01);与造模后比较,给药后KN93组MWT和TWL明显升高(P<0.01)。实验二:与Con-1组比较,OIH-1组sIPSCs幅值和频率明显降低(P<0.05),给药后OIH-1组sIPSCs幅值和频率明显升高(P<0.05),但对Con-1组无明显影响;与Con-2组比较,OIH-2组mIPSCs幅值和频率亦明显降低(P<0.05),给药前后OIH-2组与Con-2组mIPSCs幅值和频率差异无统计学意义。结论CaMKⅡα可抑制CeA区自发抑制性突触后电流,这可能是CaMKⅡα调制阿片诱导痛觉过敏的机制之一。

钙信号早期干预对大鼠心肌细胞钙调素依赖性蛋白激酶信号途径及细胞凋亡的影响

通过建立肥大心肌细胞模型,研究钙通道阻滞剂对心肌细胞钙调素依赖性蛋白激酶II(calcium/calmodulin-dependent protein kinase II,CaMKII)的表达及钙离子浓度的变化对钙泵、ATP凋亡信号调节激酶(apoptosis signal-regulation kinase1 ASK1)、细胞活力及细胞凋亡率的影响,深入了解钙离子拮抗剂在心肌细胞肥大过程中的作用。通过早期应用钙离子拮抗剂,可以明显改善CaMKII信号系统的活性,保持心肌细胞内钙稳态,抑制心肌细胞的凋亡。

钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在心血管疾病中的作用进展

钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)是许多心血管疾病的关键酶。CaMKⅡ能通过自身磷酸化、氧化、巯基亚硝基化和O-乙酰氨基葡萄糖修饰来调节多种细胞过程。许多研究表明,CaMKⅡ信号通路广泛影响心血管系统的生理活动,对于心律失常、心力衰竭及糖尿病心肌病等心血管疾病的发生发展发挥着重要的作用。本文收集了近年来对CaMKⅡ的组成结构和激活途径的研究,总结了CaMKⅡ信号通路对心血管疾病的调控作用,以及CaMKⅡ抑制剂和基因编辑对心血管疾病的治疗作用,为以后CaMKⅡ抑制剂药效及成药性的研究提供相关的理论依据及思路。

蛋白激酶CK2及其抑制剂与头颈部鳞癌的关系

蛋白激酶CK2是真核细胞中普遍存在的第二信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,目前蛋白激酶CK2已成为抗肿瘤的重要靶点之一,其抑制剂具有抗肿瘤作用。本文简介了蛋白激酶CK2的分子结构、主要功能及其作用机制,蛋白激酶CK2抑制剂的分类及其作用机制,蛋白激酶CK2及其抑制剂与头颈部鳞癌的关系。

钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在心律失常中作用的研究进展

钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ已成为许多心脏疾病特别是心律失常的关键酶,尽管近年来已经阐明了导致钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ激活的许多途径,但几乎没有任何影响钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ活性的临床上可行的化合物从基础体外研究发展到体内研究。现重点介绍抑制钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ的抗心律失常策略的最新进展。并将详细论述钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂在心房颤动、遗传综合征、窦房结功能障碍中的抗心律失常作用及具有潜在临床应用的新型钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂。

钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ与心力衰竭关系的研究进展

心力衰竭的发生发展过程中伴随钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活性升高。心肌细胞内钙离子浓度的升高激活CaMKⅡ,CaMKⅡ通过钙离子超载、心肌细胞肥厚、线粒体功能障碍等途径影响心肌细胞功能,进而促进心力衰竭进展。抑制CaMKⅡ可缓解心力衰竭的进程,现有的小分子CaMKⅡ抑制剂对心肌细胞的特异性较差,尚不能应用于临床。中医药也可通过抑制CaMKⅡ控制心力衰竭症状,显示出良好的应用前景,但目前应用证据稍显不足,仍需进一步研究证实。现对CaMKⅡ的结构、影响心力衰竭的病理生理机制、CaMKⅡ抑制剂等方面进行综述,希望为心力衰竭的研究与治疗提供依据和思路。

钙／钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ及其抑制剂在细胞生长调控中的作用及机制

钙／钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（ealeium／calmodulin-dependent proteinkinaseⅡ，Ca／CaMKⅡ）是钙／钙调节蛋白家族的一个主要成员，广泛分布于组织器官中，可通过调节G1／S期、G2／M期等有丝分裂节点调控细胞生长、增殖及分化的周期进程。近年来发现该分子活化可促进肿瘤发生和恶化，并与细胞耐药密切相关。CaMKⅡ抑制剂可通过抑制CaMKⅡ磷酸化，特异性抑制CaMKⅡ的活性，引起肿瘤细胞生长受抑或凋亡。对CaMKⅡ及其抑制剂的深人研究可有助于发现新的肿瘤靶向治疗途径。

双歧杆菌对腹腔巨噬细胞ERK1/2蛋白激酶通道的影响

目的 探讨双歧杆菌对巨噬细胞ERK1/ 2蛋白激酶通道的调控。方法 收集SD大鼠腹腔巨噬细胞,提取细胞浆蛋白及核蛋白,采用Western印迹分析双歧杆菌对巨噬细胞ERK蛋白激酶水平的影响。结果 双歧杆菌呈浓度依赖性诱导巨噬细胞ERK1/ 2的活化。10 3/ ml的双歧杆菌即可增加ERK1/ 2磷酸化。用10 5/ ml的双歧杆菌刺激巨噬细胞,ERK1/ 2磷酸化30 min达到高峰。特异性ERK蛋白激酶抑制剂PD980 5 9能显著降低双歧杆菌诱导的巨噬细胞ERK1/ 2的活化。结论 双歧杆菌可以通过ERK蛋白激酶通道调控巨噬细胞。

DNA-PKcs抑制剂在胶质母细胞瘤治疗中的作用与前景

胶质母细胞瘤是人类中枢神经系统肿瘤中恶性程度最高、预后最差的一类肿瘤,尽管目前对于胶质母细胞瘤可采取手术、辅助放射、化学药物等治疗方式,其预后仍然较差。新的起源学说认为胶质母细胞瘤中的胶质瘤干细胞可能起源于脑室下区,并且与该区的神经干细胞相关。而这种具有干细胞特性的肿瘤细胞与其他干细胞一样,拥有极强的DNA损伤修复能力,并且可以通过这种DNA损伤修复作用来增强肿瘤对于放射治疗的顽固抗性。该文探讨通过抑制DNA损伤修复的关键酶来拮抗胶质母细胞瘤的放疗抗性,提高患者预后的可能性。

cGMP依赖性蛋白激酶G抑制剂对内毒素孵育大鼠胸主动脉血管环反应性的影响

目的评价特异性cGMP依赖性蛋白激酶G（PKG）抑制剂（D）-DT-2对内毒素（LPS）孵育大鼠胸主动脉血管环收缩功能的影响。方法实验Ⅰ取SD大鼠胸主动脉血管环，采用随机数字表法分为3组（n=5）：KH液组、DL组和DDT2组，用50／μmol／L8-Br-cGMP孵育25min后加入上述各药，比较各组血管环的张力变化。实验Ⅱ将SD大鼠胸主动脉血管环，采用随机数字表法分为4组（n=5）：对照组、LPS组、LPS-DL组和LPS—DDT2组，在体外测定LPS孵育3h后各组血管环在苯肾上腺素（PE）作用下最大收缩力（Emax）以及产生最大收缩力的半数有效浓度（EC50）。结果实验IPKG抑制剂DT-2和（D）-DT-2能够使8-Br-cGMP舒张的血管环收缩，DDT2组血管环的Emax明显高于D｜r2组（P〈0．05）。实验Ⅱ DT-2和（D）-DT-2均可以显著提高LPS孵育血管环的收缩功能；与LPS组比较，LPS—DT2组和LPS—DDT2组Emax升高，EC50降低（P〈0．01）。LPS-DDT2组与LPS—DT2组相比Emax升高，EC50降低（P〈0．05）。结论PKG抑制剂可提高内毒素孵育血管环的收缩功能，（D）-DT-2恢复血管反应性的作用强于DT-2。

具有嘌呤结构的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂研究进展

细胞周期是细胞生命活动的基本特征,完整的细胞周期受多种蛋白酶的调控,细胞周期调控失调与细胞癌变有着密切的关系.细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(cyclin-dependent kinase inhibitors,CDKI)是以细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinases,CDKs)为靶点,通过阻断细胞周期控制细胞增殖,从而达到抗肿瘤的目的.简述了细胞周期、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂、细胞周期调控机制与抗肿瘤作用之间的关系,综述了近年来具有嘌呤骨架的细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂的研究进展,并展望了其发展趋势.

Autocamtide 2-相关抑制肽对心肌成纤维细胞分泌细胞因子及基质金属蛋白酶表达的抑制研究

目的:观察钙-钙调素依赖性蛋白激酶(CaMK)Ⅱ抑制剂(autocamtide 2-相关抑制肽,AIP)在大鼠心肌成纤维细胞增殖中的作用及其分子机制。方法:培养新生1～3 d乳鼠心肌成纤维细胞(3代),分为正常对照组(CON),血管紧张素Ⅱ(AngⅡ,0.1 umol/L)组,AngⅡ(0.1μmol/L)+AIP(0.2μmol/L)组,AngⅡ(0.1μmol/L)+AIP(0.5μmol/L)组,AngⅡ(0.1μmol/L)+AIP组(1.0μmol/L);MTT法及细胞记数法分别测定心肌成纤维细胞增殖;ELISA法测定细胞因子(TGF-β_1,TNF-a);RTPCR检测基质金属蛋白酶-2,9(MMP-2,9)mRNA水平;免疫印记法检测MMP-2,9的蛋白表达。结果:AIP(0.5μmol/L,1.0μmol/L)抑制AngⅡ引起的心肌成纤维细胞增殖,并呈剂量依赖;AIP(0.5μmol/L,1.0μmol/L)抑制AngⅡ引起的细胞因子分泌,并呈剂量依赖AIP(0.5μmol/L,1.0μmol/L)预防0.1μmol/LAngⅡ引起的MMP-2,9 mRNA及蛋白的表达增加。结论:AIP(0.5μmol/L,1.0μmol/L)对AngⅡ诱导的心肌纤维化具有保护作用,其机制可能与AIP预防心肌成纤维细胞增殖、细胞因子分泌以及对基质金属蛋白酶的调节有关。

CaMKⅡ抑制剂阻抑脊髓背角C纤维诱发电位LTP的诱导和早期维持

目的 :探讨钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ (calmodulin dependentproteinkinaseII,CaMKⅡ )的高特异性抑制剂 (autocamtide 2 relatedinhibitorypeptide,AIP)在脊髓背角C纤维诱发电位长时程增强 (long termpotentiation ,LTP)的诱导和维持中的作用。 方法 :用单方波 (10～ 2 0V ,0 .5ms,1min/次 )刺激左侧坐骨神经 ,细胞外记录脊髓背角诱发电位。强直刺激 (40V ,0 .5ms ,10 0Hz,持续 1s ,以 10s间隔重复 4次 ,)坐骨神经诱导背角C纤维诱发电位LTP。在LTP诱导前后 ,在暴露的脊髓表面局部给予AIP ,观察其对LTP的影响。结果 :(1) 2 0 0 μmol/L的AIP不影响脊髓背角C纤维诱发电位的幅度 (n =4 ) ,但在强直刺激前 30min给予同样浓度的AIP可完全阻断脊髓背角LTP的诱导 (n =5 )。 (2 ) 2 0 0 μmol/L的AIP呈时间依赖性翻转脊髓背角LTP。在LTP诱导后 30min给予AIP ,LTP逐渐降低 ,于 3h降至对照水平 (n =6 ) ;在LTP诱导后 1h脊髓局部给予AIP ,10例动物中有 7例LTP被抑制 ;但同样浓度的AIP ,在LTP诱导后 3h ,不能翻转业已建立的LTP(n =6 ) ,且增加AIP的浓度至 5 0 0μmol/L也不能抑制脊髓背角LTP。结论 :CaMKⅡ参与脊髓背角C纤维诱发电位LTP的诱导和早期维持 ,但AIP对晚期LTP无抑制作用。