左卡尼汀通过抑制钙/钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ信号通路抑制过氧化氢诱导的大鼠心肌细胞凋亡

目的:观察左卡尼汀对过氧化氢(H2O2)诱导的大鼠心肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:利用200μmol/L H2O2刺激12 h,建立体外原代培养新生乳鼠心肌细胞凋亡模型。Ca2+螯合剂1,2-双(2-氨基苯氧基)乙烷-N,N,N',N'-四乙酸(BAPTA)、钙调素依赖蛋白激酶II(CaMKII)特异性抑制剂KN93及左卡尼汀分别于加入H2O2前30 min或1 h加入,以检测这3种药物对H2O2刺激下心肌细胞活力、细胞凋亡、细胞内静息钙浓度([Ca2+]i)及磷酸化CaMKII(p-CaMKII)表达的影响。利用MTT比色法检测心肌细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率;利用激光共聚焦扫描检测[Ca2+]i;蛋白质免疫印迹法检测cleaved caspase-3及p-CaMKII的表达。结果:模型组经200μmol/L H2O2作用12 h后,细胞活力显著下降,细胞凋亡率显著增加。BAPTA、KN93及左卡尼汀预处理显著抑制上述细胞损伤。进一步研究发现,H2O2诱导的[Ca2+]i水平升高、cleaved caspase-3及p-CaMKII的表达增加均可被上述3种药物不同程度地抑制。结论:左卡尼汀可抑制H2O2所致的心肌细胞凋亡,该心肌保护作用可能与其抑制Ca2+/CaMKⅡ信号通路有关。

钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ在心肌肥厚中转导核钙信号的作用

钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)是一种多功能的蛋白激酶,作为Ca2+信号转导的关键因子,能够调节细胞多种功能。CaMKⅡ的δ亚基是心脏中的主要成分,其中δB位于细胞核,能够调节肥厚相关基因表达,也能转导凋亡信号。本文主要对CaMKⅡ的δB亚基的结构、在心肌肥厚过程中发挥的作用以及如何转导核钙信号来调节基因转录和有关凋亡的内容作一简述。

脾气虚大鼠小肠组织钙调蛋白信号通路中钙调蛋白、钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ基因表达规律的研究

目的:观察脾气虚大鼠小肠组织钙调蛋白信号通路中钙调蛋白(Ca M)、钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)基因表达规律,揭示脾气虚证发生的内在机制。方法 :将48只大鼠随机分为正常对照组和脾气虚7 d、14 d、21 d组4组,每组12只。除正常对照组外,其余各组采用复合法(苦寒破气法、力竭法及饥饱失常法)建立脾气虚证大鼠模型,观测各组大鼠一般生存状态、脾虚证宏观证候积分、平均每日体质量增加量、负重游泳耐力时间和基础肛温;同时,采用实时荧光定量PCR技术检测小肠组织钙调蛋白信号通路中Ca M、Ca MKⅡ基因表达水平的变化。结果:与正常对照组对比,脾气虚模型7 d、14 d、21 d组大鼠平均每日体质量增加量、负重游泳耐力和基础肛温降低,脾虚证宏观证候积分升高,小肠组织Ca M、Ca MKⅡ基因相对表达量显著升高,且以脾气虚模型21 d组变化显著(P<0.05)。结论:脾气虚大鼠小肠组织钙调蛋白信号通路中Ca M、Ca MKⅡ基因表达水平异常增高。

左乙拉西坦对青霉素点燃癫痫幼鼠海马钙调素依赖蛋白激酶Ⅱα的影响

目的:比较新型抗癫痫药物左乙拉西坦(LEV)和传统抗癫痫药物苯巴比妥(PB)对青霉素点燃癫痫幼鼠海马CA3区神经元形态及钙调素依赖蛋白激酶Ⅱα(CaMKⅡα)的影响。方法:选出生后20 d健康的SD大鼠(雌雄不限)50只,随机分为青霉素致痫组40只和空白对照组10只,将存活的造模成功大鼠随机分为癫痫对照组(用生理盐水灌胃)、LEV组[300 mg/(kg.d)灌胃]和PB组[30 mg/(kg.d)灌胃]。在用药5周后,HE染色观察海马CA3区神经元形态,免疫组化检测CaMKⅡα的表达。结果:空白对照组大鼠海马CA3区神经元排列密集、规则,而致痫组海马神经元排列紊乱、疏松;癫痫对照组、PB组、LEV组与空白对照组比较CaMKⅡα的表达明显减少,差异有统计学意义。PB组与癫痫对照组比较CaMKⅡα的表达稍减少,但差异无统计学意义。LEV组与PB组比较CaMKⅡα的表达增加,差异有统计学意义。结论:发育期反复惊厥可导致大鼠成年后海马神经细胞损伤,造成海马CA3区CaMKⅡα表达下降,故可推测CaMKⅡα的表达下降可能是反复癫痫发作致认知损害的机制之一;长期使用苯巴比妥可使海马CA3区CaMKⅡα表达下降,而长期使用左乙拉西坦对海马CA3区CaMKⅡα表达的影响较小。

钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ与血管重塑的研究进展

血管重塑与多种心血管疾病密切相关。血管平滑肌细胞(VSMC)表型转换是血管重塑和内膜增生的显著特征,也是基因表达变化的结果。Ca^(2+)信号可以通过调节VSMC增殖,迁移和基因转录促进血管重塑。钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)可以通过促VSMC表型转换来调节细胞增殖,迁移和基因表达。因此,Ca^(2+)信号可能通过Ca MKⅡδ促进VSMC表型转换和血管重塑。

TGF-β_1诱导大鼠心肌细胞肥大中钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ信号途径研究

目的:探讨TGF-β_1诱导的大鼠心肌细胞肥大中钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ信号途径的信号表达。方法:建立TGF-β_1诱导的体外大鼠心肌细胞肥大模型PI染色标记细胞双链RNA法检测心肌细胞RNA表达量,间接检测心肌细胞肥大。实时荧光定量PCR检测心肌细胞肥大相关基因肌球蛋白重链β亚型(β-MHC)的表达。Western blotting检测心肌细胞中p-CaMKⅡ蛋白表达。结果:TGF-β_1可诱导体外培养心肌细胞肥大基因的表达,β-MHC的表达明显高于对照组(P<0.01)。PI染色TGF-β_1组PI含量明显增高(P<0.01),TGF-β_1 3μg/L组心肌细胞内PI含量最高(80.57±3.56);与对照组相比,TGF-β_1可明显上调的表达p-CaMKⅡ(108.83±12.15 vs 10.6±1.35,P<0.01),并于TGF-β_1诱导2 h表达达峰。结论:TGF-β_1可诱导心肌细胞肥大的形成,此过程中CaMKⅡ蛋白表达明显增加。

近交系小鼠耳蜗钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ活性变化

目的 通过对 C5 7和 BAL B/ c近交系小鼠不同日龄时耳蜗基底膜钙调素依赖蛋白激酶 活性 (calm odulin-dependent protein kinase ,Ca M- PK )的测定 ,探讨其随年龄变化的趋势 .方法 采用 Ca M- PK 活性检测试剂盒以及同位素掺入技术分别于 2 0 ,30 ,6 0 ,90 ,12 0 ,15 0和 180日龄(n=6 )时检测酶活性 ,实验数据采用 SPSS 10 .0统计软件处理 .结果 C5 7和 BAL B/ c近交系小鼠随年龄增大均出现Ca M- PK 活性下降 ,与 2 0日龄相比 ,90日龄时 Ca M- PK 活性显著降低 (C5 7:5 1.3± 0 .3vs 5 2 .5± 0 .5 pkat· g- 1 ,P<0 .0 1;BAL B/ c:5 0 .9± 0 .5 vs5 2 .5± 0 .4 pkat· g- 1 ,P<0 .0 1) ,随着年龄增大 ,Ca M- PK 活性进一步下降 .结论 Ca M- PK 可能参与 C5 7和 BAL B/

钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ调控SSH-1L活性的作用

目的探讨钙(Ca2+)/钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)对Slingshot-1L(SSH-1L)活性的调控作用。方法用脂质体法将含Myc-SSH-1L的重组质粒转染至MG63细胞,经不同浓度的钙离子载体A23187诱导10min,蛋白印迹实验,观察P-cofilin、P-SSH1L、P-CaMKⅡ水平的变化;体内及体外实验检测CaMKⅡ对SSH-1L的磷酸化及活性调控作用。结果当A23187浓度为1μmol/L时CaMKⅡ活性达到了最大,同时此浓度下P-cofilin水平以及SSH-1L的978位点丝氨酸的磷酸化水平升高。体外实验证实CaMKⅡ可使SSH-1L(WT)磷酸化,但是对其突变体SSH-1L(2SA)无作用;同时CaMKⅡ明显抑制了SSH1L(WT)的活性,但对SSH-1L(2SA)的活性无作用。结论CaMKⅡ对SSH-1L的活性具有明显调控作用,且与SSH-1L的丝氨酸位点密切相关。

快眼动睡眠剥夺、腺苷对大鼠自发活动及海马钙/钙调素依赖蛋白激酶4的影响

目的:研究快眼动睡眠剥夺(REMSD)、腺苷对大鼠自发活动及海马钙/钙调素依赖蛋白激酶4(CaMKIV)的影响。方法:成年雄性SD大鼠随机分为正常对照组(n=8)和应激造模组(n=48。经21 d慢性轻度不可预见性应激(CUMS)又分为抑郁模型组、REMSD组、水环境对照组、NS对照组、腺苷A1和A2a受体拮抗剂组,每组8只)。用开场实验检测大鼠的自发活动;Western blot检测海马CaMKIV变化。结果:21 d CUMS后,应激造模组总路程、中央路程、周边路程显著减少(P<0.01,P<0.05,P<0.01)。72 h REMSD后,REMSD组与水环境对照组比,总路程、周边路程显著增加(P<0.01);腺苷A1受体拮抗剂组与NS对照组比,总路程、周边路程显著增加(P<0.01)。抑郁模型组CaMKIV较正常对照组显著减少(P<0.01);REMSD组、腺苷A1受体拮抗剂组与抑郁模型组比显著增加(P<0.05,P<0.01);腺苷A2a受体拮抗剂组与抑郁模型组比无统计学意义。结论:REMSD可快速逆转大鼠的抑郁样行为;腺苷、CaMKIV可能参与REMSD抗抑郁机制。

生品与麸炒苍术对脾虚证大鼠结肠及胰腺磷酸化钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ的影响

目的通过比较苍术麸炒前后影响脾虚证大鼠结肠及胰腺磷酸化钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(p-CaMKⅡ)信号通路相关蛋白表达的差异,探讨苍术麸炒后健脾作用的机制。方法雄性SD大鼠70只随机分为正常组、脾虚证模型组(以下简称模型组)、生苍术(高、低)剂量组、麸炒苍术(高、低)剂量组、复方谷氨酰胺组,复制脾虚模型后相应剂量药物灌胃治疗。治疗期满后观察各组大鼠结肠及胰腺组织病理学改变,并检测结肠、胰腺组织细胞中Ca^(2+)表达水平与结肠、胰腺组织中p-CaMKⅡ蛋白和基因表达。结果造模结束时,光镜观察,正常组大鼠结肠及胰腺形态组织学无明显异常,模型大鼠结肠黏膜上皮变性、坏死,肠绒毛上皮脱落,固有膜结构被破坏,胰腺组织胰岛数明显减少,细胞分布不均,岛内细胞大量呈空泡状;与正常组比较,模型组结肠组织细胞Ca^(2+)荧光值升高,胰腺组织细胞Ca^(2+)荧光值降低,结肠组织p-CaMKⅡ蛋白和基因表达水平升高,胰腺组织p-CaMKⅡ蛋白和基因表达水平降低(P<0.01);与模型组比较,各治疗组结肠及胰腺组织结构有不同程度修复,结肠组织细胞Ca^(2+)表达的荧光强度不同程度降低,胰腺组织细胞Ca^(2+)荧光值不同程度升高;结肠p-CaMKⅡ蛋白和基因表达降低,胰腺组织p-CaMKⅡ蛋白和基因表达水平升高(P<0.01);与生苍术(高、低)剂量组比较,麸炒苍术(高、低)剂量组上述指标改善更为明显(P<0.05或P<0.01)。结论苍术麸炒后可通过Ca^(2+)/p-CaMKⅡ信号途径更好调节和改善脾虚大鼠结肠、胰腺结构及功能并改善脾虚证候。

缬沙坦对肾血管性高血压大鼠心肌钙蛋白酶I、钙调神经磷酸酶和钙／钙调素依赖蛋白激酶Ⅱδ的影响

目的通过检测肾血管性高血压大鼠心肌肥厚过程中钙蛋白酶I（CalpainI）、钙调神经磷酸酶（calcineurin，CaN）、钙／钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ（Ca／calmodulin—dependentproteinkinaseⅡ，CaMKⅡ）8亚型A、B、C3种变异体可变剪接的改变，并观察血管紧张素受体阻断剂缬沙坦对心肌肥厚和CalpainI、CaN及CaMKⅡδ的影响，探讨缬沙坦预防心肌肥厚的可能机理。方法SD大鼠，构建两肾一夹模型，随机分为假手术组、两肾一夹组和缬沙坦组（在两。肾一夹基础上每日予缬沙坦干预），观察大鼠心肌肥厚程度改变，RT—PCR法检测CaNmRNA表达和CaMKⅡδ可变剪接变化，免疫印迹法检测CaN、CalpainI蛋白质表达改变，并测定CaN活性变化。结果两肾一夹组大鼠左心室质量／体质量显著高于假手术组（提示大鼠发生心肌肥厚），同时大鼠心肌CalpainI蛋白质表达、CaNmRNA和蛋白质表达及CaN活性显著高于假手术组（P均〈0．05），CaMKll8的可变剪接表现为CaMKⅡδA、BmRNA表达均高于假手术组（P均〈0．01），CaMKⅡδCmRNA表达则低于假手术组（P〈0．01）。缬沙坦组大鼠左心室质量／体质量显著低于两。肾一夹组（提示心肌肥厚改善），同时大鼠心肌CalpainI蛋白质表达、CaNmRNA和蛋白质表达及CaN活性均显著低于两肾一夹组（P均〈0．05），CaMKⅡ8的可变剪接表现为CaMKⅡδA、BmRNA表达均低于两肾一夹组（P均〈0．01），CaMKⅡδcmRNA表达则高于两肾一夹组（P〈0．01）。结论CalpainI、CaN信号传导通路和CaMKⅡδ的可变剪接参与介导了肾血管性高血压大鼠心肌肥厚的发生。缬沙坦可通过调控这些胞内信号传导通路预防肾血管性高血压大鼠心肌肥厚。

牡荆素调节环磷酸腺苷激活的交换蛋白1/钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ信号对大鼠心肌梗死后心肌肥大与纤维化的作用

目的探讨牡荆素调控环磷酸腺苷激活的交换蛋白1(Epac1)/钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)信号通路抑制大鼠心肌梗死(MI)后心肌细胞肥大与纤维化的作用。方法24只SD大鼠随机分为:假手术组、MI组、牡荆素组。大鼠进行心脏左前降支结扎建立MI模型,假手术组只穿线不结扎。检测大鼠心功能变化;苏木精-伊红(HE)染色观察心脏病理学变化,天狼星红染色观察心脏纤维化,电镜观察心肌线粒体损伤情况;Western Blot检测Epac1、CaMKⅡ等蛋白变化。结果(1)大鼠MI 4周后,与假手术组比较MI组大鼠左心室短轴缩短率(LVFS)和左心室射血分数(LVEF)均降低(P<0.01),左心室收缩末期内径(LVIDs)、左心室舒张末期内径(LVIDd)和舒张末期左心室后壁厚度(LVPWd)、收缩末期左心室后壁厚度(LVPWs)增加(P<0.01),牡荆素组大鼠心脏LVIDs、LVIDd、LVPWs和LVPWd较MI组降低,LVFS和LVEF均升高,差异有统计学意义(P<0.05);(2)牡荆素可降低大鼠心脏重量指数(P<0.01),并减小MI组大鼠心肌细胞横截面积,同时减轻大鼠左心室壁心肌纤维化程度(P<0.01),牡荆素组大鼠心肌胞浆内线粒体肿胀较MI组减轻,线粒体形态较完整,空泡形成较少;(3)Western Blot结果显示牡荆素抑制大鼠MI后Epac1激活(P<0.01),抑制其下游CaMKⅡ激活与细胞外调节激酶的磷酸化(P<0.01),同时可抑制B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)上调(P<0.05),上调Bcl-2(P<0.01),抑制凋亡蛋白裂解半胱天冬酶3(Cleaved-Caspase 3)的活化(P<0.05)。结论牡荆素可通过抑制Epac1/CaMKⅡ通路,改善大鼠MI后心脏功能,抑制心肌肥大和纤维化。

钙调素依赖蛋白激酶家族Ⅱ表达调控对大鼠肝细胞BRL-3A凋亡的影响

目的 探讨钙调素依赖蛋白激酶家族Ⅱ（Calmodulin-dependent kinases casades,CaMK Ⅱ）表达调控对大鼠肝细胞BRL-3A凋亡的影响.方法 通过培养稳定传代的大鼠肝细胞BRL-3A细胞,并建立构建CaMK Ⅱγ蛋白（LV-CaMK Ⅱγ组）和CaMK ⅡγshRNA（shRNA组）的慢病毒表达体系,同时予以灌注相应的空白载体（LV-NC组、shRNA-NC组）及空白对照（CON组）形成对照,通过Western blot法检测各组CaMK Ⅱ、细胞色素C（Cytochrome C,Cyt C）、凋亡诱导因子（Apoptosis inducing factor,AIF）蛋白的表达,并通过Tunel法检测大鼠肝细胞BRL-3A凋亡率.结果 LV-CaMK Ⅱγ组的CaMK Ⅱ、Cyt C、AIF的蛋白表达量较CON组显著增多（均P＜0.05）;shRNA组的CaMK Ⅱ、Cyt C、AIF的蛋白表达量较CON组显著降低（均P＜0.05）;而CON组、LV-NC组、shR-NA-NC组组间比较无显著差异（P＞0.05）.同一时点LV-CaMKⅡγ组肝细胞凋亡比CON组多,差异有统计学意义（P＜0.05）;同一时点shRNA组肝细胞凋亡比CON组少、差异有统计学意义（P＜0.05）;shRNA-NC组、LV-NC组和CON组有差异但无统计学意义（P＞0.05）.结论 特异性阻断CaMK Ⅱ信号通路可抑制肝细胞BRL-3A凋亡;而增强的CaMKⅡ信号通路则促进肝细胞BRL-3A凋亡.

小麦条锈菌钙调素依赖蛋白激酶基因Pscamk的功能

【目的】克隆小麦条锈菌钙调素依赖蛋白激酶基因Pscamk,并分析其在条锈菌侵染小麦过程中的表达特征及初步功能。【方法】基于本实验室已测序的小麦条锈菌基因组序列,利用RT-PCR方法,从小麦条锈菌生理小种CYR32中克隆Pscamk基因的cDNA序列,并利用网络数据库和生物信息学工具预测该基因编码蛋白的基本特征和保守结构;运用qRT-PCR技术分析Pscamk在不同发育及侵染阶段的表达水平,进一步通过钙调素依赖蛋白激酶(CaMK)的免疫抑制剂KN-93处理小麦条锈菌夏孢子,观察其萌发状况。【结果】获得1个1620 bp的小麦条锈菌CaMK基因Pscamk;序列分析发现,Pscamk编码蛋白包含CaMK蛋白的保守结构域,并与小麦杆锈菌该类蛋白序列相似性最高。qRT-PCR分析表明,Pscamk在条锈菌侵染初期过程中的芽管发育、初生菌丝侵染及吸器形成时期呈显著上调表达,且在条锈菌接种6 h时表达量最高,为对照夏孢子的20.74倍。在专一性免疫抑制剂KN-93处理后,随着KN-93施加浓度的增加,条锈菌夏孢子萌发率逐渐降低,当浓度为1.4μmol/L时夏孢子萌发率为8.02%,仅为对照的12%。【讨论】推测Pscamk基因参与了小麦条锈菌夏孢子萌发、芽管发育以及初期侵染结构的形成。本研究为进一步探索条锈菌细胞钙信号传导机理和致病机制奠定了基础。

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者血清心肌营养素-1及钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ的临床意义

目的观察0SAHs患者血清中心肌营养素-1（CT-1）及钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ（CaMKII）Tk平的变化情况，并通过超声心动图检测右心室等容加速度（RVIVA）以评估OSAHS患者早期心功能的改变。方法选取不同严重程度的OSAHS患者60例，并选取单纯肥胖者20例作为对照组，均行〉7h的多导睡眠监测，并测定患者CT-1及CaMKlI的血清水平，同时对所有人选对象中的对照组和0SAHS患者重度组行心脏组织多普勒超声，测量RVIVA。结果①与单纯肥胖组比较，OSAHS各组中CT-1血清水平、CaMKII血清水平均明显升高，差异有统计学意义（P〈O．05）。且两者血清水平的升高均与OSAHS病情严重程度呈正相关，差异有统计学意义（P〈O．05）。相关分析显示：CT-1血清水平与呼吸紊乱指数（AHI）、CaMKⅡ血清水平呈正相关（r=0．732，0．794，P〈0．01），与最低血氧饱和度（LSa02）呈负相关（r=-0．583，P〈0．01）；CaMKII血清水平与AHI呈正相关（r=0．697，P〈0．01），与LSaOz呈负相关（r=-0．641，P〈O．01）。②与对照组比较，0SAHS组虽无明显临床症状，但RVIVA值已出现明显降低，差异有统计学意义（P〈O．05），相关分析显示RVIVA水平与AHI呈负相关（r=-0．566，P〈0．01）。③将CT_1及CaMKII的浓度与RVIVA进行相关分析，发现C-1、CaMKⅡ两者均与RVIVA无相关性。结论0SAHs可引起CT-1及CaMKII的血清水平增高，且其增高程度与OSAHS病情的严重程度密切相关，OSAHS患者在临床无任何并发症存在时即可出现右心功能的下降。。

钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ的分子调节与突触可塑性

钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)是一种在学习和记忆形成机制中具有重要作用的蛋白激酶,它存在于大多数组织中,但以神经元中表达量最高。大多数具有激酶活性的蛋白分子在组织中的表达量都相对较低,所以CaMKⅡ在神经系统中高度表达具有其特殊意义。该文将较为全面的对CaMKⅡ的分子结构与自身磷酸化特征、亚细胞空间定位及其在突触可塑性中的作用进行综述。

钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ在大鼠胚胎心肌肥大细胞中调控血管紧张素Ⅱ诱导的细胞自噬

目的:探讨钙离子/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca^(2+)/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ,CaMK Ⅱ)与细胞自噬在胚胎心肌细胞肥大发展过程中的相互作用。方法:使用血管紧张素Ⅱ作用于大鼠胚胎心肌细胞株H9c2细胞,建立体外心肌细胞肥大模型,通过药物抑制和基因过表达及敲除等方法分析细胞自噬通路AMPK-LC3 Ⅱ。结果:血管紧张素Ⅱ可快速诱导CaMKⅡ及细胞自噬相关通路AMPK磷酸化以及细胞自噬标记蛋白LC3 Ⅱ表达,CaMKⅡ抑制剂以及基因敲除和药物抑制CaMK Ⅱ下游因子组蛋白乙酰转移酶4(HDAC4)可显著阻断血管紧张素Ⅱ诱导的LC3 Ⅱ蛋白表达(P<0.05)。结论:CaMK Ⅱ作为心肌肥大病理过程的中心调控子,可以通过AMPK或其下游HDAC4直接或间接调控细胞自噬,进而调节心肌肥大的发生发展。

补肾方含药血清对谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内游离钙浓度及钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ磷酸化的影响

目的:运用中药血清药理学方法,研究补肾复方含药血清(BS)对谷氨酸(Glu)诱导凋亡的PC12细胞胞浆内游离钙离子浓度([Ca2+]i)及钙信号转导通路下游的关键信号分子钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)磷酸化的影响。方法:采用谷氨酸诱导PC12细胞造成凋亡模型,以荧光探针Fluo-3/AM对活细胞染色,结合流式细胞技术观察BS对谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内[Ca2+]i的影响;采用Western-blotting技术观察BS对谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞CaMKⅡ磷酸化的影响。结果:20%浓度BS含药血清能够拮抗谷氨酸诱导凋亡的PC12细胞胞浆内钙离子浓度的升高,抑制CaMKⅡ的磷酸化水平增高。结论:补肾中药神经保护作用的机制可能与减轻钙超载,调控钙信号通路关键信号分子的磷酸化有关。

钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ在盐酸布比卡因诱导SH-SY5Y细胞损伤中的作用

目的探讨钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)抑制剂KN93对盐酸布比卡因诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)损伤的影响。方法 SH-SY5Y细胞随机分为4组(n=6):正常培养组(C组);KN93组(K组,KN93终浓度1μmol/L孵育24 h);布比卡因组(B组,盐酸布比卡因终浓度1 mmol/L孵育24 h);KN93+布比卡因组(KB组,KN93终浓度1μmol/L和盐酸布比卡因终浓度1 mmol/L孵育24 h)。孵育24 h后在显微镜下观察各组细胞形态改变及免疫印迹法检测各组细胞Cav3.1亚型T型钙通道(Cav3.1)蛋白的表达;在孵育前(T1)、孵育后1 h(T2)、6 h(T3)、12 h(T4)、24 h(T5)MTT法检测细胞活力及流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 SH-SY5Y细胞经1 mmol/L盐酸布比卡因处理后,细胞突触消失,胞体变圆;细胞活力降低;细胞凋亡率升高;Cav3.1蛋白的表达上调;1 mmol/L的KN93则可以减少盐酸布比卡因所致的上述改变的幅度。结论 Ca MKⅡ可能参与盐酸布比卡因所致的SH-SY5Y细胞损伤,且与上调Cav3.1蛋白的表达有关。