绿原酸通过基因编码基质相互作用分子/钙释放激活钙调节蛋白通路改善糖尿病小鼠动脉粥样硬化的机制

目的探讨绿原酸(CGA)通过基因编码基质相互作用分子1(Stim1)/钙释放激活钙调节蛋白1(Orai1)通路改善糖尿病小鼠动脉粥样硬化(AS)的机制。方法将30只C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组、模型组、CGA组,每组各10只。采用高脂饲料饲养加腹腔注射50 mg/kg的链脲佐霉素(STZ)建立糖尿病AS小鼠模型,对照组采用普通饲料+等量生理盐水,CGA组建立模型后给予CGA干预,模型组给予等量生理盐水。HE染色、油红O染色观察动脉斑块情况;CCK-8检测主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖活力;qPCR检测Stim1、Orai1表达水平。结果CGA组、模型组的斑块沉积面积大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而CGA组的斑块沉积面积小于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、CGA组的VSMCs增殖率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而CGA组的VSMCs增殖率低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组、CGA组的Stim1、Orai1水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);而CGA组的Stim1、Orai1水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论CGA能够改善糖尿病AS及VSMCs增殖,其机制可能与调节Stim1/Orai1通路有关。

钙调节蛋白对七氟烷处理再灌注心律失常的影响

目的:七氟烷对离体大鼠心脏再灌注心律失常的影响的探究。方法:在血流动力学稳定30min后,缺血20min,再灌注60min,建立缺血再灌注损伤模型。参考相关发表大鼠动物模型文献[1-2]将50只大鼠随机分成以下5组,每组10只:时间对照组(TC):用95%氧合KH液恒流在离体心脏内灌流110 min;缺血/再灌注组(I/RI):连续灌流95%氧合KH液30min后停止20min,恢复灌流60min;七氟烷预处理组(sevofluranepreconditioning,Sevo PC):离体心脏用95%氧合KH液灌流20 min,用95%氧合的3%七氟烷饱和KH混合液灌流10 min,停止20 min,恢复灌流60 min;七氟烷后处理组(sevofluranepostconditioning,Sevo Po C):离体心脏用95%氧合KH液灌流30 min,停止20 min,用95%氧合的3%七氟烷饱和KH混合液灌流10 min,恢复灌流50 min;七氟烷联合处理组(sevofluranepreconditioning and postconditioning,PCPO):离体心脏用95%氧合KH液灌流20min,用95%氧合的3%七氟烷饱和KH混合液灌流10min,停止20 min,使95%氧合的3%七氟烷饱和KH混合液灌流10min,恢复灌流50 min。持续监测各组HR,左心室发展压力(left ventricular developed pressure,LVDP),最大LVDP上升率(+dp/dt),最大LVDP下降率(-dp/dt)。监测并统计再灌注心律失常发生率。LTCC、RyR2和NCX1的蛋白和转录水平分别通过Westernblot和RT-PCR进行检测。用荧光分光光度计检测并比较每组细胞中的钙离子水平。结果:七氟烷干预的三组大鼠在再灌注30min、60min后的心功能均有改善,表现为LVDP、+dp/dt、-dp/dt和HR的改善(P<0.05),LVEDP下降(P<0.01)。再灌注心律失常的发生可由SevoPC和SevoPoC改善,表现为室性期前收缩(ventricular premature beat,VPB)总数下降。室性心动过速(ventricular tachycardia,VT)、心室颤动(ventricular fibrillation,VF)发作时程缩短,VF发生率下降,心律失常再灌注评分下降等。SevoPC组RyR2在转录水平的表达明显减少;在SevoPoC组中,转录水平的LTCC、RyR2、NCX1的表达和RyR2、NCX1的翻译水平均有较大幅度的下降。与TC组相比,I/RI、SevoPC、SevoPoC和PCPo组的细胞内钙水平分别增加了145%、88%、79%和65%(P<0.05)。结论:SevoPC和SevoPoc可以改善离体大鼠心脏再灌注心律失常的发生,机制可能与其对RyR2和NCX1表达的抑制作用有关。

miR-101-3p通过靶向抑制斯坦尼钙调节蛋白1(STC1)促进巨噬细胞对人肝癌细胞的吞噬作用

目的 探究miR-101-3p能否促进THP-1巨噬细胞对HCCLM3人肝癌细胞的吞噬作用及其机制。方法 通过慢病毒包装、感染和抗性筛选,获得绿色荧光蛋白(GFP)标记并过表达miR-101-3p的HCCLM3人肝癌细胞稳转系(HCCLM3^(GFP)-miR-101-3p),同时使用佛波酯(PMA)诱导THP-1细胞贴壁分化为M0型巨噬细胞。将两者共培养24 h后收集细胞,运用荧光激活细胞分选法(FACS)检测巨噬细胞吞噬效率。实时定量PCR检测斯坦尼钙调节蛋白1(STC1)、钙网蛋白(CRT)的mRNA表达水平,免疫荧光染色法检测CRT的表达和分布,Western blot法检测STC1、 CRT的蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验分析miR-101-3p与靶基因的靶向调控关系。结果 过表达miR-101-3p促进THP-1巨噬细胞对HCCLM3肝癌细胞的吞噬作用,miR-101-3p通过靶向STC1进而上调HCCLM3细胞膜表面CRT的表达。结论 miR-101-3p通过靶向抑制STC1进而促进HCCLM3细胞膜表面CRT的表达,增强巨噬细胞对肝癌细胞的吞噬作用。

华支睾吸虫钙调节蛋白的生物学特性及与肝纤维化的关系

目的：对华支睾吸虫成虫（Clonorchis sinensis, Cs）钙调节蛋白（CaM）进行生物学及功能分析，以确定其在肝纤维化中的作用。方法从Cs cDNA质粒文库中寻找CsCaM全长序列，以BLASTx搜索其同源序列并进行比对分析。以生物信息学进行同源比对、理化性质分析及功能域预测。以分子生物学方法进行原核克隆，大肠杆菌表达，亲和层析纯化，并将纯化蛋白免疫大鼠，产生多克隆抗体。ELISA检测CsCaM抗体滴度及产生曲线。免疫印迹实验分析CsCaM重组蛋白纯化及其抗体识别效果。免疫组化分析其组织定位；腹腔注射法建立CsCaM致大鼠肝纤维化模型。结果重组、表达及纯化了CsCaM，其编码150位氨基酸，理论相对分子质量23400。结构域预测其具有EF手位模序。pET-30a-CsCaM重组质粒其目的蛋白表达于宿主菌BL21 E. coli上清，相对分子质量约23400。总IgG抗体滴度于2~4周达较高峰，效价大于1∶51200。免疫组织化学定位显示CsCaM在成虫睾丸表达丰富。CsCaM腹腔注射大鼠的肝脏均显示不同程度病变，HE染色可见炎症反应较严重，可见气球样变、门管区炎及碎片状坏死；网状纤维染色显示小胆管周围胶原增生，有轻到中度纤维化。结论 CsCaM促进大鼠肝脏炎症病变及纤维化的作用，提示其可能参与了华支睾吸虫病致肝纤维化的作用。

肌浆网钙调节蛋白在心肌肥厚病理中的作用

目的 :探讨心肌肌浆网钙调节蛋白功能变化在高血压左心室肥厚病理中的作用。方法 :用自发性高血压大鼠 (SHR)制成左心室肥厚模型 ,以 [3 H]ryanodine为放射配基、p 硝基苯酰磷酸 (PNPP)为底物分别测定左心室肌浆网ryanodine受体密度及钙ATP酶活力的改变。结果 :(1)SHR左心室肥厚时 ,ryanodine受体Bmax值比对照组 (WKY组 )升高 (P <0 .0 1) ,亲和常数 (Kd)无变化 ;钙ATP酶活力下降 (P <0 .0 1)。 (2 )与SHR组相比 ,SHR培哚普利治疗组ryanodine受体Bmax下降 (P <0 .0 5 ) ,钙ATP酶活力上升 (P <0 .0 5 )。结论

11,12-环氧二十碳三烯酸对缺血前和再灌注前大鼠心肌钙调节蛋白的影响

目的观察11,12-环氧二十碳三烯酸(11,12-EET)预处理与后处理对缺血/再灌注(IR)大鼠心肌钙调节蛋白的影响,探讨11,12-EET心肌保护的作用及其机制。方法采用Langendorff离体灌流装置,通过停灌40min/复灌30min复制大鼠心肌IR损伤模型。将33只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组、IR组、EET预处理组(Pre-EET)及EET后处理组(Post-EET)。采用BL-420生物信号采集系统监测心功能,比色法检测肌浆网Ca2+-ATPase变化,半定量RT-PCR方法检测钙泵(SERCA)、磷酸受纳蛋白(PLB)、兰尼碱受体2型(RyR2)及1,4,5-三磷酸肌醇受体2型(IP3R2)表达变化。结果Pre-EET及Post-EET组与IR组相比,心功能改善、Ca2+-ATPase活性增高(P<0.05,P<0.01);IP3R2表达增强,PLB表达降低(P<0.05,P<0.01);Pre-EET组SERCA表达增强(P<0.05)。Pre-EET与Post-EET组间差异无显著性;各组RyR2表达差异无显著性。结论11,12-EET预处理与后处理具有拮抗IR损伤的作用,这与其诱导肌浆网IP3R2表达上调,PLB表达下调以及改善Ca2+-ATPase的活性有关;同时,预处理肌浆网SERCA表达上调,也可能是其抗IR损伤机制之一。

波生坦对低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉钙调节蛋白表达的影响

目的:探讨波生坦(bosentan,BST)对低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠肺动脉中钙调节蛋白(calponin,CPN)表达的影响。方法:40只健康SD大鼠随机分为正常组、模型组、安慰剂组和BST组,每组各10只。正常组常压常氧下饲养6周,其他组分别置于全自动调节的低压低氧仓中间断低氧(8 h/d),分别饲养3周、6周和6周。自第4周起,模型组常压常氧下饲养;安慰剂组和BST组大鼠在入仓前分别给予生理盐水(2 ml)和BST(100 mg/kg)灌胃。以6周为观察终点,经HE染色后,观察各组大鼠肺血管的形态学变化;应用图像采集处理系统检测各组大鼠中型及小型肺动脉的相对中膜厚度(RMT);用免疫组化染色法对各组大鼠肺动脉的CPN进行定位及半定量分析。结果:①与其他组相比,安慰剂组大鼠肺动脉管壁增厚、管腔狭窄;BST组大鼠肺动脉管壁的厚度及管腔大小可恢复至正常组的状态;②各组大鼠肺动脉管壁中均有CPN表达,随着低氧时间的延长,CPN表达减少,BST组CPN表达与正常组相比无统计学差异。结论:BST可促进HPH大鼠肺动脉CPN的合成。

狗枣猕猴桃钙调节蛋白基因生物信息学分析

通过NCBI查找到狗枣猕猴桃钙调节蛋白基因序列,利用生物信息学方法对该基因编码蛋白的理化性质、二维结构、三维结构、糖基化位点、所属蛋白家族、代谢途径、进化地位等信息进行了预测。结果表明,该蛋白富含天冬氨酸和谷氨酸,不含N-糖基化位点和O-糖基化位点,属于EF-hand蛋白家族,在钙信号、cAMP信号转导及植物与病原菌的相互作用、细胞减数分裂等过程中均有重要作用。

钙调节蛋白在七氟烷后处理心脏保护中的机制探讨

目的探讨钙调节蛋白在七氟烷后处理(SevoPoC)心脏保护中的机制。方法选取30只SD大鼠建立离体心脏模型,血流动力学稳定30 min后,缺血30 min复灌60 min建立缺血再灌注损伤模型,完全随机分入以下3组,每组10只:①时间对照组(TC组):将离体心脏在恒流下灌注充分氧合的KH液120 min;②缺血再灌注组(I/RI组):将离体心脏在恒流下灌注充分氧合的KH液30 min后,停止灌注30 min,随后恢复灌注60 min;③七氟烷后处理组(SevoPoC组):将离体心脏在恒流下灌注充分氧合的KH液30 min后,停止灌注30 min,在复灌即刻使用含3%的七氟烷持续灌注10 min,然后使用氧合的KH液灌注50 min。各实验组均持续监测左心室舒张末期压力(LVEDP)、心率、左心室发展压(LVDP)、最大LVDP上升速率(+dp/dt)及最大LVDP下降速率。检测心肌梗死面积和冠状动脉流出液中心肌肌钙蛋白I(cTnl)水平。分别用蛋白印迹法和荧光实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测L型钙通道(LTCCs)、兰尼碱受体2(RyR2)以及钠钙交换体1(NCXI)的蛋白和基因转录水平。结果 SevoPoC能明显加快LVEDP、RPP(心率与LVDP的乘积)和+dp/dt向基线水平恢复,SevoPoC组LVEDP水平低于,RPP及+dp/dt高于I/RI组(均P<0.05)。同时,SevoPoC可以降低心肌缺血再灌注损伤后cTnI的释放,SevoPoC组cTnI水平低于I/RI组[(0.060±0.003)mg/L比(0.110±0.004)mg/L](P<0.01)。NCX1相对表达水平I/RI组高于TC组[(0.59±0.09)比(0.35±0.05)],SevoPoC组(0.32±0.06)低于I/RI组(均P<0.01)。LTCCs和RyR2的表达各组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 SevoPoC可以提供心肌保护作用,表现在心功能恢复的增强、冠状动脉流出液cTnI释放以及心肌梗死面积的减少。其作用可能与其对NCXl的抑制有关。

血清钙调节蛋白-1水平预测孕妇早产的临床价值

目的探讨血清钙调节蛋白-1水平用于预测孕妇早产的临床价值。方法收集2018年6月至9月在本院住院治疗的先兆早产患者共50例,均抽取患者血液检测血清钙调节蛋白-1水平,同时行唾液中E3值联合B超检查了解宫颈管长度,收集患者钙调节蛋白-1水平,B超下宫颈管长度,分娩时间。结果大于1天组和1天内分娩组患者的血清钙调节蛋白-1水平和正常值相比差异不明显,对比P<0.05;唾液中E3值联合B超检查宫颈管长度无创伤性,检验结果准确。结论钙调节蛋白-1水平的高低用于预测早产的发生尚且缺乏一定的临床意义。

孕晚期血清钙调节蛋白1 游离雌三醇联合宫颈管长度对双胎妊娠自发性早产的预测价值

目的 分析孕晚期血清钙调节蛋白1(CAM1)、游离雌三醇(uE_(3))联合宫颈管长度对双胎妊娠自发性早产的预测价值。方法 选取2018年1月—2020年5月永康市妇幼保健院收治的186例孕晚期双胎妊娠产妇为研究对象,均定期在该院进行产前检查。另选取同期在该院产检的单胎妊娠产妇189例作为对照。所有受试者在孕晚期均检测血清CAM1、uE_(3)水平,并检测宫颈管长度。比较双胎妊娠中发生自发性早产产妇和未发生产妇血清CAM1、uE_(3)水平及宫颈管长度;分析双胎妊娠自发性早产的影响因素;分析三者联合检测对双胎妊娠自发性早产的预测价值。结果 双胎妊娠产妇自发性早产发生率(14.36%)高于单胎妊娠产妇(4.23%),差异有统计学意义(χ~2=11.374,P<0.05)。双胎妊娠中发生自发性早产产妇孕晚期血清CAM1、uE_(3)水平[(30.15±5.26)pg/L、(2.27±0.39)ng/ml]均高于未发生者[(23.77±4.01)pg/L、(1.76±0.25)ng/ml],宫颈管长度[(21.03±4.18)mm]短于未发生者[(24.91±4.96)mm],差异均有统计学意义(t=7.156,P<0.05;t=8.786,P<0.05;t=3.768,P<0.05)。高龄产妇、有精神压力、血清CAM1及uE_(3)水平均是双胎妊娠产妇发生自发性早产的危险因素(OR=3.515,P<0.05;OR=1.889,P<0.05;OR=6.373,P<0.05;OR=7.199,P<0.05),宫颈管长度是其保护因素(OR=0.558,P<0.05)。孕晚期血清CAM1、uE_(3)水平及宫颈管长度联合检测预测双胎妊娠自发性早产的灵敏度和AUC均高于单独检测,差异均有统计学意义(均P<0.05);特异度与单独检测比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论 双胎妊娠自发性早产产妇孕晚期血清CAM1、uE_(3)水平均高于未发生自发性早产者,宫颈管长度短于未发生自发性早产者,三者联合检测对双胎妊娠自发性早产的预测效能较高。

高血压左心室肥厚与心肌肌浆网钙调节蛋白相关性的实验研究

目的探讨血管紧张素Ⅱ及肌浆网钙调节蛋白在高血压左心室肥厚（ＬＶＨ）形成中的作用和机制。方法以自发性高血压大鼠（７只，ＳＨＲ）、培哚普利治疗组（５只）和对照组ＷＫＹ（７只）为模型；分别测定左心室心肌血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）含量、肌浆网Ｒｙａｎｏｄｉｎｅ受体密度和Ｋ受体亲和力及钙ＡＴＰ酶活力。结果左心室肥厚与心肌ＡｎｇⅡ含量、肌浆网钙调节蛋白及钙ＡＴＰ酶活力相关：（１）左心室心肌ＡｎｇⅡ含量：ＳＨＲ组［（１６７±５２）ｐｇ／ｍｇ］比ＷＫＹ组升高［（１２０±２３）ｐｇ／ｍｇ，Ｐ＜００５）］，培哚普利治疗组［（１３９±１６）ｐｇ／ｍｇ］明显下降。（２）Ｒｙａｎｏｄｉｎｅ受体最大结合点密度值（Ｂｍａｘ）：ＳＨＲ组（２３２±２７ｆｍｏｌ／ｍｇ）比ＷＫＹ组［１７３±１８）ｆｍｏｌ／ｍｇ］增加，培哚普利治疗组［（１９１±２３）ｆｍｏｌ／ｍｇ］受体密度恢复；（３）钙ＡＴＰ酶活力：ＳＨＲ组［（０５２±０１１）μｍｏｌ·ｇ－１·ｍｉｎ－１］比ＷＫＹ组［（１０３±０２２）μｍｏｌ·ｇ－１·ｍｉｎ－１］下降，培哚普利［（０８２±０２８）μｍｏｌ·ｇ－１·ｍｉｎ－１］治疗后上升。（４）３组受体亲和力无显著变化?

附子-黄芪-葶苈子角药对心力衰竭模型大鼠心肌细胞线粒体膜电位及钙调节蛋白NCX1、SERCA2的影响

目的探讨附子-黄芪-葶苈子角药治疗心力衰竭的可能作用机制。方法将75只SD大鼠随机分为空白组、模型组、角药组、黄芪甲苷组与曲美他嗪组,每组15只。除空白组外,其余各组大鼠以腹腔注射盐酸阿霉素6周的方式建立心力衰竭大鼠模型,实验第2周起角药组给予附子、黄芪、葶苈子免煎颗粒15g/(kg·d)灌胃,曲美他嗪组给予盐酸曲美他嗪片10mg/(kg·d)灌胃,黄芪甲苷组给予黄芪甲苷水溶液1g/(kg·d)灌胃,空白组和模型组大鼠给予2ml双蒸水灌胃。各组均每日灌胃1次,共6周。末次给药12h后,检测大鼠心功能指标及血清脑钠尿肽(BNP)水平,测定大鼠心肌组织线粒体膜电位的变化及心肌细胞钙调节蛋白钙钠交换体(NCX1)和心肌细胞肌浆网Ca^(2+)-ATP酶(SERCA2)mRNA和蛋白表达。结果与空白组比较,模型组大鼠血清BNP水平升高,心功能及心肌细胞线粒体膜电位未降低细胞的百分比明显降低,心肌细胞NCX1蛋白及mRNA表达升高,SERCA2蛋白及mRNA表达降低(P<0.01)。与模型组比较,黄芪甲苷组、曲美他嗪组和角药组上述各指标均有不同程度改善(P<0.01),且角药组在改善心肌细胞线粒体膜电位未降低细胞的百分比及NCX1、SERCA2 mRNA表达方面优于黄芪甲苷组、曲美他嗪组(P<0.01)。结论附子-黄芪-葶苈子角药可稳定心力衰竭大鼠心肌细胞线粒体膜电位,改善心肌细胞的线粒体功能,调节NCX1和SERCA2表达平衡,从而改善心功能。

葡萄糖调节蛋白78和钙网蛋白在喉鳞状细胞癌组织中的表达及意义

目的探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及钙网蛋白(CRT)与喉鳞状细胞癌之间的关系,从而为喉凝状细胞癌的临床诊治及治疗提供新思路。方法采用免疫组化方法及Western blot方法检测60例喉癌患者喉癌组织及癌旁组织中的GRP78与CRT的表达,探讨GRP78与CRT与喉癌病理特征之间的关系。结果 CRP78和CRT在喉癌组织中阳性细胞平均光密度值分别为0.3585±0.0006和0.2962±0.0126,在喉癌癌旁组织中分别为0.331±0.006和0.2847±0.0043,CRP78和CRT在喉癌中的平均光密度值高于癌旁组织,差异均具有统计学意义(P<0.005)。采用Pearson相关分析统计分析数据结果显示:CRP78及CRT与喉鳞状细胞癌密切相关,CRP78在喉凝状细胞癌中的表达随CRT升高而增加(r=1.45,P<0.001)。CRP78及CRT在喉癌组织中的平均灰度值分别为0.53±0.21和0.65±0.23,在正常组织中分别为0.24±0.14和0.56±0.17,CRP78及CRT在喉癌组织中的平均灰度值显著高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CRP78及CRT在喉癌中呈高表达,与喉癌的发生发展密切相关,且两者在喉凝状细胞癌组织中的表达量呈正相关。

钙稳态调节蛋白1在痛性糖尿病神经病变大鼠脊髓背角的表达变化

目的研究钙稳态调节蛋白1(CALHM1)在痛性糖尿病神经病变(PDN)大鼠脊髓中的表达。方法构建PDN大鼠模型,检测其行为学改变;利用免疫组织化学法、Western blot及实时荧光定量核酸扩增反应(q RTPCR)检测CALHM1在大鼠脊髓背角神经元上的分布、表达及m RNA转录;用统计学分析CALHM1 m RNA表达与缩足反应阈值(PWT)的相关性。结果 PDN大鼠的CALHM1及m RNA表达高于对照组,差异有统计学意义,且CALHM1 m RNA表达与50%PWT呈负相关。结论 CALHM1在PDN大鼠脊髓背角神经元中表达增高。

短期快速心房起搏钙平衡调节蛋白基因表达变化的研究

为观察家兔短期快速心房起搏所致心房肌电重构及其对钙平衡调节蛋白mRNA表达水平的影响 ,探讨心房肌电重构的发生机制 ,取新西兰大耳白兔 36只 ,随机分为 6组 ,经颈内静脉切开置入电极导管 ,以最快的心房 1∶1起搏的频率于右房行快速心房起搏 ,监测起搏前后心房有效不应期 (AERP)的变化 ,按分组分别于起搏 0 .5 ,1,2 ,4 ,8h后终止起搏 ,取右房组织 ,行半定量逆转录 聚合酶链式反应测定钙平衡调节蛋白基因表达的相对水平。结果 :快速心房起搏后AERP缩短 ,起搏后 0 .5h内AERP变化速率最大 ,最小值出现在快速心房起搏后 8h ,在 0 .5h后的整个短期起搏过程中变化不大 ;0 .5h至 8h的快速心房起搏使肌浆网钙泵和L型Ca2 + 通道基因表达水平逐渐下调 ,至起搏后 4h较起搏前有显著性差异 ;Na+ Ca2 + 交换的基因表达水平上调 2 3.71% ,但无统计学意义。磷酸受纳蛋白、Ryanodine受体的基因表达水平无明显变化。结论 :心房肌电重构的电生理变化发生于快速心房起搏0 .5h ,起搏 4h可引起钙平衡调节蛋白基因表达的变化 ,推测心房肌电重构的形成有细胞内钙超载机制的参与。

钙离子调节蛋白依赖激酶在子宫内膜癌细胞中表达的研究

目的探讨钙离子调节蛋白依赖激酶(CaMKⅣ)在子宫内膜癌发病中的作用。方法采用免疫组化方法,检测31例子宫内膜癌患者和20例正常子宫内膜标本中CaMKⅣ的表达强度,同时分析CaMKⅣ染色细胞的百分数与患者临床特征的关系(临床分期、组织分级和临床预后)。结果正常子宫内膜组织细胞无CaMKⅣ的表达,CaMKⅣ表达主要在子宫内膜癌细胞核内,表达的强弱与临床分期和预后有关。结论CaMKⅣ在子宫内膜癌组织中的表达与子宫内膜癌的恶性强度有关。

血管平滑肌细胞增殖中蛋白激酶G与钙调磷酸酶信号通路的交互调节

目的探讨血管平滑肌细胞增殖过程中蛋白激酶G与钙调磷酸酶信号通路之间是否存在交互调节作用。方法植块法原代培养Wistar大鼠血管平滑肌细胞。Western blot测定钙调磷酸酶和蛋白激酶G Iα蛋白的表达。定磷法测定钙调磷酸酶活性,MTT法测定血管平滑肌细胞的增殖。结果苯肾上腺素刺激诱发的平滑肌细胞钙调磷酸酶的表达和活性可被一氧化氮供体S-亚硝基-N-乙酰青霉胺和Sp-8-pCPT-cGMP抑制,但可被Rp-8-pCPT-cGMP增强。应用环孢素A干预增殖细胞后蛋白激酶G Iα蛋白表达量较对照组明显提高(P<0.01),而加入苯肾上腺素刺激后蛋白激酶G Iα蛋白的表达较对照组也有明显提高(P<0.05),但较5 mg/L环孢素A干预组减少了36.7%,两组之间差异有统计学意义(P<0.01)。经0.5 mg/L环孢素A预处理后,苯肾上腺素刺激诱发的平滑肌细胞吸光度降低36.67%,S-亚硝基-N-乙酰青霉胺、Sp-8-pCPT-cGMP或Rp-8-pCPT-cGMP并不能进一步抑制或升高已升高的吸光度。结论蛋白激酶G介导钙调磷酸酶信号抑制血管平滑肌细胞增殖,并且蛋白激酶G与钙调磷酸酶能够交互调节影响血管平滑肌细胞增殖进程。

miR-103靶向钙调磷酸酶调节蛋白1对糖尿病肾病足细胞损伤的影响

目的探讨微小RNA-103(miR-103)在高糖诱导足细胞损伤中的作用及其可能的分子机制。方法本研究从2018年1月至2019年1月期间,体外培养人足细胞(HPC),以高糖刺激足细胞6、12、24 h,qRT-PCR与Western blotting分别检测高糖刺激下HPC细胞miR-103、钙调磷酸酶调节蛋白1(RCAN1)表达;采用ELISA检测白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;流式细胞仪检测细胞凋亡率。检测干扰miR-103的表达及RCAN1过表达后细胞凋亡率及IL-6、TNF-α水平变化;双荧光素酶报告基因检测验证miR-103与RCAN1的靶向调控关系。结果高糖诱导的足细胞中miR-103的表达量升高[(1.00±0.07)比(4.51±0.34)](P<0.05),而RCAN1表达水平降低[mRNA(1.00±0.08)比(0.59±0.06);蛋白(0.86±0.05)比(0.36±0.04)](P<0.05),足细胞凋亡率增加[(5.31±0.52)%比(24.36±1.58)%](P<0.05),IL-6、TNF-α水平升高[(7.23±0.33)ng/mL比(18.84±0.85)ng/mL;(0.34±0.03)ng/mL比(0.95±0.07)ng/mL](P<0.05);干扰miR-103的表达及RCAN1过表达后,足细胞凋亡率降低[(22.87±1.55)%比(14.72±0.82)%;(22.76±1.14)%比(13.88±0.85)%](P<0.05),IL-6[(18.54±0.62)ng/mL比(12.74±0.44)ng/mL;(19.74±0.61)ng/mL比(14.87±0.56)ng/mL]、TNF-α[(0.92±0.05)ng/mL比(0.54±0.06)ng/mL;(0.90±0.06)ng/mL比(0.56±0.04)ng/mL]水平降低(P<0.05);miR-103与RCAN1存在靶向关系,miR-103能够负向调控RCAN1的表达与活性;干扰RCAN1的表达部分逆转干扰miR-103的表达对高糖刺激足细胞的保护作用。结论干扰miR-103的表达可通过促进RCAN1的表达而减轻糖尿病肾病足细胞损伤。

钙神经调节蛋白抑制剂诱导治疗狼疮性肾炎的Meta分析

目的:钙神经调节蛋白抑制剂(CNIs)在狼疮性肾炎(LN)治疗中的作用受到越来越多人的关注。本研究通过Meta分析评估CNIs诱导治疗LN的疗效及安全性,并与对照治疗进行比较。方法:检索Pubmed、EMBASE、Cochran图书馆及万方数据库、中国知网、维普中文科技期刊数据库,检索时间截止至2017年9月,纳入环孢素A(Cs A)和他克莫司(FK506)与吗替麦考酚酯(MMF)或环磷酰胺(CTX)相比较的随机对照临床试验。采用Stata12软件进行Meta分析。结果:共计16篇(871例患者)符合标准的文献纳入本研究。Meta分析结果显示CNIs组总有效率(P<0. 001)、完全缓解率(P<0. 001)均优于对照组。CNIs组的感染、消化道症状、白细胞减少及月经紊乱的发生率明显低于对照组。而一过性肌酐升高、血压升高及血糖升高的发生率则明显高于对照组。结论:CNIs用于LN诱导治疗药物,其疗效及安全性均优于对照组,但其长期维持治疗的疗效及安全性仍需要进一步评估。