脾气虚大鼠小肠组织钙调蛋白信号通路中钙调蛋白、钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ基因表达规律的研究

目的:观察脾气虚大鼠小肠组织钙调蛋白信号通路中钙调蛋白(Ca M)、钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)基因表达规律,揭示脾气虚证发生的内在机制。方法 :将48只大鼠随机分为正常对照组和脾气虚7 d、14 d、21 d组4组,每组12只。除正常对照组外,其余各组采用复合法(苦寒破气法、力竭法及饥饱失常法)建立脾气虚证大鼠模型,观测各组大鼠一般生存状态、脾虚证宏观证候积分、平均每日体质量增加量、负重游泳耐力时间和基础肛温;同时,采用实时荧光定量PCR技术检测小肠组织钙调蛋白信号通路中Ca M、Ca MKⅡ基因表达水平的变化。结果:与正常对照组对比,脾气虚模型7 d、14 d、21 d组大鼠平均每日体质量增加量、负重游泳耐力和基础肛温降低,脾虚证宏观证候积分升高,小肠组织Ca M、Ca MKⅡ基因相对表达量显著升高,且以脾气虚模型21 d组变化显著(P<0.05)。结论:脾气虚大鼠小肠组织钙调蛋白信号通路中Ca M、Ca MKⅡ基因表达水平异常增高。

电针联合柴胡疏肝散对抑郁大鼠海马神经元活性、MAO水平及CaMK信号蛋白水平的影响

目的 探究电针联合柴胡疏肝散对抑郁大鼠海马神经元活性、单胺氧化酶(MAO)水平及钙调蛋白激酶(CaMK)信号蛋白水平的影响。方法 将15只雄性SD大鼠根据不同治疗方法分为抑郁组、健康组、电针组、柴胡疏肝散组、联合组各3只。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测海马神经元细胞中CaMKⅡmRNA表达量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞中MAO表达水平,Hoechst 33258荧光染色法检测海马神经元细胞的凋亡情况,水迷宫行为检测大鼠空间学习记忆能力,Western印迹法检测细胞中CaMKⅡ蛋白含量。结果 与抑郁组相比较,电针组、柴胡疏肝散组、联合组空间学习记忆能力显著更优(均P<0.05),联合组空间学习记忆能力显著优于电针组、柴胡疏肝散组(均P<0.05)。电针组、柴胡疏肝散组、联合组海马神经元细胞的凋亡率、MAO表达显著低于抑郁组(均P<0.05),与电针组、柴胡疏肝散组相比较,联合组细胞凋亡细胞率、MAO表达显著下降(均P<0.05)。电针组、柴胡疏肝散组、联合组海马神经元细胞CaMKⅡ蛋白表达、CaMKⅡmRNA表达量显著高于抑郁组(均P<0.05)。结论 电针与柴胡疏肝散对抑郁大鼠均有改善作用,两者联合治疗效果更佳,电针与柴胡疏肝散对抑郁大鼠的作用机制可能与提高CaMK信号蛋白水平有关。

钙离子钙调蛋白激酶Ⅱ-组蛋白去乙酰化酶信号通路与心肌肥厚的研究进展

心肌肥厚最初是维持正常心功能的一种补偿机制，也是心脏疾病发病率和致死率较高的主要危险因素。很多动物心肌肥厚和心力衰竭时发生钙离子钙调蛋白激酶Ⅱ-（CaMKⅡ）磷酸化增加和活性提高。CaMKII主要通过激酶的活性作用于下游信号分子，从而改变细胞核内基因转录，在心肌肥厚的信号转导中发挥重要作用。

脾气虚大鼠骨骼肌组织钙调蛋白信号通路中CaM及CaMKⅡ基因表达变化

目的探讨脾气虚大鼠骨骼肌组织钙调蛋白信号通路中钙调蛋白(Ca M)、钙调素依赖蛋白激酶(Ca MK)Ⅱ基因表达变化规律。方法受试动物随机分为空白组、脾气虚模型组(7 d、14 d、21 d组),每组10只。除空白组外,其余受试动物采用复合法(苦寒破气法、力竭法及饥饮失常法)成功建立脾气虚证大鼠模型后,在观察各组大鼠一般生存状态、脾虚证宏观证候积分、平均每日摄食量、平均每日体重增加量和负重游泳耐力的同时,采用实时荧光定量PCR技术检测骨骼肌组织Ca M信号通路中Ca M、Ca MKⅡ基因表达水平的变化。结果与空白组比较,脾气虚7 d、14 d、21 d组大鼠一般生存状况较差,脾虚宏观证候积分显著升高(P<0.05),平均每日摄食量、平均每日体重增加量和负重游泳耐力降低(P<0.05),骨骼肌组织Ca M、Ca MKⅡ基因相对表达量显著降低,且以脾气虚模型21 d组变化显著(P<0.05)。结论脾气虚大鼠骨骼肌组织Ca M信号通路中Ca M、Ca MKⅡ基因表现为低表达水平。

磷酸化钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在大鼠脊髓背角C-纤维诱发电位长时程增强的诱导和维持中的作用

实验旨在探讨钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin—dependent protein kinase Ⅱ,CaMKⅡ)在脊髓背角C-纤维诱发电位长时程增强(long-term potentiation,LTP)的诱导和维持中的作用。用Western blot技术分别检测LTP形成30 min和3 h脊髓背角(L4-L6)CaMK Ⅱ的含量及其磷酸化水平。同时观察脊髓局部给予CaMK Ⅱ选择性抑制剂KN-93后对脊髓背角LTP和CaMK Ⅱ磷酸化的影响。观察结果如下:(1)诱导LTP后30 min.CaMK Ⅱ的磷酸化水平明显高于对照组,而CaMKⅡ的总量无变化;诱导LTP后3 h CaMK Ⅱ的磷酸化水平进一步升高,而且CaMK Ⅱ的总量也明显增加(n=4);(2)强直刺激前30 min 于脊髓局部给予CaMK Ⅱ的特异性抑制剂KN-93(100μmol/L),可阻断LTP的诱导,同时明显抑制CaMK Ⅱ的磷酸化水平;(3)诱导LTP后30 min给予KN-93,可显著抑制LTP的维持,同时CaMKⅡ的磷酸化水平与未用药组相比也明显降低(n=3);(4)LTP 3 h后给予KN-93,LTP的幅值不受影响,磷酸化的CaMKⅡ的含量与用药前相比也无差别(n=3)。根据上述实验结果可以认为,CaMK Ⅱ的激活参与脊髓背角C-纤维诱发电位LTP的诱导和早期维持过程。

钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ在卵母细胞减数分裂和受精中的作用(英文)

钙调蛋白依赖的蛋白激酶 (CaMK)是一类分布广泛的丝 /苏氨酸蛋白激酶家族 ,在钙离子和钙调蛋白存在的条件下发生自磷酸化而被激活 ,在细胞内对于钙信号的传递具有重要的介导作用 .近年来的研究表明CaMKⅡ是参与调节卵母细胞减数分裂的重要分子 ,在卵母细胞成熟、极体排放、受精和活化等过程中发挥作用 .CaMKⅡ作为Ca2 + 的下游信号分子 ,在受精后促进成熟促进因子 (MPF)和细胞静止因子 (CSF)的失活 ,并调节纺锤体微管的组装和中心体的复制过程 .虽然CaMKⅡ在减数分裂中的作用广泛而关键 ,但目前的研究主要集中于低等动物和小鼠 。

阿片类药物对NG108-15细胞Ca^(2+)/钙调蛋白依赖的蛋白激酶II信息通路的作用

目的 观察阿片类依赖时Ca2 + 钙调蛋白依赖的蛋白激酶II信息通路的变化。方法 以NG10 8 15细胞作为体外的细胞模型 ,分别用竞争性蛋白结合法及放射免疫法、PDE法、γ 32 P参入法测定cAMP水平、钙调蛋白(CaM)活性和钙调蛋白依赖的蛋白激酶II(CaMKII)活性。结果 DPDPE作用NG10 8 15细胞 48h可使细胞浆和细胞核CaM和CaMKII活性升高 ,该变化可被CaM特异性拮抗剂W 7所抑制 ;CaMKII特异性抑制剂KN 6 2可抑制CaMKII活性的增高 ,而对CaM活性无明显影响。DPDPE作用NG10 8 15细胞 48h后 ,加入纳洛酮 ,CaM活性、CaMKII活性进一步增高。结论 Ca2 + CaMKII信息通路参与了阿片依赖的机制。

钙调蛋白激酶在L型钙通道“run-down”现象发生及恢复过程中的作用

目的；研究钙调蛋白激酶（CaMKⅡ）在钙通道“run-down”现象发生及恢复过程中的作用机制。方法：用酶分离单个豚鼠心室肌细胞，利用膜片钳单通道技术，在细胞膜面内向外的模式下，诱发L型钙通道“run-down”现象。制备活性钙调蛋白激酶（CaMKⅡ αT286D），记录并分析它在L型钙通道“run—down”现象中的影响。结果：在细胞膜面内向外的钳制模式下1分钟后，细胞内液中加入CaMK ⅡαT286D（1-30μM），仅使钙通道活性恢复2-10％。但发现CaMKⅡ αT286D可消除CaM对钙通道“run-down”现象恢复作用的时间依存性。在CaMKⅡ αT286D和CaM共同存在条件下，记录到第5分钟的钙通道活性（158．1±62．2％）几乎等同于第1分钟的（148．4±55．5％）。制备CT-1，即含豚鼠Cav1．2通道蛋白C末端1509．1789氨基酸的一个GST融合蛋白。Pull-down实验结果显示，CT-1经CaMKⅡ αT286D处理后，CaM的亲和力高于未经磷酸化或去磷酸化处理的亲和力。结论：CaMKⅡ介导的L型钙通道磷酸化调节了CaM对钙通道的亲和力，延长了CaM对钙通道“run-down”现象恢复作用时间，是“run-down”现象的一个重要调节因子。

钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶的结构和功能

钙 /钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶 (calcium/calmodulin dependentserineproteinkinase,CASK)属于膜相关鸟苷酸激酶 (membraneassociatedguanylatekinase ,MAGUK)家族 .CASK具有多个不同蛋白质结合结构域 ,在细胞膜的特定区域 ,与其他蛋白质形成多种蛋白质复合体 ,参与组成细胞骨架 .它通过衔接细胞外信号蛋白和细胞内骨架蛋白 ,协助功能蛋白质的转运和定位 ,以及细胞内的信号传递 .此外CASK还可以进入细胞核影响基因转录调控 ,以及作用在神经突触膜上参与神经递质的释放 .

非接触共培养体系下抑制ARPE-19中CAMKⅡ表达对HUVECs迁移和侵袭及管腔形成的影响

目的:探讨非接触共培养体系下抑制人视网膜色素上皮细胞(ARPE)中Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CAMKⅡ)表达对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移、侵袭、管腔形成的影响。方法:将过表达CAMKⅡ-δ的ARPE-19样本进行RNA测序,应用生物信息学分析差异基因参与的功能。使用transwell小室构建ARPE-19和HUVECs非接触共培养体系,根据实验干预措施分为:空白组:仅接种未共培养的HUVECs,无ARPE-19细胞;对照组:ARPE-19和HUVECs细胞均使用完全培养基进行共培养;AIP组(CAMKⅡ抑制组):ARPE-19使用含有AIP(160 nmol/L)的完全培养基,HUVECs使用完全培养基,进行共培养。检测HUVECs迁移、侵袭和管腔形成能力的变化,并通过Western blotting检测CAMKⅡ/AMPK/mTOR/VEGFA蛋白表达水平。结果:生信分析发现差异基因参与细胞生长与死亡和细胞运动等生物学过程。划痕和transwell迁移实验均表明AIP组的HUVECs相对迁移率均明显低于对照组(均P<0.05)。而侵袭和小管形成实验表明,AIP组的相对侵袭率和相对管腔形成率较对照组无明显改变(均P>0.05)。Western blotting结果表明AIP组CAMKⅡ、P-mTOR、VEGFA蛋白表达较对照组均明显下调,而P-AMPK蛋白表达较明显上调(均P<0.05)。结论:在非接触共培养体系下抑制ARPE-19细胞中CAMKⅡ表达可以显著降低HUVECs迁移能力,但不能改变侵袭和管腔形成能力,这可能是通过AMPK/mTOR/VEGFA信号通路实现的。

CaMKⅡ/ERK信号通路在TGFβ1诱导肝星状细胞增殖中的作用

目的观察Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)/细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase,ERK)信号通路对TGFβ1诱导下人肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖的影响。方法 CaMKⅡαsiRNA转染对HSC内CaMKⅡα进行干扰,ERK特异性抑制剂PD98059对ERK信号进行抑制,MST法检测HSC的增殖,Western blotting法检测ERK、p-ERK、JNK、p-JNK表达的变化。结果 CaMKⅡαsiRNA可显著抑制TGFβ1诱导的HSC增殖,差异有统计学意义(P<0.05),对ERK的表达无明显影响,但显著提高p-ERK的表达水平,差异有统计学意义(P<0.05);PD98059可明显抑制TGFβ1诱导的HSC增殖,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CaMKⅡ/ERK信号参与了TGFβ1诱导的HSC增殖,是肝纤维化发展过程中的重要信号通路。

Ca^(2+)-CaM-CaMKⅡ及低铅对其信号通路机制进展

铅是不可降解的环境污染物,对机体各系统都有一定副作用,对人体没有任何生理功能,其理想的血铅浓度为零。铅对中枢神经系统的损害基本是不可逆的,特别是孕妇和儿童。目前铅神经毒性分子机制研究中一个重要内容就是探讨铅对信号途径传导过程中两个重要因素,钙和蛋白激酶功能的影响。铅可以通过取代Ca2+进入细胞后与CaM结合形成Pb-CaM,使之改变构型和活性,结合并激活包括酶与载体在内的调节蛋白,该文综述了通过钙调蛋白-钙调蛋白激酶的信号途径参与介导铅神经毒性,探讨其分子机制是有一定意义的。

药物成瘾中的CaMK Ⅱ信号转导机制

钙／钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（Ca2＋／calmodulin—dependentproteinkinaseⅡ，CaMKⅡ）是一种多功能丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，分布全身，在脑内分布尤其丰富，与神经递质合成和分泌、受体调节、细胞骨架结构调节、轴突传递、长时程增强（long—termpotentiation，LTP）以及基因表达密切相关。近年来研究表明，CaMKⅡ信号转导通路在镇痛及药物成瘾中发挥了重要作用。

CaMKⅡ在结直肠癌相关信号通路激活中作用的研究进展

钙离子(Ca^2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)是钙信号最重要的传感器和调节剂,在多种恶性肿瘤中高表达。当细胞内Ca^2+水平周期性上升时,Ca^2+通过结合钙调蛋白(CaM)激活CaMKⅡ,从而激活多条相关信号通路影响结直肠癌(CRC)的发生发展。其中,CaMKⅡγ可以介导NF-κB信号通路的激活从而促进CRC细胞在体内外的增殖;CaMKⅡγ通过介导STAT3信号通路的失调与结肠炎相关性结肠癌(CAC)进展密切相关;CaMKⅡ可通过ERK1/2和p38依赖性途径介导结肠癌细胞的增殖和迁移;CaMKⅡ通过调控下游靶标MAPK途径可以导致多种肿瘤细胞增殖、侵袭;Wnt/CaMKⅡ信号的激活可能是驱动CAC发生的重要信号途径之一。以上信号通路在CRC发生发展中可能相互影响。

脑外伤对皮层及海马CA1区神经元内钙调蛋白激酶Ⅱ磷酸化的影响

中、重度脑外伤患者常伴有不同程度的记忆障碍。长时程电位（LTP）在记忆的形成中具有重要的作用，而钙调蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）是调节长时程电位的关键性蛋白之一。笔者以皮层及海马CA1区神经元内钙调蛋白激酶Ⅱ为研究对象，探讨脑外伤对其的影响。

黄芩素通过抑制小鼠蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白、细胞外信号调节激酶1/2、核因子κB和钙调磷酸酶信号通路减轻血管紧张素Ⅱ诱导的心肌重构

黄芩素是一种特异性的脂氧合酶抑制剂,有抗炎和抗氧化作用,而其在血管紧张素（angiotensin,Ang）Ⅱ诱导的高血压和心肌重构中的作用仍不清楚。该研究探讨黄芩素对心肌肥厚和纤维化的影响及潜在机制。方法：单用AngⅡ[1200ng/（kg·min）]或联用12/15-脂氧合酶抑制剂黄芩素（25mg／kg）输注野生型小鼠，持续2周。通过HE染色、Masson染色、麦胚凝集素染色和免疫组织化学对心脏切片进行组织学检查。

慢性铝暴露对大鼠海马神经元PKC、CaMKⅡ、Ng的影响

通过研究慢性铝暴露对大鼠学习记忆和海马长时程增强(long-term potentiation,LTP)的影响,并检测海马神经元蛋白激酶C(protein kinasec,PKC)活性及Ca2+-钙调蛋白激酶Ⅱ(Ca2+-calmodulin dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)和神经颗粒素(neurogranin,Ng)蛋白表达的变化,探讨铝暴露损害学习记忆的作用机制.选用断乳后Wistar大鼠,以含有不同浓度AlCl3的蒸馏水进行饲养.3个月后,测定铝暴露组大鼠脑内和血中的铝含量;测量记录大鼠海马群体峰电位(population spike,PS)LTP;用改良Takai法测定海马神经元PKC活性变化;Western印迹法检测CaMKⅡ和Ng的蛋白表达.结果显示,与对照组相比,铝暴露组的PKC活性降低,差异有统计学意义(P<0·01);与对照组相比,铝暴露组的CaMⅡ蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0·05);与对照组相比,铝暴露组的Ng蛋白表达降低,且差异有统计学意义(P<0·05).实验结果说明:慢性铝暴露可以降低大鼠海马神经元PKC的活性及Ng和CaMKⅡ的蛋白表达,可能影响Ng磷酸化水平,从而影响CaM与Ng之间的亲和性,也影响Ca2+-CaM对CaMKⅡ的调节,抑制LTP的形成,损害学习记忆的功能.