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诱导性低温复苏对失血性休克大鼠肠组织Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅰ表达影响
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作者 薄琦 王鑫宇 +1 位作者 刘丹 张成 《创伤与急危重病医学》 2023年第5期308-312,共5页
目的探讨诱导性低温复苏对失血性休克大鼠肠组织Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅰ(CaMKⅠ)表达的影响。方法选取成年雄性Wistar大鼠30只,随机分为假手术组(n=6)、常温复苏组(n=12)以及低温复苏组(n=12)。假手术组仅进行外科插管及相关... 目的探讨诱导性低温复苏对失血性休克大鼠肠组织Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅰ(CaMKⅠ)表达的影响。方法选取成年雄性Wistar大鼠30只,随机分为假手术组(n=6)、常温复苏组(n=12)以及低温复苏组(n=12)。假手术组仅进行外科插管及相关手术操作,不建立失血性休克模型;常温复苏组及低温复苏组每只大鼠放血25 ml/kg,构建失血性休克模型,休克60 min后分别采取38℃和32℃复苏并维持60 min,复苏结束后将大鼠体温恢复至38℃并监测血流动力学3 h。大鼠复苏3 h后,3组均随机选取50%的大鼠处死,取小肠黏膜、肠系膜淋巴结及血液,剩余大鼠进行72 h生存分析。采用定量聚合酶链式反应(PCR)及蛋白质印迹法分别检测3组大鼠肠黏膜中CaMKⅠmRNA及蛋白表达情况,应用酶联免疫吸附试剂盒检测大鼠血清炎性因子表达情况,同时,进行细菌移位检测。结果复苏3 h后,低温复苏组大鼠的心率和平均动脉压(MAP)均低于常温复苏组,而心输出量、每搏量和射血分数均高于常温复苏组,差异有统计学意义(P<0.05)。设定72 h为观察终点,假手术组大鼠于观察终点时全部存活,低温复苏组大鼠的生存时间为(63.50±9.59)h,明显长于常温复苏组的(46.83±19.59)h,差异有统计学意义(P<0.05)。在液体复苏3 h后,低温复苏组CaMKⅠmRNA表达水平、灰度值均明显低于常温复苏组,差异有统计学意义(P<0.05);常温复苏组与低温复苏组CaMKⅠmRNA、蛋白表达水平均明显高于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05)。假手术组大鼠血清中CaMKⅠ、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6和IL-8水平明显低于常温复苏组和低温复苏组,IL-10水平高于常温复苏组,但低于低温复苏组,差异有统计学意义(P<0.05)。低温复苏组大鼠血清中CaMKⅠ、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8水平明显低于常温复苏组,IL-10水平明显高于常温复苏组,差异有统计学意义(P<0.05)。复苏3 h后,低温复苏组大鼠血液细菌移位量、肠系膜淋巴结细菌移位量均明显低于常温复苏组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在诱导性低温复苏条件下,失血性休克大鼠肠组织中CaMKⅠmRNA及蛋白水平表达降低,大鼠生存时间延长,CaMKⅠ下调可能是诱导性低温复苏减轻大鼠失血性休克肠缺血再灌注损伤的重要分子机制。 展开更多
关键词 失血性休克 诱导性低温 肠缺血再灌注损伤 Ca^(2+)/蛋白依赖性蛋白激酶
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尼莫地平对癫痫大鼠海马Ca^(2+)浓度及Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ_α表达的影响 被引量:4
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作者 王佩 王海祥 +3 位作者 刘瑞春 王维平 范月辉 胡华伟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期226-228,共3页
目的探讨尼莫地平(nimodipin,NIM)对戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及海马细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)、Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡα,CaMKⅡα)蛋... 目的探讨尼莫地平(nimodipin,NIM)对戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及海马细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)、Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡα,CaMKⅡα)蛋白表达的影响。方法将动物分为正常对照组、PTZ组和NIM+PTZ组,采用PTZ慢性点燃癫痫模型,应用Mor-ris水迷宫观察各组大鼠空间学习记忆能力,运用流式细胞仪检测海马细胞内[Ca2+]i变化,Western blot方法测定CaMKⅡα蛋白的表达。结果PTZ组大鼠空间学习记忆能力受损,其海马细胞内[Ca2+]i明显升高(P<0.05),CaMKⅡα蛋白水平较正常对照组减少(P<0.05);与PTZ组比较,NIM+PTZ组大鼠空间学习记忆能力好转,其海马细胞内[Ca2+]i下降(P<0.05),CaMKⅡα蛋白水平升高(P<0.05)。结论PTZ点燃癫痫大鼠海马存在钙超载及CaMKⅡα的表达异常,由此引起大鼠空间学习记忆能力受损;NIM可以降低细胞内[Ca2+]i,提高CaMKⅡα的表达,改善癫痫大鼠的学习记忆能力。 展开更多
关键词 尼莫地平 癫痫 空间学习记忆 Ca^2+/蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα
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石杉碱甲对血管性痴呆小鼠海马神经细胞[Ca^(2+)]_i及钙调蛋白、蛋白激酶Ⅱ信使核糖核酸表达的影响 被引量:26
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作者 吕佩源 尹昱 +2 位作者 王伟斌 梁翠萍 李文斌 《中国新药与临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期73-76,共4页
目的 :观察石杉碱甲对血管性痴呆 (VD)小鼠海马神经细胞 [Ca2 + ] i 和钙调蛋白 (CaM) ,Ca2 +钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ (CaMPKⅡ )mRNA表达的影响。方法 :采用双侧颈总动脉线结法 ,制作小鼠VD模型 ,并设假手术对照组 ,石杉碱甲为治疗... 目的 :观察石杉碱甲对血管性痴呆 (VD)小鼠海马神经细胞 [Ca2 + ] i 和钙调蛋白 (CaM) ,Ca2 +钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ (CaMPKⅡ )mRNA表达的影响。方法 :采用双侧颈总动脉线结法 ,制作小鼠VD模型 ,并设假手术对照组 ,石杉碱甲为治疗组 ;术后d 2 9,30测试学习、记忆成绩。利用激光共焦显微镜检测各组海马神经细胞 [Ca2 + ] i;用RT PCR技术检测CaM ,CaMPKⅡmRNA。结果 :模型组[Ca2 + ] i 荧光强度 (44±s 3)显著高于假手术组(2 6± 4) (P <0 .0 1 )和石杉碱甲组 (2 8.5± 2 .5) (P<0 .0 1 ) ;模型组CaMmRNA含量 (0 .76± 0 .2 1 )显著低于假手术组 (1 .1 3± 0 .2 3) (P <0 .0 1 )和石杉碱甲组 (0 .97± 0 .1 9) (P <0 .0 5) ,CaMPKⅡmRNA含量(0 .43± 0 .0 7)显著低于假手术组 (0 .67± 0 .1 0 )(P <0 .0 1 )和石杉碱甲 (0 .61± 0 .0 8) (P <0 .0 1 )。结论 :石杉碱甲可降低VD小鼠海马神经细胞[Ca2 + ] i,提高CaM ,CaMPKⅡmRNA表达水平 。 展开更多
关键词 痴呆 血管性 小鼠 海马 蛋白 Ca^2+蛋白依赖性蛋白激酶 显微镜检查 共焦 石杉碱甲 静息态[Ca^2+]i
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钙/钙调蛋白依赖的蛋白激酶激酶2在前列腺癌及癌旁组织中的表达及其临床意义 被引量:3
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作者 汤永峰 符浩 +6 位作者 付欣 蔡志煅 李博伟 叶剑恒 吴永定 钟惟德 韩兆冬 《贵州医药》 CAS 2015年第8期694-697,共4页
目的研究CAMKK2在前列腺癌及癌旁组织中的表达,分析其表达与临床病理数据的关系。方法通过实时荧光定量PCR技术检测CAMKK2的mRNA水平在前列腺癌及癌旁组织中的表达情况,通过免疫印迹及免疫组化技术检测CAMKK2的蛋白水平在两种组织中的表... 目的研究CAMKK2在前列腺癌及癌旁组织中的表达,分析其表达与临床病理数据的关系。方法通过实时荧光定量PCR技术检测CAMKK2的mRNA水平在前列腺癌及癌旁组织中的表达情况,通过免疫印迹及免疫组化技术检测CAMKK2的蛋白水平在两种组织中的表达,分析CAMKK2的表达水平与前列腺癌相关临床病理特征及预后的关系。结果前列腺癌组织中的CAMKK2在mRNA及蛋白水平上均较癌旁组织中上调表达,CAMKK2的表达与血清PSA水平、是否转移及是否生化复发有关,CAMKK2的表达高低与无生化复发生存率相关,CAMKK2是生化复发的独立危险预测因素。结论 CAMKK2在前列腺癌组织中的表达增加,可能提示患者的预后情况,并可作为前列腺癌新的生物标记物。 展开更多
关键词 前列腺癌 /蛋白依赖的蛋白激酶激酶2 实时荧光定量PCR 免疫组化 免疫印迹
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咬合干扰大鼠咬肌线粒体钙超载的离子变化特征及其钙调蛋白激酶Ⅱ的调节机制 被引量:1
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作者 曾林 刘静 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期755-760,共6页
目的探明咬合干扰作用下大鼠咬肌组织线粒体钙离子浓度与细胞外钠离子浓度的变化特点,探讨钙调蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)对线粒体"钙超载"现象的调控机制。方法在SD大鼠右侧上颌第一磨牙咬合面粘接直径0.6 mm钢丝段,建立咬合干扰... 目的探明咬合干扰作用下大鼠咬肌组织线粒体钙离子浓度与细胞外钠离子浓度的变化特点,探讨钙调蛋白激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)对线粒体"钙超载"现象的调控机制。方法在SD大鼠右侧上颌第一磨牙咬合面粘接直径0.6 mm钢丝段,建立咬合干扰大鼠模型,实验组分为3、7、14、21 d及去除咬合干扰后3 d组,并设立对照组。应用苏木精-伊红(HE)染色法观察咬肌组织形态学的变化;应用荧光分光光度法检测咬肌线粒体钙离子浓度;应用6-氢氧化锑钾直接比浊法检测咬肌肌纤维细胞外钠离子浓度;应用Western blotting技术检测咬肌组织p-Ca MKⅡ(Thr286)/Ca MKⅡ表达水平。结果与对照组比较,建模3、7、14和21 d实验组咬合干扰侧咬肌线粒体Ca2+浓度持续升高(P<0.05),去除咬合干扰后3 d组Ca2+浓度显著下降且低于正常对照组(P<0.05)。建模3 d组、7 d组、14 d组及21 d组细胞外Na+浓度持续升高(P<0.05),去除咬合干扰后3 d组Na+浓度显著降低(P<0.05)。建模3 d、7 d和14 d实验组咬合干扰侧p-Ca MKⅡ(Thr286)/Ca MKⅡ表达水平持续升高(P<0.05),但其表达水平在建模21 d组下降且低于对照组水平(P<0.05),去除干扰3 d组表达水平显著下降且低于21 d组(P<0.05)。非咬合干扰侧变化趋势同干扰侧趋势一致,但干扰侧变化更显著(P<0.05)。结论咬合干扰可使大鼠咬肌线粒体Ca2+和胞浆Na+浓度升高,引发"钙超载";线粒体Ca2+浓度升高与Ca MKⅡ磷酸化水平相关,提示其对线粒体"钙超载"具有负反馈调节作用。 展开更多
关键词 线粒体超载 咬合干扰 咬肌 钙调蛋白激酶2 咀嚼肌功能紊乱
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钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在窦房结中的生物学作用 被引量:1
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作者 聂大安 李景东 《心血管病学进展》 CAS 2018年第2期226-229,共4页
Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ表达在窦房结细胞中,能够在不影响基础心率的条件下调节应激时的心率反应,通过作用于窦房结细胞上的离子通道及细胞内的钙通道、受磷蛋白和雷诺定受体等信号蛋白调节窦房结起搏功能,还能感应钙超负荷... Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ表达在窦房结细胞中,能够在不影响基础心率的条件下调节应激时的心率反应,通过作用于窦房结细胞上的离子通道及细胞内的钙通道、受磷蛋白和雷诺定受体等信号蛋白调节窦房结起搏功能,还能感应钙超负荷、氧化应激和高血糖状态,影响窦房结功能障碍发展进程。现简要总结钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ在窦房结中的生物学作用。 展开更多
关键词 窦房结 Ca2+/蛋白依赖性蛋白激酶 氧化Ca2+/蛋白依赖性蛋白激酶 窦房结功能障碍 心率
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钙调素蛋白磷酸酶对Slingshot-1L的调控作用
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作者 王杨 王岩 +1 位作者 赵建武 高忠礼 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期353-355,共3页
目的探讨钙调素依赖蛋白激酶(Calcinenurin/PP2B/CnA/Cn)对Slingshot-1L(SSH-1L)活性的调控作用。方法用脂质体法将含YFP-SSH-1L的重组质粒转染至MG63细胞,经钙离子载体A23187诱导10min,进行免疫细胞化学染色,观察细胞形态变化;体内及... 目的探讨钙调素依赖蛋白激酶(Calcinenurin/PP2B/CnA/Cn)对Slingshot-1L(SSH-1L)活性的调控作用。方法用脂质体法将含YFP-SSH-1L的重组质粒转染至MG63细胞,经钙离子载体A23187诱导10min,进行免疫细胞化学染色,观察细胞形态变化;体内及体外实验检测PP3B对SSH-1L的活性调控作用;应用免疫共沉实验检测PP2B与SSH-1L的相互结合情况。结果Ca2+信号诱导骨肉瘤细胞形成伪叶,同时SSH-1L与F-actin移位共聚集至细胞膜伪叶,但是被PP2B有效抑制剂Cypermethrin完全阻断;在体外,SSH-1L磷酸酶活性测定实验以及SSH-1L与PP2B结合实验证实SSH-1L与PP2B在细胞内是一对相互结合的蛋白质,同时PP2B具有促进SSH-1L酶活性的作用。结论PP2B通路对细胞伪叶的形成及细胞运动具有重要调控作用,同时对SSH-1L酶具有促进其活性的作用。 展开更多
关键词 蛋白激酶(Calcineurin/PP2B/Cna/Cn) Slingshot-1L(SSH-1L) 骨肉瘤
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抑郁症患者外周血miRNA-219和钙调蛋白激酶Ⅱγ亚基mRNA表达水平的临床意义 被引量:7
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作者 余正和 李轶 +2 位作者 李静 宋明芬 王晟东 《中华精神科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期134-138,共5页
目的通过检测首次发病抑郁症患者外周血中miRNA-219和钙调蛋白激酶Ⅱγ亚基mRNA(γCaMKⅡ mRNA)表达水平,分析探讨其与抑郁症之间的关系。方法纳入符合DSM-5中抑郁发作诊断标准的41例抑郁症患者(抑郁组)和31名健康对照者(对照组),采用HA... 目的通过检测首次发病抑郁症患者外周血中miRNA-219和钙调蛋白激酶Ⅱγ亚基mRNA(γCaMKⅡ mRNA)表达水平,分析探讨其与抑郁症之间的关系。方法纳入符合DSM-5中抑郁发作诊断标准的41例抑郁症患者(抑郁组)和31名健康对照者(对照组),采用HAMD17评估患者的抑郁症状严重程度,采集受试者空腹外周血样本,采用实时荧光定量PCR法检测外周血白细胞中miRNA-219表达水平和γCaMKⅡ mRNA表达水平,采用t检验进行组间比较;miRNA-219表达水平、γCaMKⅡ mRNA表达水平、HAMD17评分两两之间相关性采用Pearson相关分析。结果抑郁组外周血白细胞miRNA-219表达水平低于对照组(0.91±0.21与1.80±0.24,t=2.753,P=0.007 5),γCaMKⅡ mRNA表达水平高于对照组(5.55±0.57与2.16±0.20,t=4.970,P<0.01),差异均有统计学意义。并且抑郁组外周血白细胞γCaMKⅡ mRNA表达水平与HAMD17评分呈正相关(r=0.460,P=0.002 5)。结论抑郁症患者外周血miRNA-219表达水平降低,γCaMKⅡ mRNA表达水平升高,提示miRNA-219和γCaMKⅡ表达水平可能与抑郁症发病机制存在一定联系。 展开更多
关键词 抑郁症 受体 N-甲基-D-天冬氨酸 -蛋白依赖性蛋白激酶2 miRNA-219
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唑来膦酸对破骨细胞分化中Ca^2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ与钙调蛋白结合及下游基因表达的影响 被引量:1
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作者 王会 董伟 +3 位作者 戚孟春 孙红 冯晓洁 温黎明 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期120-125,共6页
目的探讨唑来膦酸对破骨细胞分化中Ca^2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca^2+/calmodnlin.dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)与钙调蛋结合及下游活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activation of cells-1,NFATc1)、抗酒石... 目的探讨唑来膦酸对破骨细胞分化中Ca^2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca^2+/calmodnlin.dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)与钙调蛋结合及下游活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activation of cells-1,NFATc1)、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acidphos phatase,TRAP)基因表达的影响,探索其抑制破骨细胞分化的分子机制。方法将小鼠RAW264.7细胞分为A、B两组,每组均以5×10^3个/孔接种于直径为30mm的培养皿中培养。A组(对照组)在NF-κB受体激活蛋白配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)诱导下向破骨细胞形成,B组(唑来膦酸组)在RANKL诱导培养1d后加用1×10^-6mol/L唑来膦酸处理2d。应用免疫共沉淀co.immunoprecipitation,Co-IP)及反向Co-IP对CaMKⅡ与钙调蛋白的结合进行分析;应用蛋白质印迹法及免疫荧光细胞化学检测两组NFATc1、TRAP蛋白表达,并对破骨细胞生成进行评价。结果B组新生多核破骨细胞数、牙本质吸陷窝数和面积分别为(11.3±1.5)个、(8.7±2.1)个和(5034.4+775.4)μm^2,均显著低于A组[分别为(37.7±5.7)个、(23.0±4.0)个和(15042.7±1906.0)μm^2](P〈0.01)。Co—IP及反向Co—IP检测显示,B组CaMKII与钙调蛋白的结合较A组分别显著下降了59.8%和50.9%(P〈0.01);在总蛋白中,B组钙调蛋白与CaMKll蛋白较A组,分别显著降低了52.1%和51.5%(P〈0.01)。NFATc1、TRAP蛋白水平B组较A组显著下降了52.4%和38.9%(P〈0.01);免疫荧光化学检测也显示B组蛋白表达强度较A组弱。结论唑来膦酸可以显著抑制破骨细胞分化中CaMKⅡ与钙调蛋白的结合,并下调下游NFATc1、TRAP的蛋白表达。 展开更多
关键词 -蛋白依赖性蛋白激酶2 蛋白 唑来膦酸 免疫沉淀法
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抑制剂KN-93干预二乙酰吗啡致心肌细胞节律异常的蛋白质组学分析
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作者 季敏 苏丽萍 +3 位作者 刘丽 管雅玲 肖锦玲 蒲红伟 《中国医药导报》 CAS 2023年第19期4-9,共6页
目的使用蛋白质组学分析抑制剂KN-93干预二乙酰吗啡致心肌细胞节律异常的作用。方法60只SPF级SD大鼠乳鼠,雌雄不限,提取心肌组织,体外培养SD大鼠乳鼠原代心肌细胞,分为对照组和实验组,对照组使用100μmol/L二乙酰吗啡作用24 h,实验组使... 目的使用蛋白质组学分析抑制剂KN-93干预二乙酰吗啡致心肌细胞节律异常的作用。方法60只SPF级SD大鼠乳鼠,雌雄不限,提取心肌组织,体外培养SD大鼠乳鼠原代心肌细胞,分为对照组和实验组,对照组使用100μmol/L二乙酰吗啡作用24 h,实验组使用100μmol/L二乙酰吗啡+1μmol/L KN-93作用24 h。采用TMT相对定量蛋白质技术筛选出对照组和实验组之间具有显著性表达差异蛋白质,筛选标准:表达倍数上调>1.2倍或下调<0.83倍且P<0.05。通过GO功能富集分析差异表达蛋白质的主要功能、细胞定位和参与的生物学过程,通过KEGG通路富集分析差异表达蛋白质可能参与的代谢或信号通路,通过蛋白质相互作用网络分析蛋白质之间有结合作用或相互作用。结果与对照组比较,实验组Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)磷酸化水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);TMT技术共筛选出346个差异表达蛋白质,主要参与对细胞因子的反应、细胞对细胞因子刺激的反应等过程,影响相同的蛋白质结合、信号受体结合等分子功能和细胞外区域部分、胞外区等细胞组分蛋白,主要富集在癌症途径、PI3K-Akt信号通路、人乳头瘤病毒感染、阿尔茨海默病等信号通路。蛋白互作网络显示,MSH6、NFk B1等可能与CaMKⅡ存在蛋白质互相作用关系。与对照组比较,实验组ADCY7、NFk B1、MSH6、MMP2、MMP9、NQO1、TXNRD1蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论CaMKⅡ可能通过调控NFk B、MSH6等蛋白的改变,通过癌症途径信号通路调节心肌细胞凋亡,参与二乙酰吗啡致心肌细胞节律异常过程。 展开更多
关键词 二乙酰吗啡 心肌细胞 Ca2+/蛋白依赖性蛋白激酶 蛋白质组学
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CaMKⅡ磷酸化介导海马长时程增强的诱导及淀粉样β蛋白引起的长时程增强伤害 被引量:5
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作者 殷文娟 李新毅 祁金顺 《中西医结合心脑血管病杂志》 2008年第5期557-559,共3页
目的探讨大鼠海马在体长时程增强(LTP)的诱导与Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)磷酸化水平的关系;CaMKⅡ磷酸化水平在淀粉样β蛋白(Aβ)所致海马LTP伤害中的作用。方法电生理手段记录大鼠在体海马CA1区场电位变化;免疫组化技术... 目的探讨大鼠海马在体长时程增强(LTP)的诱导与Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)磷酸化水平的关系;CaMKⅡ磷酸化水平在淀粉样β蛋白(Aβ)所致海马LTP伤害中的作用。方法电生理手段记录大鼠在体海马CA1区场电位变化;免疫组化技术测定海马脑片CaMKⅡ磷酸化水平。结果高频刺激(HFS)成功诱导海马CA1区LTP,同时,CaMKⅡ的磷酸化水平明显升高;25nmol Aβ25-35预处理可时间依赖性压抑海马LTP的诱导;Aβ25-35预处理可时间依赖性压抑海马CaMKⅡ的磷酸化水平。结论在LTP诱导过程中,电生理指标场兴奋性突触后电位的LTP变化与免疫组织化学实验中磷酸化CaMKⅡ的变化相一致;CaMKⅡ磷酸化作用的下调可能参与了Aβ对在体海马LTP的抑制。 展开更多
关键词 Ca^2+/蛋白依赖性蛋白激酶 LTP 免疫组化 海马 大鼠
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CaMK Ⅱ活性对H_2O_2所致SK-N-SH细胞氧化应激损伤的影响
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作者 于剑锋 耿霞 +3 位作者 王钢 陈静 高文洁 黄科昌 《解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第5期535-538,共4页
目的:评价钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活性对过氧化氢所致人源性神经母细胞瘤细胞氧化应激损伤的影响。方法:SK-N-SH细胞生长至对数期时,接种于96孔培养板或6孔培养板,采用随机数字表法,将其分为4组:正常对照组,培养基中添加H_2O_... 目的:评价钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活性对过氧化氢所致人源性神经母细胞瘤细胞氧化应激损伤的影响。方法:SK-N-SH细胞生长至对数期时,接种于96孔培养板或6孔培养板,采用随机数字表法,将其分为4组:正常对照组,培养基中添加H_2O_2组(H_2O_2组),培养基中只添加CaMKⅡ活性抑制剂KN93组(KN93组),培养基中同时添加H_2O_2和KN93组(H_2O_2+KN93组),倒置显微镜观察细胞形态学,采用CCK-8法测定细胞活力,采用Fura-2/AM荧光法检测细胞内Ca^(2+)浓度([Ca^(2+)]_i),采用免疫印迹测定CaMKⅡ和磷酸化CaMKⅡ的表达,采用RT-PCR法检测CaMK mRNA表达。结果:与正常对照组比较,H202组细胞体呈圆形的细胞和脱落细胞增加,细胞突起长度缩短,细胞存活率降低,[Ca^(2+)]_i升高,磷酸化CaMKⅡ表达上调,CaMKⅡmRNA表达下调。与H_2O_2组比较,H_2O_2+KN93组脱落细胞明显减少,突起变长,细胞存活率增加,[Ca^(2+)]_i降低,磷酸化CaMKⅡ表达下调,CaMKⅡmRNA表达水平上调。结论:CaMKⅡ增强了H_2O_2诱导的人源性神经母细胞瘤细胞氧化应激损伤。 展开更多
关键词 过氧化氢 氧化应激 蛋白依赖性蛋白激酶2型 神经母细胞瘤
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LRRK2干扰对MPP+诱导PD细胞模型线粒体功能的影响 被引量:1
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作者 罗宁 王春玲 +4 位作者 蒙冰 周欣梅 冯文勇 李昌海 文晓东 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 CAS 北大核心 2022年第1期6-10,16,共6页
目的探讨富亮氨酸重复激酶2(LRRK2)干扰对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的帕金森病(PD)细胞模型线粒体功能及CaMKK-β/AMPK通路的影响。方法采用MPP+诱导传代培养的SH-SY5Y细胞构建PD细胞模型。将造模的SH-SY5Y细胞随机分PD模型组、... 目的探讨富亮氨酸重复激酶2(LRRK2)干扰对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的帕金森病(PD)细胞模型线粒体功能及CaMKK-β/AMPK通路的影响。方法采用MPP+诱导传代培养的SH-SY5Y细胞构建PD细胞模型。将造模的SH-SY5Y细胞随机分PD模型组、空载转染组(空载转染PD模型细胞)和siRNA转染组(siRNA-LRRK2转染PD模型),另设正常对照组,每组设3个复孔。采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞LRRK2 mRNA表达,采用免疫印迹(WB)法检测各组细胞LRRK2蛋白表达,采用JC-1探针法检测各组细胞线粒体膜电位,采用试剂盒检测各组细胞线粒体复合物I(Complex I)活性及ATP含量,采用WB检测各组细胞中CaMKK-β/AMPK通路相关蛋白CaMKK-β、AMPK和p-AMPK蛋白表达。结果与正常对照组相比,PD模型组LRRK2蛋白表达增加(P<0.05),线粒体膜电位下降,Complex I活性及ATP含量降低(P<0.05),CaMKK-β/AMPK通路蛋白CaMKK-β、AMPK、p-AMPKα(Thr 172)蛋白表达增加(P<0.05)。与PD模型组比较,siRNA转染组LRRK2 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05),线粒体膜电位提升,Complex I活性及ATP含量增加(P<0.05),CaMKK-β、AMPK和p-AMPK蛋白表达降低(P<0.05)。结论LRRK2干扰可改善MPP+诱导的PD细胞模型中受损的线粒体功能,抑制CaMKK-β/AMPK信号通路。 展开更多
关键词 帕金森病 富亮氨酸重复激酶2 线粒体功能 -蛋白依赖性蛋白激酶2 AMPK通路
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非接触共培养体系下抑制ARPE-19中CAMKⅡ表达对HUVECs迁移和侵袭及管腔形成的影响
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作者 徐卫星 刘华 张岩 《国际眼科杂志》 CAS 2024年第4期508-514,共7页
目的:探讨非接触共培养体系下抑制人视网膜色素上皮细胞(ARPE)中Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CAMKⅡ)表达对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移、侵袭、管腔形成的影响。方法:将过表达CAMKⅡ-δ的ARPE-19样本进行RNA测序,应用生物信息学... 目的:探讨非接触共培养体系下抑制人视网膜色素上皮细胞(ARPE)中Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CAMKⅡ)表达对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)迁移、侵袭、管腔形成的影响。方法:将过表达CAMKⅡ-δ的ARPE-19样本进行RNA测序,应用生物信息学分析差异基因参与的功能。使用transwell小室构建ARPE-19和HUVECs非接触共培养体系,根据实验干预措施分为:空白组:仅接种未共培养的HUVECs,无ARPE-19细胞;对照组:ARPE-19和HUVECs细胞均使用完全培养基进行共培养;AIP组(CAMKⅡ抑制组):ARPE-19使用含有AIP(160 nmol/L)的完全培养基,HUVECs使用完全培养基,进行共培养。检测HUVECs迁移、侵袭和管腔形成能力的变化,并通过Western blotting检测CAMKⅡ/AMPK/mTOR/VEGFA蛋白表达水平。结果:生信分析发现差异基因参与细胞生长与死亡和细胞运动等生物学过程。划痕和transwell迁移实验均表明AIP组的HUVECs相对迁移率均明显低于对照组(均P<0.05)。而侵袭和小管形成实验表明,AIP组的相对侵袭率和相对管腔形成率较对照组无明显改变(均P>0.05)。Western blotting结果表明AIP组CAMKⅡ、P-mTOR、VEGFA蛋白表达较对照组均明显下调,而P-AMPK蛋白表达较明显上调(均P<0.05)。结论:在非接触共培养体系下抑制ARPE-19细胞中CAMKⅡ表达可以显著降低HUVECs迁移能力,但不能改变侵袭和管腔形成能力,这可能是通过AMPK/mTOR/VEGFA信号通路实现的。 展开更多
关键词 Ca^(2+)/蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CAMKⅡ) 自生肽2相关抑制肽(AIP) 迁移 人视网膜色素上皮细胞(ARPE) 人脐静脉内皮细胞(HUVECs)
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稳心颗粒对房颤大鼠心房肌钙调控Cav1.2-CaM-CaMK Ⅱ信号通路的影响 被引量:14
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作者 张菀桐 胡元会 +2 位作者 陈雯 师帅 翁维良 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期2246-2249,共4页
目的:探索房颤(Af)模型发生维持机制的关键病理环节,并阐释稳心颗粒对Af大鼠心房肌钙调控Cav1.2-CaM-CaMKⅡ信号通路的影响机制。方法:选取健康雄性SD大鼠50只,将体质量均衡大鼠随机分为正常组(10只)和造模组(40只)2组,将造模成功大鼠... 目的:探索房颤(Af)模型发生维持机制的关键病理环节,并阐释稳心颗粒对Af大鼠心房肌钙调控Cav1.2-CaM-CaMKⅡ信号通路的影响机制。方法:选取健康雄性SD大鼠50只,将体质量均衡大鼠随机分为正常组(10只)和造模组(40只)2组,将造模成功大鼠随机分为模型组、稳心颗粒组、维拉帕米组与正常组共4组,连续给药4周,期间持续尾静脉注射Ach-CaCl_2。以Langendorff恒温恒流灌流系统,描记离体心电图,同时以S1S2程控刺激检测各组大鼠心房有效不应期。运用Western blot方法检测Af模型大鼠心房肌Cav1.2、钙调蛋白(CaM)、2型钙调蛋白激酶(CaMKⅡ)、2型兰尼碱受体(RYR^2)、2型兰尼碱受体磷酸化(P-RYR^2)蛋白表达程度。结果:大鼠给药治疗4周后,1心房有效不应期(AERP)组间比较:与正常组比较,模型组大鼠AERP显著缩短(P≤0.01);与模型组比较,维拉帕米组、稳心颗粒组大鼠AERP显著延长(P≤0.05)。2稳心颗粒组大鼠心房肌Cav1.2蛋白表达水平上调,CaM蛋白、CaMKⅡ蛋白表达水平下调,Ry R^2磷酸化程度降低。结论:稳心颗粒治疗房颤的机制可能为减轻Af模型大鼠心房肌细胞内钙超载,恢复细胞内钙稳态。 展开更多
关键词 房颤大鼠 稳心颗粒 2型蛋白激酶
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Nrf2参与CaMKII抑制引起的神经细胞毒性作用
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作者 顾宇婧 张晓红 +7 位作者 王妤婷 何苗 佟欣 童昱 李美璇 孙智惠 张欣怡 郭凤 《解剖科学进展》 CAS 2024年第1期82-85,共4页
目的探讨Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKII)的特异性抑制剂KN93对神经细胞的作用及其与Nrf2通路之间的关系。方法培养小鼠脑神经瘤细胞N2a,CCK8检测确定给药12h后KN93对细胞的毒性作用与浓度的相关性;应用5μmolKN93给药12h后... 目的探讨Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKII)的特异性抑制剂KN93对神经细胞的作用及其与Nrf2通路之间的关系。方法培养小鼠脑神经瘤细胞N2a,CCK8检测确定给药12h后KN93对细胞的毒性作用与浓度的相关性;应用5μmolKN93给药12h后进行荧光NeuN染色,检测细胞存活率;应用ELISA试剂盒检测KN93对炎症因子TNF-α、IL-1β表达的影响;Westernblot检测给药KN93后Nrf2蛋白表达的变化;ELISA试剂盒检测KN93与Nrf2拮抗剂ML385同时处理时,炎症相关因子TNF-α、IL-1β表达的变化。结果与对照组相比,5μmol KN93给药12h后,KN93给药组中NeuN染色的阳性细胞明显减少;TNF-α和IL-1β表达明显增加;Nrf2蛋白表达显著增加;与KN93给药组相比,KN93和Nrf2拮抗剂ML385同时处理组炎症相关蛋白表达下降,即Nrf2的抑制剂ML385能逆转KN93诱发的炎症反应。结论Nrf2通过诱发炎性反应,参与CaMKII的抑制剂KN93引起的神经细胞毒性作用。 展开更多
关键词 Ca^(2+)/蛋白依赖性蛋白激酶 KN93 癫痫 N2a NRF2
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慢性铝暴露对大鼠海马神经元PKC、CaMKⅡ、Ng的影响 被引量:9
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作者 邢伟 王彪 +4 位作者 郝凤进 许金华 赵岩 刘素媛 时利德 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期410-414,共5页
通过研究慢性铝暴露对大鼠学习记忆和海马长时程增强(long-term potentiation,LTP)的影响,并检测海马神经元蛋白激酶C(protein kinasec,PKC)活性及Ca2+-钙调蛋白激酶Ⅱ(Ca2+-calmodulin dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)和神经颗粒素... 通过研究慢性铝暴露对大鼠学习记忆和海马长时程增强(long-term potentiation,LTP)的影响,并检测海马神经元蛋白激酶C(protein kinasec,PKC)活性及Ca2+-钙调蛋白激酶Ⅱ(Ca2+-calmodulin dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)和神经颗粒素(neurogranin,Ng)蛋白表达的变化,探讨铝暴露损害学习记忆的作用机制.选用断乳后Wistar大鼠,以含有不同浓度AlCl3的蒸馏水进行饲养.3个月后,测定铝暴露组大鼠脑内和血中的铝含量;测量记录大鼠海马群体峰电位(population spike,PS)LTP;用改良Takai法测定海马神经元PKC活性变化;Western印迹法检测CaMKⅡ和Ng的蛋白表达.结果显示,与对照组相比,铝暴露组的PKC活性降低,差异有统计学意义(P<0·01);与对照组相比,铝暴露组的CaMⅡ蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0·05);与对照组相比,铝暴露组的Ng蛋白表达降低,且差异有统计学意义(P<0·05).实验结果说明:慢性铝暴露可以降低大鼠海马神经元PKC的活性及Ng和CaMKⅡ的蛋白表达,可能影响Ng磷酸化水平,从而影响CaM与Ng之间的亲和性,也影响Ca2+-CaM对CaMKⅡ的调节,抑制LTP的形成,损害学习记忆的功能. 展开更多
关键词 蛋白激酶C(PKC) Ca^2+-蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ) 神经颗粒素(Ng) 学习记忆
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莪术油注射液对慢性低氧大鼠学习与记忆的影响 被引量:12
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作者 孙臣友 胡伟 +3 位作者 戚双双 戴开宇 胡斯旺 楼新法 《生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期228-234,共7页
本文旨在探讨莪术油注射液对慢性低氧大鼠学习与记忆的影响及其可能机制。将Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组、慢性低氧组、5mg/kg体重莪术油组、10mg/kg体重莪术油组、20mg/kg体重莪术油组,每组14只。慢性低氧处理采用低氧舱内吸入大... 本文旨在探讨莪术油注射液对慢性低氧大鼠学习与记忆的影响及其可能机制。将Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组、慢性低氧组、5mg/kg体重莪术油组、10mg/kg体重莪术油组、20mg/kg体重莪术油组,每组14只。慢性低氧处理采用低氧舱内吸入大约10%O2、5%CO2,饲养10h/d,持续饲养28d。莪术油组大鼠低氧处理前腹腔注射相应浓度的莪术油注射液。实验结束次日,通过Morris水迷宫测试各组动物学习和记忆成绩的变化;测定各组大鼠血清和海马组织丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性以及海马组织Ca2+浓度([Ca2+i]);通过免疫组织化学和Western blot检测磷酸化Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(phosphorylated Ca2+/calmodulin-dependent pro-tein kinase II,p-CaMKII)在海马组织和胞膜上的表达。结果显示,与对照组相比,慢性低氧组大鼠隐蔽平台的逃避潜伏期明显延长(P<0.05),血清和海马组织MDA含量明显增高,SOD活性显著降低(P<0.05,P<0.01),海马组织[Ca2+]i明显增高(P<0.01),海马p-CaMKII表达量显著降低(P<0.01)。与慢性低氧组比较,莪术油各组发生以下变化:10、20mg/kg体重莪术油组大鼠隐蔽平台的逃避潜伏期显著缩短(P<0.05);5、10、20mg/kg体重莪术油组大鼠血清和海马组织MDA含量均显著降低(P<0.05,P<0.01);10、20mg/kg体重莪术油组大鼠血清SOD活性显著增加(P<0.01);5、10、20mg/kg体重莪术油组大鼠海马组织[Ca2+]i明显降低(P<0.01);10、20mg/kg体重莪术油组大鼠海马p-CaMKII表达也明显增加(P<0.05,P<0.01)。以上结果提示,莪术油改善慢性低氧导致的大鼠学习与记忆能力下降,其机制可能与降低血清和海马组织MDA含量、增加SOD活性、降低海马组织[Ca2+]i和/或增加海马组织p-CaMKII表达有关。 展开更多
关键词 慢性低氧 莪术油注射液 学习和记忆 海马 磷酸化Ca2+/蛋白依赖性蛋白激酶II
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前列腺素EP_3受体激动剂诱导发热及其机制初探 被引量:11
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作者 李沧海 周军 +2 位作者 霍海如 康旭亮 姜廷良 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期664-665,672,共3页
目的 :研究前列腺素EP3 受体激动剂对大鼠体温的影响并初步探讨其作用机制。方法 :观察脑室注射前列腺素EP3 受体激动剂sulprostone对大鼠体温的影响 ,并与同当量PGE2 比较 ;利用PI-PLC及CaMKⅡ特异性抑制剂初步分析PGE2 和sulprostone... 目的 :研究前列腺素EP3 受体激动剂对大鼠体温的影响并初步探讨其作用机制。方法 :观察脑室注射前列腺素EP3 受体激动剂sulprostone对大鼠体温的影响 ,并与同当量PGE2 比较 ;利用PI-PLC及CaMKⅡ特异性抑制剂初步分析PGE2 和sulprostone诱导发热的机理。结果 :脑室注射sulprostone可剂量依赖性升高大鼠体温 ,较之同当量PGE2 发热峰值更高、持续时间更长 ;同时给予PI-PLC、CaMKⅡ抑制剂可以明显抑制PGE2 和sulprostone诱导的体温升高。结论 :前列腺素E2 可能主要通过EP3 受体诱导大鼠发热 ,其胞内环节可能与PI -PLC -IP3 -Ca2 + /CaM -CaMKⅡ通路有关。 展开更多
关键词 前列腺素 受体 前列腺素E 发热 大鼠 Ca(2+)蛋白依赖性蛋白激酶
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麝香保心丸防治动脉粥样硬化的实验研究 被引量:7
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作者 陶彦谷 李进营 +1 位作者 韦燕妮 黄启辉 《中药新药与临床药理》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期508-511,共4页
目的研究慢性炎症反应与动脉粥样硬化的关系及麝香保心丸防治动脉粥样硬化的作用机制。方法新西兰雄性大耳白兔60只,随机分为5组,即空白对照组,模型组,麝香保心丸低、高剂量组,立普妥组。高脂饲料造模4周后再连续给药6周,末次给药后(空... 目的研究慢性炎症反应与动脉粥样硬化的关系及麝香保心丸防治动脉粥样硬化的作用机制。方法新西兰雄性大耳白兔60只,随机分为5组,即空白对照组,模型组,麝香保心丸低、高剂量组,立普妥组。高脂饲料造模4周后再连续给药6周,末次给药后(空腹大于12 h)耳动脉采血,麻醉后取主动脉,检测血脂及炎症因子,观察各组动物动脉内膜病理形态的改变,检测Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(CaMKⅡ)蛋白表达及Ca MKII的活性。结果与模型组比较,麝香保心丸低、高剂量组及立普妥组的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)水平及动脉粥样斑块数量、厚度均有明显降低,Ca MKII蛋白含量及活性均有明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论麝香保心丸具有抗实验性新西兰大耳兔动脉粥样硬化的作用,并可能与降低CaMKⅡ蛋白含量或活性,减轻或抑制慢性炎症反应有关。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 麝香保心丸 Ca2+/蛋白依赖性蛋白激酶II
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