东亚钳蝎钙通道样毒素的重组表达及活性研究

目的:原核表达东亚钳蝎钙通道样毒素,分离纯化并初步探讨其生物学活性。方法:将东亚钳蝎钙通道样毒素Bm Ca基因重组到PET-GST表达载体中,转化入大肠杆菌BL21并IPTG诱导表达,Ni-Super Chelating Resin柱亲和层析纯化融合蛋白,尿素梯度透析法复性融合蛋白,采用激光共聚焦显微镜观察其对大鼠骨骼肌细胞内钙浓度的影响。结果:成功构建PET-GST-Bm Ca原核表达质粒,诱导后表达分子量约为33 k D的融合蛋白,经亲和层析得较高纯度的融合蛋白,复性后激光共聚焦扫描显微镜检测显示表明重组蛋白能可逆性的升高骨骼肌细胞内[Ca2+]i。结论:成功构建PET-GST-Bm Ca重组质粒,获得Bm Ca基因工程菌株,并表达纯化得到可作用于钙通道的重组蝎毒素蛋白。

东亚钳蝎钙通道样毒素的克隆与其在大肠杆菌中的表达

目的:克隆东亚钳蝎钙通道样毒素(BmCa)基因,并构建原核表达质粒,在大肠杆菌中重组表达该毒素蛋白。方法:以东亚钳蝎尾毒腺的总RNA为模板,通过RT-PCR技术,扩增并克隆BmCa的cDNA基因,并将该基因重组到PET-GST表达载体中,转化入大肠杆菌BL21并诱导表达,采用N i-SuperChelating Resin柱亲和层析纯化,用小白鼠毒性实验检测融合蛋白的活性。结果:成功克隆BmCa基因并构建原核表达质粒,IPTG诱导后表达分子质量约为33KD的融合蛋白,含量为大肠杆菌总蛋白的25%,经亲和层析得较高纯度的融合蛋白,小白鼠毒性实验表明融合蛋白具有活性。结论:在大肠杆菌中成功表达了有活性的东亚钳蝎钙通道样毒素蛋白,为其功能研究奠定基础。