面神经损伤后面神经核中神经型钙黏附分子及胎盘型钙黏附分子的表达

背景:面神经周围性损伤后,首先涉及其中枢神经元轴突的逆行性反应,神经能否再生则取决于神经元胞体的存活及功能状态。目的:检测面神经损伤后,面神经核中神经型钙黏附分子和胎盘型钙黏附分子的表达变化。方法:将新西兰大白兔随机分为模型组(n=48)和对照组(n=8)。模型组兔建立右侧面神经压榨损伤模型。模型组分别于损伤后1,4,7,14,21,28 d各取8只兔进行检测。运用免疫组织化学SP法及实时定量PCR法检测兔右侧面神经核运动神经元中神经型钙黏附分子和胎盘型钙黏附分子蛋白及mR NA的表达水平。结果与结论:对照组兔右侧面神经核运动神经元中无神经型钙黏附分子或胎盘型钙黏附分子标记的阳性神经元。模型组兔右侧面神经核运动神经元中存在神经型钙黏附分子和胎盘型钙黏附分子阳性神经元,2种阳性神经元数量均在第14天时达到峰值。与对照组相比,模型组损伤后4-28 d兔面神经核中神经型钙黏附分子mR NA的表达水平明显增加,损伤后1 d时兔面神经核中胎盘型钙黏附分子mR NA的表达水平明显下降,损伤后7-28 d时兔面神经核中胎盘型钙黏附分子mR NA的表达水平明显增加。提示面神经损伤的早期即出现2种分子的阳性表达,其中胎盘型钙黏附分子的表达自神经损伤后一直存在,而神经型钙黏附分子表达时间相对较短。在面神经损伤时,面神经核中神经型钙黏附分子和胎盘型钙黏附分子均表达增加,说明面神经再生可能与黏附分子的高表达有关。

RNA干扰技术抑制上皮性钙黏附分子表达对HO-8910细胞的影响

目的探讨通过RNA干扰(RNAi)技术下调上皮性钙黏附分子(E-cad)表达后,对人卵巢浆液性囊腺癌HO-8910细胞的侵袭、迁移能力的影响。方法将针对E-cad的双链小干扰RNA(siRNA)转染入HO-8910细胞中,抑制E-cad基因表达;采用免疫荧光法及Western blotting检测RNAi效果;用Transwell小室法检测RNAi后细胞侵袭、迁移能力的改变。结果RNAi后HO-8910细胞E-cad表达显著下降,由63.7%降低为11.9%(P<0.01),RNAi有效;细胞对细胞外基质的侵袭能力明显提高,穿过滤膜的细胞数由13.4±3.93增至42.0±4.15(P<0.01);细胞迁移能力也明显提高,穿过滤膜的细胞数由23.24±3.71增至82.0±5.51(P<0.01)。结论人卵巢浆液性囊腺癌的侵袭、转移等恶性行为可能与E-cad基因表达下降有关。

B16黑色素瘤组织中上皮型钙黏附分子和S-100蛋白的表达及意义

目的:探讨B16黑色素瘤小鼠体内上皮型钙黏附分子与S-100蛋白的表达在肿瘤侵袭及转移过程中发挥的作用。方法:C57纯系小鼠分为12d和25d肿瘤组和正常对照组。肿瘤组将B16黑色素瘤细胞人工植入C57小鼠背部皮下,制荷瘤鼠模型,免疫组织化学法检测肿瘤病变中心区及交界区皮肤上皮型钙黏附分子和S-100的表达。结果:12d肿瘤组肿瘤组织中S-100蛋白表达的面密度和数密度明显增高,与正常对照组和25d肿瘤组比较差异有统计学意义;肿瘤组织中上皮型钙黏附分子表达的面密度和数密度较正常对照组明显降低。结论:上皮型钙黏附分子和S-100蛋白的异常表达在皮肤黑色素瘤的恶性进展过程中起重要作用,其表达程度可作为判断黑色素瘤恶性程度及预后的指标之一。

胃癌中钙黏附分子启动子甲基化与幽门螺旋杆菌感染的相关性研究

目的:探讨胃癌中钙黏附分子启动子甲基化与幽门螺旋杆菌(Hp)感染的相关性,为临床诊断治疗提供依据。方法:纳入86例胃癌患者,获取肿瘤组织,与正常黏膜组织对照,采用甲基化特异性聚合酶链反应法检测胃癌中CDH1基因启动子甲基化。两组患者一般资料比较无显著性差异,具有可比性(P>0.05)。结果:胃癌组患者CDH1基因甲基化阳性61例,阳性率为70.9%。对照组患者CDH1基因甲基化阳性11例,阳性率12.8%,两组比较具有显著性差异(P<0.01)。胃癌组CDH1基因甲基化阳性率与肿瘤分化程度、幽门螺旋杆菌感染密切相关,而与性别、浸润程度相关性小。结论:钙黏附分子基因启动子甲基化与胃癌发生密切相关。胃癌中钙黏附分子启动子甲基化与Hp感染密切相关,由此可见,Hp感染可能参与了抑癌基因甲基化失活及肿瘤演变的发展过程。

大肠癌E-钙黏附分子表达及其临床意义

目的 探讨大肠癌E 钙黏附分子 (E cadherin ,E CD)的表达及其与大肠癌细胞分化程度、大体类型、淋巴结转移及Dukes分期间的关系。方法 应用免疫组化法 ,测定 3 1例经病理证实的新鲜大肠癌标本中E CD的表达。结果 正常大肠黏膜E CD强阳性表达率为 10 0 % ,3 1例大肠癌E CD总减低表达率为 77.4% ;分化较好的和分化不良的大肠癌细胞E CD减低表达率分别为 57.2 %和 94.1% ;肿块型、溃疡型、浸润型癌E CD减低表达率分别为 44.5%、93 .7%、88.3 % ;无淋巴结转移、有淋巴结转移E CD减低表达率分别为 62 .5%、93 .3 %。E CD表达与大肠癌的细胞分化程度、大体生长方式、有无淋巴结转移相关 (P <0 .0 1) ,与Dukes分期无明显相关性 (P >0 .0 5)。结论 E

胃癌中钙黏附分子启动子甲基化与幽门螺杆菌感染及肿瘤生物学特性的关系

目的建立甲基化特异性聚合酶链式反应方法检测组织中钙黏附分子(CDH1)的甲基化程度;探索CDH1启动子的甲基化与幽门螺杆菌(HP)感染及与肿瘤分化、浸润、淋巴及远处转移之间的关系。方法采用热转化甲基化特异性聚合酶链式反应法检测2008年1月-2009年12月共40例胃癌手术标本中CDH1的启动子甲基化情况,并回顾性地分析CDH1的启动子甲基化与HP感染、肿瘤分化、浸润、淋巴及远处转移等肿瘤生物学特性的统计学关联。结果胃癌组CDH1基因甲基化阳性率高于对照组(67.5%、12.5%,P<0.05)。胃癌组中低-未分化肿瘤组CDH1基因甲基化阳性率高于高-中分化肿瘤组(80.6%、22.2%,P<0.05);胃癌组中HP阳性患者的CDH1基因甲基化率高于HP阴性患者(78.1%、25.0%,P<0.05);而胃癌组中CDH1基因甲基化阳性率与患者性别、肿瘤浸润程度、淋巴转移及远处转移无明显关系(P>0.05)。结论 CDH1基因甲基化可能参与了胃癌的发展过程,并且CDH1基因甲基化可能导致了肿瘤分化程度的降低。CDH1基因甲基化与胃癌患者的HP感染之间可能存在密切关系,提示HP感染可能参与了抑癌基因甲基化失活及肿瘤演变的发展过程。

细胞黏附分子CD44变异体V6和上皮性钙黏附素在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨细胞黏附分子CD44的变异体V6(CD44V6)和上皮性钙黏附素(E-cad)在膀胱移行细胞癌(BTCC)中的表达及其临床意义.方法:应用SP免疫组化染色法检测87例膀胱移行细胞癌组织和10例正常组织中CD44V6和E-cad的表达.结果:正常膀胱黏膜CD44v6,E-cad均呈正常表达,细胞膜为黄褐色.87例膀胱癌组织中,CD44V6正常表达55.2%(48/87)、E-cad正常表达63.2%(55/87).CD44V6和E-cad在膀胱移行细胞癌组织中的表达与肿瘤的病理分级、临床分期及复发显著相关(P<0.05).结论:CD44V6和E-cad阳性表达率与膀胱移行细胞癌的生物学特性密切相关,其表达率降低表明肿瘤恶性程度增强.

自体骨髓祖细胞移植对下肢动脉缺血导致创面中VE-钙黏附分子的影响

目的检测自体骨髓祖细胞移植前后下肢创面中VE-钙黏附分子的变化特性,对自体骨髓祖细胞移植治疗下肢动脉缺血导致创面进行机理探讨,为临床的治疗提供依据。方法2003年6月至2006年8月对199例下肢动脉缺血导致创面的患者采用超声彩色多普勒和选择性血管造影进行检查是否存在下肢动脉的缺血,97例患者行自体骨髓祖细胞移植治疗,应用RT-PCR、Western blot和免疫荧光染色等技术检测检测移植前和后1周、2周、1月、2月和3月下肢创面中VE-钙黏附分子mRNA和蛋白质的变化。结果(1)超声彩色多普勒检查结果:阳性结果173例(阳性率87%,173/199),其中完全闭塞者40例(23%,40/173),重度狭窄者64例(37%,64/173),中度狭窄者69例(40%,69/173);(2)199例患者中行选择性血管造影者169例,阳性结果为128例(76%,128/169),其中髂总动脉+髂外动脉+股动脉闭塞或狭窄者15例(12%,15/128),髂外动脉+股动脉闭塞或狭窄者31例(24%,31/128),股动脉+腘动脉闭塞或狭窄者45例(35%,45/128),腘动脉下动脉血管闭塞或狭窄者37例(29%,37/128);(3)199例患者中,应用自体骨髓祖细胞移植的患者97例(48%,97/199),和同程度未行自体骨髓祖细胞移植的患者比较创面愈合时间平均缩短28±3天(P<0.05);(4)自体骨髓祖细胞移植后1周到1月VE-钙黏附分子的mRNA和蛋白质表达呈缓慢增长趋势,移植后2月到3月为明显表达增加趋势。结论自体骨髓祖细胞的移植可以促进下肢动脉缺血导致溃疡创面的愈合,VE-钙黏附分子的表达在新生的血管形成和侧枝循环的形成中起关键的作用。

神经型钙黏附蛋白与肿瘤关系的研究进展

钙黏附分子超家族包括经典型钙黏附分子和非经典型钙黏附分子．经典型钙黏附分子主要包括上皮型钙黏附蛋白（E．cadherin）和神经型钙黏附蛋白（N—cadherin）。E-cadherin主要表达在人类各种上皮组织中，在细胞的形态发生和维持上皮完整性及肿瘤细胞间紧密接触等方面起着重要作用。

细胞凋亡在烫伤鼠肺组织损伤中的作用及其机制的实验研究

目的 :探讨细胞凋亡在烫伤鼠肺组织损伤中的作用及基因调控机制 ,为进一步阐明烫伤鼠肺组织损伤机制和在细胞凋亡水平防治烧伤后脏器损伤提供理论依据。方法 :采用原位末端标记 (TUNEL)法及免疫组织化学技术观察烫伤鼠肺组织细胞凋亡及肺组织 Fas/Fas L、核因子κB(NFκB) /IκB和 Bcl 2基因表达、鼠烫伤后肺组织通透性及 VE 钙黏附分子表达 ;电镜扫描肺组织血管内皮细胞连接的变化。结果 :1烫伤鼠肺组织细胞发生凋亡 ,尤其是肺泡上皮细胞和肺血管内皮细胞凋亡增加明显 ;2烫伤鼠肺组织对 99锝标记的亚锡喷替白蛋白通透性明显增加 ,同时肺组织血管内皮细胞 VE 钙黏附分子表达下降 ,与肺组织细胞凋亡呈平行关系 ;3烫伤鼠肺组织 Fas/Fas L 表达明显上调 ,Bcl 2表达明显下调 ,Fas/Fas L 表达的增加与肺组织细胞凋亡增加呈平行关系 ;4NFκB/IκB的表达与 Fas/Fas L表达相一致 ;5电镜扫描见肺组织血管内皮细胞连接增宽。结论 :鼠烫伤后肺泡上皮和肺血管内皮细胞发生凋亡 ,细胞凋亡参与了烫伤鼠肺组织损伤、通透性增加及内皮细胞连接损伤的发生过程 ;鼠烫伤后肺组织 Fas/Fas L、NFκB/IκB和 Bcl 2系统活化 。

金荞麦提取物对WM239迁移的抑制作用及WM239与Huvec共培养体系N-Cadherin磷酸化的影响

目的:探讨金荞麦提取物对WM239细胞穿越内皮细胞过程中N-钙黏附分子的影响。方法:采用苏木素方法测定金荞麦提取物对HUVEC和WM239细胞增殖的影响,筛选合适的金荞麦提取物浓度;利用Transwell迁移实验,测定金荞麦提取物对WM239细胞迁移能力的影响;流式细胞术(FCM)测定金荞麦提取物对HUVEC和WM239细胞共培养体系N-cadherin表达的影响;免疫共沉淀实验测定金荞麦提取物对N-cadherin胞内段磷酸化及其与β-catenin结合的影响;Western blot检测金荞麦提取物对Src活化的影响。结果:金荞麦提取物浓度在25～100 mg/L之间对WM239和HUVEC的增殖无明显抑制作用。金荞麦提取物在此药物浓度范围内可对WM239细胞的迁移能力有较强的抑制作用。金荞麦提取物对共培养细胞N-cadherin表达量几乎没有影响,但可导致p-Src蛋白的表达减少,N-cadherin胞内段的磷酸化减低,引起N-cadherin与β-catenin的解离减少。结论:金荞麦提取物可抑制WM239的增殖和迁移能力,减少Src蛋白的活化,降低N-cadherin胞内段磷酸化水平及N-cadherin与β-catenin的解离。

E-cadherin反义寡核苷酸对肿瘤细胞浸润能力影响的研究

目的了解上皮型钙黏附分子(E-cadherin)下调对肿瘤细胞浸润能力的影响。方法选用人胰腺癌细胞株JHP-1,经E-cadherin反义寡核苷酸(ASODN)作用,应用免疫细胞化学染色、Western blot法检测细胞E-cadherin蛋白表达情况,细胞浸润MTT比色法检测该细胞对基底膜的浸润能力。结果经E-cadherin ASODN作用后,JHP-1细胞膜E-cadherin表达减弱,E-cadherin蛋白含量与对照组相比明显降低;JHP-1细胞对基底膜浸润能力明显高于对照组(P<0.001)。结论E-cadherin与肿瘤细胞的浸润能力有关。

E-cadherin、α-catenin和MMP2在膀胱癌中的表达及预后意义

目的 研究钙黏附分子 (E cadherin ,E cad)、α 连接蛋白 (α catenin ,α cat)和基质金属蛋白酶 (MatrixMetallopro teinase 2 ,MMP2 )在膀胱移行细胞癌中的表达及预后意义。方法 应用SP免疫组化染色法 ,检测 96例膀胱移行细胞癌和 10例正常膀胱黏膜E cad、α cat及MMP2的表达情况。结果 正常膀胱黏膜E cad、α cat呈正常表达 ,MMP2为阴性 ;96例膀胱移行细胞癌中E cad及α cat的异常表达率分别为 4 4 8% (43/96 )和 5 8 3% (5 6 /96 ) ,MMP2阳性表达为 5 3 1%(5 1/96 )。E cad和α cat的异常表达率、MMP2的阳性表达率与肿瘤的病理分级、临床分期及生存率显著相关。结论 E cad、α cat和MMP2在膀胱移行细胞癌的演变过程中起重要作用 ,可作为监测肿瘤恶性程度和判断预后的指标。

树突状细胞在黏膜免疫模型小鼠中的分布及E-cadherin和ICAM-1表达的研究

目的通过研究小鼠树突状细胞在黏膜免疫模型小鼠中分布特征及上皮型钙黏附分子(E-cadherin)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达,以探讨E-cadherin和ICAM-1在树突状细胞迁移过程中的调控作用。方法采用光镜和免疫组织化学染色方法,观察黏膜免疫模型小鼠中树突状细胞的分布特征;分析E-cadherin和ICAM-1的表达情况。结果体内的树突状细胞在黏膜免疫模型小鼠中,主要分布于肠系膜淋巴结、回肠集合淋巴小结、胃和空回肠黏膜及黏膜下层,与对照组相比有显著差异,其ICAM-1表达明显增高,E-cadherin表达下调,分别与对照组数密度和面密度比较有显著差异。结论在树突状细胞迁移运动过程中,E-cadherin和ICAM-1黏附分子可能起着关键性的调控作用。

宫颈鳞状细胞癌原发灶及淋巴结转移灶中ki67及E-cadherin的表达

目的检测宫颈鳞状细胞癌原发灶及淋巴结转移灶中细胞增殖标记ki67及上皮型黏附分子(E-cadherin)的表达差异,探讨两者在细胞增殖及迁移特性的差异。方法 60例有淋巴结转移的宫颈鳞状细胞癌,采用免疫组化检测ki67及E-cadherin在宫颈鳞状细胞癌原发灶及相应淋巴结转移灶中的表达差异。结果原发灶及淋巴结转移灶中ki67阳性表达率均为85.0%(51/60),两者密切相关(P<0.01)。E-cadherin在原发灶及淋巴结转移灶中的阳性表达率分别为56.67%(34/60)和63.33%(38/60);两者的表达差异有统计学意义(P<0.01)。结论宫颈鳞状细胞癌组织原发灶及淋巴结转移灶细胞增殖标记ki67高度一致,其细胞增殖能力没有异质性;而E-cadherin表达上调,提示淋巴结转移过程中在局部转移灶肿瘤细胞发生了间质-上皮转化。

发育鼠单次惊厥后脑内N-Cadherin的表达在海马苔藓纤维发芽中作用的研究

目的探讨单次惊厥发作后脑内神经性钙黏附分子(N-Cadherin)表达与海马结构中苔藓纤维发芽现象之间的关系及其作用。方法利用腹腔注射戊四氮(PTZ)制作发育期SD大鼠(14天、28天)单次惊厥发作模型,各日龄组随机分为生理盐水(NS)组、PTZ致惊组和吡咯二硫氨基甲酸酯(PDTC)预处理组,采用免疫组化法检测N-Cadherin的表达,利用Timm染色法观察海马苔藓纤维发芽现象。结果NS组在海马CA3区可见极少Timm染色颗粒,致惊后1周偶见Timm染色颗粒,与NS组相比差异无显著性(P>0.05);致惊后3周可见较多Timm染色颗粒沿海马CA3区呈条带样分布,较NS组明显增加(P<0.01);PDTC预处理组可见Timm染色颗粒较PTZ致惊组明显减少(P<0.05)。同时,NS组14天和28天大鼠海马CA3区可见少量的N-Cadherin阳性细胞,着色不深;PTZ致惊组海马CA3和齿状回门区的N-Cadherin阳性细胞与NS组相比明显增多(P<0.01),PDTC预处理后相同区域内N-Cadherin阳性细胞较PTZ致惊组明显减少(P<0.05)。N-Cadherin与Timm染色颗粒的表达结果与惊厥鼠的日龄并无关联性。结论单次惊厥发作在幼鼠可以引起海马不同程度的苔藓纤维发芽,而N-Cadherin的分布位置与变化时相与苔藓纤维发芽相吻合,这表明N-Cadherin可能参与或促进了苔藓纤维的发芽。

观察副肿瘤神经综合征患者抗Hu抗体对培养胎鼠神经细胞N-cadherin的表达及意义

目的观察副肿瘤神经综合征(PNS)患者自身抗体(抗Hu抗体)对胎鼠培养神经细胞的直接影响及N-cadherin的表达,探讨PNS免疫学的发病机制。方法实验组抗Hu抗体阳性PNS患者血清IgG、对照组血清IgG添加到由胎儿鼠脑分离出的培养神经细胞,观察细胞的变化,通过免疫组化观察N-cadherin的表达。结果实验组添加抗Hu抗体阳性IgG的培养神经细胞可见细胞互相融合,突起出现粗而长相互连接的形态变化,免疫组化发现大量N-cadherin的表达;而对照组未看到上述细胞形态的变化,免疫组化也未发现N-cadherin的表达;各组均未发现凋亡的神经细胞。结论抗Hu抗体可能通过诱导N-cadherin的表达,或者在抗Hu抗体IgG片段中存在着另外的某种物质,从而促进神经细胞聚集及突起的增粗伸长,因而影响了神经细胞的正常功能。这种效应推测抗Hu抗体不是直接与对应抗原发生了免疫反应引起发病,而可能是在血清抗体IgG片段中存在着抗体以外的致病因子参与了PNS的发病过程。

E-Cadherin、CD44v6、MMP2在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义

目的研究钙黏附分子E-cadherin(E-cad)、CD44变异体6(CD44v6)和基质金属蛋白酶(MMP2)在膀胱尿路上皮癌(bladder urothelial carcinoma)中的表达及对预后的意义。方法应用免疫组化Envision法,检测105例膀胱尿路上皮癌患者和20例正常体检者膀胱黏膜E-cad、CD44v6及MMP2的表达情况。结果 20例正常膀胱黏膜中E-cad、CD44v6均正常表达,MMP2均阴性表达,105例膀胱尿路上皮癌中E-cad及CD44v6的异常表达率分别为43.8%(46/105)和58.1%(61/105),MMP2阳性表达为53.3%(56/105)。E-cad、CD44v6的异常表达率和MMP2的阳性表达率与患者肿瘤的病理分级、临床分期及生存率相关。结论E-cad、CD44v6的异常表达和MMP2的阳性表达在膀胱尿路上皮癌的演变过程中起着重要作用,可作为监测肿瘤恶性程度和预后有效的分子生物学指标之一。

CDX2和Survivin及E-cadherin在大肠癌中的表达及其相关性

目的研究肠道特异性转录因子2(CDX2)、存活素(survivin)、上皮型钙黏附分子(E-cadherin)在大肠癌、大肠腺瘤、正常大肠黏膜中的表达及其与大肠癌生成、侵袭转移之间的关系;探讨CDX2、survivin、E-cadherin之间的关系。方法选取临床资料完整的40例大肠癌、30例大肠腺瘤和30例正常大肠黏膜,采用免疫组化S-P法研究CDX2、survivin、E-cadherin的表达。结果CDX2、E-cadherin、survivin在大肠癌中的表达与在正常大肠黏膜、大肠腺瘤中的表达差异有显著性(P<0.01);大肠腺瘤中survivin表达明显高于正常大肠黏膜(P<0.05);CDX2、E-cadherin、survivin在大肠癌中的表达与Dukes分期有关(P<0.05);CDX2、E-cadherin在大肠癌中的表达与淋巴结转移有关(P<0.05);大肠癌中CDX2与survivin表达呈负相关(P<0.01);大肠癌中CDX2与E-cadherin表达正相关(P<0.01)。结论联合检测CDX2、survivin、E-cadherin的表达可为大肠癌的早期发生、侵袭转移的研究提供依据,对大肠癌诊断、治疗、预后判定有一定价值。