薏米多肽-钙、锌螯合物制备及结构表征

目的:制备1种薏米多肽-钙、锌螯合物并研究其结构。方法:利用枯草芽孢杆菌和嗜热链球菌混合发酵薏米,采用葡聚糖凝胶Sephadex G-15、反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离纯化薏米发酵液得到薏米多肽(CSP),Tricine-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(Tricine-SDS-PAGE)电泳检测其分子质量。以锌螯合率和钙螯合率为指标,在单因素实验的基础上,采用响应面试验优化薏米多肽-钙、锌螯合物(CSP-Ca-Zn)的制备工艺,采用紫外光谱、红外光谱和荧光光谱表征其结构。结果:薏米发酵液经Sephadex G-15分离得到4个峰,其中A3的钙、锌螯合率最高。RP-HPLC分离A3得到的CSP纯度达93.91%,其分子质量约7.8 ku。CSP与Ca-Zn螯合的最佳制备工艺为:CSP与钙、锌质量比4.4∶1,钙、锌质量比1∶1,pH 3.7,在此条件下,锌螯合率、钙螯合率分别达到52.63%和63.79%。CSP与钙、锌螯合的主要位点是氨基氮、羧酸基,其空间结构也发生改变。结论:所确定的螯合工艺条件使CSP同时螯合钙、锌两种金属,为薏米多肽新产品的开发提供了技术参考,为制作食源性有机钙、锌补充剂提供了新思路。

鮰鱼骨胶原多肽-钙螯合物的制备及结构表征与稳定性研究

为制备一种人体易吸收的钙制剂,并提高鮰鱼加工副产物鱼骨的附加值,以钙结合活性为评价指标,通过单因素试验得到鮰鱼骨胶原多肽的最佳酶解工艺,然后采用Sephadex G-25凝胶柱分离纯化钙结合活性高的胶原多肽。运用红外光谱、扫描电镜和能谱分析对鮰鱼骨胶原多肽-钙螯合物进行结构表征,最后评价鮰鱼骨胶原多肽-钙螯合物的热稳定性、酸碱稳定性和体外消化稳定性。研究表明,以碱性蛋白酶制备的胶原多肽的最佳酶解工艺为料液比1∶13(g∶mL),酶添加量4%,pH 8.0,酶解时间2 h,酶解温度40℃,其钙结合能力达29.37 mmol/L,分子质量为195~1967 Da的胶原多肽约占鮰鱼骨胶原多肽整体的77.73%。经Sephadex G-25分离纯化得到3个不同分子质量的肽组分,其中F_(3)组分的钙结合活性最佳。红外光谱、扫描电镜和能谱分析表明,鮰鱼胶原多肽的氨基、羧基和酰胺键为Ca^(2+)的主要结合位点,螯合之后,其光滑的平面变为粗糙、疏松、多孔的形状,钙含量明显增加。稳定性分析发现,鮰鱼骨胶原多肽-钙螯合物具有一定的耐热性、耐弱碱性和消化稳定性,胃肠道消化后,其钙保留率在70%以上,具有较高的钙生物利用率,但在强酸环境下不稳定。该研究可丰富钙制剂的种类,为鱼骨资源高值化利用提供技术参考。

大黄鱼蛋白肽-钙螯合物的制备及性质研究

目的制备大黄鱼蛋白肽-钙螯合物,并研究其结构性质。方法以大黄鱼鱼糜为原料,通过胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶进行酶解制备多肽,将肽与钙进行螯合,探究大黄鱼蛋白肽及其肽-钙螯合物的性质功能。结果3种酶解肽中,胰酶肽钙螯合含量最高,胰酶肽的粒径最小,肽-钙螯合物相比于肽的粒径都有所减小,说明肽-钙螯合物是一种致密的纳米颗粒并呈现出折叠多孔的网络结构。这些变化可归因于肽和钙离子之间的相互作用。紫外吸收光谱、荧光光谱、红外图谱和圆二色光谱的结果表明大黄鱼蛋白肽与钙离子螯合,生成了新的肽-钙螯合物。结论3种酶解肽中,胰蛋白酶水解物的钙离子结合能力在3种蛋白酶获得的水解物中最高。因此,在本研究中胰蛋白酶被认为是制备大黄鱼蛋白水解物钙离子结合活性肽的最优酶制剂,为大黄鱼的高值化利用和新型钙制剂的开发提供了理论依据和实验参考。

鱼骨胶原肽磷酸化及其肽-钙螯合物的制备

利用三聚磷酸钠(STP)对鱼骨胶原肽(Fish bone collagen peptide,FBCP)进行磷酸化改性,优化FBCP磷酸化改性和其与钙螯合的工艺过程。结果表明,在3%FBCP、30%STP、pH 9、40℃、2 h条件下FBCP磷酸化程度最高,达到19.63 mg/g,磷酸化鱼骨胶原肽(PFBCP)的氮磷摩尔比为9.05。PFBCP的磷酸化程度越高,其钙螯合能力也越强。PFBCP在肽钙比为1∶1、pH 9、50℃、40 min条件下钙螯合能力最高,为89.96 mg/g。红外光谱分析表明,FBCP中的氨基、羟基参与了磷酸化改性,PFBCP通过磷酸基团、羧基和氨基与钙离子螯合。实验结果为鱼骨胶原肽-钙螯合物的制备提供理论依据。

低值鱼蛋白多肽-钙螯合物的制备和抗氧化、抗菌活性研究

探讨了以南海低值鱼蛋白为原料,采用木瓜蛋白酶和风味酶的复合酶水解制备多肽复合物,并制备多肽-钙螯合物,对螯合工艺及螯合产物的结果及抗氧化和抗菌功能特性进行了初步研究。结果表明:DH为5%的多肽与钙离子螯合效果最佳,螯合率为81.75%;化学分析及红外光谱说明活性肽与钙离子螯合并形成稳定结构的螯合物;未经过乙醇沉淀的螯合钙具有明显的抗氧化活性,其抗氧化作用相当于生育酚的94.43%,经过80%乙醇沉淀的螯合物具有显著的抗枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌活性,其抑菌圈均直径分别为16mm和16mm。通过本研究,不仅为低值鱼的深精加工与综合利用开辟了新的途径,而且也为低值鱼酶解多肽螯合物的广泛应用奠定了基础。

花生肽-钙螯合物的制备及其结构表征

为开发新型补钙产品并提高花生的附加值,研究不同的酶解方式对花生肽-钙螯合率的影响,在单因素试验的基础上采用响应面法对螯合工艺进行优化,并采用紫外光谱、傅里叶红外光谱以及热重分析螯合前后结构的变化。结果表明:对比了碱性、风味蛋白酶单酶酶解,碱性、风味蛋白酶双酶同步酶解以及双酶分步酶解4种酶解方式,发现风味蛋白酶的加入有助于提高钙螯合率,且分步酶解法对螯合率的提高效果显著强于同步酶解;在双酶分步酶解基础上制备花生肽-钙螯合物的最佳条件为肽钙质量比7.2∶1、pH 7.5、时间50 min、温度47℃,在此条件下螯合率达到75.26%;紫外光谱分析表明,螯合后形成了一种不同于花生肽的新化合物;红外光谱分析表明,多肽的氨基、羧基参与了螯合反应;热重分析表明,花生肽-钙螯合物相比花生肽具有更稳定的结构。

灰树花多肽-钙螯合物对小鼠衰老性骨质疏松的改善作用

通过建立D-半乳糖致衰老性骨质疏松(SOP)小鼠模型,探讨灰树花多肽-钙螯合物(GPs-Ca)对SOP的改善作用;通过体外Caco-2单细胞层模型模拟研究灰树花多肽-钙螯合物的促钙吸收能力。将50只雄性ICR小鼠随机分为5组,除了空白对照组外,其它4组均给予腹腔注射D-半乳糖;空白对照组给予腹腔注射同等剂量的生理盐水。8周后造模成功,空白对照组、模型对照组均给予去离子水灌胃;试验组给予灰树花多肽-钙螯合物高剂量(Hgps-Ca)灌胃。各组连续灌胃4周后,采血检测其血液生化指标及剥离股骨、胫骨后的骨指标。建立Caco-2单细胞层,用Fluo-3-Am钙离子探针测定细胞内钙摄取情况。结果表明:灰树花多肽-钙螯合物组血清钙、磷水平显著上升,具有统计学意义(P<0.05)。试验组血清碱性磷酸酶(ALP)数值较模型组降低,且灰树花多肽-钙螯合物组血清ALP水平接近对照组。灰树花多肽-钙螯合物在细胞内相较无机钙、葡萄糖酸钙更易吸收转运。结论:灰树花多肽-钙螯合物能够提高血清钙、磷、过氧化氢酶(CAT)水平,降低ALP活性,促进钙盐沉积,提高钙的吸收利用率,有利于改善SOP。

响应面法制备小球藻多肽-钙螯合物的制备工艺

为探究小球藻多肽-钙螯合物的较佳制备工艺,以小球藻干粉作为原料,对其进行酶解,获得小球藻多肽,以螯合率为指标,对小球藻多肽与CaCl_2的螯合工艺进行了优化,考查了螯合时间、螯合温度、肽钙质量比、底物质量分数和pH值对螯合反应的影响,通过Box-Behnken试验设计与响应面分析,同时建立螯合物制备工艺的二次项数学模型并验证其可靠性,优化后确定为螯合温度50℃,pH值9,肽钙质量比3∶1,底物质量分数5%,螯合时间60 min,最终螯合率可达96.14%。研究为合成新型补钙制剂(多肽-钙螯合物)的开发提供了理论依据,也为小球藻的开发利用提供了一个新的开拓思路。

罗非鱼骨胶原钙螯合肽的酶解制备

本研究以罗非鱼骨胶原蛋白为原料酶解制备具有良好钙螯能力性的活性肽。以钙螯合活性为指标,将罗非鱼骨架经过脱肉、脱钙等前处理获得的罗非鱼骨胶原蛋白通过木瓜蛋白酶酶解制备得到罗非鱼骨胶原蛋白肽,通过单因素及正交试验对制备罗非鱼骨胶原螯合肽的酶解工艺进行优化。同时对最优条件下酶解获得的罗非鱼骨胶原钙螯合肽的分子量及氨基酸组成进行分析。结果表明,最优酶解工艺条件为:酶解时间4.5 h,pH 6.5,酶解温度62℃,酶底比0.6%。罗非鱼骨胶原钙螯合肽是一类小分子功能活性肽。同时通过对比罗非鱼骨胶原钙螯合肽及其钙-肽螯合物氨基酸组成,发现胱氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸和赖氨酸等氨基酸对活性肽的钙螯合能力起到重要作用。

鮰鱼骨胶原蛋白肽-钙螯合物促进钙转运和成骨细胞分化作用

以实验室前期制备的鮰鱼骨胶原蛋白肽-钙螯合物(F3-Ca螯合物)为原料,采用Caco-2细胞模型评价其对钙转运和吸收的影响,再分析其对hFoB1.19成骨细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性以及分化关键基因和蛋白表达的影响。结果发现F3-Ca螯合物能使Caco-2细胞的钙转运量提高到0.31 mg/mL,并促进成骨细胞的矿化。当F3-Ca螯合物的质量浓度为100μg/mL时,成骨细胞ALP的活性提高了53.68%。反转录聚合酶链式反应和蛋白质免疫印迹分析表明F3-Ca螯合物能提高成骨细胞中骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、骨钙素和Runt相关转录因子2的基因和蛋白表达水平,降低核因子受体激活因子-κB配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)的基因和蛋白表达水平,增大OPG/RANKL的比值,从而激活OPG/RANKL/核因子受体激活因子-κB信号通路,促进成骨细胞的增殖、分化和矿化,达到加强钙吸收和抗骨质疏松的作用。本研究可为鮰鱼骨的高值化利用和新型钙补充剂的开发提供科学依据。

芝麻多肽螯合钙的制备及其补钙效果研究

为充分利用芝麻渣蛋白,提高其附加值,该研究选用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶水解从芝麻渣中提取的芝麻蛋白,以蛋白质水解度为指标,筛选出最佳蛋白酶组合。结果表明,相比单酶水解,双酶复合水解芝麻蛋白的效果更好,其中木瓜蛋白酶与风味蛋白酶的组合水解效果最好。单因素试验得到芝麻蛋白最佳水解条件:温度50℃、pH6.5、底物浓度1%、加酶量3%,在此条件下,水解度最高为21.09%。以氯化钙为钙源,将水解得到的蛋白多肽制备成芝麻蛋白多肽螯合钙,优化得到最佳螯合工艺:多肽与CaCl_(2)的质量比5∶1、螯合温度40℃、pH7.0、螯合时间20 min,在此条件下,多肽钙螯合率最高达到75%。傅里叶红外光谱分析表明,钙与多肽的C=O及末端的N-H和-COO-结合。小鼠灌胃实验表明,与对照组(蒸馏水灌胃)相比,芝麻蛋白多肽螯合钙对小鼠股骨生长有促进作用,提高了骨钙含量和血钙含量,降低了碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)活性,效果优于葡萄糖酸钙和碳酸钙。

肽-钙螯合方式及吸收机制研究现状

钙是人体必需的常量元素之一,科学补钙对维持生命健康具有重要意义,具有良好钙结合能力和高生物利用度的肽-钙螯合物也备受关注。本文综述了肽-钙螯合物中钙与肽的结合位点、结合模式、分子间作用力等内容。通过阐明游离钙和螯合钙的吸收途径,分析螯合钙易被肠道吸收的特点。肽-钙螯合物作为新型钙补充剂,来源丰富且生物利用度高,具有良好的经济开发价值和广阔的发展前景。在肽-钙螯合物的安全性、物理化学稳定性、消化稳定性以及螯合钙被肠道吸收后Ca2+的释放机制等方面的研究需要继续开展。本文旨在为新型钙补充剂的开发提供思路。

乳清蛋白肽-钙螯合物的制备及性质研究

目的:研究乳清蛋白肽与金属离子螯合的工艺及螯合物的性质,发掘乳清蛋白与金属离子螯合物的保健功效,为人们提供一种新型的保健食品。方法:以水解度和抗氧化活性为指标,筛选最适酶解乳清蛋白的酶,优化酶解乳清蛋白的条件。将所得乳清蛋白肽与钙离子进行螯合反应,优化螯合工艺制备螯合产物,探讨乳清蛋白肽-钙离子螯合物的理化性质和生物活性。结果:碱性蛋白酶为酶解乳清蛋白的最适用酶。最佳酶解工艺条件是:酶解温度50℃、最适pH 8.0、酶/底物800 U/g、底物质量浓度0.05 g/m L、水解时间1 h。优化的乳清蛋白肽-钙螯合物制备条件是:以固体钙的形式添加,乳清多肽与氯化钙质量比20∶1,反应时间20 min,反应温度50℃。采用红外光谱法对螯合物进行表征,所得物质为乳清蛋白酶解物与钙的螯合复合物。结论:经酶水解得到的乳清多肽可与钙离子螯合,所得螯合物具有显著的抗氧化活性,为乳清蛋白复合产品的开发提供试验依据。

响应面法优化乳清蛋白肽螯合钙离子的研究

目的:为优化乳清蛋白肽-钙的螯合工艺,在单因素试验的基础上应用响应面法对乳清蛋白肽与氯化钙的螯合工艺进行优化,确定最优水平,得到乳清蛋白肽-钙螯合物,以期为人们提供1种新型的保健食品。方法:利用复合蛋白酶和复合风味蛋白酶酶解乳清蛋白,将所得乳清蛋白肽与钙离子进行螯合反应,优化工艺制备螯合产物,并利用红外光谱法和荧光光谱法对乳清蛋白肽-钙螯合物进行表征。结果:根据响应面分析,得到优化的乳清蛋白螯合钙的制备条件为:以液体钙的形式添加,乳清蛋白肽与氯化钙质量比24∶1,乳清蛋白肽质量浓度35 mg/mL,反应时间20 min,反应温度30℃,pH 7.0。采用红外光谱法和荧光光谱法对螯合物进行表征,表明所得物质为乳清蛋白肽与钙的螯合物。结论:经酶水解得到的乳清多肽能够与钙离子螯合。优化得到最佳螯合工艺,为乳清蛋白金属螯合产品的生产和开发提供了新的思路。