目的观察钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)抑制剂KN93对新生大鼠心房肌细胞钙负荷的影响,并对细胞CaMKⅡ的表达变化进行检测。方法新生大鼠心房肌细胞原代培养96h,应用钙离子导入剂ion...目的观察钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)抑制剂KN93对新生大鼠心房肌细胞钙负荷的影响,并对细胞CaMKⅡ的表达变化进行检测。方法新生大鼠心房肌细胞原代培养96h,应用钙离子导入剂ionomycin(1.0μmol/L)建立心房肌细胞钙超载模型,并在KN933种浓度(0.25、0.5、1.0μmol/L)的干预下,以钙离子指示剂Fluo-3/AM负载心房肌细胞,激光共聚焦显微镜观察心房肌细胞内游离钙的变化;应用Western blot法检测CaMKⅡ表达的变化。结果①细胞培养至第4天,免疫组织化学染色90%以上细胞α-肌动蛋白抗体阳性。②与对照组比较,钙离子导入剂ionomycin明显增加细胞内钙离子荧光值[(660.16±108.47)vs(376.12±57.57),P<0.01];KN93对细胞内钙离子荧光值无明显影响(P>0.05)。③预先加入3种不同浓度KN93可显著降低ionomycin导致的细胞内钙离子荧光强度的增加幅度(P<0.01),与对照组比较差异也有统计学意义(P<0.01)。④钙超载组细胞CaMKⅡ表达较对照组明显增加(P<0.01);而KN93对细胞CaMKⅡ表达影响不明显。⑤不同浓度KN93预处理后,钙超载组细胞CaMKⅡ的表达显著降低(P<0.01)。结论 CaMKⅡ抑制剂KN93可降低ionomycin引发的大鼠心房肌细胞钙负荷,并下调细胞CaMKⅡ表达。展开更多
目的探讨戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及海马细胞内游离Ca^(2+)浓度([Ca^(2+)]i)、Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(calcium/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱα,CaMKIl_α)mRNA的表达。方法...目的探讨戊四氮(pentylenetetrazol,PTZ)点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及海马细胞内游离Ca^(2+)浓度([Ca^(2+)]i)、Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(calcium/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱα,CaMKIl_α)mRNA的表达。方法动物分为正常对照组和PTZ组,采用PTZ慢性点燃癫痫模型,应用Morris水迷宫观察2组大鼠空间学习记忆能力,运用流式细胞仪检测海马细胞内[Ca^(2+)]i浓度变化,反转录多聚酶链反应方法测定海马CaMKⅡ_α mRNA的表达。结果 PTZ组大鼠空间学习记忆能力受损,其海马细胞内[Ca^(2+)]i浓度明显升高(P<0.05),CaMKⅡ_αmRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论 PTZ点燃癫痫大鼠海马存在钙超载及CaMKⅡ_α的表达异常,由此引起空间学习记忆受损。展开更多
文摘目的观察钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)抑制剂KN93对新生大鼠心房肌细胞钙负荷的影响,并对细胞CaMKⅡ的表达变化进行检测。方法新生大鼠心房肌细胞原代培养96h,应用钙离子导入剂ionomycin(1.0μmol/L)建立心房肌细胞钙超载模型,并在KN933种浓度(0.25、0.5、1.0μmol/L)的干预下,以钙离子指示剂Fluo-3/AM负载心房肌细胞,激光共聚焦显微镜观察心房肌细胞内游离钙的变化;应用Western blot法检测CaMKⅡ表达的变化。结果①细胞培养至第4天,免疫组织化学染色90%以上细胞α-肌动蛋白抗体阳性。②与对照组比较,钙离子导入剂ionomycin明显增加细胞内钙离子荧光值[(660.16±108.47)vs(376.12±57.57),P<0.01];KN93对细胞内钙离子荧光值无明显影响(P>0.05)。③预先加入3种不同浓度KN93可显著降低ionomycin导致的细胞内钙离子荧光强度的增加幅度(P<0.01),与对照组比较差异也有统计学意义(P<0.01)。④钙超载组细胞CaMKⅡ表达较对照组明显增加(P<0.01);而KN93对细胞CaMKⅡ表达影响不明显。⑤不同浓度KN93预处理后,钙超载组细胞CaMKⅡ的表达显著降低(P<0.01)。结论 CaMKⅡ抑制剂KN93可降低ionomycin引发的大鼠心房肌细胞钙负荷,并下调细胞CaMKⅡ表达。
文摘目的分析钙离子钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱδ体内外的表达情况并探讨其机制,为临床诊断治疗提供新的靶点。方法采用半定量RT-PCR技术检测3种人结直肠癌细胞系、20对结直肠癌组织及其配对癌旁组织中CAMKⅡδmRNA的表达水平;利用Western Blot技术及免疫组化SP技术检测结直肠癌组织及癌旁正常组织中CAMKⅡδ蛋白的表达情况,并结合患者的临床病理参数进行分析。结果CAMKⅡδmRNA水平在3种结直肠癌细胞系中均有较高的表达,其中SW620表达最高,依次为HT-29、RKO。20对结直肠癌组织,有16对癌组织中CAMKⅡδmRNNA表达高于癌旁组织,其值分别是0.48±0.31和0.25±0.16,两者之间有统计学差异(P=0.002)。1 Western Blot的检测结果与RT-PCR的检测结果相一致,同样可以观察到CAMKⅡδ在配对的癌组织中的表达强于癌旁组织(P<0.05)。免疫组化提示CAMKⅡδ在结直肠癌组织中免疫反应强阳性,而癌旁正常组织中表达明显减弱。20例结直肠癌组织标本中,CAMKⅡδ的阳性表达率为55%(11/20),明显高于癌旁正常组织的表达率20%(4/20)。(P=0.022)结论 CAMKⅡδ在结直肠癌细胞系及结直肠癌组织中高表达,提示可能促进肿瘤细胞的不断增殖,与直肠癌的发生发展密切相关。
