CD44通过影响猪流行性腹泻病毒复制调节钠氢交换体3活性

本研究旨在研究CD44(cluster of differentiation 44)对感染猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)的猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)中钠氢交换体3(NHE3)表达及膜转移的影响。以IPEC-J2为细胞模型,采用RT-qPCR和Western blot检测感染PEDV后不同时间点IPEC-J2细胞中NHE3和PEDV N表达量变化;转染质粒调控IPEC-J2中CD44表达后,采用TCID50和Western blot检测PEDV感染后不同时间点PEDV复制水平和NHE3蛋白表达变化,采用火焰原子吸收法检测IPEC-J2细胞内外Na^(+)浓度变化。转录组数据和细胞试验结果显示,与对照组相比,PEDV感染后IPEC-J2细胞中CD44蛋白表达水平和mRNA表达量均呈上调趋势,24~48 h内上升显著(P<0.05),而PEDV N蛋白表达水平在12~48 h内则呈显著下降趋势(P<0.05)。此外,CD44重组质粒转染试验结果显示,与PEDV感染组相比,过表达CD44后感染PEDV组细胞中病毒滴度和PEDV N蛋白表达水平显著降低(P<0.05),而干扰CD44后感染PEDV组细胞中病毒滴度和PEDV N蛋白表达水平则显著上升(P<0.05)。以上结果表明,高表达CD44具有抑制PEDV复制的作用,干扰CD44后PEDV复制增多。同时,为研究PEDV感染情况下,CD44是否参与了IPEC-J2细胞中NHE3表达的调节,采用Western blot和火焰原子吸收法检测了调节CD44后膜NHE3蛋白的表达水平和细胞内外Na^(+)浓度。结果表明,过表达CD44显著促进了膜NHE3蛋白的表达和活性(P<0.05),细胞内外Na^(+)浓度逐渐恢复正常水平。相反,干扰CD44显著降低了膜NHE3蛋白的表达和活性(P<0.05),细胞内外Na^(+)浓度呈现失衡状态。结果提示,CD44可能是缓解PEDV引发仔猪腹泻的潜在治疗靶点,它通过抑制IPEC-J2细胞中PEDV的复制来增加转移至质膜上的NHE3数量,从而维持细胞内外Na^(+)运转平衡。

缺氧-复氧对大鼠心肌微血管内皮细胞中钠氢交换体-1的表达及活性影响

目的探讨缺氧-复氧对大鼠心肌微血管内皮细胞(rat myocardial microvascular endothelial cells,RMMEVCs)中缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)表达以及钠氢交换体-1(hydrogen exchanger-1,NHE1)的表达及活性的影响。方法蛋白印迹检测缺氧培养的RMMVECs的HIF-1、NHE1蛋白水平表达,并用氯化钴模拟缺氧进行验证。进而BCECF/AM法检测细胞内pH值、酸负荷后pH回复率及对NHE1特异阻断剂DMA的反应。复氧0、24、48 h后检测缺氧影响作用的回复情况。结果缺氧导致RMMVECs中HIF-1、NHE1蛋白表达水平升高,氯化钴模拟缺氧证实NHE1表达亦升高。但缺氧致细胞内pH值下降[0 h(7.42±0.06);12 h(7.17±0.05);24 h(7.04±0.04);P<0.01],酸负荷后细胞内pH值回复率减小[(U/min)0 h(0.106±0.007);12 h(0.059±0.005);24 h(0.044±0.004);P<0.01];相对于DMA未处理组,不同缺氧时间点DMA处理组的酸负荷后pH回复率均降低[(U/min)0 h,-0.063;12 h,-0.028;24 h,-0.020]。复氧后NHE1蛋白水平逐渐下降,但复氧24 h酸负荷后细胞内pH值回复率最高(0.119 U/min),DMA抑制幅度最明显(-0.076 U/min),与0、48 h比较差异显著(P<0.01)。结论在缺氧中HIF-1升高可能导致NHE1蛋白表达升高,但NHE1活性降低,而复氧后NHE1活性升高。NHE1表达与活性改变可能是RMMVECs缺氧中pH调节的重要机制。

钠氢交换体及其抑制物在急性肺损伤中的作用

目的 探讨钠氢交换体及其抑制物在急性肺损伤中的作用。方法 应用内毒素 (LPS ,5mg/kg)复制大鼠急性肺损伤模型。将 2 1只SD大鼠随机分成三组 :正常对照组 (NS组 ) ;内毒素组 (LPS组 ) ;LPS +DMA组 (L&D组 ) ,该组以钠氢交换体抑制物DMA(5mg/kg)预处理。大鼠均于 5小时后处死。然后测定各组的肺系数 (LI)及血浆和支气管肺泡灌洗液 (BALF)中的TNF、ET - 1、NO的浓度变化。结果 L&D组肺系数及血浆和BALF中的TNF、ET - 1、NO浓度的增加 ,均明显低于LPS组(P <0 0 1)。结论 NHE抑制物对急性肺损伤具有保护作用 。

钠氢交换体1与心血管疾病关系研究进展

作为一种分布在细胞膜表面的蛋白,钠氢交换体1(NHE1)参与调节细胞内的pH值和细胞容积,并且可随着细胞机能状态的变化而进行自我调节。在细胞缺血、缺氧、酸中毒等情况下,NHE1被激活,进一步导致细胞内Na+潴留,Na+-Ca2+交换加强,细胞内Ca2+增加,细胞内钙超载导致心肌组织损伤,这一病理生理变化参与了多种心血管疾病的发生、发展。

心衰患者心肌组织中钠氢交换体1 mRNA的表达与血清胶原的相关性研究

目的观察心衰患者心肌组织中钠氢交换体1(sodium-hydrogen exchanger 1,NHE1)的表达及其与血清胶原的相关性,探讨NHE1在心衰发生和发展中的作用及其与心肌纤维化的相互关系。方法设心衰组及正常对照组,心衰组按NYHA分级分成心功能Ⅰ级、Ⅱ级及Ⅲ级3个亚组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测受试者心肌组织中NHE1 mRNA的表达水平,采用放射免疫分析法分别测定血清Ⅰ型前胶原羧基端肽Ⅰ(PⅠCP)和Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)含量。结果心衰组PⅠCP、PⅢNP含量较正常对照组明显升高,随着心功能的逐渐恶化,心衰组PⅠCP、PⅢNP含量呈上升趋势,各组间表达总体上有差异(P<0.05或P<0.01),PⅠCP、PⅢNP含量与NHE1 mRNA的△Ct值呈显著负相关。结论心衰患者心肌组织中存在NHE1 mRNA的高水平表达,血清PⅠCP、PⅢNP含量显著增加,提示NHE1可能在心衰的发生和发展过程中起着重要作用。

钠氢交换体可能是钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂心力衰竭获益及不良反应的潜在靶点

心力衰竭是多种心血管疾病的终末阶段,是老年人致死致残的重要原因。钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂(SGLT2i)是一类新型降糖药物。多项临床试验证实SGLT2i可显著降低2型糖尿病患者的心血管事件,尤其是心力衰竭风险,但其心脏保护机制尚不明确。钠氢交换体1是参与致心力衰竭多种信号通路的重要下游分子,参与了心力衰竭的病理生理过程。现总结在SGLT2i治疗心力衰竭过程中钠氢交换体1所发挥的潜在影响及其临床意义。

钠氢交换体1 mRNA在心衰患者心肌组织中的表达

目的观察钠氢交换体1(sodium-hydrogen exchanger1,NHE1)在心力衰竭患者心肌组织中的表达,探讨NHE1在心衰发生和发展中的作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测35例心力衰竭患者心肌组织NHE1 mRNA的表达水平。结果实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测心功能Ⅰ级组、心功能Ⅱ级组、心功能Ⅲ级组心力衰竭患者心肌组织NHE1 mRNA的△Ct值分别为6.29±0.66、5.01±0.60、4.40±0.74。与心功能Ⅰ级组比较,在心功能Ⅱ级组、心功能Ⅲ级组患者心肌组织中NHE1 mRNA表达明显高于心功能Ⅰ级组(P<0.01),同时与心功能Ⅱ级组比较,心功能Ⅲ级组患者心肌组织中NHE1 mRNA水平增高,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论心衰患者心肌组织中存在NHE1 mRNA的高水平表达,提示NHE1可能在心衰的发生和发展过程中起着重要作用。

钠-氢交换体1抑制剂治疗心力衰竭大鼠

目的在大鼠心力衰竭(HF)的初始阶段应用钠-氢交换体1(NHE-1)抑制剂cariporide(car)治疗,以评价其疗效。方法30只大鼠腹部皮下注射异丙肾上腺素,340mg/kg,间隔24h重复注射1次,制备HF模型。随机分为HF组及HF+car组,每组15只。14只大鼠以相同方式腹部皮下注射0.9%NaCl注射液,随机分为对照组及对照+car组,每组7只。HF+car组、对照+car组自实验第3天起每天给予car,30mg/kg,持续8周。应用超声心动仪检查心脏结构及功能,测量左心室质量/体质量,行左心室HE及Masson胶原纤维染色。应用病理图像分析仪测定心肌胶原含量。结果HF组大鼠存活9只,HF+car组存活12只。对照组、对照+car组心脏彩超、左心室质量/体质量及病理无差别。与对照组比较,HF组大鼠呈现左心室扩张、肥厚、收缩功能降低、心肌坏死及纤维化。HF+car组上述异常均得以改善。结论早期给予car治疗,延缓HF。

钠氢交换体的结构、功能及其在疾病中的作用

细胞内pH维持在一定的生理范围内,对细胞的生长分化、细胞内酶的活性、细胞骨架的装配与解聚等生理过程至关重要。细胞主要依赖于一系列离子转运蛋白来调控细胞内pH的动态平衡,钠氢交换体（Na＋/H＋exchanger,NHE）是其中重要的成员之一。

达格列净对动脉粥样硬化的影响以及与钠氢交换体1相关机制

目的 探讨达格列净对载脂蛋白E敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(AS)形成的影响以及与钠氢交换体1(NHE1)相关的机制。方法 6周龄雄性ApoE^(-/-)小鼠24只,随机分为普通饮食组、高脂饮食组、高脂饮食+达格列净组(10 mg/(kg·d))以及高脂饮食+格列美脲组(0.5 mg/(kg·d))。8周后,HE染色检测小鼠主动脉的AS斑块情况,定量PCR及免疫印迹法检测主动脉钠葡萄糖协同转运蛋白2(SGTL2)表达,免疫组化法检测主动脉NHE1表达。进而给予达格列净(10μmol/L)、阿米洛利(20μmol/L)以及脂多糖(100 ng/mL)干预小鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞处理24 h,免疫印迹法检测NHE1蛋白表达以及SNARF-1/AM荧光法检测NH_(4)Cl诱导pH值回复率(NHE1活性);酶联免疫吸附法检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10分泌情况。结果 高脂饮食+达格列净组主动脉的AS斑块面积显著低于高脂饮食组(P<0.05);各组主动脉斑块内均极低表达SGLT2(P<0.05);高脂饮食+达格列净组内斑块NHE1表达较高脂饮食组下降(P<0.05)。LPS+达格列净组RAW.7细胞的NHE1蛋白水平明显低于LPS组(P<0.05);SNARF-1荧光法提示达格列净处理后细胞内pH值降低(P<0.05),细胞NHE1活性显著降低(P<0.05);与LPS组相比,LPS+达格列净组细胞上清TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著减少(P<0.05),IL-10含量显著增加(P<0.05)。结论 达格列净通过抑制NHE1表达及其活性抑制AS斑块发展及细胞因子释放。

钠氢交换体1调节肿瘤微环境对肿瘤细胞的影响

肿瘤细胞微环境呈酸性,主要由肿瘤细胞无限增殖及高代谢所致。它们主要是通过外排H+或向胞内转运HCO3-来维持其微环境的稳态。研究发现钠氢交换体1(sodium hydrogen exchanger isoform 1,NHE1)是一种广泛表达的跨膜泌酸转运蛋白,其表达上调或激活通常与肿瘤的恶性程度相关。我们对目前关于NHE1的相关研究进行综述,探讨肿瘤细胞是如何改变微环境pH值的平衡,及微环境pH值对肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和生长的影响,并讨论酸性微环境是如何协助肿瘤细胞逃避化疗药物的杀伤。

钠氢交换体1在氯化锂-匹罗卡品点燃癫痫大鼠模型海马组织内的表达

目的 检测钠氢交换体1(NHE1)在氯化锂-匹罗卡品点燃癫痫大鼠模型海马组织中的表达。方法 选取雄性SD大鼠90只,其中45只采用腹腔注射氯化锂-匹罗卡品构建癫痫模型作为模型组,45只采用腹腔注射生理盐水组作为对照组;取模型组和对照组大鼠各36只,采用蛋白印迹(Western blot)法检测造模后第1、3、7、14、30及60天时2组大鼠海马组织匀浆中NHE1蛋白的定量表达;取模型组和对照组大鼠各3只,采用免疫组织化学分析造模后第14天时2组大鼠海马组织NHE1的蛋白表达;取模型组和对照组大鼠各6只,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测造模后第14天2组大鼠海马组织NHE1 m RNA的的表达特点。结果造模后第1、3、7、14、30及60天时,模型组大鼠海马组织匀浆中NHE1蛋白表达较对照组增高(P<0.05),且模型组大鼠海马组织NHE1蛋白表达从第1天开始增高、第14天时达到高峰、第30天和第60天逐渐下降(P<0.05);造模后第14天时,模型组大鼠海马组织不同亚区NHE1阳性表达较对照组相应区域增强,且NHE1m RNA水平也高于对照组(P<0.05)。结论 氯化锂-匹罗卡品点燃模型癫痫大鼠海马组织中NHE1表达随时间呈动态变化,且在第14天表达最高,提示NHE1可能与癫痫的发生发展过程密切相关。

钙激活中性蛋白酶和钠氢交换体1在癫痫所致神经元损害中的研究进展

癫痫（epilepsy）是最常见的神经系统疾病之一，患病率为千分之5～千分之7，全球约有3500万患者，我国约有650万患者正在遭受该疾病的困扰4而癫痫持续状态（statusepilepticus，SE）是癫痫的严重状态，是指持续性痫性发作超过30min，或者两次或两次以上的相继的痫性发作，期间意识状态未能完全恢复正常。

癫痫模型大鼠心肌组织钠氢交换体1的表达及与凋亡的关系

目的探讨癫痫模型大鼠心肌组织钠氢交换体1(NHE1)的表达及凋亡情况。方法选取SD雄性大鼠共40只纳入研究,采用氯化锂-匹罗卡品构建癫痫模型作为模型组(n=22),采用腹腔注射生理盐水作为对照组(n=18);模型成功后第60天,麻醉处死后取心肌组织,应用蛋白印迹和RT-PCR检测NHE1的表达,进一步应用流式细胞仪检测大鼠心肌细胞凋亡情况。结果制作模型过程中3只大鼠死亡,死亡率为14%。与对照组比较,蛋白印迹结果显示第60天时模型组大鼠心肌组织NHE1蛋白表达增高(P<0.05)。RT-PCR结果显示造模后第60天时,模型组大鼠心肌组织NHE1mRNA表达增高(P<0.05)。流式细胞检测结果显示模型组大鼠心肌细胞凋亡明显增多(P<0.05)。结论癫痫模型大鼠在癫痫慢性病程中,心肌组织的NHE1表达增高可能与心肌细胞凋亡增多相关。

细胞外信号调节激酶对心肌细胞钠氢交换体调控的作用

目的:探讨细胞外信号调节激酶(ERK)对心肌细胞钠氢交换体(NHE)的调控作用。方法:用氯化铵诱导乳鼠心肌细胞内酸化,用荧光指示剂(BCECF/AM)法测定细胞内pH值,钠氢交换体的活性用酸化后每分钟pH值的变化率(dpH_i/dt)表示,观察使用ERK特异性抑制剂UO126后对NHE活性的影响;用Western blottmg检测心肌细胞ERK蛋白的磷酸化水平。结果:用ERK的选择性抑制剂UO126(3μmoL/L)预孵育5 min,与模型组比较,UO126组可以使钠氢交换的活性下降49.46%(P<0.05);与模型组比较,ERK的磷酸化水平降低66.5%(P<0.05)。结论:细胞内酸化激活NHE和ERK的过程中,NHE的激活受到ERK的调控。

钠氢交换体1在星形细胞瘤中的表达及其与恶性程度的关系

目的:检测人星形细胞瘤和正常脑组织中钠氢交换体1(NHE1)的表达差异及其与恶性程度的关系,探讨星形细胞瘤增殖、生长的分子机制。方法:收集人星形细胞瘤标本51例,低、高级别星形细胞瘤组织分别为22例、29例,以肿瘤周围相对正常脑组织作为对照。用H-E染色进行诊断和分级,免疫组织化学和免疫印迹检测肿瘤组织与正常脑组织中NHE1表达变化。结果:NHE1主要分布在对照组神经元和少量星形胶质细胞胞膜上;在肿瘤组织中,NHE1分布在低级别星形细胞瘤细胞膜上,并强烈表达于高级别星形细胞瘤的胞质和胞膜上。与对照组相比较,在低级别和高级别星形细胞瘤组织中NHE1表达上调,其中,恶性程度较高的高级别肿瘤相对于恶性程度低的低级别肿瘤,NHE1的表达更为强烈。结论:NHE1在人星形细胞瘤组织中表达增强,其强度变化与肿瘤的恶性程度有关。

钠钙交换体激活CaMKⅡ介导大鼠离体心脏缺血再灌注损伤

目的:探讨钠钙交换体(Na+/Ca^(2+) exchanger,NCX)在离体心脏缺血再灌注损伤中的作用及其可能机制。方法:40只大鼠随机分为4组:正常对照组(Control组)、10μmol/L KB-R7943药物对照组(KB-R7943组)、缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)组和10μmol/L KB-R7943干预缺血再灌注组(KB-R7943+IR组)。采用Langendorff灌流装置建立离体心脏缺血再灌注模型;以再灌注末心肌纤维形态的变化、左室发展压(LVDP)比值、左室舒张末压(LVEDP)、冠状动脉流出液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性、心肌梗死面积及细胞色素c和cleaved caspase-3蛋白的变化评价心肌损伤程度;Western印迹检测磷酸化钙/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ(Ca^(2+)/calmodulindependent protein kinase Ⅱ,CaMKⅡ)和受磷蛋白(phospholamban,PLN)苏氨酸17位点磷酸化(pThr17)水平的变化。结果:与Control组相比,IR组再灌注末心肌纤维排列紊乱,断裂明显,心肌梗死面积、LVEDP和冠状动脉流出液中LDH活性明显增加,LVDP比值降低,细胞色素c、cleaved caspase-3、磷酸化CaMKⅡ及pThr17-PLN水平均上调(P<0.01);KB-R7943+IR组心肌梗死面积明显减小,LVEDP降低,LVDP比值明显改善,LDH活性明显降低,细胞色素c和cleaved caspase-3蛋白水平明显降低,磷酸化CaMKⅡ和pThr17-PLN水平也明显下调(P<0.01)。结论:NCX可通过激活CaMKⅡ启动细胞凋亡和坏死,进而诱导心肌缺血再灌注损伤。

钠氢交换蛋白1在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖的影响

目的观察钠氢交换蛋白1(Na+/H+,exchanger 1,NHE1)在人胃癌组织和胃癌细胞中的表达变化,以及对SGC-7901胃癌细胞增殖的影响。方法采用实时逆转录聚合酶链式反应(real time PCR,RT-PCR)和免疫印迹(Western Bloting)技术检测比较NHE1在正常胃黏膜组织、胃癌组织、正常胃黏膜细胞株GES-1和胃癌细胞株SGC-7901中的表达;用不同浓度的NHE1特异性阻断剂[5-(N-乙基-N-异丙基)]阿米洛利[5-(N-ethyl-N-isopropyl)amiloride(EIPA)]处理胃癌SGC-7901细胞24h,MTT法检测其对SGC-7901细胞增殖的影响。结果 NHE1在人正常胃黏膜组织、胃癌组织、正常胃黏膜细胞和胃癌细胞中均有表达,但在人胃癌组织和SGC-7901胃癌细胞中,其mRNA和蛋白表达水平均明显增高(P<0.05);EIPA10μm/mL,20μm/mL,30μm/mL处理,均能抑制胃癌SGC-7901细胞的过度增殖(P<0.05),且呈现良好的剂量-效应关系。结论 NHE1mRNA和蛋白表达水平在胃癌中表达显著升高;NHE1特异性阻断剂EIPA能抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,NHE1的改变可能与胃癌细胞的增殖密切相关。

钠/氢交换抑制剂增强心肌保护液对无心跳猪供心的保护作用

目的探讨对无心跳供体(NHBD)的心脏进行移植的可行性,以及心肌保护液联合钠/氢交换抑制剂HOE-642对这种供心的保护效果。方法将健康雄性家猪24头随机分为实验组(E组,n=6)和对照组(C组,n=6)(每组12头,供、受各6头)。实验组供者采取主动脉快速完全放血法制成NHBD模型,取其心脏,冷浴保存4 h后进行移植。其中,实验组于供心热缺血前5 min静脉给予HOE-642(2 mg/kg)并以含HOE-642的Stanford液(4℃)灌洗和保存供心;供心吻合前经主动脉根部以含HOE-642的保护液(4℃,4∶1氧合血)灌注1次,吻合期间以同样的方法每隔30 min灌注一次;心脏吻合完毕主动脉开放后5 min内静脉给予HOE-642(2 mg/kg)。对照组供者经主动脉适量放血(心脏不停跳),造成热缺血,然后取其心脏,同样冷浴保存4 h后进行移植,但对照组的供心处理不用HOE-642,而是用等量生理盐水。采集供心主动脉根部放血前、心脏移植完毕主动脉开放后1 h(停机)以及主动脉开放后2 h(实验结束)3个时间点的血流动力学指标,测定供心的心肌含水量及心肌酶学指标,观察心肌细胞组织结构变化。结果两组在主动脉开放后均成功脱机。两组各检测点的左心室舒张末压、左心室峰发展压及左心室压力变化速率的差异均无统计学意义(P>0.05);实验组和对照组心肌组织含水量分别为(78.4±5.2)%和(76.3±3.1)%,其差异无统计学意义(P>0.05);两个时间点的心肌酶学指标差异无统计学意义(P>0.05);光镜下见两组的心肌纤维结构清楚,排列紧密,质未见炎性细胞浸润,也未见变性、坏死,电镜下见心肌细胞超微结构完整。结论 NHBD的供心可用于移植,其效果与有心跳者相近;HOE-642可增强心肌保护液对这种供心的保护效果。

Na^+/H^+交换体阻滞剂在培养乳鼠心肌细胞/复氧损伤中的保护作用及其机制

目的:探讨在缺氧/复氧损伤中Na+/H+交换体阻滞剂在不同时相用药的心肌细胞保护作用及其机制。方法:应用乳鼠心肌细胞建立心肌缺血-再灌注(I/R)损伤模型,实验分为对照组、缺氧/复氧全程给药组(EIPA-I组)、复氧前给药1组(EIPA-R1组)和复氧前给药2组(EIPA-R2组)进行缺氧/复氧处理,动态检测单个心肌细胞在缺氧/复氧时细胞胞质Ca2+浓度(即[Ca2+]i)的变化及细胞挛缩程度,并观察细胞的存活率。结果:EIPA-I组和EIPA-R2组显著抑制了[Ca2+]i上升及细胞的挛缩,并提高了细胞存活率。结论:在复氧前给予增大剂量的EIPA与缺氧时常规剂量用药同样有效地抑制复氧期Na+/H+的交换,减轻细胞内钙超载,抑制细胞的挛缩,提高心肌细胞的存活率。