钠依赖性磷酸转运蛋白在痛风/高尿酸血症中的研究进展

钠依赖性磷酸转运蛋白由溶质载体家族17基因编码,编码基因位于6号染色体上,是人体重要的以有机阴离子为底物的转运蛋白,在肾脏等组织中表达。其中钠依赖性磷酸转运蛋白1、3和4有转运尿酸的功能,功能异常会导致尿酸排泄减少,从而引起高尿酸血症,甚至诱发痛风。

顶端钠依赖性胆汁酸转运蛋白(ASBT)在肝胆疾病中的作用

顶端钠依赖性胆汁酸转运蛋白(ASBT)是负责胆汁酸肠道重吸收的关键转运体,对维持胆汁酸和胆固醇稳态起重要作用,其表达受到转录因子、核受体和肠道微生物等多种因素的调控。ASBT的表达和功能异常会导致胆汁酸及胆固醇代谢紊乱,引起多种肝胆相关疾病。目前,ASBT作为一种治疗靶点已受到广泛关注。本文阐述了ASBT的生物学特征及表达调控机制,并对ASBT在肝胆疾病中的作用进行了综述,为相关疾病的治疗提供新方向。

人肾高亲和力钠离子依赖性二羧酸转运蛋白基因的克隆和生物信息学分析

为探讨人高亲和力钠离子依赖性二羧酸转运蛋白 (humanhigh affinitysodium dependentdicar boxylatetransporter,hSDCT2orhNaDC3 )基因在人体内的生理功能及其与疾病的关系 ,借助生物信息学成功地从人肾中克隆了hSDCT2基因 (GenBank接收号 :AY0 72 810 ) .首先将大鼠SDCT2cDNA与人EST数据库进行同源性比较 ,获得具有高度同源性EST片段并用DNAstar软件将它们拼接成EST重叠群 .在重叠群上设计PCR引物从人肾总RNA中用RT PCR扩增出hSDCT2基因并测序 ,然后用软件对其结构特性、组织分布及基因定位进行分析 .序列测定结果显示 ,hSDCT2开放阅读框为180 9bp ,共编码 6 0 2个氨基酸 .蛋白同源性分析表明 ,其氨基酸序列与大鼠及小鼠SDCT2分别有85 %和 87%相同 .二级结构分析显示 ,该蛋白有 12个跨膜螺旋区 .Northern分析显示 ,该基因可在肾、肝、脑、胎盘等多种组织中表达 ,并定位于 2 0号染色体的q12～q13

人钠依赖性二羧酸转运蛋白2(hSDCT2)的组织表达谱分析

利用DNA重组技术 ,构建重组表达质粒pGEX hSDCT2 .IPTG诱导其表达后 ,采用谷胱甘肽 Sepharose 4B亲和层析 ,获得纯化的谷胱甘肽S 转移酶 (GST) hSDCT2重组融合蛋白 .以此为免疫原免疫兔制备GST hSDCT2融合蛋白抗体 .多组织Northern印迹法结果显示 ,3 6kb的hSDCT2基因转录产物 ,在心、骨骼肌、胸腺、小肠、肺和外周血白细胞等组织中几乎不表达 ,在脑、结肠、脾、肝和胎盘中仅有少量表达 ,但在肾脏中大量表达 ;并且在肾脏和脾脏中还存在着另一种约 4 3kb的转录产物 .Western印迹法证实 ,hSDCT2蛋白以类似方式于上述组织表达 .免疫组化双重染色结果发现 ,与分布于近端肾小管刷状缘的hSDCT1不同 ,hSDCT2主要分布于近端肾小管的基底膜侧 .这些结果为进一步研究人钠依赖性二羧酸转运蛋白 2的结构和功能奠定了基础 .

反刍动物钠依赖性葡萄糖转运蛋白的研究

葡萄糖转运蛋白分为2类:钠依赖性葡萄糖转运蛋白和易化葡萄糖转运蛋白。高精料饲养条件下,钠依赖性葡萄糖转运蛋白影响了过瘤胃淀粉在反刍动物小肠中的消化利用。

钠依赖性葡萄糖转运蛋白的日粮调控

钠依赖性葡萄糖转运蛋白(SGLT1)在小肠吸收葡萄糖过程中发挥重要作用,是介导葡萄糖主动跨膜转运的主要载体,SGLT1在体内的表达水平的调节对于生物体能量供给以及体内葡萄糖平衡的维持有着重要意义。文章介绍了SGLT1的结构、分布和主要功能,并总结了日粮调控SGLT1表达的几种因素。

磷酸钠协同转运蛋白基因SLC34A2的真核表达重组载体的构建及鉴定

目的构建磷酸钠协同转运蛋白基因SLC34A2的真核表达重组载体pcDNA3.1(+),并进行酶切鉴定。方法查得人SLC34A2cDNA全序列,设计合成相应特异性引物,引入BamHⅠ和EcoRⅠ酶切位点,通过RT-PCR获得SLC34A2基因,定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+)多克隆酶切位点中,构建重组体pcDNA3.1(+)-SLC34A2,通过酶切分析,PCR及测序鉴定,筛选阳性重组体。结果从正常肺组织中逆转录扩增出的SLC34A2基因,大小约为2073bp,经双酶切及测序鉴定证明成功构建了SLC34A2真核表达重组载体pcDNA3.1(+)-SLC34A2。结论RT-PCR扩增得到了大小约为2073bp的SLC34A2基因;并成功构建了pcDNA3.1(+)-SLC34A2真核表达重组载体。

钠离子依赖性中性氨基酸转运载体2特性、表达调控及功能

转运系统A载体——钠离子依赖性的中性氨基酸转运载体2(SNAT2)是近年发现的氨基酸转运感受体的典型代表,是体内主要的氮转运载体。SNAT2通过转运过程调节细胞内氨基酸浓度,进而调控细胞内氨基酸感受体的下游信号,发挥氨基酸转运载体和信号受体的双重功能,而成为近年氨基酸营养感应的研究热点。本文围绕SNAT2的分子特性、生物学特性、表达调控及其介导的氨基酸感应信号的研究进展进行综述。

丁酸钠对高蛋白饲料诱导雏鹅痛风及肠道尿酸转运体蛋白表达的影响

该试验旨在研究丁酸钠对高蛋白饮食雏鹅尿酸代谢、肠道尿酸转运体蛋白表达及痛风发生的影响。选取1日龄扬州鹅300只,随机分成5组,每组6个重复,每个重复10只,分别为正常饲粮对照组(NDC组,粗蛋白质16.5%)、高蛋白组(HPC组,粗蛋白质24%)、低剂量丁酸钠组(LSB组,按0.025%添加于高蛋白饲粮)、中剂量丁酸钠组(MSB组,按0.05%添加于高蛋白饲粮)和高剂量丁酸钠组(HSB组,按0.1%添加于高蛋白饲粮)。试验期18 d。结果表明:(1)HSB组雏鹅采食量从10日龄起,MSB组从14日龄起,分别显著高于HPC组(P<0.05);HSB组雏鹅体重从14日龄起高于HPC组,MSB组体重在18日龄时高于HPC组(P<0.05)。(2)14日龄时,HPC组、LSB组、MSB组及HSB组血清尿酸(UA)水平均超过阈值,表现为高尿酸血症,HPC组UA水平最高,HSB组最低;试验期间,HPC组痛风发病率(38%)高于HSB组(18.3%)。(3)与HPC组比较,HSB组回肠中三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)基因mRNA表达升高,蛋白表达降低(P<0.05),MSB组及HSB组回肠中溶质载体家族2成员9(SLC2A9)基因mRNA及蛋白表达均降低(P<0.05)。由此可见,丁酸钠可以改善高蛋白饲粮饮食雏鹅的血清尿酸代谢,减少痛风发生,提高生产性能,其作用机制可能与调节回肠尿酸转运体蛋白ABCG2和SLC2A9表达有关。

第10个溶质转运蛋白家族(SLC10)的细胞功能

溶质转运蛋白(solute carrier,SLC)是细胞内最大的一类转运蛋白,目前被分为55个家族,包括至少362个成员。这里介绍了第10个溶质转运蛋白家族(SLC10)各成员的鉴定、表达和功能方面的研究进展,并对该家族成员顶端钠依赖性胆汁酸转运蛋白(apical sodium-dependent bileacid transporter,ASBT)和Na^+/牛磺胆酸共转运多肽(Na^+/taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)的底物特异性及其抑制剂在药物开发方面的研究做了简要介绍。对SLC10的功能研究可以为治疗高胆固醇血症新药的开发提供理论指导,也可以为人类一些与SLC10突变相关的其他疾病的诊断和治疗开辟新的途径。

过表达NHE1通过上调钙蛋白酶活性降低RAW264.7细胞ABCA1蛋白表达

目的探讨过表达钠氢交换体1(NHE1)对RAW264.7细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)蛋白表达的影响。方法采用Ad NHE1腺病毒感染RAW264.7细胞,Western blot法检测NHE1-EGFP融合蛋白的表达,激光共聚焦显微镜技术检测NHE1-EGFP融合蛋白细胞内定位,酸负载p H回复检测NHE1活性,Western blot法检测NHE1-EGFP融合蛋白对RAW264.7细胞ABCA1蛋白水平及钙蛋白酶(calpain)活性的影响,加入calpain抑制剂N-乙酰基-L-亮氨酰-L-亮氨酰-L-正亮氨酸(ALLN),Western blot法检测肝脏X受体激动剂TO-901317诱导ABCA1蛋白表达水平的影响。结果 Ad NHE1腺病毒感染RAW264.7细胞后,高表达NHE1-EGFP融合蛋白,定位在细胞质及细胞膜。NHE1-EGFP融合蛋白可降低ABCA1蛋白的表达水平并提高calpain活性,而calpain抑制剂ALLN能阻断ABCA1蛋白表达水平降低。结论 NHE1过表达通过上调calpain活性而降低ABCA1蛋白表达水平。

阿米洛利抑制载脂蛋白A1诱导小鼠巨噬细胞ABCA1的降解

目的探讨钠氢交换体1抑制剂阿米洛利对载脂蛋白A1(Apo A1)诱导小鼠三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)降解的影响。方法给小鼠静脉注射Apo A1后不同时间点收集腹腔巨噬细胞,定量实时聚合酶链反应及Western blot检测巨噬细胞ABCA1 mRNA及蛋白水平变化。进而,Apo A1干预8 h小鼠给予腹腔注射阿米洛利或钙蛋白酶抑制剂ALLN,实验分为4组:对照组、阿米洛利组、ALLN组及阿米洛利+ALLN组,Western blot检测巨噬细胞ABCA1蛋白水平,荧光法检测钙蛋白酶活性。结果 Apo A1干预小鼠后ABCA1 mRNA无明显改变,而ABCA1蛋白水平迅速升高,8 h达高峰后逐渐降低。阿米洛利组、ALLN组及阿米洛利+ALLN组ABCA1蛋白水平均比对照组高;在0、4、8 h时间点,阿米洛利组、ALLN组及阿米洛利+ALLN组间ABCA1蛋白水平差异无统计学意义;而在12、16 h时间点,阿米洛利+ALLN组ABCA1蛋白水平较阿米洛利组、ALLN组升高。与对照组比较,阿米洛利组、ALLN组及阿米洛利+ALLN组钙蛋白酶活性均降低;阿米洛利组、ALLN组、阿米洛利+ALLN组3组组间比较,钙蛋白酶活性各时间点均无明显差异。结论阿米洛利在活体内抑制Apo A1诱导ABCA1蛋白降解及钙蛋白酶活性,提示钠氢交换体1可能至少部分通过改变钙蛋白酶活性参与ABCA1的降解。

尿酸盐转运体研究现状及其药物研发

尿酸盐是体内嘌呤代谢的终产物,其合成和排泄决定血尿酸水平。无论血尿酸水平过高或过低都将导致严重并发症。本文主要对尿酸转运体及降尿酸药物进行综述。

VPA诱导的自闭症青年小鼠海马中PLCγ1/IP3R/CaMKⅡ蛋白表达和树突棘密度的变化

目的探讨丙戊酸钠(VPA)诱导的自闭症模型小鼠大脑海马区磷脂酶C-γ1(PLCγ1)/肌醇三磷酸受体(IP3R)/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的改变和树突棘密度的异常。方法 C57孕小鼠于孕10、12 d分别腹腔注射丙戊酸钠300 mg/kg或生理盐水,其仔鼠分别为自闭症谱系障碍模型鼠(VPA组)或正常对照鼠(CON组)。Western blot检测两组仔鼠大脑海马区PLCγ1、IP3R、CaMKⅡ和突触后致密物-95(PSD95)的表达水平。高尔基染色法检测2组仔鼠大脑海马区树突棘的变化。结果 Western blot检测结果显示:与正常对照组相比,VPA组小鼠大脑海马区PLCγ1,IP3R,CaMKⅡ和PSD95的表达均下降(P<0.01)。高尔基染色结果显示:与正常对照组相比,VPA组小鼠大脑海马区树突棘密度减少(P<0.01)。结论 VPA诱导的自闭症模型小鼠大脑海马区的PLCγ1/IP3R/CaMKⅡ表达下降,同时伴随着海马CA1区锥体神经元树突棘密度降低,PSD95的表达减少。

钠-葡萄糖共转运蛋白及其相关药物的作用机制

近年来，钠？葡萄糖共同转运蛋白2抑制剂（sodium glucose co？transporter 2 inhibitor, SGLT？2i）作为治疗T2DM的一类新药受到广泛关注。而SGLT？2i通过选择性地抑制钠？葡萄糖共同转运蛋白（SGLT）从而促进尿糖排泄，非胰岛素依赖性地发挥降糖作用是其独特的作用机制。

胆汁酸肠肝循环及胆汁酸性腹泻的机制研究进展

人体肠肝循环中胆汁酸稳态失衡,大量胆汁酸抵达结肠,可引发胆汁酸性腹泻。胆汁酸性腹泻产生的主要原因是胆汁酸重吸收减少或肝内胆汁酸合成增多。现有研究根据胆汁酸性腹泻的发病机制将其分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型。作者介绍了胆汁酸肠肝循环的生理机制,并就胆汁酸性腹泻发病机制的研究进展作一综述。

Amiloride通过抑制缺氧诱导的NHE1表达而延缓calpain介导的ABCA1降解

目的:研究缺氧对钠氢交换体1(NHE1)表达、细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)和钙蛋白酶(calpain)活性的影响,探讨NHE1抑制剂阿米洛利(amiloride)对ABCA1降解的影响以及与calpain相关的机制。方法:RAW264.7细胞缺氧0、12、24和48 h。MTT法检测细胞活力,real-time PCR及Western blot检测NHE1的表达。流式细胞术检测[Ca2+]i,荧光素法检测细胞内calpain活性。进而,经缺氧24 h处理的细胞,cycloheximide干预条件下,NHE1抑制剂amiloride处理6 h及12 h,检测ABCA1蛋白含量。最后,给予calpain抑制剂ALLN及细胞内钙螯合剂BAPTA共孵育12 h,检测ABCA1含量及calpain活性。结果:缺氧呈时间依赖方式抑制细胞增殖。缺氧促进NHE1表达上调,增加[Ca2+]i及calpain活性。缺氧加速ABCA1蛋白降解,而amiloride减缓ABCA1蛋白降解。ALLN及BAPTA升高ABCA1蛋白含量,降低calpain活性。结论:Amiloride延缓calpain介导的ABCA1降解,提示缺氧诱导NHE1表达可能至少部分参与ABCA1蛋白降解。

缬沙坦对心力衰竭家兔肌浆网钙ATP酶、蛋白激酶A及磷酸酶1α的影响

目的探讨家兔慢性心力衰竭（心衰）时心肌肌浆网钙ATP酶（SERCA2）、心肌蛋白激酶A（PKA）和磷酸酶1α（PP1α）表达的改变及血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦长期干预的意义。方法21只家兔随机分为三组，假手术组、心衰组和缬沙坦组各7只，通过超容量负荷联合压力负荷建立家兔心衰模型，于术后7周观察左心室结构、血流动力学的变化及SERCA2、PKA、PP1α的表达。结果与假手术组比较，心衰组左心室重量指数（LVMI）、心率、左心室舒张末压（LVEDP）显著升高（P〈0．05），左心室缩短率（LVFS）及射血分数（EF）明显降低（P〈0．05）；与心衰组比较，缬沙坦组LVMI、心率、LVEDP显著降低（P〈0．05），LVFS及EF明显升高（P〈0．05）；心衰组SERCA2、PKA显著低于假手术组（P〈0．05），PP1α显著高于假手术组（P〈0．05）；缬沙坦组SERCA2、PKA显著高于心衰组（P〈0．05），PP1α显著低于心衰组（P〈0．05）。结论缬沙坦长期干预心衰，能够改善心脏舒缩功能，可能与其上调SERCA2、PKA表达，降低PP1α表达有关。

大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E中VDR、PKC及其相互作用对Na DC1表达的影响

目的:探究大鼠肾小管上皮细胞NRE-52E中蛋白激酶C(PKC)、维生素D受体(VDR)及其相互作用对钠离子依赖性二羧酸协同转运蛋白1(Na DC1)表达的影响。方法:体外培养大鼠肾小管上皮细胞NRE-52E,采用PKC激动剂和PKC抑制剂干预NRE-52E细胞,并用VDR过表达载体及VDR-shRNA载体转染NRE-52E细胞,结合Western blot检测细胞中PKC、VDR和Na DC1的蛋白表达情况。结果:成功建立VDR稳定过表达和VDR稳定干扰的NRK-52E细胞株。与对照组比较,PKC激动剂组VDR和Na DC1蛋白表达量显著上调(P <0. 01),VDR过表达组的PKC和Na DC1蛋白表达量显著上升(P <0. 01),VDR干扰+PKC激动剂组和VDR过表达+PKC抑制剂组中PKC和Na DC1蛋白的表达水平均介于VDR干扰组与VDR过表达组之间。结论:在大鼠肾小管上皮细胞NRE-52E中PKC活性增强诱导VDR蛋白表达,PKC活性减弱抑制Na DC1蛋白表达;VDR与PKC和Na DC1的蛋白表达存在明显正相关;PKC与VDR相互作用时PKC高活性和VDR过表达是促进或维持Na DC1蛋白表达的主要因素。