禽白血病病毒J亚群感染鸡组织中细胞受体chNHE 1的表达分析

旨在研究鸡钠氢交换蛋白1(chicken sodium hydrogen exchanger isoform 1,chNHE1)在不同类型鸡组织内的表达情况,J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus, ALV-J)的组织嗜性及ALV-J感染后组织chNHE1的mRNA变化情况。本研究利用qPCR技术,检测了商品肉鸡、商品蛋鸡和SPF鸡脏器内的chNHE1转录量,ALV-J感染鸡后各组织的病毒载量及组织chNHE1的转录量的变化。结果显示,chNHE1在3种类型鸡的心、肝、脾、肺、肾、盲肠扁桃体、胸腺和法氏囊中均能检测到,但转录量高低存在较大差异,其中,免疫器官内的chNHE1转录量相对较高;SPF鸡接种ALV-J后,心、脾、肾和盲肠扁桃体中的病毒载量相对较高,而肝、肺、胸腺和法氏囊中的病毒载量相对较低;ALV-J感染后,脾、肾和盲肠扁桃体中的chNHE1转录量明显上调,但心中的转录量与空白对照相比无明显变化。本研究分析了3种类型鸡chNHE1的组织转录特点及ALV-J感染对组织内chNHE1转录的影响,该研究结果为探究受体chNHE1的转录与ALV-J的组织嗜性的关系提供重要的理论依据。

缺氧-复氧对大鼠心肌微血管内皮细胞中钠氢交换体-1的表达及活性影响

目的探讨缺氧-复氧对大鼠心肌微血管内皮细胞(rat myocardial microvascular endothelial cells,RMMEVCs)中缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)表达以及钠氢交换体-1(hydrogen exchanger-1,NHE1)的表达及活性的影响。方法蛋白印迹检测缺氧培养的RMMVECs的HIF-1、NHE1蛋白水平表达,并用氯化钴模拟缺氧进行验证。进而BCECF/AM法检测细胞内pH值、酸负荷后pH回复率及对NHE1特异阻断剂DMA的反应。复氧0、24、48 h后检测缺氧影响作用的回复情况。结果缺氧导致RMMVECs中HIF-1、NHE1蛋白表达水平升高,氯化钴模拟缺氧证实NHE1表达亦升高。但缺氧致细胞内pH值下降[0 h(7.42±0.06);12 h(7.17±0.05);24 h(7.04±0.04);P<0.01],酸负荷后细胞内pH值回复率减小[(U/min)0 h(0.106±0.007);12 h(0.059±0.005);24 h(0.044±0.004);P<0.01];相对于DMA未处理组,不同缺氧时间点DMA处理组的酸负荷后pH回复率均降低[(U/min)0 h,-0.063;12 h,-0.028;24 h,-0.020]。复氧后NHE1蛋白水平逐渐下降,但复氧24 h酸负荷后细胞内pH值回复率最高(0.119 U/min),DMA抑制幅度最明显(-0.076 U/min),与0、48 h比较差异显著(P<0.01)。结论在缺氧中HIF-1升高可能导致NHE1蛋白表达升高,但NHE1活性降低,而复氧后NHE1活性升高。NHE1表达与活性改变可能是RMMVECs缺氧中pH调节的重要机制。

钠氢交换体1与心血管疾病关系研究进展

作为一种分布在细胞膜表面的蛋白,钠氢交换体1(NHE1)参与调节细胞内的pH值和细胞容积,并且可随着细胞机能状态的变化而进行自我调节。在细胞缺血、缺氧、酸中毒等情况下,NHE1被激活,进一步导致细胞内Na+潴留,Na+-Ca2+交换加强,细胞内Ca2+增加,细胞内钙超载导致心肌组织损伤,这一病理生理变化参与了多种心血管疾病的发生、发展。

心衰患者心肌组织中钠氢交换体1 mRNA的表达与血清胶原的相关性研究

目的观察心衰患者心肌组织中钠氢交换体1(sodium-hydrogen exchanger 1,NHE1)的表达及其与血清胶原的相关性,探讨NHE1在心衰发生和发展中的作用及其与心肌纤维化的相互关系。方法设心衰组及正常对照组,心衰组按NYHA分级分成心功能Ⅰ级、Ⅱ级及Ⅲ级3个亚组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测受试者心肌组织中NHE1 mRNA的表达水平,采用放射免疫分析法分别测定血清Ⅰ型前胶原羧基端肽Ⅰ(PⅠCP)和Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)含量。结果心衰组PⅠCP、PⅢNP含量较正常对照组明显升高,随着心功能的逐渐恶化,心衰组PⅠCP、PⅢNP含量呈上升趋势,各组间表达总体上有差异(P<0.05或P<0.01),PⅠCP、PⅢNP含量与NHE1 mRNA的△Ct值呈显著负相关。结论心衰患者心肌组织中存在NHE1 mRNA的高水平表达,血清PⅠCP、PⅢNP含量显著增加,提示NHE1可能在心衰的发生和发展过程中起着重要作用。

钠氢交换体1 mRNA在心衰患者心肌组织中的表达

目的观察钠氢交换体1(sodium-hydrogen exchanger1,NHE1)在心力衰竭患者心肌组织中的表达,探讨NHE1在心衰发生和发展中的作用。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测35例心力衰竭患者心肌组织NHE1 mRNA的表达水平。结果实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测心功能Ⅰ级组、心功能Ⅱ级组、心功能Ⅲ级组心力衰竭患者心肌组织NHE1 mRNA的△Ct值分别为6.29±0.66、5.01±0.60、4.40±0.74。与心功能Ⅰ级组比较,在心功能Ⅱ级组、心功能Ⅲ级组患者心肌组织中NHE1 mRNA表达明显高于心功能Ⅰ级组(P<0.01),同时与心功能Ⅱ级组比较,心功能Ⅲ级组患者心肌组织中NHE1 mRNA水平增高,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论心衰患者心肌组织中存在NHE1 mRNA的高水平表达,提示NHE1可能在心衰的发生和发展过程中起着重要作用。

钠-氢交换体1抑制剂治疗心力衰竭大鼠

目的在大鼠心力衰竭(HF)的初始阶段应用钠-氢交换体1(NHE-1)抑制剂cariporide(car)治疗,以评价其疗效。方法30只大鼠腹部皮下注射异丙肾上腺素,340mg/kg,间隔24h重复注射1次,制备HF模型。随机分为HF组及HF+car组,每组15只。14只大鼠以相同方式腹部皮下注射0.9%NaCl注射液,随机分为对照组及对照+car组,每组7只。HF+car组、对照+car组自实验第3天起每天给予car,30mg/kg,持续8周。应用超声心动仪检查心脏结构及功能,测量左心室质量/体质量,行左心室HE及Masson胶原纤维染色。应用病理图像分析仪测定心肌胶原含量。结果HF组大鼠存活9只,HF+car组存活12只。对照组、对照+car组心脏彩超、左心室质量/体质量及病理无差别。与对照组比较,HF组大鼠呈现左心室扩张、肥厚、收缩功能降低、心肌坏死及纤维化。HF+car组上述异常均得以改善。结论早期给予car治疗,延缓HF。

冠心病患者经皮冠状动脉介入术相关造影剂急性肾损害的影响因素分析及KIM-1、NGAL、NHE3的预测价值

目的探究冠状动脉粥样硬化性心脏病(以下简称冠心病)患者经皮冠状动脉介入术(PCI)相关造影剂急性肾损害(CIAKI)的影响因素,并分析尿液中肾损伤分子-1(KIM-1)、中性粒细胞明胶酶相关脂质结合蛋白(NGAL)、钠/氢交换蛋白3(NHE3)预测CIAKI发生的价值。方法回顾性分析2021年7月—2022年6月在齐齐哈尔医学院附属第一医院行PCI的142例冠心病患者的病历资料,根据患者术后是否发生CIAKI,分为CIAKI组和非CIAKI组。分析影响PCI术后发生CIAKI的因素,评估PCI前后KIM-1差值、NGAL差值及NHE3差值对PCI术后发生CIAKI的预测价值。结果142例行PCI的冠心病患者中发生CIAKI 25例(17.61%)。CIAKI组糖尿病占比及造影剂使用剂量高于非CIAKI组(P<0.05),术前GFR水平低于非CIAKI组(P<0.05)。CIAKI组手术前后尿KIM-1、NGAL及NHE3的差值均高于非CIAKI组(P<0.05)。多因素逐步Logistic回归分析结果显示:糖尿病[OR=3.350(95%CI:1.145,9.802)]、造影剂使用剂量[OR=3.377(95%CI:1.154,9.880)]、KIM-1差值[OR=4.958(95%CI:1.695,14.506)]、NGAL差值[OR=4.446(95%CI:1.519,13.008)]、NHE3差值[OR=4.446(95%CI:1.519,3.008)]是冠心病患者PCI术后发生CIAKI的危险因素(P<0.05);GFR[OR=0.262(95%CI:0.089,0.765)]是冠心病患者PCI术后发生CIAKI的保护因素(P<0.05)。受试者工作特征曲线分析结果表明,KIM-1差值、NGAL差值、NHE3差值单一及联合预测冠心病患者PCI术后发生CIAKI的敏感性为75.32%(95%CI:0.594,0.831)、68.59%(95%CI:0.537,0.762)、62.77%(95%CI:0.514,0.735)、80.93%(95%CI:0.629,0.924),特异性为74.01%(95%CI:0.583,0.826)、83.16%(95%CI:0.652,0.941)、78.92%(95%CI:0.603,0.875)、81.15%(95%CI:0.638,0.945),曲线下面积为0.743、0.748、0.762和0.837,联合诊断效能最高。结论糖尿病、GFR、造影剂使用剂量和PCI前后KIM-1、NGAL、NHE3的变化影响CIAKI的发生,PCI前后KIM-1差值、NGAL差值及NHE3差值联合预测CIAKI的效能较好。

达格列净对动脉粥样硬化的影响以及与钠氢交换体1相关机制

目的 探讨达格列净对载脂蛋白E敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(AS)形成的影响以及与钠氢交换体1(NHE1)相关的机制。方法 6周龄雄性ApoE^(-/-)小鼠24只,随机分为普通饮食组、高脂饮食组、高脂饮食+达格列净组(10 mg/(kg·d))以及高脂饮食+格列美脲组(0.5 mg/(kg·d))。8周后,HE染色检测小鼠主动脉的AS斑块情况,定量PCR及免疫印迹法检测主动脉钠葡萄糖协同转运蛋白2(SGTL2)表达,免疫组化法检测主动脉NHE1表达。进而给予达格列净(10μmol/L)、阿米洛利(20μmol/L)以及脂多糖(100 ng/mL)干预小鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞处理24 h,免疫印迹法检测NHE1蛋白表达以及SNARF-1/AM荧光法检测NH_(4)Cl诱导pH值回复率(NHE1活性);酶联免疫吸附法检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10分泌情况。结果 高脂饮食+达格列净组主动脉的AS斑块面积显著低于高脂饮食组(P<0.05);各组主动脉斑块内均极低表达SGLT2(P<0.05);高脂饮食+达格列净组内斑块NHE1表达较高脂饮食组下降(P<0.05)。LPS+达格列净组RAW.7细胞的NHE1蛋白水平明显低于LPS组(P<0.05);SNARF-1荧光法提示达格列净处理后细胞内pH值降低(P<0.05),细胞NHE1活性显著降低(P<0.05);与LPS组相比,LPS+达格列净组细胞上清TNF-α、IL-1β、IL-6含量显著减少(P<0.05),IL-10含量显著增加(P<0.05)。结论 达格列净通过抑制NHE1表达及其活性抑制AS斑块发展及细胞因子释放。

钠氢交换体1调节肿瘤微环境对肿瘤细胞的影响

肿瘤细胞微环境呈酸性,主要由肿瘤细胞无限增殖及高代谢所致。它们主要是通过外排H+或向胞内转运HCO3-来维持其微环境的稳态。研究发现钠氢交换体1(sodium hydrogen exchanger isoform 1,NHE1)是一种广泛表达的跨膜泌酸转运蛋白,其表达上调或激活通常与肿瘤的恶性程度相关。我们对目前关于NHE1的相关研究进行综述,探讨肿瘤细胞是如何改变微环境pH值的平衡,及微环境pH值对肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和生长的影响,并讨论酸性微环境是如何协助肿瘤细胞逃避化疗药物的杀伤。

钠氢交换体1在氯化锂-匹罗卡品点燃癫痫大鼠模型海马组织内的表达

目的 检测钠氢交换体1(NHE1)在氯化锂-匹罗卡品点燃癫痫大鼠模型海马组织中的表达。方法 选取雄性SD大鼠90只,其中45只采用腹腔注射氯化锂-匹罗卡品构建癫痫模型作为模型组,45只采用腹腔注射生理盐水组作为对照组;取模型组和对照组大鼠各36只,采用蛋白印迹(Western blot)法检测造模后第1、3、7、14、30及60天时2组大鼠海马组织匀浆中NHE1蛋白的定量表达;取模型组和对照组大鼠各3只,采用免疫组织化学分析造模后第14天时2组大鼠海马组织NHE1的蛋白表达;取模型组和对照组大鼠各6只,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测造模后第14天2组大鼠海马组织NHE1 m RNA的的表达特点。结果造模后第1、3、7、14、30及60天时,模型组大鼠海马组织匀浆中NHE1蛋白表达较对照组增高(P<0.05),且模型组大鼠海马组织NHE1蛋白表达从第1天开始增高、第14天时达到高峰、第30天和第60天逐渐下降(P<0.05);造模后第14天时,模型组大鼠海马组织不同亚区NHE1阳性表达较对照组相应区域增强,且NHE1m RNA水平也高于对照组(P<0.05)。结论 氯化锂-匹罗卡品点燃模型癫痫大鼠海马组织中NHE1表达随时间呈动态变化,且在第14天表达最高,提示NHE1可能与癫痫的发生发展过程密切相关。

癫痫模型大鼠心肌组织钠氢交换体1的表达及与凋亡的关系

目的探讨癫痫模型大鼠心肌组织钠氢交换体1(NHE1)的表达及凋亡情况。方法选取SD雄性大鼠共40只纳入研究,采用氯化锂-匹罗卡品构建癫痫模型作为模型组(n=22),采用腹腔注射生理盐水作为对照组(n=18);模型成功后第60天,麻醉处死后取心肌组织,应用蛋白印迹和RT-PCR检测NHE1的表达,进一步应用流式细胞仪检测大鼠心肌细胞凋亡情况。结果制作模型过程中3只大鼠死亡,死亡率为14%。与对照组比较,蛋白印迹结果显示第60天时模型组大鼠心肌组织NHE1蛋白表达增高(P<0.05)。RT-PCR结果显示造模后第60天时,模型组大鼠心肌组织NHE1mRNA表达增高(P<0.05)。流式细胞检测结果显示模型组大鼠心肌细胞凋亡明显增多(P<0.05)。结论癫痫模型大鼠在癫痫慢性病程中,心肌组织的NHE1表达增高可能与心肌细胞凋亡增多相关。

钠氢交换蛋白-1特异性抑制剂二甲基氨氯吡咪对HL-60/ADM细胞pHi变化及细胞增殖、凋亡的影响

为了探讨钠氢交换蛋白-1(NHE-1)抑制剂二甲基氨氯吡咪(DMA)对HL-60/ADM细胞pHi变化及细胞增殖、凋亡的影响,以敏感HL-60细胞为对照,用不同浓度的DMA干预后,荧光指示剂(BCECF/AM)检测法检测细胞内pHi,微量噻唑蓝法(MTT)检测细胞生长的抑制率,流式细胞术检测细胞周期变化,TUNEL法检测原位细胞凋亡,对比HL-60/ADM细胞与HL-60细胞之间的差异。结果显示:HL-60/ADM细胞内pHi较HL-60细胞显著升高;DMA作用下,HL-60/ADM细胞的pHi降低幅度、生长抑制率、细胞凋亡率均显著高于HL-60细胞;当DMA浓度100-150μmol/L时,HL-60/ADM细胞的G0/G1期细胞比率增加幅度、S期及G2/M期细胞比率降低幅度均高于HL-60细胞。结论:NHE-1特异性抑制剂DMA引起HL-60/ADM的pHi降低,可抑制细胞生长并诱导细胞凋亡;且DMA对HL-60/ADM细胞的生长抑制作用显著高于HL-60细胞。

实验性高血氨对肝细胞钠-氢交换蛋白1型转运活性和细胞内pH值的影响

目的研究高血氨对肝细胞钠-氢交换蛋白1型转运活性和细胞内pH值的影响。方法采用5mmol/L NH4Cl处理HL-7702细胞24 h,构建高血氨肝细胞模型,采用细胞计数法、流式细胞法、BCECF-AM法和Western blot法测定细胞数量、凋亡率、细胞内pH值以及NHE1蛋白的转运活性和表达水平。结果高血氨肝细胞模型肝细胞内pH值下降,NHE1蛋白的转运活性和表达水平升高,肝细胞数量降低和凋亡率升高。结论高血氨导致的肝细胞损伤可能与降低肝细胞内pH值,激活NHE1蛋白有关。

抗钠-钙交换体α-1和α-2重复序列抗体的制备和纯化(英文)

目的用人工合成的钠-钙交换体α1和α2重复序列作为抗原,制备并纯化抗α1和α2重复序列抗体。方法通过主动免疫大鼠,获得抗血清。采用酶联免疫吸附测定法(SAELISA)测定抗体滴度,并将高滴度抗血清(≥1∶640)上样至HiTrapProteinGHP进行亲和层析对抗体进行纯化。纯化效果用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,并采用Bradford蛋白质定量法对纯化后抗体进行定量。结果大鼠经主动免疫后,抗α1抗血清滴度从免疫前的1∶(25.5±1.5)升高到1∶(905.1±2.2)(P<0.01);抗α2抗血清滴度从免疫前的1∶(26.4±1.5)升高到1∶(1076.3±2.0)(P<0.01)。纯化后的抗α1和抗α2重复序列抗体电泳时都仅有一条带出现,分子量160kDa左右,与IgG标准品相一致。用Bradford蛋白质定量法测得抗α1和α2抗体浓度分别为1.0mg/ml和1.2mg/ml。结论本研究获得了高纯度、高滴度的抗α1抗体,为下一步对其进行功能研究奠定了基础。

钠氢交换蛋白1在胃癌中的表达及其对胃癌细胞增殖的影响

目的观察钠氢交换蛋白1(Na+/H+,exchanger 1,NHE1)在人胃癌组织和胃癌细胞中的表达变化,以及对SGC-7901胃癌细胞增殖的影响。方法采用实时逆转录聚合酶链式反应(real time PCR,RT-PCR)和免疫印迹(Western Bloting)技术检测比较NHE1在正常胃黏膜组织、胃癌组织、正常胃黏膜细胞株GES-1和胃癌细胞株SGC-7901中的表达;用不同浓度的NHE1特异性阻断剂[5-(N-乙基-N-异丙基)]阿米洛利[5-(N-ethyl-N-isopropyl)amiloride(EIPA)]处理胃癌SGC-7901细胞24h,MTT法检测其对SGC-7901细胞增殖的影响。结果 NHE1在人正常胃黏膜组织、胃癌组织、正常胃黏膜细胞和胃癌细胞中均有表达,但在人胃癌组织和SGC-7901胃癌细胞中,其mRNA和蛋白表达水平均明显增高(P<0.05);EIPA10μm/mL,20μm/mL,30μm/mL处理,均能抑制胃癌SGC-7901细胞的过度增殖(P<0.05),且呈现良好的剂量-效应关系。结论 NHE1mRNA和蛋白表达水平在胃癌中表达显著升高;NHE1特异性阻断剂EIPA能抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,NHE1的改变可能与胃癌细胞的增殖密切相关。

结直肠癌组织中DNA甲基转移酶-1和钠氢交换子调节因子1的表达、临床意义及相关性

目的探讨结直肠癌组织中DNA甲基转移酶-1(DNMT1)和钠氢交换子调节因子1(NHERF1)的表达、临床意义及相关性。方法选取2017年2月~2018年2月河北北方学院附属第一医院手术切除的结直肠癌(癌组)和癌旁正常组织(正常组)各50例,应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测两组DNMT1 mRNA和NHERF1 mRNA的表达,应用免疫组化(IHC)法检测两组DNMT1和NHERF1蛋白的表达,同时收集患者的临床资料,分析二者的表达与临床病理特征间的关系,应用Spearman检验分析两种蛋白间的相关性。结果qRT-PCR法结果显示:癌组中DNMT1 mRNA的表达水平明显高于正常组,而癌组中NHERF1 mRNA的表达水平则明显低于正常组,差异均有高度统计学意义(均P<0.01);IHC法结果显示:癌组中DNMT1蛋白阳性表达率明显高于正常组,而癌组中NHERF1蛋白阳性表达率明显低于正常组,差异均有高度统计学意义(均P<0.01);癌组中DNMT1和NHERF1蛋白的表达水平均与病变浸润程度、TNM分期、淋巴结转移及肝转移有关(均P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤大小和分化程度无关(均P>0.05);Spearman相关分析显示:癌组织中DNMT1与NHERF1呈负相关(r=-0.491,P<0.01)。结论DNMT1高表达和NHERF1低表达在结直肠癌的发生、发展中发挥重要作用,二者均可作为结直肠癌早期诊断和治疗监测的潜在分子生物学指标。

钠钙交换体1在高血压发病学中的研究进展

钠钙交换体（sodium-calcium exchanger,NCX）是一种存在于细胞膜上的Na＋-Ca2＋转运蛋白,为非耗能的低亲和力高容量双向转运系统,对维持细胞内Ca2＋浓度的稳态十分重要。对NCX的早期研究主要集中于心肌细胞,揭示NCX是导致缺血再灌注损伤的主要效应分子[1]。心肌缺血再灌注时,继发于细胞内酸中毒的胞浆Na＋升高,激活NCX反向转运使Ca2＋内流增加,导致细胞钙超载,

钙激活中性蛋白酶和钠氢交换体1在癫痫所致神经元损害中的研究进展

癫痫（epilepsy）是最常见的神经系统疾病之一，患病率为千分之5～千分之7，全球约有3500万患者，我国约有650万患者正在遭受该疾病的困扰4而癫痫持续状态（statusepilepticus，SE）是癫痫的严重状态，是指持续性痫性发作超过30min，或者两次或两次以上的相继的痫性发作，期间意识状态未能完全恢复正常。

微小RNA-320a和钠氢交换调控因子1在肝细胞癌中的表达及机制

目的探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-320a和钠氢交换调控因子1(Na+/H+exchanger regulatory factor 1,NHERF1)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及机制。方法收集首都医科大学附属北京佑安医院2015年1月至2016年1月经手术治疗的HCC患者肝癌组织及癌旁组织。采用反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测miR-320a和NHERFl在HCC组织、癌旁组织、HCC细胞株Bel-7402和正常肝细胞株HL-7702中的表达。将体外培养的Bel-7402细胞分为对照组、空白组和miR-320a转染组,空白组中仅加入2 ml全培养基;对照组加入2 ml空载体质粒;miR-320a组将稀释的miR-320a混合液加入到完全养基中,最终体积为2 ml;采用RT-PCR检测Bel-7402细胞中miR-320a、NHERF1及β-catenin的表达,采用流式细胞术检测Bel-7402细胞的凋亡,采用Transwell检测Bel-7402细胞迁移侵袭能力。结果miR-320a(0.51±0.01 vs 0.83±0.02)和NHERFl(0.78±0.02 vs 1.42±0.05)在肝癌组织中的表达均显著低于癌旁组织,差异有统计学意义(t值分别为-80.25、-68.05,P均<0.001)。miR-320a(0.75±0.03 vs 0.81±0.04)和NHERFl(0.79±0.05 vs 1.58±0.05)在Bel-7402细胞中的相对表达量均显著低于HL-7702,差异有统计学意义(t=-2.73,P=0.021,t=-27.60,P<0.001)。对照组、空白组和miR-320a转染组在Bel-7402细胞中miR-320a相对表达量分别为0.77±0.04、0.79±0.05和1.28±0.07,差异有统计学意义(H=11.66,P=0.003),miR-320a转染组显著高于对照组和空白组(H值分别为8.308、8.308,P值分别为0.004、0.004)。对照组、空白组和miR-320a转染组Bel-7402细胞中NHERFl相对表达量分别为0.82±0.04、0.70±0.04和1.46±0.06,差异有统计学意义(H=15.17,P=0.001),miR-320a转染组显著高于对照组和空白组(H值分别为8.337、8.308,P值分别为0.004、0.004)。空白组、对照组和miR-320a转染组Bel-7402细胞凋亡率分别为11.2%、11.4%、32.5%,差异有统计学意义(χ^2=9263.95,P<0.001)。其中miR-320a转染组显著高于空白组和对照组(χ^2值分别为7508.35、5100.96,P均<0.001),空白组和对照组间差异无统计学意义(χ^2=1.024,P=0.311)。miR-320a组Bel-7402迁移能力显著降低。对照组、空白组和miR-320a转染组Bel-7402细胞中β-catenin的相对表达量分别为1.66±0.07、1.62±0.06、0.64±0.02,差异有统计学意义(H=12.117,P=0.002)。其中,miR-320a转染组显著低于空白组和对照组(H值分别为8.308、8.308,P值分别为0.004、0.004),空白组和对照组间差异无统计学意义(H=1.641,P=0.200)。结论miR-320a和NHERF1在HCC中表达降低,miR-320a可能通过Wnt信号转导通路发挥作用,抑制癌细胞的增殖。

糖基化终末产物对大鼠平滑肌细胞钠/氢交换蛋白1活性的影响

目的观察糖基化终末产物对大鼠血管平滑肌细胞钠/氢交换蛋白1活性的影响。方法采用组织贴块法原代培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞。用体外制备的外源性糖基化终末产物和血管平滑肌细胞共孵育24h,利用BCECF通过荧光分光光度计检测细胞上钠/氢交换蛋白1活性。结果不同浓度糖基化终末产物(1、5和10mg/L)与血管平滑肌细胞共孵24h后,能显著增强钠/氢交换蛋白1的活性,分别使钠/氢交换蛋白1的活性从0.66±0.05升高至0.71±0.03、0.80±0.07和0.88±0.06(P<0.05或P<0.01),使钠/氢交换蛋白1 mRNA表达从0.77±0.07分别升高至0.88±0.08、1.23±0.06和1.33±0.08(P<0.05或P<0.01);预先使用糖基化终末产物受体阻断剂5 mg/L,钠/氢交换蛋白1活性比糖基化终末产物处理组明显降低(0.68±0.04比0.90±0.05,P<0.05);使用不同浓度的丝裂原活化蛋白激酶阻断剂PD98059(1、10和25μmol/L),使钠/氢交换蛋白1活性从0.94±0.05分别降至0.86±0.06、0.74±0.05和0.66±0.07(P<0.05或P<0.01)。结论外源性糖基化终末产物能诱导血管平滑肌细胞上钠/氢交换蛋白1活化,其机制可能与糖基化终末产物激活糖基化终末产物受体,引起丝裂原活化蛋白激酶信号通路活化有关。