醛固酮可通过钠氢交换子1诱导肾小球系膜细胞外基质增生

目的探讨醛固酮能否在肾小球系膜细胞(GMC)激活钠氢交换子1(NHE1),以及能否通过NHE1诱导GMC细胞外基质增生。方法体外培养大鼠GMC,并按如下分组:对照组(Con,普通培养液);醛固酮组(Aldo,10-7mol／L);醛固酮+安体舒通组(Aldo+Spir 10-9 mol／L);醛固酮+NHE1抑制剂DMA组(Aldo+DMA 25μmol／L)。24 h后收集培养上清液和各组细胞,抽提总RNA。用酸负荷后钠依赖的pHi(细胞内pH值)的变化来检测NHE1活性,同时采用实时PCR以及流式细胞术检测NHE1基因和蛋白的表达。采用实时PCR和ELISA方法检测纤连蛋白(FN)基因和蛋白的表达。结果与对照组比较,Aldo组肾小球系膜细胞NHE1的活性(△pHi／100S)显著增高[Con(4．48±0．25)％,Aldo(5．29±0．11)％,P<0．05]。加入安体舒通和DMA后,上述NHE1活性均有所降低[Aldo+Spir(4．92±0．35)％,Aldo+DMA(4．07±0．23)％,与Aldo组比较,P<0．05]。实时PCR结果显示Aldo组NHE1 mRNA水平有所增高,是对照组的1．16倍(P<0．05),而Aldo+Spir组NHE1 mRNA水平明显下降,是Aldo组的81．9％(P<0．05)。流式细胞术结果显示Aldo组NHE1蛋白水平显著增高,是对照组的2．9倍(P<0．01),而Aldo+Spir组NHE1蛋白水平明显下降,仅为Aldo组的52．3％(P<0．05),安体舒通本身对NHE1的基因和蛋白表达没有显著影响。实时PCR结果显示Aldo组FN mRNA水平有所增高,是对照组的1．03倍(P<0．05); Aldo+Spir组和Aldo+DMA组FN mRNA水平有所下降,分别是Aldo组的91．21％(P<0．01)和92．30％(P<0．01)。ELISA结果显示培养上清液中分泌的FN(ng／ml)也表现为相同的趋势[Con(17．84±3．77),Aldo(51．66±1．40),P<0．01;Aldo+Spir(29．60±1．99),Aldo+DMA(25．75±4．66),与Aldo组比较,P<0．01]。结论醛固酮能够刺激肾小球系膜细胞分泌细胞外基质成分FN,其作用可能是由于醛固酮激活系膜细胞NHE1活性、上调其基因和蛋白表达所致。

钠氢交换子1短发夹RNA抑制醛固酮引起的系膜细胞纤连蛋白增生

目的构建钠氢交换子1（NHE1）的短发夹RNA（shRNA）,用来抑制NHE1表达,进一步明确NHE1是否直接介导醛固酮引起的细胞外基质增生。方法构建靶向NHE1的短发夹状双链RNA的真核表达质粒（shRNA-NHE1）,并将该质粒转染体外培养的大鼠肾小球系膜细胞。分别于转染后1、3、4 d用荧光定量PCR（real-time PCR）和Western印迹观察NHE1 mRNA和蛋白的表达。选择shRNA-NHE1质粒转染后第4天,给予醛固酮（10^-7mol/L）干预24 h,用ELISA法检测培养上清液中细胞外基质成分纤连蛋白（FN）的表达。结果PCR结果显示转染后24 h,shRNA-NHE1组NHE1 mRNA表达下降36.9%;转染第3、4天NHE1 mRNA表达降低69.2%和77.9%。Western印迹显示转染后24 h NHE1的蛋白表达无明显变化;3 d后蛋白水平显著下降,4 d后抑制作用更明显。ELISA结果显示,在未转染的系膜细胞中,醛固酮刺激后上清液中FN水平比对照组明显升高[（51.78±1.15）比（17.74±1.38）μg/L,P〈0.05],而当细胞转染shRNA-NHE1质粒后,醛固酮的上述作用被明显抑制[（28.07±1.73）μg/L,P〈0.05]。结论靶向NHE1的shRNA真核表达载体导入可以特异性抑制大鼠肾小球系膜细胞NHE1的表达,同时显著抑制醛固酮引起的FN增生,提示NHE1在醛固酮诱导的肾小球硬化中起重要作用。

原发性乳房外Paget病组织中钠氢交换子调节因子1和β联蛋白的表达和意义

目的探讨钠氢交换子调节因子1（NHERF1）和β联蛋白在原发性乳房外Paget病组织中的表达及其意义。方法应用免疫组化方法，检测18例原位乳房外Paget病、22例侵袭性乳房外Paget病石蜡组织切片中NHERF1和β联蛋白的表达情况。结果NHERF1在22例侵袭性乳房外Paget病中18例（81．82％）为高表达，18例原位乳房外Paget病中7例（38．89％）高表达，两组差异有统计学意义（χ2=7．78，P〈0．01）；β联蛋白在侵袭性乳房外Paget病中有0例胞膜高表达和18例（81．82％）胞质或核高表达，原位乳房外Paget病中分别为6例（33．33％）和8例（44．44％），两组差异均有统计学意义（χ2值分别为8．63和6．08，P值分别〈0．01和〈0．05）。原发性乳房外Paget病组织中NHERF1的表达与B联蛋白胞膜表达呈负相关（ρ=-0．488，P〈0．01），与β联蛋白胞质或核表达呈正相关（ρ=0．623，P〈0．01）；β联蛋白胞膜表达与胞质或核表达呈负相关（ρ=-0．572，P〈0．01）。结论乳房外Paget病组织中NHERF1和β联蛋白表达异常，并可能与原发性乳房外Paget病的发生发展及侵袭有关。

宫颈癌组织中NHERF1、NF2蛋白表达水平及临床预后意义

目的:分析宫颈癌组织中钠氢交换子调节因子1(NHERF1)、NF2蛋白表达水平及临床预后意义。方法:选取2015年1月—2017年7月我院病理检查确诊的80例宫颈癌癌组织标本及相应的癌旁组织(距肿瘤边缘2cm处)标本。采用免疫组织化学染色法检测所有标本组织中NHERF1、NF2表达水平,并分析NHERF1、NF2表达与宫颈癌患者临床病理特征及预后的关系。结果:宫颈癌组织中NHERF1、NF2阳性表达率分别低于癌旁组织NHERF1、NF2阳性表达率(P<0.05)。NHERF1、NF2表达水平与宫颈癌患者临床分期、分化程度、淋巴结转移存在显著关系(P<0.05)。NHERF1阳性、阴性宫颈癌患者5年生存率分别为66.67%、32.08%,二者差异有统计学意义(P<0.05);NF2阳性、阴性患者5年生存率分别为68.97%、29.41%,二者差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析得出:不同临床分期、分化程度、淋巴转移、NHERF1及NF2表达宫颈癌患者5年生存率比较差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Cox回归模型分析得出:临床Ⅲ/Ⅳ期(OR=2.28)、低分化(OR=3.38)、淋巴转移(OR=4.73)、NHERF1阴性(OR=3.35)、NF2阴性(OR=2.49)均为宫颈癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:宫颈癌组织中NHERF1、NF2蛋白均呈低表达水平,且表达水平与临床病理特征及预后有关,有望作为临床评估宫颈癌预后的有效标志物。

钠氢交换子调节因子-1在皮肤肿瘤中的作用

钠氢交换子调节因子-1是一种支架蛋白，其在调节离子转运、运输中发挥着一定的作用，同时还与膜-细胞骨架连接蛋白相互作用，可以稳定跨膜蛋白、参与构成上皮顶端微绒毛结构。它还是一种调节蛋白，能与30余种蛋白质作用并调节其功能。其基因的突变或杂合性丢失可导致肿瘤细胞的恶性程度增高，在正常细胞中通常为胞膜表达，发挥抑癌作用；胞膜不表达或在胞质及胞核中过表达则提示肿瘤恶性程度增加。在进一步的研究中除了不断探索其抗肿瘤的机制外，对肿瘤生物学行为的影响及临床意义将成为研究萤点．

钠-氢交换蛋白1小干扰RNA对抗霉素A诱导人肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤的保护机制

目的通过构建钠-氢交换蛋白1（NHE-1）小干扰RNA（siRNA）抑制肾小管上皮细胞NHE-1的表达，探讨其对细胞缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法根据人NHE-1全长基因序列设计并合成NHE-1-siRNA，转染人肾小管上皮细胞系（HKC），以无关siRNA转染组作为对照。利用10μmol／L抗霉素A诱导细胞来模拟缺血缺氧环境。用RT—PCR、Western印迹法检测NHE-1的表达。用BCECF／AM、Fluo-3／AM和SBFI-AM标记HKC，通过激光共聚焦显微镜分别检测其细胞内pHi、Ca^2＋和Na^＋浓度的变化。用Hoechst 33342染色技术及AnnexinV／PI染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡情况。利用荧光探针JC-1检测细胞线粒体膜电位的变化。结果特异性NHE-1-siRNA能有效抑制HKC的NHE-1表达，与无关siRNA转染组相比，NHE-1-siRNA转染组NHE-1 mRNA和蛋白表达水平明显下调（均P〈0．05）。抗霉素A刺激后，2组细胞NHE-1 mRNA及蛋白表达水平显著上调，而NHE-1-siRNA转染组低于无关siRNA转染组；同时NHE-1-siRNA转染组细胞凋亡率（8．9％±2．9％）明显低于抗霉素A处理组（18．8％±3．2％）和抗霉素A＋无关siRNA转染组（17．4％±3．6％）（均P〈0．05）；NHE-1-siRNA转染组线粒体膜电位明显增高；与无关siRNA转染组相比较，NHE-1-siRNA转染组经抗霉素A处理后，细胞内钠离子、氢离子及钙离子增高的幅度较低（P〈0．05）。结论NHE-1-siRNA可抑制肾小管上皮细胞内NHE-1的表达，对抗霉素A诱导肾小管上皮细胞的缺血再灌性损伤有一定的保护作用。其机制可能通过抑制NHE-1表达，延缓细胞内Na^＋的积聚，减轻细胞内钙离子的超载，抑制损伤细胞的线粒体膜电位下降，减少细胞的凋亡。

乳腺癌组织中NHERF1、PTEN和ERα蛋白的表达及其临床意义

目的在乳腺癌及癌旁组织中研究钠氢交换子调节因子1(Na+/H+exchanger regulatory factor 1,NHERF1)、PTEN和雌激素受体亚型ERα的免疫组织化学表达情况及其与乳腺癌临床病理分型的关系。方法采用免疫组织化学(SP)法评价乳腺癌组织及癌旁组织中NHERF、PTEN和雌激素受体亚型ERα蛋白表达情况,对其进行比较研究。结果乳腺癌组织中NHERF1和PTEN均呈现弱阳性表达或者不表达,而在癌旁组织中两者均有表达,而且在癌旁组织与癌组织中的表达量的差异有统计学意义(P<0.01)。而ERα的表达量在乳腺癌组织中明显高于癌旁组织(P<0.01)。结论乳腺癌组织中PTEN蛋白的表达水平可能与乳腺癌组织中NHERF1的表达有很大的相关性,雌激素受体在乳腺癌的发生发展过程中起了很重要的作用。

磷酸化蛋白50(EBP50)——一种新的抑癌蛋白

磷酸化蛋白50(ERM-binding phosphoprotein-50,EBP50)是由358个氨基酸组成的多功能连接蛋白.EBP50通过其PDZ-Ⅰ、PDZ-Ⅱ和ERM结合结构域与多种蛋白质结合,对PI3K/Akt、PLCβ等生长信号途径及对细胞迁移进行调控.目前有很多证据提示,ebp50是一种新的抑癌基因.在乳腺癌病人临床标本和细胞系中可检测到ebp50基因的杂合性丢失(LOH)和突变,其抑癌作用可能是通过它与多种抑癌蛋白(如抑癌蛋白PTEN、MERLIN和SYK)的相互作用并增强它们的稳定性,并与致癌蛋白结合从而抑制其致癌功能来达到的.通过对其分子结构、调控的信号途径及其与乳腺癌发生、发展的关系进行综述,为乳腺癌的防治提供新线索.

NHERF1及β联蛋白在黑素瘤细胞系A375、M14、MV3中的表达及意义

目的探讨钠氢交换子调节因子-1（NHERF1）及B联蛋白在黑素瘤细胞系A375、M14、MV3中的表达及意义。方法使用免疫细胞化学法、实时荧光定量-PCR法、免疫印迹法对黑素瘤细胞系A375、M14、MV3及黑素细胞中NHERF1及13联蛋白的表达情况进行观察。使用MTr法对黑素瘤细胞系A375、M14、MV3及黑素细胞的增殖情况进行检测。结果NHERF1及β联蛋白在黑素细胞中同时表现为细胞膜阳性表达，而在黑素瘤细胞系A375、M14、MV3中均出现膜表达的缺失，同时呈现不同程度的胞质和（或）胞核阳性表达。在3株黑素瘤细胞系中，MV3细胞中的NHERF1免疫细胞化学染色仅呈少部分胞质弱阳性表达，实时荧光定量PCR检测NHERF1的mRNA表达水平最低，免疫印迹法中未见NHERF1蛋白表达条带，而其在MTT法中检钡4到的增殖速度最快，明显高于另外两株细胞。A375细胞中的NHERF1免疫细胞化学染色呈胞质及胞核的强阳性表达，实时荧光定量PCR检测NHERF1的mRNA表达水平最高，免疫印迹法中可见NHERF1蛋白最强阳性表达，而其增殖速度却慢于MV3细胞。β联蛋白在MV3细胞中免疫细胞化学染色呈细胞质及细胞核的强阳性表达，实时荧光定量PCR检测的mRNA表达水平最高，免疫印迹法检测到蛋白最强阳性表达；而A375细胞及M14细胞中，β联蛋白在免疫细胞化学染色呈相对弱的细胞质阳性表达，实时荧光定量PCR检测的mRNA表达水平明显较低；免疫印迹法中的蛋白表达较MV3中的表达低。结论黑素瘤细胞胞质中NHERF1表达量可能与细胞的增殖速度相关，NHERF1在黑素瘤细胞中表达程度越低细胞增殖越快。黑素瘤细胞中的NHERF1与β联蛋白存在着差异性表达。

NHERF1／EBPSO在肿瘤发生发展中的作用

钠氢交换子调节因子1（Na＋／H＋ exchanger regulating factor1，NHERF1）是由358个氨基酸组成的多功能连接蛋白。NHERF1通过其PDZ-1、PDZ-2和EB结构域与多种蛋白质结合，对PDGF、P13K／Akt等信号转导通路起到调控作用。目前研究发现，NHERF1在多种肿瘤中存在异常表达和定位，并且通过与多种抑癌蛋白的相互作用参与肿瘤的发生。文章综述了NHERF1结构、定位、以及在肿瘤（如乳腺癌和肝癌）中的作用机制。