雷诺嗪对兔心房肌细胞快钠电流的影响及使用依赖性阻滞作用

目的研究雷诺嗪对兔心房肌细胞快钠电流的影响及其是否存在使用依赖性阻滞作用。方法应用全细胞膜片嵌记录方法,了解雷诺嗪对兔单个心房肌细胞快钠电流的作用,及在不同刺激频率(1 Hz、3.3 Hz、5 Hz)时对快钠电流的影响。结果30μmmol/L雷诺嗪对兔心房肌细胞快钠电流有明显的抑制作用,其IC50为(25.6±1.8)μmmol/L,并且随着刺激频率的增加其作用加强,存在使用依赖性。结论雷诺嗪对兔心房肌细胞快钠电流有一定的抑制作用,其存在使用依赖性阻滞作用。

氧化苦参碱对豚鼠心室肌细胞钠电流的影响

目的 :观察氧化苦参碱 (OMT)对豚鼠心室肌细胞钠电流的影响。方法 :采用全细胞膜片钳技术。结果 :OMT 0 .1、0 .3和 1mmol/ L对钠电流均呈现不同程度的抑制作用 ,且呈现剂量依赖性。结论 :OMT对钠通道的阻滞作用可能是其抗心律失常的作用机制之一。

晚钠电流在兔心力衰竭模型室性心律失常中的作用

目的探讨晚钠电流(INa-L)在心力衰竭模型兔室性心律失常中的作用。方法 40只新西兰大耳白兔随机分为假手术组、心衰组、海葵毒素(ATX-Ⅱ)组和雷诺嗪组,每组10只。心衰组、ATX-Ⅱ和雷诺嗪组通过缩窄腹主动脉制备兔心力衰竭模型,假手术组开腹但不缩窄腹主动脉。心力衰竭模型建造成功后,制备兔左室楔形心肌块灌注模型,采用浮置玻璃微电极法同步记录左室楔形心肌块心内膜、心外膜心肌细胞跨膜动作电位和跨室壁心电图。假手术组和心衰组灌注正常蒂罗德液,ATX-Ⅱ组在灌注正常蒂罗德液的基础上加灌10nmol/L的ATX-Ⅱ,雷诺嗪组在灌注正常蒂罗德液的基础上加灌20μmol/L的雷诺嗪。同时记录各组室性心律失常的诱发率。结果心衰组兔室性心律失常的发生率显著高于假手术组(60%vs.0%);INa-L增强剂ATX-Ⅱ进一步增加了心力衰竭兔室性心律失常的发生率(100%vs.60%);INa-L阻断剂雷诺嗪可显著减少心衰兔室性心律失常的发生率(10%vs.60%)。结论 INa-L在兔心力衰竭室性心律失常的发生中起着重要作用,阻断INa-L可减少心衰时心律失常的发生。

稳心颗粒甘松提取物对大鼠心室肌细胞钠电流和瞬时外向钾电流激活动力学的影响

目的研究步长稳心颗粒中甘松提取物对大鼠心室肌细胞钠电流(INa)、瞬时外向钾电流(Ito)激活动力学的影响。方法采用全细胞膜片钳技术,研究10 g/L甘松提取物对急性分离的成年大鼠心室肌细胞INa、Ito激活动力学的影响。结果①10 g/L甘松提取物使大鼠心室肌细胞INa峰值(INa,max)从-58.96±2.71 pA/pF降至-31.66±1.29 pA/pF(n=5,P<0.01);②10 g/L甘松提取物使Ito峰值(Ito,max)由3.40±1.52 pA/pF降到1.43±0.64 pA/pF(n=7,P<0.05)。10 g/L甘松提取物对INa和Ito的抑制率分别达38.2%和57.9%。结论10 g/L甘松提取物对大鼠心室肌细胞INa、Ito具有显著抑制作用。

普罗帕酮对兔心室肌细胞动作电位的影响及对快钠电流的使用依赖性阻滞作用

目的:探讨普罗帕酮对兔心室肌细胞动作电位(AP)的影响及对快钠电流的张力性阻滞和使用依赖性阻滞作用。方法:选取10只成年新西兰大白兔,急性分离兔心脏,应用消化酶消化分离获得单个心室肌细胞(n=10),采用微电极技术记录AP的最大舒张期电位、0相最大上升速率(Vmax)、AP振幅,以及复极化20%、50%和90%时的动作电位时程(依次简写为APD20、APD50和APD90)。应用全细胞膜片钳技术检测兔心室肌细胞快钠电流的I-V曲线及不同频率下的峰值电流,并用10μmol/L普罗帕酮溶液灌流干预,最后进行统计分析。结果:与普罗帕酮灌流前相比,普罗帕酮灌流后,兔心室肌细胞最大舒张电位无明显变化[(-80±6)mV vs(-82±5)mV,P>0.05],AP振幅显著降低[(95±12)m V vs(125±10)m V,P<0.05],Vmax明显减慢[(330±43)V/s vs(420±54)V/s,P<0.05)],APD20[(8±2)ms vs(6±2)ms,P>0.05]、APD50[(16±3)ms vs(12±3)ms,P>0.05]和APD90[(86±14)ms vs(85±12)ms,P>0.05]无显著变化。普罗帕酮干预后,快钠电流的I-V曲线较干预前明显上移,峰值电流下降[(3 001±383)pA vs(4 193±378)pA,P<0.05]。分别予0.06、1、2、5、10 Hz频率刺激,普罗帕酮干预前快钠电流均未显示出使用依赖性阻滞作用,第10个刺激与第1个刺激诱发的快钠电流之间的差异无统计学意义(P>0.05)。普罗帕酮干预后,在2、5、10 Hz频率刺激下,阻滞率分别为(22±11)%、(38±14)%和(52±17)%,与普罗帕酮灌流前及普罗帕酮在0.06 Hz和1 Hz刺激时的阻滞率间的差异有显著统计学意义(P<0.05),三组间两两比较差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论:普罗帕酮减慢AP的Vmax,降低AP振幅,对APD无显著影响。普罗帕酮对快钠电流不但有张力性阻滞作用,更有显著的使用依赖性阻滞作用,这样不但减轻了对QT间期的影响,也可减少心动过缓的发生。

一氧化氮增加常氧和缺氧豚鼠心室肌细胞持续性钠电流

运用全细胞膜片钳记录缺氧条件下豚鼠心室肌持续性钠电流(INa.P)的变化及施加药物对其的影响,以探讨 INa.P 的本质及缺氧增大 INa.P 的机制。结果显示:(1)在常氧条件下,一氧化氮(NO)前体 L- 精氨酸(L-Arg)和供体硝普钠(SNP)浓度依赖性地增大INa.P; (2)INa.P 随缺氧时间延长而增大, 缺氧15 min 后施加 NO 合酶(NOS)抑制剂L- 硝基精氨酸甲酯(L-NAME), 不能使增大的INa.P 明显回复[(1.344 ±0.320) vs (1.301 ±0.317) pA/pF, P>0.05, n=5]; (3)缺氧时含L-NAME 的灌流液可使INa.P 明显减小,与单纯缺氧相比有显著差异[(0.914 ± 0.263), n=5 vs (1.344 ± 0.320) pA/pF, n=6, P<0.05], 但仍比常氧条件下增大[(0.914 ±0.263) vs (0.497 ±0.149) pA/pF, P<0.05, n=5]; (4)还原剂1,4-二硫代苏糖醇(DTT)不但可使L-Arg 及缺氧后施加SNP 增大的 INa.P 回复[(1.449 ± 0.522) vs (0.414 ± 0.067) pA/pF, P<0.01, n = 6 和(0.436 ± 0.141) vs (1.786 ± 0.636) pA/pF,P<0.01, n=5],而且使正常的 INa.P 减小[(0.396 ± 0.057) pA/pF vs (0.442 ± 0.056) pA/pF, P<0.01, n=6]。本实验结果表明缺氧可增大心室肌细胞的INa.P, 其作用机制可能是缺氧时心肌产生的NO 通过氧化细胞膜上钠通道蛋白所致,正常INa.P 的产生?

4-氨基吡啶对豚鼠心室肌钙和钠电流的影响

目的 研究 4 氨基吡啶 ( 4 AP)对心肌细胞L型钙通道和钠通道的影响。方法 用全细胞膜片钳技术考察 4 AP对豚鼠心室肌细胞L型钙电流和钠电流的作用。结果 4 AP 0 1,0 5 ,1 0mmol·L-1浓度依赖性地抑制L型钙电流 (ICa,L)和钠电流 (INa) ,抑制率分别为 ( 11 6± 1 7) % ,( 37 5± 8 3) %和 ( 5 4 5± 6 9) %以及 ( 2 2 1±14 3) % ,( 39 4± 8 8) %和 ( 6 2 3± 6 8) %。 0 5mmol·L-14 AP使ICa ,L和INaI -V曲线均上移。结论 4

长期应用咪达普利对陈旧性心肌梗死代偿区不应期和钠电流的影响

目的探讨咪达普利(IMI)对家兔陈旧性心梗(HMI)后心脏有效不应期(ERP)及钠电流(I_(Na))的影响。方法选家兔制 HMI 模型,口服 IMI 0.625mg·kg^(-1)·d^(-1)(8周)。记录整体心脏 ERP 和单细胞 I_(NA)。结果 HMI 组ERP 显著延长,用 IMI 后则缩短。HMI 组代偿区细胞 I_(Na)降低,I_(Na)稳态失活曲线负移,恢复时间常数延长;应用 IMI,I_(Na)明显恢复。结论咪达普利可抑制 HMI 心脏 ERP 延长,并使降 I_(Na)得以恢复。这可能是该药减少陈旧性心梗后心律失常发生的机制之一。

伽玛刀对大鼠皮层神经元钠电流的影响

目的观察伽玛刀对体外培养大鼠皮层神经元电压依赖性钠电流的影响。方法将原代培养的神经元随机分为实验组和对照组，通过立体定向技术和18mm准直器对实验组原代培养大鼠皮层神经元实施伽玛刀照射，中心剂量30Gy。伽玛刀照射后1、3、7、10d通过膜片钳技术在全细胞模式下记录实验组和对照组皮层神经元的电压依赖性钠电流，每组每时间点记录6～8个神经元。结果实验组皮层神经元在伽玛刀照射后1、3、7、10d时的电压依赖性钠电流峰值密度（pA／pF）分别为（89．94±4．65）、（84．13±4．56）、（80．27±5．18）和（80．80±5．41），与对照组神经元电压依赖性钠电流峰值密度[照射后1、3、7、10d分别为（100．93±4．63）、（97．89±4．77）、（100．76±5．90）和（102．84±4．08）]相比，均显著减小（P〈0．05），且减小程度随观察时间延长而增加，呈一定时间依赖性。另外，实验组神经元电压依赖性钠电流的I—V曲线明显上移，下降支明显右移。结论伽玛刀照射通过抑制电压依赖性钠离子通道的功能引起大鼠皮层神经元兴奋性下降，可能是伽玛刀照射抑制癫痫发作的分子机制之一。

晚钠电流——中医药干预心衰心律失常的新靶点

心律失常是心力衰竭患者主要的死亡原因之一。晚钠电流在慢性心力衰竭患者心肌中异常增高并参与恶性心律失常的发生。现代医学对心衰心律失常的治疗虽然取得了很大的进步,但与此同时也存在着难以克服的使用局限性和患者难以耐受的不良反应。研究表明,中医药可综合干预心脏功能和电生理,发挥抗心律失常作用且安全性较高。一些临床用于治疗心律失常的中药及单体已被证实具有抑制晚钠电流的作用,晚钠电流可成为未来研究中医药干预心衰心律失常的新靶点之一。

妥泰对急性分离的大鼠海马神经元钠电流的影响

目的 在离子通道水平探讨妥泰 (Topiramax ,TPM)对大鼠海马神经元细胞的钠通道的作用。 方法 采用 7～ 10d的大鼠 ,以链霉素蛋白酶E加吸管吹打法制备海马神经元 ;利用全细胞膜片钳技术 ,观察TPM对急性分离大鼠海马神经元电压依赖性钠通道的作用。结果 TPM使这种河豚毒素 (Tetrodotoxin ,TTX)敏感的内向电流幅值减小 (n =2 7) ,这种作用具有浓度依赖性 ,它还可以使钠电流的稳态失活曲线负向漂移 (n =5 )。

硫酸镁对大鼠海马CA_1区神经元钠电流的抑制作用

利用全细胞膜片钳技术研究了硫酸镁 (MgSO4 )对大鼠海马CA1区神经元钠电流的影响。结果表明 ,MgSO4 可浓度依赖和电压依赖地抑制钠电流 ,半数抑制浓度为 4 0 5mmol/L。这一抑制作用与刺激频率无关。结果还表明 ,4mmol/LMgSO4 不影响钠电流的失活过程 ,却使半数激活电压由 - 5 5 8± 6 8mV变为 - 3 4 2± 6 2mV (n =8,P <0 0 1) ,而激活曲线的斜率因子不变。结果提示 ,MgSO4

缺血再灌注处理对乳鼠心肌细胞钠电流的影响

目的研究缺血再灌注(I/R)处理对乳鼠心肌细胞钠电流的影响。方法实验分为两组:对照组为体外培养乳鼠心室肌细胞;I/R组为相同的细胞,缺血3 h,再灌注1 h,采用膜片钳全细胞模式记录仪分别记录并比较对照组和I/R组的钠电流。结果和对照组相比,I/R组在每一指令电压上都增大钠电流;在测试电压为-20 mV的条件下,钠电流峰值电流密度从(-159.74±63.80)pA/pF增至(-397.25±82.99)pA/pF(n=7,P(0.05);通道稳态激活V1/2分别为(-58.77±3.83)mV和(-51.51±5.34)mV(n=5,P(0.05);稳态失活V1/2分别为(-58.77±3.83)mV和(-51.51±5.34)mV(n=5,P(0.05);通道失活后恢复τ分别为(8.57±1.50)ms和(6.30±0.57)ms(n=5,P(0.05)。结论 I/R处理可以增大钠电流的峰值电流,并使电压电流曲线下移;减慢通道的时间依赖性激活,促进通道的电压依赖性失活,失活后恢复变快。钠通道的这些改变可能是引起心肌细胞缺血再灌注损伤的重要原因。

硫酸镁抗实验性心律失常及其对钠电流的影响

观察硫酸镁对抗乌头碱诱发的大鼠心律失常,及其对大鼠心室肌细胞钠通道电流(INa)的影响,探讨硫酸镁抗心律失常的部分离子通道机理。应用乌头碱诱发的大鼠心律失常模型,计算对照组及硫酸镁组诱发大鼠出现室性早搏、室性心动过速/心室颤动及心脏停搏所用乌头碱的量;应用膜片钳全细胞记录技术,观察乌头碱、硫酸镁对大鼠心室肌细胞INa的影响。结果:诱发大鼠出现室性早搏、室性心动过速/心室颤动及心脏停搏时,硫酸镁组所用乌头碱的量均分别显著高于对照组(31.23±6.95μgvs24.67±5.25μg;45.00±7.93μgvs28.15±6.26μg;82.73±10.31μgvs75.47±11.26μg)。利用膜片钳技术观察到对照组、乌头碱组及硫酸镁组INa密度分别为:90.57±11.25pA/pF,98.31±26.63pA/pF,73.10±14.25pA/pF,3组数据,两两比较,差异均有显著性,P均<0.05。乌头碱组及硫酸镁组INa的IV曲线分别向下方及上方移位。结论:硫酸镁能够对抗乌头碱诱发的大鼠心律失常,其机理之一与它能够阻断I有关。

白藜芦醇对豚鼠心室肌细胞钠电流的影响

目的研究白藜芦醇(resveratrol,RES)对豚鼠心室肌细胞钠电流(INa)的影响,探讨其心肌保护机制。方法用全细胞膜片钳技术记录RES对单个心室肌细胞INa的作用。结果RES(10,30,100μmol.L-1)浓度依赖性的抑制豚鼠心室肌细胞INa,其中30μmol.L-1对INa的抑制率为(17.3±3.1)%(P<0.005),100μmol.L-1抑制率(52.7±10.2)%(P<0.01),抑制作用迅速,用药后3 min左右即开始起效,洗脱后均可以完全恢复;100μmol.L-1使半数最大失活电压(V1/2)由(-89.3±2.0)mV变化到(-100.7±3.3)mV(P<0.005),RES未改变S和半数最大激活电压(V1/2)。结论RES浓度依赖性的抑制INa,作用出现快,并且可逆。

焦亚硫酸钠对大鼠海马CA1区神经元钠电流的影响

目的:探讨SO2及其体内衍生物(亚硫酸盐和亚硫酸氢盐)对中枢神经元钠通道的影响。方法:采用全细胞膜片钳技术研究了焦亚硫酸钠(SMB)对大鼠海马CA1区神经元钠电流的影响及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)相应的保护作用。结果:①焦亚硫酸钠可剂量依赖性地增大全细胞钠电流,剂量为2μmol/L和20μmol/L时,钠电流分别增大(22.36±3.28)%和(65.05±5.75)%(n=10)。②10μmol/L的焦亚硫酸钠不影响钠电流的激活过程,却非常显著地影响其失活过程,使失活曲线显著右移,作用前后的半数失活电压分别为(-82.38±0.54)mV和(-69.39±0.41)mV(n=10,P<0.01),但失活曲线的斜率因子未见改变。③SOD(1×106U/L)、CAT(2×106U/L)及GPx(1×104U/L)均可使SMB(10μmol/L)增大的钠电流部分恢复。结论:SMB增大钠电流并抑制其失活过程,从而影响神经细胞的兴奋性,这一效应可能与硫中心或氧中心自由基的损伤作用有关。

肾上腺素对布比卡因抑制大鼠心室肌细胞钠电流的影响

目的:研究肾上腺素对较低浓度布比卡因所抑制的大鼠心室肌细胞钠电流(I_(Na))的影响。方法:采用急性酶解分离法获得Sprague-Dawley雄性大鼠心室肌细胞,随机分为2组(n=5),以全细胞膜片钳技术记录I_(Na),观察0.15μg/m L肾上腺素对40μmol/L布比卡因和50μmol/L布比卡因所抑制的INa的影响。结果:40μmol/L和50μmol/L布比卡因对大鼠心室肌细胞I_(Na)抑制率分别为(50.2%±5.8%)和(62.7%±7.7%),差异有统计学意义(P<0.05)。当加入0.15μg/m L肾上腺素后,40μmol/L布比卡因组抑制率变到(33.7%±10.2%),差异有统计学意义(P<0.05);50μmol/L布比卡因组抑制率变为(62.1%±7.3%),差异无统计学意义(P>0.05),肾上腺素对I-V曲线无明显影响。结论:肾上腺素可以部分恢复较低浓度布比卡因所抑制的心室肌细胞I_(Na),但其作用在较高浓度布比卡因中受到限制。

拉莫三嗪对大鼠急性分离海马神经元钠电流的影响

目的探讨拉莫三嗪对酶机械联合急性分离的大鼠海马神经元细胞的钠通道的作用。方法采用7～10 d大鼠,以链丝菌蛋白酶E加吸管吹打法制备海马神经元,应用全细胞膜片钳技术,观察拉莫三嗪对急性分离大鼠海马神经元电压依赖性钠通道的作用。结果拉莫三嗪使电压依赖性钠电流幅值减小,100μmol.L-1拉莫三嗪使钠电流幅值减少(15.35±3.01)%,这种作用具有浓度依赖性;使钠电流的激活曲线向去极化方向漂移(3.8±0.9)mV,稳态失活曲线超极化方向漂移(1.8±0.9)mV。结论拉莫三嗪对电压依赖性钠离子通道有阻断作用。

黄芪总黄酮对柯萨奇B3病毒感染心肌细胞钠电流的作用

目的探讨黄芪总黄酮（TFA）对嗜心性柯萨奇B3病毒（CVB3m）感染心肌细胞钠电流的作用。方法采用体外培养小鼠新生心肌细胞方法，建立柯萨奇B3病毒感染心肌细胞模型，采用全细胞膜片钳记录技术记录心室肌细胞钠电流（INa）。结果应用黄芪总黄酮（TFA）组与柯萨奇B3病毒感染模型组相比较，INa峰值从（-7．79±1．53）nA下降到（-5．64±1．67）nA，差异有统计学意义（P〈0．01，n=6）。结论黄芪总黄酮可显著降低柯萨奇B3病毒感染心肌细胞钠电流的幅值。