甲状腺乳头状癌钠碘同向转运体基因启动子区域CpG岛异常甲基化状态检测及其意义

目的 通过检测甲状腺乳头状癌中钠碘同向转运体(NIS)基因的启动子区域甲基化状态及其与各项临床指标之间的关系,探讨NIS基因甲基化在甲状腺乳头状癌发病过程中的地位、作用和相关机制.方法 取2007年5～7月手术切除的甲状腺乳头状癌及正常组织标本各11份,液氮保存.针对NIS-L区域设计新的甲基化特异PCR(MSP)引物,对所有亚硫酸氢钠修饰后的甲状腺癌及对照组织标本DNA进行MSP检测,比较肿瘤和对照甲状腺组织的NIS-L甲基化状态,分析其与有关临床指标之间的相关性.结果 实验发现11例甲状腺癌中NIS-L区域CpG岛甲基化率达81.8%(9/11),与肿瘤直径存在相关性,与年龄、性别、AJCC分期、淋巴结转移情况、多灶性等临床指标无相关性;相应对照组织中NIS-L甲基化率为36.4%(4/11),与所有临床指标无相关性.结论 甲状腺乳头状癌组织中NIS-L区域CpG岛甲基化率异常增高,且与肿瘤直径存在相关性.NIS-L与其它NIS表达调控因素的关系有待进一步研究.

钠碘同向转运体上游增强子序列的特异性结合蛋白文库的构建及初步筛选

目的:构建酵母单杂交文库,筛选出与钠碘同向转运体上游增强子(NUE)特异性结合的蛋白质分子,进一步研究其与NUE相互作用的分子机制。方法:应用酵母单杂交系统,以NUE为酵母单杂交的"诱饵",对甲状腺癌K1细胞的c DNA文库进行初步筛选,采用DNA测序技术及生物信息学技术对筛选的克隆进行进一步功能分析。结果:对文库中的阳性克隆测序,获得53条可读序列,Blast X比对分析及基因功能注释发现其中11条具有DNA结合功能,包括Rho GTP酶激活蛋白35(ARHGAP35)、锌指蛋白394(ZNF394)、上游刺激因子2(USF2)、SOX9等。结论:应用酵母单杂交技术初步筛选出与甲状腺癌K1细胞NUE相互作用的候选蛋白,并对这些蛋白质进行了初步的功能分析。

人钠碘同向转运体(NIS)在肿瘤治疗中的研究进展

钠碘同向转运体(Sodium Iodide Symporter,NIS)是一种内源性细胞膜蛋白质,它可以间接激活甲状腺和少数几个非甲状腺腺体(如有泌乳功能的乳腺)对碘的摄取过程。利用其分子克隆的特征,可以研究其在甲状腺病理和生理中的重要作用。类似的,超过80%的乳腺癌病人体内都表达NIS,阐明其根本机制可能将促使此类疾病在病理生理学和临床治疗方面有重大进展。在将来,可能通过两种方法达到利用131I治疗甲状腺癌及非甲状腺肿瘤的目的:一种是基于重新诱导内源性NIS基因在乳腺癌和甲状腺癌中的表达,利用肿瘤转移和去分化的机制对肿瘤进行治疗;另一种是采用NIS的新型细胞减少性的基因治疗战略。NIS基因具有独一无二的优势,即,它可以同时作为受体和治疗基因在体内发挥作用,因此,利用NIS基因转染技术,有望将131I治疗应用于其他肿瘤,并在治疗的同时对肿瘤进行显像和监视。

小鼠原代哺乳期乳腺细胞中TSH对钠碘同向转运体的调节作用

目的:探讨原代哺乳期乳腺细胞中促甲状腺激素(TSH)对钠碘同向转运体(sodium iodide symporter,NIS)的调节作用。方法:在不同浓度TSH 作用下培养小鼠原代哺乳期乳腺细胞,采用实时荧光定量PCR 和Western blot 法检测NIS mRNA和蛋白的表达;Western blot法检测沉默细胞的促甲状腺激素受体(TSHR)后NIS蛋白的表达以及抑制细胞的蛋白激酶A(PKA)后NIS蛋白的表达。结果:小鼠原代哺乳期乳腺细胞TSH高剂量组NIS mRNA表达量最高(P<0.05),NIS蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);沉默TSHR后各组NIS蛋白表达之间差异无统计学意义(P>0.05);PKA抑制组NIS蛋白表达低于TSH组和空白组(P<0.05)。结论:高浓度TSH对小鼠哺乳期乳腺细胞NIS表达具有一定调节作用;PKA可上调NIS的表达。

BRAF基因突变及其对分化型甲状腺癌钠碘同向转运体功能影响的研究进展

目的:总结分化型甲状腺癌中鼠类肉瘤滤过性毒菌(V-raf)致癌同源体B1(BRAF)基因突变与钠碘同向转运体(NIS)国内外研究进展,阐述BRAF和NIS基因结构表达与调控及BRAF基因突变对NIS功能的影响。方法:应用PubMed、Sciencedirect和万方检索系统,以"分化型甲状腺癌、钠碘同向转运体、BRAF、131I"为关键词,检索1998-2010年相关文献95篇。纳入标准:1)NIS结构与功能;2)NIS与分化型甲状腺癌的关系;3)BRAF结构与功能;4)BRAF突变与分化型甲状腺癌的关系;5)BRAF突变与NIS表达在分化型甲状腺癌中的关系。根据纳入标准分析文献23篇。结果:甲状腺癌131I治疗通过NIS介导。NIS的表达可以预测复发DTC131I的聚集和131I疗效评价。BRAF突变在PTC中可作为不良影响因子,影响PTC的发生、侵袭及预后。BRAF基因突变能引起NIS表达下降(20%～80%),病灶摄碘能力降低。NIS的表达水平在含有BRAF V600E突变的PTC中明显降低。结论:BRAF基因突变能引起NIS表达下降,降低病灶碘治疗疗效。因此,BRAF基因突变有望成为预测甲状腺癌放射性碘治疗疗效的指标。

钠碘同向转运体基因介导放射性碘治疗肿瘤的研究进展

钠碘同向转运体（NIS）作为一种细胞膜蛋白，主要存在于甲状腺滤泡细胞基底膜并介导细胞的碘转运，在甲状腺癌及非甲状腺癌的放射性碘治疗研究中备受关注。部分甲状腺癌的NIS表达水平降低或者膜蛋白定位不好，通过导入NIS基因进行膜表达，介导核素滞留于细胞内，是肿瘤治疗的新途径。但目前主要存在核素在细胞内滞留时间短而影响疗效的问题。对此，在导入NIS基因后，可通过各种方法刺激肿瘤细胞增加NIS的功能性表达而增加核素的摄取，也可通过减少核素的流出来提高其滞留，扩展NIS基因治疗的应用范围，优化肿瘤治疗。该文主要综述了NIS基因介导的肿瘤治疗研究进展。

钠碘同向转运体在分化型甲状腺癌中异常表达的研究进展

放射性核素碘内照射(131I治疗)是分化型甲状腺癌的重要治疗方式,钠碘同向转运体在131I的跨膜转运中起关键作用。而钠碘同向转运体在肿瘤细胞内均有不同程度的表达异常,这与驱动变异密切相关。全文就钠碘同向转运体的分子特征、调节机制及与BRAF突变、PI3K/AKT1通路变异、RAS突变和PTEN突变之间的关系和研究进展作一综述,并总结药物靶点设计与用药方案,为下一步研究提供新的思路。

人端粒酶反转录酶启动子调控人钠碘同向转运体基因肿瘤靶向治疗的实验研究

目的:探讨肿瘤特异性人端粒酶反转录酶(hTERT)启动子调控的人钠碘同向转运体(hNIS)的特异性抗肿瘤作用。方法:将质粒pcDNA3.1-CMV-hNIS中的hNIS cDNA亚克隆至含hTERT核心启动子的质粒载体pGL3-hTERT-luc中,以构建质粒pGL3-hTERT-hNIS,并以质粒pGL3-hTERT-luc及pcDNA3.1-CMV-hNIS分别作为阴性对照及阳性对照,然后采用脂质体将其转染至人胚肺成纤维细胞MRC-5及肿瘤细胞HeLa、A549和U87中,采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测hNIS mRNA水平;免疫细胞化学法及流式细胞术(FCM)检测hNIS蛋白的表达情况;摄碘实验验证hNIS蛋白的功能;同时采用MTT观察131I的细胞杀伤作用。结果:成功构建质粒pGL3-hTERT-hNIS,转染4种细胞后,3种肿瘤细胞的hNIS mRNA水平明显高于MRC-5细胞(P<0.05)。3种肿瘤细胞均可表达hNIS蛋白,而MRC-5细胞不表达。与Na125I孵育30 min时HeLa、A549和U87细胞的摄碘量分别是阴性对照组的25倍、20倍和18倍。131I照射7 h后,3种肿瘤细胞的相对存活率显著下降(P<0.05)。结论:hTERT启动子调控hNIS基因在肿瘤细胞中特异性表达,这些细胞可特异性摄碘并被其有效杀伤,为行进一步体内实验奠定基础。

碘钠同向转运体在新疆维吾尔族甲状腺乳头状癌中的表达及其临床意义

目的研究钠碘同向转运体(NIS)在新疆维吾尔族甲状腺乳头状癌组织标本及转移淋巴结组织中的表达及其临床意义。方法选取手术切除后经临床病理证实的新疆维吾尔族甲状腺乳头状癌存档标本72例,采用免疫组织化学检测NIS在甲状腺癌组织、癌旁组织以及转移淋巴结组织中的表达,分析NIS在甲状腺癌组织中的分布特点及其与临床病理各参数间的相互关系。结果 (1)甲状腺乳头状癌组织中NIS表达阳性率为80.56%,在癌旁正常甲状腺组织中的NIS阳性表达率为30.56%,差异有统计学意义(P<0.05);(2)Ⅰ、Ⅱ期甲状腺癌组织中NIS表达阳性率为87.88%,Ⅲ、Ⅳ期甲状腺癌组织中NIS表达阳性率为74.36%,随着临床分期的递增,甲状腺癌组织中NIS表达阳性率出现降低趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);(3)在有淋巴结转移和无淋巴结转移的甲状腺乳头状癌患者中NIS表达阳性率分别为68.97%和42.86%,差异有统计学意义(P<0.05);(4)在肿瘤直径≤2cm和>2cm的甲状腺乳头状癌组织中NIS表达阳性率分别为93.02%和62.07%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论新疆维吾尔族甲状腺乳头状癌组织中NIS的表达随着临床分期增加而逐渐降低,在有淋巴结转移患者中NIS的表达显著增加,同时随着瘤体体积的增大NIS的表达显著下降。

高碘摄入对SD大鼠钠/碘同向转运体蛋白表达影响的免疫组化研究

目的:动态观察长期高碘摄入对SD大鼠甲状腺细胞钠/碘同向转运体(NIS)蛋白表达的影响。方法:SD大鼠分别饲以去离子水及不同碘浓度的碘化钾水,给碘后1 d及1,2,4,8周处死。测定尿碘、组织碘含量,免疫组织化学方法观察甲状腺细胞NIS蛋白表达水平。结果:高碘摄入可引起甲状腺滤泡细胞膜表面NIS蛋白表达的下降。短期较低浓度的高碘摄入对NIS蛋白的表达无明显影响,而较高浓度的碘摄入则引起NIS蛋白表达的明显减少;长期高碘摄入对NIS蛋白表达的抑制作用,可在机体自我调节机制作用下得以部分恢复,但NIS蛋白表达仍处较低水平。结论:高碘摄入可导致甲状腺细胞表面NIS蛋白表达下降,随摄碘浓度的增加抑制作用增强;不同浓度的碘摄入对NIS蛋白表达的抑制作用表达时间不同。

自身免疫性甲状腺疾病钠/碘同向转运体的相关性研究

目的研究不同自身免疫性甲状腺疾病(AITD)钠/碘同向转运体抗体(NISAb)与甲状腺球蛋白抗体(Tg Ab),甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)含量之间的相关性,并观察甲亢患者药物治疗前后NISAb含量的变化。方法选择甲亢(GD)患者,桥本甲状腺功能低下者(HT),健康正常人组(NC)各40例,检测NISAb、Tg Ab、TPOAb含量,比较NISAb含量与Tg Ab、TPOAb含量之间的相关性,并分析20例甲亢患者药物治疗前后NISAb含量的差异。结果 (1)甲亢患者NISAb与Tg Ab、TPOAb含量,相关系数R分别为0.90、0.85,P均<0.05,呈直线相关性,GD患者NISAb与Tg Ab,TPOAb呈正相关,HT患者NISAb与Tg Ab、TPOAb含量,相关系数r分别为-0.64、-0.52,P均<0.05,呈线性负相关性。正常人群NISAb,Tg Ab,TPOAb含量之间,相关性分析,P值分别为0.63、0.22,P均>0.05,无线性相关性。(2)甲亢患者NISAb含量与正常人群对比分析,t检验,P<0.05,NISAb含量高于正常人群。HT患者NISAb含量与正常人群对比分析,t检验,P<0.05,NISAb含量低于正常人群。(3)甲亢患者治疗前后NISAb含量对比分析,t检验,P<0.05差异有统计学意义。结论 (1)GD和HT患者血浆NISAb含量与Tg Ab,TPOAb含量之间具有相关性,GD患者血浆NISAb含量与Tg Ab,TPOAb含量之间呈正相关,HT患者血浆NISAb含量与Tg Ab,TPOAb含量之间呈负相关。(2)GD患者血浆NISAb含量高于健康人群,HT患者NISAb含量低于健康人群。(3)GD患者治疗后NISAb含量明显降低,差异明显。

钠/碘同向转运体基因获取及其克隆与测序

目的 :获取、构建并鉴定携带人钠 /碘同向转运体 (NIS)基因的pGEMTeasy质粒载体。方法 :利用逆转录和聚合酶链反应 (RT-PCR)获取Graves甲亢病人甲状腺NIS基因可编码区片段 ,与pGEMTeasy质粒载体连接、经转化、蓝白斑筛选、酶切鉴定 ,获得pGEMTeasy -NIS重组质粒 ,进行序列测定鉴定。结果 :所构建的pGEMTeasy -NIS重组质粒中NIS与文献报告序列 99%同源性。结论 :成功构建pGEMTeasy -NIS重组质粒。

钠/碘同向转运体在人不同组织学分型胃癌中的表达

目的研究钠/碘同向转运体(sodium-iodide symporter,NIS)在人不同组织学分型胃癌组织中的表达,分析NIS表达与胃癌组织学分型的关系。方法选取于中国医科大学附属第一医院肿瘤外科行手术治疗的180例患者的胃癌组织为研究对象。依据胃癌的组织学分型分为6组,其中乳头状腺癌30例,管状腺癌30例,低分化腺癌30例,黏液腺癌30例,印戒细胞癌30例,未分化癌30例。选取上述180例患者的癌旁组织及30例慢性胃炎患者的胃组织作为对照。采取免疫组织化学SP法对上述组织的石蜡切片进行染色。结果在人胃癌组织、人胃癌旁组织及人慢性胃炎组织中,NIS阳性细胞率分别为10.6%(19/180)、28.3%(51/180)和90%(27/30)。人胃癌组织与人胃癌旁组织相比(P<0.01)、人胃癌组织与人慢性胃炎组织相比(P<0.01)、人胃癌旁组织与人慢性胃炎组织相比(P<0.01),NIS阳性细胞率均具有显著统计学差异。在人乳头状腺癌、管状腺癌、低分化腺癌、黏液腺癌、印戒细胞癌及未分化癌中,NIS阳性细胞率分别为30%(9/30)、10%(3/30)、13.3%(4/30)、6.7%(2/30)、3.3%(1/30)和0(0/30)。人乳头状腺癌与人黏液腺癌相比(P<0.05)、人乳头状腺癌与人印戒细胞癌相比(P<0.01)以及人乳头状腺癌与人未分化癌相比(P<0.01),NIS阳性细胞率均具有统计学差异。在人慢性胃炎组织及人胃癌旁组织中,NIS仅表达于胃黏膜细胞的细胞膜上,而在人胃癌组织中,NIS在癌细胞膜有表达,在细胞质也有较明显的表达。结论在人胃癌组织、癌旁组织、慢性胃炎组织中,NIS阳性细胞率依次增高。在本研究人各种组织学分型的胃癌中,随着胃癌恶性程度的增高,NIS表达呈现出减少的趋势。人胃癌组织NIS在癌细胞的细胞膜和细胞质均有表达,而人慢性胃炎组织和人胃癌旁组织NIS仅在胃黏膜细胞的细胞膜表达。

人钠/碘同向转运体基因转染肺癌A549细胞介导放射性碘摄取实验研究

目的:研究重组人钠/碘同向转运体基因(hNIS)腺病毒介导肺癌A549细胞的碘摄取、外流和杀伤情况,为放射性碘治疗肺癌提供理论和实验依据。方法:用重组hNIS腺病毒(AdNIS)感染肺癌A549细胞,检测感染细胞内hNIS蛋白的表达;在体外培养的条件下研究其125I的摄取、外流情况以及131I的杀伤情况。结果:hNIS蛋白在实验组肺癌A549细胞中表达阳性且主要分布于细胞膜上;实验组细胞摄碘能力较对照组高;细胞摄碘后碘外流过程十分迅速;实验组细胞可被131I有效杀伤。结论:应用腺病毒为载体,可以有效的将hNIS基因转染至体外培养的肺癌A549细胞中,并介导肺癌细胞对放射性碘的摄取及选择性杀伤作用。

钠/碘同向转运体在甲状腺癌^(131)I治疗中的应用

钠/碘同向转运体(Na+/I-symporter,NIS)是一种膜蛋白,介导甲状腺滤泡细胞的碘转运,在甲状腺癌的病理生理及131I治疗中起着重要的作用。多数研究表明,甲状腺癌的NISmRNA及蛋白表达水平降低;维甲酸、去甲基化及组蛋白脱乙酰酶抑制剂可刺激失分化甲状腺癌细胞的NIS表达,为甲状腺癌131I的有效治疗进行了有益的探索。NIS基因的克隆和其特性的揭示为甲状腺癌的靶向基因放射治疗提供了可能。

人钠/碘同向转运体基因cDNA的克隆与序列测定

为研究人钠/碘同向转运体(hNIS)的生物学性能和用于肿瘤放射性碘治疗的可能性,运用反转录聚合酶链反应 (RT-PCR)从人甲状腺组织总RNA中扩增出hNIS基因cDNA序列,将其克隆至pUCm-T载体中。序列分析证实克隆 片段与文献报道的hNIS基因cDNA序列完全一致,说明已成功克隆到hNIS基因cDNA。

钠/碘同向转运体与放射性碘治疗

钠 /碘同向转运体 (NIS)是一种调节甲状腺及其他组织碘转运活性的膜蛋白。NIS在甲状腺的病理生理中发挥着关键性作用 ,它实现了甲状腺组织摄取碘并进行甲状腺激素的生物合成 ,实现了甲状腺功能亢进和分化型甲状腺癌的显像诊断和放射性碘治疗。近年来 ,对 NIS的进一步分子学研究表明 。

钠/碘同向转运体

钠 /碘同向转运体是甲状腺滤泡细胞基底细胞膜上的糖蛋白 ,介导甲状腺对碘的主动运输。本文综述钠 /碘同向转运体在基因、蛋白质二级结构、电生理学特征、调控及组织分布等方面的进展 ,及其对甲状腺疾病和放射性碘治疗的意义。

钠/碘同向转运体的研究进展

甲状腺对I-的摄取是甲状腺激素合成的第一步 ,而调节这一过程的重要物质是位于甲状腺滤泡细胞基底膜上的钠 /碘同向转运体 (sodium/iodidesymporter,NIS)。NIS主要存在于甲状腺组织 ,其调节I-摄取要依赖Na+ 的存在 ,摄取过程可被SCN-、ClO4-等一价阴离子所抑制。人和大鼠NIS的基因都已经被克隆 ,对其基因表达调控的研究也逐渐兴起。促甲状腺激素 (TSH)对NIS的基因的表达及I-摄取具有很强的刺激作用。研究人员在一些自身免疫性甲状腺疾病患者的血清中发现了针对NIS的抗体 ,而且 ,认识到NIS的基因突变是先天性甲状腺功能低下的一个重要原因。此外 ,人们利用NIS的基因 。

人重组pcDNA3人钠/碘同向转运体核表达质粒的构建

目的:获取、构建并鉴定携带人钠/碘同向转运体(hNIS)基因的pcDNA3.0质粒载体。方法:利用逆转录和聚合酶链反应获取Graves甲亢患者甲状腺NIS基因可编码区片段。与pUCm-T质粒载体连接、经转化、蓝白斑筛选、酶切鉴定,序列测定鉴定,获得pUCm-T-重组质粒。pUCm-T-重组质粒亚克隆得到pcDNA3-hNIS重组质粒。结果:所构建的pcDNA3-hNIS重组质粒中的hNIS基因序列与文献报道序列一致。结论:成功构建pcDNA3-hNIS重组质粒。