钠离子牛磺胆酸共转运多肽缺陷病及其对母胎影响的研究进展

钠离子牛磺胆酸共转运多肽(sodium-taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)缺陷病是一种溶质载体家族10成员1(solute carrier family 10 member 1,SLC10A1)双等位基因突变引起的胆汁酸代谢障碍性疾病,分布具有区域和种族差异,其中SLC10A1 c.800C>T(p.Ser267Phe)是我国的高频突变。NTCP缺陷病患儿主要表现为病理性黄疸,少部分有生长、运动和神经系统发育迟缓的表现,成年患者临床症状和体征不明显,生化检查提示血清总胆汁酸水平升高、部分伴有转氨酶和25-羟维生素D3水平降低。NTCP缺陷病性高胆汁酸血症需与乙型肝炎病毒感染、丁型肝炎病毒感染、自身免疫性肝炎及妊娠期肝内胆汁淤积症等鉴别,妊娠合并NTCP缺陷病性高胆汁酸血症对母胎的影响迄今少有相关报道。综述NTCP缺陷病的分子遗传机制、临床表现、实验室检查、诊断、治疗及其对母胎的影响,为该病患者的明确诊断和正确干预提供依据。

新生儿钠牛磺胆酸共转运多肽缺陷病2例报道及文献回顾

钠牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)缺陷病是由于溶质转运蛋白家族10成员1(SLC10A1)基因突变引起的一种遗传性胆汁酸代谢病,为一种常染色体隐性遗传病,NTCP缺陷病患者体内血浆中结合胆汁盐进入肝细胞的主要转运体的功能受到影响[1-2]。主要临床表现为高胆汁酸、皮肤瘙痒和脂肪吸收不良,导致全面生长迟缓和脂溶性维生素缺乏等。目前,国内外相关文献报道并不多见,长期预后及临床表现不明确。湖北省天门市第一人民医院收治并确诊为NTCP缺陷病患儿2例,现将其临床资料报道如下,以提高临床医生对该病的认识。

2例钠牛磺胆酸共转运多肽缺陷病患儿临床分析

钠牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)缺陷病是近年来新发现的一种遗传性胆汁酸代谢障碍性疾病,本研究旨在提高对NTCP缺陷病的认识,选取华中科技大学附属湖北省妇幼保健院儿童内分泌遗传代谢科分别以生长发育落后及黄疸就诊的2例患儿,虽临床表现不同,但均发现有顽固性的高胆汁酸血症,并伴有25-羟维生素D下降,行基因分析发现SLC10A1突变,临床确诊为NTCP缺陷病,经积极对症治疗后临床症状缓解,预后较好。该研究提示,对于显著而持续性的高胆汁酸血症的新生儿及儿童患者,需考虑NTCP缺陷病可能。NTCP缺陷病患儿远期可能出现身材矮小等生长发育落后情况,生长激素或可改善NTCP缺陷病患者的终身高。

钠-牛磺胆酸共转运多肽缺陷患儿的肝功能及基因特点

目的探讨钠-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)缺陷病患儿的肝功能及基因特点。方法选取经基因测序确诊的NTCP缺陷病患儿(n=11)及其父母(n_(父)=11,n_(母)=11)为研究对象,收集NTCP缺陷病患儿的年龄、出生史、家族史及新生儿期黄疸等一般临床资料;抽取患儿入院治疗前空腹静脉血,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(IBIL)及胆汁酸(TBA);抽取患儿及父母外周血采用高通量测序法进行基因检测,对患儿突变基因与其父母基因进行Sanger验证,并运用Rare Exome Variant Ensemble Learner(REVEL)、Sortig Intolerant from Tolerant(SIFT)、PolyPhen-2、Mutationtation Taster、Genomic Evolutionary Rate Profiling(GERP^(+))综合性预测软件对突变位点进行危害预测;随访患儿1年,检测血清ALT、AST、TBA、TBIL、DBTL及IBIL等肝功能指标。结果11例NTCP缺陷病患儿,男6例(54.5%)、女5例(45.4%),确诊年龄40~221d、平均(99.82±69.63)d,血清ALT、AST、TBA、TBIL、DBIL及IBIL升高分别为8例(72.7%)、8例(72.7%)、11例(100%)、6例(54.5%)、7例(63.6%)及4例(36.4%);所有患儿均为SLC10A1基因(c.800C>T)纯合突变,父母为(c.800C>T)突变携带者,除检测到与疾病表型高度相关的SLC10A1基因突变外,还检测到与临床相关性不明确突变位点134个;治疗后患儿随访肝功能指标,除TBA外,其余指标下降良好,随着访时间延长TBA呈现下降趋势。结论NTCP缺陷病患儿肝功能异常以TBA增高为主要特征;SLC10A1基因突变是直接原因,已发现多个突变位点可致病,目前c.800C>T是热点突变,患者可呈杂合或纯合突变。

钠牛磺胆酸共转运多肽在肝胆疾病中的研究进展

钠牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)既是胆汁酸吸收入肝的重要转运体,又是HBV、HDV的功能性受体;其结构、功能、基因特点、表达调控机制等已得到广泛研究;且NTCP与慢性病毒性肝炎、非酒精性脂肪性肝病、肝纤维化、原发性胆汁性胆管炎、肝细胞癌相关,本文系统阐述了NTCP在各种肝胆疾病中的作用,为相关疾病的诊断及治疗提供新方向。

新生儿钠牛磺胆酸共转运多肽缺陷病合并先天性甲状腺功能减退症1例

钠牛磺胆酸共转运多肽(sodium taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)缺陷病是由于SLC10A1基因变异引起的一种遗传性胆汁酸代谢病。本文报道1例新生儿期起病的NTCP缺陷病合并先天性甲状腺功能减退症的患儿,提高临床医生的认识。

血清胆汁酸谱分析协助钠离子-牛磺胆酸共转运多肽缺陷病诊断和鉴别诊断

目的以钠离子-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)缺陷病为核心,探讨血清胆汁酸谱分析在协助该病诊断及其鉴别诊断中的价值。方法收集整理并分析2015年4月初至2021年12月底暨南大学附属第一医院儿科诊治的66例胆汁淤积性肝病(CLDs)患者的临床资料,包括NTCP缺陷病患者32例(成人16例,儿童16例)、希特林缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(NICCD)16例、Alagille综合征8例,胆道闭锁10例。同时设立成人和小儿健康对照组(各15例)。通过超高效液相色谱-串联质谱技术对研究对象血清胆汁酸成分进行定性定量分析,利用统计学SPSS 19.0及GraphPad Prism 5.0软件对数据进行作图和比较。用t检验、Wilcoxon秩和检验、Kruskal-Wallis H检验等统计学方法,比较NTCP缺陷病与相应健康对照组以及NTCP缺陷病与其他CLDs患儿的临床及胆汁酸谱之间的差异。结果与健康对照相比,NTCP缺陷病患者总结合型胆汁酸、总初级胆汁酸、总次级胆汁酸,以及甘氨胆酸、牛磺胆酸和甘氨鹅脱氧胆酸等水平均升高(P<0.05);与NTCP缺陷病成人患者相比,NTCP缺陷病患儿血清总结合型胆汁酸和总初级胆汁酸水平均明显升高(P<0.05);NTCP缺陷病患儿血清牛磺鹅脱氧胆酸、甘氨猪胆酸、牛磺猪胆酸和牛磺α鼠胆酸水平明显升高,但甘氨脱氧胆酸、甘氨石胆酸、石胆酸等胆汁酸降低(P<0.05);NTCP缺陷病患儿血清中石胆酸、脱氧胆酸和猪脱氧胆酸等次级胆汁酸水平明显高于NICCD、Alagille综合征和胆道闭锁等其他CLDs组(P<0.05);总初级胆汁酸/总次级胆汁酸、总结合型胆汁酸/总未结合型胆汁酸,以及牛磺胆酸、血清牛磺鹅脱氧胆酸和甘氨鹅脱氧胆酸等指标可有效鉴别NTCP缺陷病和其他非NTCP缺陷病CLDs患儿。结论证实血清胆汁酸谱分析对于协助NTCP缺陷病的诊断和鉴别诊断具有重要参考价值,深化了对NTCP缺陷病等CLDs患者血清胆汁酸谱变化特征的科学认识,为深入理解其发病机制提供了代谢组学依据,同时为后续深入研究提供了线索和思路。

钠离子-牛磺胆酸共转运多肽在人骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的表达及其对HBV体外感染BMSCs的影响

目的研究体外培养的人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)中钠离子-牛磺胆酸共转运多肽(sodium taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)的表达情况,探索体外培养的BMSCs能否自然感染乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)及NTCP是否是HBV感染BMSCs的一个功能性受体。方法将HBV阳性血清以不同方法感染BMSCs,检测培养基上清及细胞中HBV DNA、培养基上清中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)等感染指标。NTCP-siRNA转染BMSCs后,再次用HBV阳性血清感染BMSCs,检测各感染指标。Western blot法检测各处理组BMSCs中NTCP的表达情况。结果HBV可自然感染体外贴壁培养的人BMSCs,但感染效率很低。当HBV感染悬浮状态下的BMSCs时,感染效率显著升高。BMSCs中存在NTCP的表达,且HBV可显著上调NTCP的表达量,特别是对悬浮状态下的BMSCs。当BMSCs中NTCP的表达被NTCP-siRNA沉默后,HBV对BMSCs的感染效率显著下降。结论体外培养的人BMSCs可被HBV自然感染,且其细胞内表达的NTCP是其感染HBV的一个功能性受体。人BMSCs可作为一种易感、稳定、无需分子修饰的细胞模型,用于研究HBV生命周期的早期阶段以及抗病毒治疗研究。

微环载体结合水动力转染技术制备乙肝病毒受体小鼠模型

目的制备乙肝病毒受体钠离子/牛磺胆酸共转运多肽(Na+/taurocholate co-transporting polypeptide,NTCP)小鼠基因转染模型,为乙肝的防治研究提供动物模型。方法制备携带人NTCP真核表达框的亲本质粒ZY781-CMV-NTCP及微环DNA p MC-CMV-h NTCP,采用水动力转染技术将微环DNA p MC-CMV-h NTCP经尾静脉注入ICR小鼠体内,采用PCR和免疫组化方法检测NTCP基因在小鼠体内的表达情况。结果成功构建了携带人NTCP基因的微环载体。PCR检测表明人NTCP基因成功转入小鼠肝组织内,同时肝组织免疫组化检测表明h NTCP可以在小鼠的肝脏内表达。结论成功制备出乙肝病毒受体(NTCP)基因转染小鼠模型。

茵陈蒿汤防治大鼠非酒精性脂肪性肝病效果及其对肝组织NTCP表达的影响

目的观察茵陈蒿汤防治大鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的效果及其对肝组织钠离子牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)表达的影响,探讨茵陈蒿汤防治NAFLD的机制。方法将45只SD大鼠随机分为3组各15只,模型组、干预组每天给予高脂饲料灌胃进行NAFLD造模,同时干预组每天给予茵陈蒿汤10 m L/kg灌胃,对照组每天给予普通饲料喂养。12周后分批处死,取大鼠腹主动脉血及肝脏组织;生化分析仪检测丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、总胆汁酸(TBA)、甘油三酯(TG),HE染色观察肝组织病理变化; Real time PCR、Western blotting法分别检测肝脏组织中NTCP mRNA及蛋白表达。结果与对照组比较,模型组血清ALT、AST、TBA、TG水平均升高(P均<0. 05);干预组血清ALT、AST、TBA、TG水平均较模型组下降(P均<0. 05),而与对照组间差异无统计学意义(P均> 0. 05)。HE染色显示,模型组肝组织可见空泡样变性、炎性细胞浸润和棕黄色胆汁颗粒,而干预组较模型组肝组织脂肪变性、炎性细胞浸润均有一定程度缓解。与对照组比较,模型组肝组织中NTCP mRNA及蛋白表达水平均下调(P均<0. 05);干预组肝组织中NTCP mRNA及蛋白表达水平均较模型组上调(P均<0. 05),而与对照组间差异无统计学意义(P均> 0. 05)。结论茵陈蒿汤可能通过上调NTCP基因表达,减轻肝细胞内胆汁淤积,进而改善肝脏功能,减轻NAFLD大鼠肝脏病理损害。

表面等离子共振法测量乙肝病毒功能受体NTCP与配体相互作用

钠离子/牛磺胆酸共转运多肽(NTCP,SLC10A1)是乙型肝炎病毒(HBV)感染肝细胞的功能性受体,也是抗慢性乙肝感染药物的潜在靶标。目前评价NTCP与其配体相互作用的方法仍然有限。本文使用Sf9细胞表达并纯化了重组NTCP蛋白,通过抗体间接偶联的方法将其固定在表面等离子共振实验芯片上。通过动力学分析,拟合得出HBV PreS1多肽对NTCP结合的平衡解离常数K_(D)为4.93μmol/L;NTCP经典底物牛磺胆酸钠对NTCP的平衡解离常数K为25.3μmol/L。相对于化合物抑制NTCP底物转运的活性,通过SPR方法测得的平衡解离常数可比较化合物与NTCP直接相互作用力的强弱,并用于研发基于NTCP-PreS1相互作用的抗HBV药物。

HBV进入抑制剂研究近况与展望

钠离子牛磺胆酸共转运多肽(Na+-taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)是乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染的受体,此发现为抗HBV新药研发提供了新靶标。本文综合了近3年来对NTCP受体的研究,全面阐述了目前HBV治疗中的瓶颈、NTCP发现的意义及其表达调节,以及进入抑制剂的种类、作用机制和研究进展。进入抑制剂将成为抗HBV感染的新靶点,并有可能成为抗HBV感染的新的策略之一。

SLC10A1基因p.S267F位点单核苷酸多态性对慢性乙型肝炎患者肝功能的影响

目的探讨SLC10A1基因p.S267F位点单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)对慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者肝功能的影响。方法纳入初治CHB患者153例,其中p.S267F位点野生型(C/C)132例,突变型(C/T)21例。T检验比较p.S267F位点野生型与突变型CHB患者各项肝功能指标间的差异。结果 SLC10A1基因p.S267F位点突变型CHB患者的ALT、AST、TBIL和DBIL水平均显著低于野生型患者(P<0.05);两组患者ALP、GGT和TBA水平间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 SLC10A1基因p.S267F位点突变型CHB患者的肝功能损伤程度低于野生型CHB患者,SLC10A1基因p.S267F位点突变可能是CHB患者肝损加重的保护因素。

HBV研究模型新进展

慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是造成肝炎、肝硬化、肝癌的主要诱因之一,已成为全球性的公共健康问题。乙型肝炎疫苗的推广应用显著降低了HBV感染率,但现阶段慢性乙肝病毒感染仍然无法根治。HBV研究模型对推动HBV相关研究和临床治疗起到了重要的作用。然而,由于缺乏合适的研究模型,HBV生物学以及HBV与宿主之间相互作用等方面仍存在很多问题未明了,制约了抗HBV新药研发。近年来,HBV功能性受体钠离子-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)的发现以及干细胞技术的发展应用,极大推动了HBV研究模型的发展。本文分别从病毒来源、细胞和动物感染模型等角度对HBV研究模型领域的进展进行综述。

SLC10A1基因变异与HBV母婴传播易感性的相关性研究

目的：在群体水平探讨乙型肝炎病毒（ HBV）功能性受体SLC10A1基因c．800G＞A变异和c．356＋1098C＞T变异对HBV母婴传播易感性的影响。方法连续收集2011年5月至2015年7月西南医院感染科收治的未经核苷（酸）类药物干预的HBV e抗原（ HBeAg）阳性且HBV高病毒载量母亲所生子代306例，其中包括感染组247例（疫苗干预55例）和未感染组59例（疫苗干预56例）。采集两组人群的血液样本，提取基因组DNA，对c．800G＞A和c.356＋1098C＞T进行基因分型，并进行病例-对照关联研究分析。组间基因型比较采用卡方检验（ Pearson卡方或连续校正卡方）。结果在经疫苗干预的人群中，未感染组c.800G＞A GA基因型频率为14．3％（8／56），高于感染组GA基因型频率（5.5％，3／55），但差异无统计学意义（χ2＝2.424，P＝0.119）；感染组c.356＋1098C＞T位点CC、CT和TT基因型频率分别为20.0％（11／55）、47.3％（26／55）和32.7％（18／55），未感染组分别为12.5％（7／56）、69.6％（39／56）和17.9％（10／56），两组基因型分布差异无统计学意义（χ2＝5.766，P＝0.056）。在总人群中，未感染组c.800G＞A GA基因型频率为13.6％（8／59），高于感染组GA基因型频率（6.9％，17／247），但差异无统计学意义（χ2＝2.010，P＝0.156）；感染组c.356＋1098C＞T位点CC、CT和TT基因型频率分别为20.2％（50／247）、49.8％（123／247）和30.0％（74／247），未感染组为11.9％（7／59）、69.5％（41／59）和18.6％（11／59），两组基因型分布差异有统计学意义（χ2＝7.436，P＝0.024）。为进一步了解不同基因型人群对乙型肝炎疫苗的反应性，进一步将感染组分为疫苗干预组55例和无疫苗干预组192例。其中，疫苗干预组与无疫苗干预组c.800G＞A位点GA基因型频率分别为5.5％（3／55）和7.3％（14／192），两组比较差异无统计学意义（χ2＝0.030，P ＝0.863）；疫苗干预组c.356＋1098C＞T位点CC、CT和TT基因型频率分别为20.0％（11／55）、47.3％（26／55）和32.7％（18／55），无疫苗干预组为20.3％（39／192）、50.5％（97／192）和29.2％（56／192），两组比较差异亦无统计学意义（χ2＝0.274，P＝0.872）。结论 SLC10A1基因c．356＋1098C＞T突变可能与HBeAg阳性高病毒载量HBV母亲所生子代对HBV易感性相关。

儿科遗传性胆汁淤积症诊断与治疗新进展

胆汁淤积症的定义为血清总胆红素≤5 mg/dL（85.5 μmol/L）时，结合胆红素〉1 mg/dL（17.1 μmol/L）；或总胆红素〉5 mg/dL（85.5 μmol/L）时，结合胆红素占总胆红素的比例〉20%。随着基因组学和分子遗传学理论技术的发展、成熟和临床应用，近年来遗传性胆汁淤积症的诊断治疗引起儿科界关注。此类疾病致病基因繁多，临床表现特异性不强，病因诊断依赖遗传学分析，治疗难度大，预后差别悬殊，往往给患儿及其家庭造成巨大痛苦和负担。现以希特林缺陷病、线粒体DNA耗竭综合征、微绒毛包涵体病和钠牛磺胆酸共转运多肽缺陷病为例，综述其诊断、治疗新进展，希望能够作为引玉之砖，为遗传性胆汁淤积症的诊治研究提供参考。

SLC10A1基因p．S267F位点单核苷酸多态性与HBV感染临床转归之间的相关性

目的：探讨SLC10A1基因在p．S267F位点单核苷酸多态性与HBV感染临床转归之间的相关性。方法连续收集2014年7月至2015年2月在复旦大学附属公共卫生临床中心就诊的HBV感染者1268例。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（ PCR-RFLP）技术对所有HBV感染者的SLC10A1基因p．S267F位点进行测序分型，通过对临床资料的分析来探讨SLC10A1基因p．S267F位点突变与HBV感染临床转归之间相关性。结果1268例HBV感染患者中，基因CC型1226例，基因CT型42例，p．S267F位点突变发生率为3．31％（42／1268）。与未发生p．S267F位点突变的HBV感染者（基因CC型）相比，p．S267F位点突变（基因CT型）的HBV感染者中急性HBV感染率较高（13．6％ vs．28.6％，χ2＝19．819， P ＜0．05）、HBV 相关肝硬化或肝癌的比例较低（13．9％vs．4．8％，χ2＝18.945，P＜0．05）。结论 p．S267F位点单核苷酸多态性可能与HBV感染慢性化、重症化存在相关性。其中，基因CT型可能是HBV感染慢性化、重症化的保护因素。

HBV受体NTCP基因S267F变异与HBV感染结局的相关性研究

目的探讨钠离子-牛磺胆酸钠共转运多肽(NTCP,SLC10A1)的S267F位点变异与不同HBV感染结局之间的相关性。方法采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应法检测42例无症状HBV携带者(ASC)、158例慢性HBV感染(CHB)患者、175例HBV相关性肝硬化(LC)患者、71例HBV相关性肝细胞癌(HCC)患者以及224例HBV自限性清除者的NTCP基因S267F的基因型,分析S267F变异与不同HBV感染结局的关系。结果 S267F的T等位基因在ASC组的频率(5.95%)高于在HBV感染组中的频率(1.86%),差异有统计学意义(95%CI=0.108~0.852,P<0.05)。S267F的T等位基因在LC组(0.29%)、HCC组(0.70%)和LC+HCC组(0.41%)中的频率均低于CHB组(2.15%),差异有统计学意义(P<0.05);但S267F变异与HBV自限性清除无显著相关性(P>0.05)。结论 HBV受体NTCP的S267F变异与不同的HBV感染结局有关,S267F变异可能是CHB患者进展为肝硬化和肝癌的保护因素。