血清胆汁酸谱分析协助钠离子-牛磺胆酸共转运多肽缺陷病诊断和鉴别诊断

目的以钠离子-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)缺陷病为核心,探讨血清胆汁酸谱分析在协助该病诊断及其鉴别诊断中的价值。方法收集整理并分析2015年4月初至2021年12月底暨南大学附属第一医院儿科诊治的66例胆汁淤积性肝病(CLDs)患者的临床资料,包括NTCP缺陷病患者32例(成人16例,儿童16例)、希特林缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(NICCD)16例、Alagille综合征8例,胆道闭锁10例。同时设立成人和小儿健康对照组(各15例)。通过超高效液相色谱-串联质谱技术对研究对象血清胆汁酸成分进行定性定量分析,利用统计学SPSS 19.0及GraphPad Prism 5.0软件对数据进行作图和比较。用t检验、Wilcoxon秩和检验、Kruskal-Wallis H检验等统计学方法,比较NTCP缺陷病与相应健康对照组以及NTCP缺陷病与其他CLDs患儿的临床及胆汁酸谱之间的差异。结果与健康对照相比,NTCP缺陷病患者总结合型胆汁酸、总初级胆汁酸、总次级胆汁酸,以及甘氨胆酸、牛磺胆酸和甘氨鹅脱氧胆酸等水平均升高(P<0.05);与NTCP缺陷病成人患者相比,NTCP缺陷病患儿血清总结合型胆汁酸和总初级胆汁酸水平均明显升高(P<0.05);NTCP缺陷病患儿血清牛磺鹅脱氧胆酸、甘氨猪胆酸、牛磺猪胆酸和牛磺α鼠胆酸水平明显升高,但甘氨脱氧胆酸、甘氨石胆酸、石胆酸等胆汁酸降低(P<0.05);NTCP缺陷病患儿血清中石胆酸、脱氧胆酸和猪脱氧胆酸等次级胆汁酸水平明显高于NICCD、Alagille综合征和胆道闭锁等其他CLDs组(P<0.05);总初级胆汁酸/总次级胆汁酸、总结合型胆汁酸/总未结合型胆汁酸,以及牛磺胆酸、血清牛磺鹅脱氧胆酸和甘氨鹅脱氧胆酸等指标可有效鉴别NTCP缺陷病和其他非NTCP缺陷病CLDs患儿。结论证实血清胆汁酸谱分析对于协助NTCP缺陷病的诊断和鉴别诊断具有重要参考价值,深化了对NTCP缺陷病等CLDs患者血清胆汁酸谱变化特征的科学认识,为深入理解其发病机制提供了代谢组学依据,同时为后续深入研究提供了线索和思路。

钠离子牛磺胆酸共转运多肽缺陷病及其对母胎影响的研究进展

钠离子牛磺胆酸共转运多肽(sodium-taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)缺陷病是一种溶质载体家族10成员1(solute carrier family 10 member 1,SLC10A1)双等位基因突变引起的胆汁酸代谢障碍性疾病,分布具有区域和种族差异,其中SLC10A1 c.800C>T(p.Ser267Phe)是我国的高频突变。NTCP缺陷病患儿主要表现为病理性黄疸,少部分有生长、运动和神经系统发育迟缓的表现,成年患者临床症状和体征不明显,生化检查提示血清总胆汁酸水平升高、部分伴有转氨酶和25-羟维生素D3水平降低。NTCP缺陷病性高胆汁酸血症需与乙型肝炎病毒感染、丁型肝炎病毒感染、自身免疫性肝炎及妊娠期肝内胆汁淤积症等鉴别,妊娠合并NTCP缺陷病性高胆汁酸血症对母胎的影响迄今少有相关报道。综述NTCP缺陷病的分子遗传机制、临床表现、实验室检查、诊断、治疗及其对母胎的影响,为该病患者的明确诊断和正确干预提供依据。

新生儿钠牛磺胆酸共转运多肽缺陷病2例报道及文献回顾

钠牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)缺陷病是由于溶质转运蛋白家族10成员1(SLC10A1)基因突变引起的一种遗传性胆汁酸代谢病,为一种常染色体隐性遗传病,NTCP缺陷病患者体内血浆中结合胆汁盐进入肝细胞的主要转运体的功能受到影响[1-2]。主要临床表现为高胆汁酸、皮肤瘙痒和脂肪吸收不良,导致全面生长迟缓和脂溶性维生素缺乏等。目前,国内外相关文献报道并不多见,长期预后及临床表现不明确。湖北省天门市第一人民医院收治并确诊为NTCP缺陷病患儿2例,现将其临床资料报道如下,以提高临床医生对该病的认识。

2例钠牛磺胆酸共转运多肽缺陷病患儿临床分析

钠牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)缺陷病是近年来新发现的一种遗传性胆汁酸代谢障碍性疾病,本研究旨在提高对NTCP缺陷病的认识,选取华中科技大学附属湖北省妇幼保健院儿童内分泌遗传代谢科分别以生长发育落后及黄疸就诊的2例患儿,虽临床表现不同,但均发现有顽固性的高胆汁酸血症,并伴有25-羟维生素D下降,行基因分析发现SLC10A1突变,临床确诊为NTCP缺陷病,经积极对症治疗后临床症状缓解,预后较好。该研究提示,对于显著而持续性的高胆汁酸血症的新生儿及儿童患者,需考虑NTCP缺陷病可能。NTCP缺陷病患儿远期可能出现身材矮小等生长发育落后情况,生长激素或可改善NTCP缺陷病患者的终身高。

钠-牛磺胆酸共转运多肽缺陷患儿的肝功能及基因特点

目的探讨钠-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)缺陷病患儿的肝功能及基因特点。方法选取经基因测序确诊的NTCP缺陷病患儿(n=11)及其父母(n_(父)=11,n_(母)=11)为研究对象,收集NTCP缺陷病患儿的年龄、出生史、家族史及新生儿期黄疸等一般临床资料;抽取患儿入院治疗前空腹静脉血,检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(IBIL)及胆汁酸(TBA);抽取患儿及父母外周血采用高通量测序法进行基因检测,对患儿突变基因与其父母基因进行Sanger验证,并运用Rare Exome Variant Ensemble Learner(REVEL)、Sortig Intolerant from Tolerant(SIFT)、PolyPhen-2、Mutationtation Taster、Genomic Evolutionary Rate Profiling(GERP^(+))综合性预测软件对突变位点进行危害预测;随访患儿1年,检测血清ALT、AST、TBA、TBIL、DBTL及IBIL等肝功能指标。结果11例NTCP缺陷病患儿,男6例(54.5%)、女5例(45.4%),确诊年龄40~221d、平均(99.82±69.63)d,血清ALT、AST、TBA、TBIL、DBIL及IBIL升高分别为8例(72.7%)、8例(72.7%)、11例(100%)、6例(54.5%)、7例(63.6%)及4例(36.4%);所有患儿均为SLC10A1基因(c.800C>T)纯合突变,父母为(c.800C>T)突变携带者,除检测到与疾病表型高度相关的SLC10A1基因突变外,还检测到与临床相关性不明确突变位点134个;治疗后患儿随访肝功能指标,除TBA外,其余指标下降良好,随着访时间延长TBA呈现下降趋势。结论NTCP缺陷病患儿肝功能异常以TBA增高为主要特征;SLC10A1基因突变是直接原因,已发现多个突变位点可致病,目前c.800C>T是热点突变,患者可呈杂合或纯合突变。

钠牛磺胆酸共转运多肽在肝胆疾病中的研究进展

钠牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)既是胆汁酸吸收入肝的重要转运体,又是HBV、HDV的功能性受体;其结构、功能、基因特点、表达调控机制等已得到广泛研究;且NTCP与慢性病毒性肝炎、非酒精性脂肪性肝病、肝纤维化、原发性胆汁性胆管炎、肝细胞癌相关,本文系统阐述了NTCP在各种肝胆疾病中的作用,为相关疾病的诊断及治疗提供新方向。

新生儿钠牛磺胆酸共转运多肽缺陷病合并先天性甲状腺功能减退症1例

钠牛磺胆酸共转运多肽(sodium taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)缺陷病是由于SLC10A1基因变异引起的一种遗传性胆汁酸代谢病。本文报道1例新生儿期起病的NTCP缺陷病合并先天性甲状腺功能减退症的患儿,提高临床医生的认识。

钠离子-牛磺胆酸共转运多肽在人骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的表达及其对HBV体外感染BMSCs的影响

目的研究体外培养的人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)中钠离子-牛磺胆酸共转运多肽(sodium taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)的表达情况,探索体外培养的BMSCs能否自然感染乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)及NTCP是否是HBV感染BMSCs的一个功能性受体。方法将HBV阳性血清以不同方法感染BMSCs,检测培养基上清及细胞中HBV DNA、培养基上清中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)等感染指标。NTCP-siRNA转染BMSCs后,再次用HBV阳性血清感染BMSCs,检测各感染指标。Western blot法检测各处理组BMSCs中NTCP的表达情况。结果HBV可自然感染体外贴壁培养的人BMSCs,但感染效率很低。当HBV感染悬浮状态下的BMSCs时,感染效率显著升高。BMSCs中存在NTCP的表达,且HBV可显著上调NTCP的表达量,特别是对悬浮状态下的BMSCs。当BMSCs中NTCP的表达被NTCP-siRNA沉默后,HBV对BMSCs的感染效率显著下降。结论体外培养的人BMSCs可被HBV自然感染,且其细胞内表达的NTCP是其感染HBV的一个功能性受体。人BMSCs可作为一种易感、稳定、无需分子修饰的细胞模型,用于研究HBV生命周期的早期阶段以及抗病毒治疗研究。

PreS1多肽(2-21Aa)介导肝脏靶向脂质体的制备及其靶向性研究

目的以来源于乙肝病毒（hepatitisBvirus，HBV）PreSl抗原2-21Aa多肽（HBVpreS／2—21nyr）为导向的肝细胞靶向长效循环脂质体（10ngcirculatingliposome，LCL），通过体外细胞学实验验证其靶向性。方法固相合成HBVpreS／2—21m多肽，化学偶联Mal—PEG2000-DSPE（马来酰亚胺一聚乙二醇2000一硬脂酰基磷脂酰乙醇胺）生成HBVpreS／2五1q—PEG2000-DSPE；采用乙醇注入法制备脂质体，包裹荧光素钠（fluoresceinsodium，FS）形成HBVpreS／2—21nyt-FS—LCL；激光粒度仪、透射电镜、高效液相色谱检测和观察脂质体的粒径、超微形态及包封率；以稳定表达NTCP的HepG2为细胞模型，分析纳米脂质体靶向性。结果合成的靶向脂质体，呈类圆形，大小均匀，粒径为（94．09±9．2）nm，达到纳米级别；有效包裹荧光素钠，包封率为（89．32±1．02）％；与无靶向修饰脂质体相比，可递送更多的荧光素钠进入细胞内。结论HBVpreS／2—21myt修饰的靶向脂质体，有较高的包封率，为纳米脂质体，能特异性地通过NTCP靶向肝细胞，有望成为一种新型的肝细胞靶向给药系统。

慢病毒介导过表达NTCP的NTCP-SK-Hep1细胞系构建

目的建立钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(NTCP)过表达的肝癌细胞系,以作为研究乙肝病毒(HBV)感染的细胞模型。方法构建NTCP慢病毒重组质粒Gv-NTCP,挑取克隆进行PCR扩增和序列测定;将阳性重组质粒与慢病毒辅助质粒共转染HEK293T细胞,包装Gv-NTCP慢病毒并进行病毒滴度测定;Gv-NTCP慢病毒感染人肝癌细胞株SK-Hep1,嘌呤霉素筛选,通过荧光显微镜,PCR和Western blot检测NTCP的表达。结果测序结果证实Gv-NTCP慢病毒载体构建成功;在HEK293T细胞中包装的Gv-NTCP慢病毒滴度为2.0×10~8TU/m L;该病毒感染SK-Hep1细胞后,在荧光显微镜下可见感染细胞表达绿色荧光,PCR结果显示感染组的NTCP表达明显增高,WB结果显示感染组的NTCP蛋白表达明显增高。结论成功建立了NTCP过表达的人肝癌细胞系NTCP-SK-Hep1。

微环载体结合水动力转染技术制备乙肝病毒受体小鼠模型

目的制备乙肝病毒受体钠离子/牛磺胆酸共转运多肽(Na+/taurocholate co-transporting polypeptide,NTCP)小鼠基因转染模型,为乙肝的防治研究提供动物模型。方法制备携带人NTCP真核表达框的亲本质粒ZY781-CMV-NTCP及微环DNA p MC-CMV-h NTCP,采用水动力转染技术将微环DNA p MC-CMV-h NTCP经尾静脉注入ICR小鼠体内,采用PCR和免疫组化方法检测NTCP基因在小鼠体内的表达情况。结果成功构建了携带人NTCP基因的微环载体。PCR检测表明人NTCP基因成功转入小鼠肝组织内,同时肝组织免疫组化检测表明h NTCP可以在小鼠的肝脏内表达。结论成功制备出乙肝病毒受体(NTCP)基因转染小鼠模型。

茵陈蒿汤防治大鼠非酒精性脂肪性肝病效果及其对肝组织NTCP表达的影响

目的观察茵陈蒿汤防治大鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的效果及其对肝组织钠离子牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)表达的影响,探讨茵陈蒿汤防治NAFLD的机制。方法将45只SD大鼠随机分为3组各15只,模型组、干预组每天给予高脂饲料灌胃进行NAFLD造模,同时干预组每天给予茵陈蒿汤10 m L/kg灌胃,对照组每天给予普通饲料喂养。12周后分批处死,取大鼠腹主动脉血及肝脏组织;生化分析仪检测丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、总胆汁酸(TBA)、甘油三酯(TG),HE染色观察肝组织病理变化; Real time PCR、Western blotting法分别检测肝脏组织中NTCP mRNA及蛋白表达。结果与对照组比较,模型组血清ALT、AST、TBA、TG水平均升高(P均<0. 05);干预组血清ALT、AST、TBA、TG水平均较模型组下降(P均<0. 05),而与对照组间差异无统计学意义(P均> 0. 05)。HE染色显示,模型组肝组织可见空泡样变性、炎性细胞浸润和棕黄色胆汁颗粒,而干预组较模型组肝组织脂肪变性、炎性细胞浸润均有一定程度缓解。与对照组比较,模型组肝组织中NTCP mRNA及蛋白表达水平均下调(P均<0. 05);干预组肝组织中NTCP mRNA及蛋白表达水平均较模型组上调(P均<0. 05),而与对照组间差异无统计学意义(P均> 0. 05)。结论茵陈蒿汤可能通过上调NTCP基因表达,减轻肝细胞内胆汁淤积,进而改善肝脏功能,减轻NAFLD大鼠肝脏病理损害。

表面等离子共振法测量乙肝病毒功能受体NTCP与配体相互作用

钠离子/牛磺胆酸共转运多肽(NTCP,SLC10A1)是乙型肝炎病毒(HBV)感染肝细胞的功能性受体,也是抗慢性乙肝感染药物的潜在靶标。目前评价NTCP与其配体相互作用的方法仍然有限。本文使用Sf9细胞表达并纯化了重组NTCP蛋白,通过抗体间接偶联的方法将其固定在表面等离子共振实验芯片上。通过动力学分析,拟合得出HBV PreS1多肽对NTCP结合的平衡解离常数K_(D)为4.93μmol/L;NTCP经典底物牛磺胆酸钠对NTCP的平衡解离常数K为25.3μmol/L。相对于化合物抑制NTCP底物转运的活性,通过SPR方法测得的平衡解离常数可比较化合物与NTCP直接相互作用力的强弱,并用于研发基于NTCP-PreS1相互作用的抗HBV药物。

芍药苷对胆汁淤积肝损伤保护作用机制研究

目的:研究芍药苷对胆汁淤积型肝损伤的保护作用机制。方法:将ICR小鼠随机分成正常对照组、模型对照组、芍药苷低、中、高剂量组。α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导胆汁淤积型黄疸模型,观察各组药物对小鼠血清总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、胆汁酸(TBA)、丙氨酸转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)的影响,并用Western Blot检测小鼠肝组织中钠-牛磺胆酸盐共转运多肽(NTCP)和还原型辅酶Ⅱ氧化酶4(NOX4)蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组血清学指标均明显升高(P<0.01或P<0.05);肝组织中NOX4表达升高,而NTCP表达降低。与模型对照组比较,除芍药苷低剂量组ALT、TBIL,芍药苷中剂量组TBIL外,其余各剂量组ALT、ALP、TBIL、DBIL、TBA均明显降低(P<0.01)。芍药苷治疗组肝组织中NOX4表达较ANIT模型对照组表达减少,芍药苷给药组小鼠肝组织中的NTCP蛋白表达较ANIT组上升。结论:芍药苷具有一定的利胆退黄和保肝降酶作用,且该作用是通过抗氧化减轻肝细胞损伤和增强肝细胞对血液中胆盐的摄取的机制实现的。

HBV感染的实验诊断进展及其个体化诊疗

有关HBV的研究取得了一系列重要进展:HBV侵入肝细胞的受体钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(NTCP)的发现;HBV感染及其结局的分子遗传学机制逐步得以阐明;借助自动化检测设备,临床实验室检测HBV血清标志物的能力大大提高。得益于以上基础和临床研究,在个体化医学时代背景下,一是应该厘清血清学检验的实验室检测路径,进一步明确新老血清标志物的诊断价值;二是应该结合HBV基因检测和宿主基因检测,开发新的检验项目,以预测HBV感染的转归和结局,预测CHB患者IFN-α或核苷(酸)类似物治疗的疗效。

SLC10A1基因p.S267F位点单核苷酸多态性对慢性乙型肝炎患者肝功能的影响

目的探讨SLC10A1基因p.S267F位点单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)对慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者肝功能的影响。方法纳入初治CHB患者153例,其中p.S267F位点野生型(C/C)132例,突变型(C/T)21例。T检验比较p.S267F位点野生型与突变型CHB患者各项肝功能指标间的差异。结果 SLC10A1基因p.S267F位点突变型CHB患者的ALT、AST、TBIL和DBIL水平均显著低于野生型患者(P<0.05);两组患者ALP、GGT和TBA水平间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 SLC10A1基因p.S267F位点突变型CHB患者的肝功能损伤程度低于野生型CHB患者,SLC10A1基因p.S267F位点突变可能是CHB患者肝损加重的保护因素。

HBV进入抑制剂研究近况与展望

钠离子牛磺胆酸共转运多肽(Na+-taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)是乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染的受体,此发现为抗HBV新药研发提供了新靶标。本文综合了近3年来对NTCP受体的研究,全面阐述了目前HBV治疗中的瓶颈、NTCP发现的意义及其表达调节,以及进入抑制剂的种类、作用机制和研究进展。进入抑制剂将成为抗HBV感染的新靶点,并有可能成为抗HBV感染的新的策略之一。

利胆退黄汤对ANIT诱导的胆汁淤积型黄疸模型大鼠的治疗作用

目的:探讨利胆退黄汤对胆汁淤积型黄疸大鼠的疗效及其作用机制。方法:Wistar雄性大鼠48只,随机分成6组:对照组,模型组,阳性药组,利胆退黄汤低、中、高剂量组,每组8只。除对照组外,其余5组均一次性灌胃α-萘基异硫氰酸盐(alpha-naphthylisothiocyanate,ANIT)溶液(5mL/kg)造模,诱发大鼠急性肝内胆汁淤积病变。造模48h后,利胆退黄汤低、中、高剂量组给药量分别是10、20、40g/(kg·d),阳性药组给予茵栀黄颗粒1.6g/kg灌胃,同时对照组和模型组每天给予生理盐水灌胃,连续给药7天,各组大鼠采集血液及肝脏组织,分析血清指标、肝脏组织中钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(Sodium taurocholate cotransporting polypeptide,NTCP)、胆汁酸盐输出泵(Bile salt export Pump,BSEP)蛋白表达、mRNA表达和观察病理切片。结果:与对照组比较,模型组大鼠血清中丙氨酸转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase,AST)、碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,γ-GT)、总胆红素(Total bilirubin,TBil)、直接胆红素(Direct bilirubin,DBil)、总胆汁酸(Total bile acid,TBA)水平均显著升高(P<0.05);与模型组比较,利胆退黄汤低、中、高剂量组血清指标显著降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组大鼠肝脏组织中NTCP、BSEP蛋白表达及mRNA表达均明显降低(P<0.05)。与模型组比较,利胆退黄汤低、中、高剂量组大鼠肝组织中NTCP、BSEP蛋白表达及m RNA表达均明显升高(P<0.05);病理切片观察可见模型组大鼠肝细胞肿大,排列无序不规整,显点状或灶性坏死,轮廓不清,胆管上皮细胞增生,肝窦变大,可见大量炎细胞浸润,利胆退黄汤低、中、高剂量组大鼠肝组织病理炎细胞浸润和脂肪细胞减少,肝细胞肿胀明显改善,肝细胞排列比较规整,细胞大小大致相等。与阳性药组比较,利胆退黄汤高剂量组大鼠肝组织病理改善较明显,血清中ALT、ALP、AST、γ-GT、TBA水平均显著升高(P<0.05),NTCP蛋白表达及mRNA表达均显著升高(P<0.05)。结论:利胆退黄汤可降低调节ANIT诱导的胆汁淤积型黄疸大鼠血清中ALT、AST、ALP、TBil、DBil、TBA的水平,且疗效优于茵栀黄颗粒。利胆退黄汤可能通过调节NTCP、BSEP mRNA的表达来改善胆汁淤积大鼠的肝胆功能。

HBV研究模型新进展

慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是造成肝炎、肝硬化、肝癌的主要诱因之一,已成为全球性的公共健康问题。乙型肝炎疫苗的推广应用显著降低了HBV感染率,但现阶段慢性乙肝病毒感染仍然无法根治。HBV研究模型对推动HBV相关研究和临床治疗起到了重要的作用。然而,由于缺乏合适的研究模型,HBV生物学以及HBV与宿主之间相互作用等方面仍存在很多问题未明了,制约了抗HBV新药研发。近年来,HBV功能性受体钠离子-牛磺胆酸共转运多肽(NTCP)的发现以及干细胞技术的发展应用,极大推动了HBV研究模型的发展。本文分别从病毒来源、细胞和动物感染模型等角度对HBV研究模型领域的进展进行综述。

HepG2-hNTCP细胞模型的构建及在miRNA-548ah调控乙型肝炎病毒研究中的应用

目的构建并鉴定表达人钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白(hNTCP)的HepG2-hNTCP细胞模型,探讨微小RNA-548ah(miR-548ah)对乙型肝炎病毒复制和表达的影响。方法扩增重组慢病毒pWPI-hNTCP-Puro质粒,pWPI-hNTCP-Puro慢病毒感染HepG2细胞,聚合酶链反应(PCR)检测hNTCPmRNA的表达水平,共聚焦显微镜检测hNTCP蛋白定位。Lipofectamine转染miR-548ah激动剂、miR-548ah抑制剂及阴性对照至细胞系。酶联免疫吸附测定检测HBsAg和HBeAg的表达水平,荧光定量PCR检测HBVDNA的表达,应用SPSS 17.0对数据进行分析。结果hNTCP mRNA在HepG2hNTCP呈高水平表达。共聚焦荧光显微镜观察HepG2hNTCP中的hNTCP蛋白正常表达且主要定位在细胞膜上。与HepG2细胞比较,HBsAg和HBeAg在感染后HepG2-hNTCP细胞5天和7天后的表达水平存在差异,随培养天数呈上升趋势,具有统计学意义(P<0.01)。与转染阴性对照比较,HBsAg在转染miR-548ah激动剂组的表达水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05);而HBeAg和HBVDNA的表达水平无明显变化,差异均无统计学意义。结论成功构建了表达hNTCP的HepG2-hNTCP细胞模型,对乙型肝炎病毒感染具有良好的易感性;miR-548ah可促进HBV感染HepG2-hNTCP细胞模型中HBsAg的表达。