上皮细胞钠通道α亚基基因多态性与湘西土家族原发性高血压的相关性

目的:探讨上皮细胞钠通道α亚基(SCNN1A)基因单核苷酸多态性位点rs2286600与湘西土家族人群原发性高血压(EH)的相关性。方法:用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术,分析213例土家族EH患者(EH组)与215例土家族健康者(对照组)SCNN1A基因型及等位基因频率的分布状况。结果:土家族存在CC、CT及TT三种基因型;EH组与对照组的CC、CT和TT基因型频率(0.799∶0.674,0.192∶0.270,0.028∶0.056),差异有统计学意义(χ2=6.328,P<0.05);EH组与对照组的C、T等位基因频率(0.876∶0.809,0.124∶0.191),差异有统计学意义(χ2=7.078,P<0.05)。结论:土家族存在SCNN1A基因rs2286600多态性位点,该多态性位点可能与土家族EH存在相关性,CC基因型与C等位基因可能是土家族人群患EH的危险因子。

辛伐他汀对脂多糖诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞钠通道α亚基的影响

目的通过体外给药的方式观察辛伐他汀对脂多糖（LPS）诱导的原代培养大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞（ATⅡ）钠通道α亚基（α-ENaC）mRNA表达的影响。方法ATⅡ细胞原代培养，分为空白对照组、LPS损伤组（终浓度1mg／L）、辛伐他汀低和高剂量组（20μmol／L、30μmol／L）、溶剂对照组。分别于培养1、12、24h用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清中肿瘤坏死因子-α（TNF—α）、白细胞介素-1β（IL-1β）的浓度，用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测细胞中α-ENaCmRNA表达。结果LPS损伤后1、12、24h时TNF-α、IL-1β浓度均较空白对照组显著升高。辛伐他汀低剂量组1、12、24hTNF—α（ng/L）和IL-1β（ng/L）均较LPS损伤组明显下降（TNF-α 1h：1178．80±127．43比2336．00±170．04，12h：1003．60±59．61比2479．80±210．41，24h：695．80±25．24比1167．60±132．72；IL-1β 1h：285．00±42．60比429．60±27．39，12h：238．60±24．12比822．20±12．74，24h：213．40±17．87比637．60±22．96，均P〈0．05），高剂量组较低剂量组下降更明显（TNF—α 1h：965．60±24．45比1178．80±127．43，12h：522．80±16．89比1003．60±59．61，24h：252．40±17．64比695．80±25．24；IL-1β 1h：225．60±34．44比285．00±42．60，12h：190．60±17．64比238．60±24．12，24h：152．80±14．70比213．40±17．87，均P〈O．05），但仍较空白对照组明显上升。在培养1h时各组α-ENaCmRNA表达差异均无统计学意义。培养12h、24h时，LPS损伤组α-ENaCmRNA表达（A值）明显低于空白对照组（12h：0．211±0．021比0．496±0．027，24h：0．253±0．030比0．482±0．030，均P〈0．05）；辛伐他汀低剂量组α—ENaCmRNA表达均较LPS损伤组明显上升（12h：0．363±0．030比0．211±0．021，24h：0．309±0．024比0．253±0．030，均P〈0．05），高剂量组较低剂量组升高更明显（12h：0．413±0．034比0．363±0．030，24h：0．346±0．024比0．309±0．024，均P〈0．05），但仍较空白对照组明显下降。空白对照组与溶剂对照组各指标差异无统计学意义。结论大剂量辛伐他汀可上调LPS诱导的大鼠ATⅡ细胞α-ENaCmRNA表达，其机制可能与调节TNF-α、IL—β的分泌有关。

力竭运动对大鼠心脏传导系统电压门控钠离子通道α亚基的影响

目的:探讨力竭运动后不同时相大鼠心脏窦房结、房室结和浦肯野氏纤维电压门控钠离子通道α亚基(SCN5A)基因和蛋白水平的表达特点,为阐明运动性心律失常发生机制提供实验依据。方法:100只健康成年雄性SD大鼠随机分为一次力竭运动组、反复力竭组及其相应的对照组,每组10只。分别于力竭运动后0、4、12及24小时取材,进行心电图、免疫荧光组化及实时荧光定量PCR分析,测试心脏窦房结、房室结和浦肯野氏纤维细胞离子通道因子SCN5A mRNA和蛋白表达。结果:不同力竭运动后,窦房结SCN5A mRNA表达运动后各时相组均显著低于其对照组(P<0.01),一次力竭运动后即刻、4小时窦房结SCN5A mRNA表达显著低于房室结(P<0.01)和浦肯野氏纤维(P<0.05)。反复力竭运动后即刻窦房结SCN5A mRNA表达显著低于房室结和浦肯野氏纤维(P<0.01)。结论:力竭运动可导致心脏传导系统细胞膜离子通道亚型SCN5A在mRNA和蛋白水平异常低表达,其中窦房结改变最明显和持久,其结果可能引起心脏起搏和传导功能异常,构成运动性心律失常的病理与发生机制。

雌孕激素在急性肺损伤中对钠离子通道α亚基的影响

目的观察17-雌二醇、孕酮联合应用对急性肺损伤大鼠的肺上皮钠离子通道（rENaC）α亚基表达的影响，探讨雌孕激素联合应用在急性肺损伤（ALI）的肺水肿清除机制中的作用。方法40只雌性未成年SD大鼠随机分为正常对照组（注射生理盐水8mL／kg），急性肺损伤（ALI）模型组（经静脉注射油酸0．1mL／kg），雌孕激素联合治疗组（在油酸注射前12、48h皮下注射由雌孕激素按750：1比例混合的混合液）。将每组大鼠分别在油酸注射后6h处死取出肺组织进行干湿质量比、肺系数的测定，观察肺病理切片肺水肿程度，RT-PCR检测肺组织钠通道α-ENaCmRNA表达。结果急性肺损伤模型组肺湿干质量比、肺系数较正常对照组显著升高（P〈0．01）。雌孕激素联合治疗组（12h前给药）与ALI模型组比较上述指标均显著下降（P〈0．05）。肺组织病理学观察联合治疗组（12h前给药）肺水肿程度较ALI模型组明显减轻。α-ENaC基因在雌孕激素联合治疗组（12h前给药）的表达与ALI模型组相比显著升高（P〈0．05）。结论联合应用雌孕激素可以上调钠离子通道α亚基的基因表达，从而可能在肺水肿清除中起到一定作用。

腺苷A2a受体对肺泡上皮细胞钠离子通道α亚基的上调作用

目的研究腺苷A2a受体对肺泡上皮A549细胞钠离子通道α亚基(epithelial sodium channelα-subunit,α-ENaC)表达变化的影响,探讨其在急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征中的作用。方法不同剂量(0、0.1、1、10、100μmol/L)和不同时间(0、1、4、8、24、48h)的腺苷A2a受体激动剂CGS-21680干预A549细胞,分别用RT-PCR和Western blot检测α-ENaC mRNA和蛋白表达情况。结果①不同剂量CGS-21680作用A549细胞8h后,α-ENaC mRNA和蛋白表达水平从0.1μmol/L开始增加,并与CGS-21680剂量呈正相关(mRNA表达:r=0.959,P<0.01;蛋白表达:r=0.988,P<0.01),与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。②100μmol/LCGS-21680作用A549细胞1h后,α-ENaC mRNA和蛋白表达水平开始增加,4h后与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论激动腺苷A2a受体能上调α-ENaC的表达,有益于急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的预后。

鸡脊髓运动神经元中钙离子通道α_2亚基和钠离子通道α亚基的免疫学表达

目的观察电压门控钙离子通道α2(votage-gated calcium channel,VGCC)亚基和电压门控钠离子通道α(volt-age-gated sodium channel,VGSC)亚基在鸡脊髓运动神经元中的表达,并探讨相互表达的关系。方法应用免疫组织化学(ABC法)观察鸡脊髓前角神经元中CCα2亚基和SCα亚基的表达,并应用免疫荧光双标记法观察鸡脊髓运动神经元中CCα2亚基和SCα亚基表达的关系。结果 CCα2亚基主要表达于脊髓IX层的大型神经元中,Ⅷ层的部分小型神经元亦呈CCα2亚基免疫阳性,大约83%的脊髓运动神经元呈CCα2阳性。CCα2亚基免疫反应物位于神经元胞浆和近位树突中。SCα亚基免疫反应物主要表达于脊髓运动神经元细胞核中,或同时表达在神经元的细胞核及胞浆中。一些有髓轴突和神经元近位树突亦呈SCα亚基免疫强阳性。大约46%的运动神经元呈SCα亚基阳性,并所有SCα亚基免疫阳性运动神经元均为CCα2亚基阳性。结论脊髓运动神经元中CCα2亚基和SCα亚基有多样性表达,可能表明运动神经元的不同运动活性。

雄激素剥夺对油酸诱导急性肺损伤肺泡上皮钠离子通道表达的研究

目的:观察通过手术去势方法降低大鼠体内雄激素水平对急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(acute lung injury/acute respiratory distress syndrome,ALI/ARDS)肺组织中肺泡上皮钠离子通道α亚基(epithelial sodium channel alpha-subunit,ENaC-α)的影响。方法:20只Sprague-Dawley(SD)大鼠按随机数字表法分为正常对照组、模型组、假手术模型组、去势手术模型组4组,每组5只。以尾静脉注射油酸(oleic acid,OA)0.15 ml/kg复制ALI/ARDS模型,去势手术模型组和假手术模型组分别于造模前2周(14 d)行开腹双侧睾丸切除术或开腹但不行睾丸切除。于造模成功6 h后行开胸手术,测定肺湿重/干重比值(wet/ery,W/D),用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)和Western blot测定肺组织中ENaC-αmRNA及蛋白的表达。结果:(1)与正常对照组比较,所有模型组大鼠肺组织病理学改变明显且W/D比值明显增加(模型组与正常对照组,P=0.000;假手术模型组与正常对照组,P=0.000;去势手术模型组与正常对照组,P=0.000)、ENaC-α的mRNA和蛋白表达明显降低(ENaC-αmRNA:模型组与正常对照组,P=0.000;假手术模型组与正常对照组,P=0.000;去势手术模型组与正常对照组,P=0.001;ENaC-α蛋白:模型组与正常对照组,P=0.000;假手术模型组与正常对照组,P=0.000;去势手术模型组与正常对照组,P=0.045)。(2)与模型组相比,去势手术组大鼠肺组织病理学改变较减轻,W/D比值明显降低(P=0.000)、ENaC-α的mRNA和蛋白表达明显上调(ENaC-αmRNA:去势手术模型组与模型组,P=0.002;ENaC-α蛋白:去势手术模型组vs.模型组,P=0.030)。结论:在ALI/ARDS发生时,雄激素本身对急性肺损伤时肺泡上皮细胞中ENaC-α的表达具有抑制作用,降低体内雄激素水平可以提高肺组织中ENaC-α的mRNA和蛋白的表达,降低肺组织水肿程度。

胰岛素对肺泡上皮细胞钠离子通道α亚基的调控研究

目的 研究胰岛素作用下肺泡上皮细胞钠离子通道α亚基（ENaC-α）的变化及其对细胞凋亡的影响.方法 以人肺腺癌细胞株A549为对象,用含30 U/L的胰岛素培养基培养30 min和60 min,分别用蛋白质免疫印迹法（Western blotting）和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定ENaC-α及血清和糖皮质激素诱导的蛋白激酶1（SGK-1）的蛋白及mRNA表达,并使用白屈菜红碱阻断蛋白激酶C（PKC）抑制SGK-1后再次测定ENaC-α蛋白表达.用原位末端缺刻标记法（TUNEL）测定经胰岛素处理后的A549细胞凋亡率.结果 用胰岛素培养30 min即可明显上调ENaC-α和SGK-1的蛋白及mRNA表达,并随处理时间延长表达量明显增加.若以未添加胰岛素培养A549细胞蛋白表达量为100%,胰岛素作用30 min时ENaC-α、SGK-1蛋白表达量为124%、135%,60 min时ENaC-α、SGK-1蛋白表达量为186%、176%（均P〈0.05）.胰岛素还可以抑制缺氧诱导的A549细胞凋亡（10.3%比21.6%,P〈0.05）.结论 胰岛素可以通过PKC、SGK-1途径上调ENaC-α表达,并抑制缺氧诱导的A549细胞凋亡,从而有利于急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征（ALI/ARDS）的预后.

SCNN1A基因多态性与氢氯噻嗪降压疗效的相关性

目的探讨上皮细胞钠通道α亚基(SCNN1A)基因单核苷酸多态性位点rs2228576与氢氯噻嗪降压疗效的相关性。方法选取新发的轻中度原发性高血压患者110例,均来自吉首市的常住苗族人群。予以氢氯噻嗪口服治疗8周,对降压疗效进行评定。用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分析患者SCNN1A基因rs2228576多态性的分布频率。结果 EH患者存在三个基因型(AA、AG及GG),频率分别为(0.127,0.509,0.364)。rs2228576位点不同基因型与经DHCT治疗后DBP的降低幅度有关,降压疗效间差异有统计学意义(F=11.522,P<0.05),收缩压降低幅度间无统计学意义(F=2.841,P>0.05)。结论 SCNN1A基因rs3828942多态性可能与DHCT的降压疗效有关。

家庭性低血钾型周期性麻痹CACNL1A3基因新的突变点528精氨酸被甘氨酸替代

目的筛查低血钾性周期性麻痹家系的骨骼肌二氢吡啶受体敏感的钙离子通道α1亚基和骨骼肌电压门控钠离子通道α亚基基因突变。方法总结低血钾型周期性麻痹家系Ⅵ代27例患者的临床特点,并应用聚合酶链反应和高液相变性技术筛查编码钙离子通道α1亚基的528位及1239位精氨酸和钠离子通道α亚基669位及672位精氨酸基因的突变点。结果钙离子通道α1亚基编码528位精氨酸的1582位碱基序列发生错义突变(C→G),编码的精氨酸变为甘氨酸,528位精氨酸被甘氨酸替代,而其他3个已知突变点的碱基序列完全正常。结论国人钙离子通道α1亚基存在528位精氨酸被甘氨酸替代突变,与国外报道的钙离子通道α1亚基528位精氨酸被组氨酸、1239精氨酸被组氨酸、1239精氨酸被甘氨酸和钠离子通道α亚基基因的669精氨酸被组氨酸替代,或672位的精氨酸被组氨酸、甘氨酸、色氨酸、半胱氨酸替代的突变不同,是一个新的突变类型。

SCN4A基因复合杂合变异导致先天性肌无力综合征1例

目的对1对具有3次不良孕产史的夫妇的临床资料以及先天性肌无力16型(CMS16)胎儿的遗传学特征进行分析。方法选取2018年2月因"2次不良孕产史"就诊于天津医科大学总医院的夫妇作为研究对象,回顾分析其临床资料。对其进行全外显子组测序(WES),并对候选变异进行Sanger测序验证。通过低深度全基因组测序对胎儿的染色体拷贝数变异(CNV)进行检测。结果孕妇第1胎孕27+5周晚期流产,超声检查发现胎儿胸水、羊水过多;第2胎孕30+5周超声检查发现胎儿手部畸形、胸水、羊水过多而选择引产。夫妻双方均否认遗传病家族史。孕妇第3胎CNV未见明显异常,SCN4A基因存在母源c.3172C>T(p.R1058W)和父源c.1431delG(p.K477fs*89)复合杂合变异。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)相关指南,判断c.3172C>T(p.R1058W)为可能致病性变异(PM1+PM2_Supporting+PP3+PP4),c.1431delG(p.K477fs*89)为致病性变异(PVS1+PM2_Supporting+PP4)。结论c.3172C>T(p.R1058W)和c.1431delG(p.K477fs*89)复合杂合变异考虑是孕妇第3个胎儿的致病原因,初步诊断其为CMS16。

SCNN1A基因多态性与土家族、苗族及汉族人群原发性高血压相关性的研究

目的:探讨上皮细胞钠通道α亚基(SCNN1A)基因单核苷酸多态性位点rs2228576与湘西土家族、苗族和汉族人群原发性高血压(EH)的相关性。方法:用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分析土家族(120例)、苗族(117例)和汉族(125例)人群EH患者(EH组)与正常人群[正常对照组(土家族119例、苗族125例、汉族122例)]SCNN1A等位基因频率分布状况。结果:土家族、苗族和汉族均存在3种AA、AG及GG基因型;土家族、苗族和汉族正常对照组基因型频率分别为(0.109,0.538,0.353;0.152,0.472,0.376;0.164,0.541,0.295);各族EH组与正常对照组基因型频率差异均无统计学意义(χ2=5.662,P>0.843);等位基因频率差异均无统计学意义(χ2=3.538,P>0.618)。结论:3个民族均存在SCNN1A基因rs2228576多态性位点,但该多态性位点与3个民族EH无明显相关性。

云南省一少数民族家族性扩张型心肌病家系致病基因筛查及临床特征分析

目的对云南省一傣族家族性扩张型心肌病(FDCM)家系进行基因测序,寻找该家系的致病基因,并分析基因型与临床表型的关系。方法入选2018年8月到云南省第一人民医院心血管内科就诊的一傣族FDCM家系,包括DCM患者3例及其家系成员共28名。详细询问先证者及该家系成员的病史,完善体格检查、常规心电图和超声心动图检查,同时对该家系成员采外周血,利用芯片捕获测序技术捕获遗传性心肌病及遗传性心律失常相关基因所有的外显子及剪切位点,应用高通量测序技术检测这些基因的突变情况。应用Sanger测序技术对检测到的变异位点进行验证,对其家系成员及220名来自于云南省第一人民医院体检中心的健康对照组人群进行检测,并分析其临床表型。结果对该家系DCM患者与正常人测序结果进行比对分析,同时经过多个生物数据库数据过滤,发现该家系中3例DCM患者(Ⅱ1、Ⅱ3、Ⅱ5)携带电压门控-钠通道α亚基(SCN5A)Arg1139Gln错义突变,先证者的母亲(I 2)、弟弟(Ⅱ7)和侄女(Ⅲ9)也检出相关基因突变位点,但无临床症状,心电图及超声心动图检查均未见明显异常。其余家系成员及健康对照人群均未检出上述基因突变位点。结论本研究发现云南省一傣族FDCM家系携带SCN5A基因Arg1139Gln错义突变,此位点在DCM家系中为首次报道,其可能与FDCM发病相关。

建立TaqMan实时定量PCR检测SCN1A基因嵌合突变

目的建立TaqMan实时定量PCR检测SCN1A基因嵌合突变的方法,调查婴儿严重肌阵挛癫痫(SMEI)家系的遗传背景。方法抽提1例SMEI患儿及其父母的外周血全基因组DNA,对SCN1A基因外显子PCR扩增后直接测序检测突变位点。然后根据患儿所携带的c.302G>A突变,合成突变型质粒、野生型质粒、TaqMan-MGB探针和引物。并以突变型及野生型质粒为研究对象,进一步分析方法的特异性及敏感度。最后用TaqMan实时定量PCR探寻其父母是否为SCN1A基因突变嵌合子。结果建立的TaqMan实时定量PCR未发现非特异性扩增,且敏感度高,在107copies/ml的野生序列背景下能检测出1.6%的突变量。直接测序发现患儿存在SCN1A c.302G>A杂合突变,父亲发现少量可疑突变背景,而母亲未发现。运用TaqMan实时定量PCR证实了患儿父亲含有c.302G>A嵌合突变。结论 TaqMan实时定量PCR能有效提高SCN1A基因嵌合突变的检出率,对优生优育和遗传咨询有较大帮助。