淡色库蚊(Culexpipienspallens)与击倒抗性(kdr)相关的钠通道基因突变

本研究采用RT -PCR技术,使用简并引物分别从淡色库蚊(Culexpipienspallens)敏感品系和抗溴氰菊酯品系中扩增出钠通道ⅡS4～ⅡS6区域的基因片段,长度为35 9bp。该基因片段所编码的氨基酸与黑尾果蝇(Drosophilamelanogaster)、家蝇(Muscadomestica)、埃及伊蚊(Aedesaegypti)、冈比亚按蚊(Anophelesgambiae)及德国小蠊(Blattellagermanica)等昆虫相应区域的氨基酸序列具有较高的同源性,其同源性分别为95. 8% ,95. 0 % ,10 0 . 0 % ,98 .3%和95 . 0 %。经序列比对,确认抗溴氰菊酯品系淡色库蚊钠通道基因在10 14位点发生了突变:该位点的碱基“A”突变为“T”,其对应氨基酸由亮氨酸(L)变为苯丙氨酸(F) ,该突变(L10 14F型)在多种昆虫中较为常见。

北京地区德国小蠊(Blattela germanica)对氯菊酯抗性相关的钠通道基因点突变的研究

应用RT PCR扩增技术 ,克隆了北京地区自然种群德国小蠊 (Blattelagermanica)的钠离子通道基因片段 ,片段长度为 16 2bp ,并对其进行了测序。将推导的氨基酸序列与德国小蠊敏感品系的相应序列进行比较 ,发现在钠离子通道ⅡS4 ⅡS6的 993同源位点上存在Leu (TTG)→Phe (TTC)突变 ,表明该品系的抗药性可能与击倒抗性 (knockdownresistance ,kdr)

β2肾上腺素受体基因、α上皮细胞钠通道基因和G蛋白β3亚基基因联合变异与维吾尔族人群高血压的关系

目的:探索β2肾上腺素受体(ADRB2)基因G1023A,α上皮细胞钠通道(ENaC)基因G2139A和G蛋白β3亚基(GNB3)基因C825T多态性与新疆维吾尔族人群原发性高血压的关系。方法:采用人群为基础的病例对照研究,高血压组269例,正常血压组229例。用聚合酶链反应一限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)的方法检测ADRB2基因G1023A基因型、ENaC基因G2139A基因型和GNB3基因C825T基因型,分析其与与维尔族人群高血压的关系。结果:高血压组和正常血压组的ADRB2基因型分布分别为GG:0.202、0.147;AG:0.266、0.339;AA:0.532、0.513,差异无统计学意义(P=0.119)。高血压组和血压正常组的ENaC基因型分布分别为GG:0.249、0.266;AG:0.472、0.476;AA:0.281、0.260,差异无统计学意义(P=0.840);高血压组和血压正常组的GNB3基因型分布分别为CC:0.346、0.293;CT:0.394、0.437;TT:0.260、0.271,差异无统计学意义(P=0.418)。用Logistic回归模型校正年龄、性别、吸烟、体重指数、腰围、臀围、血糖、甘油三酯、总胆固醇及胆红素之后,亦未发现三个位点与原发性高血压有关。进一步分析未发现三个位点对维吾尔族高血压的发病有交互作用(P=0.080)。结论:在新疆维吾尔人群中,未发现ADRB2基因G1023A、ENaC基因和GNB3基因多态性单独或联合作用在高血压发病中起作用。

Ⅰ型电压依赖型钠通道基因突变嵌合体的检测

目的:寻找鉴定Ⅰ型电压依赖型钠通道基因(SCN1A)突变嵌合体的有效方法,降低癫痫伴热性惊厥附加症的再发风险。方法:抽取携带已知突变c.5768A>G/p.Q1923R的患儿及无突变的患儿母亲的外周血全基因组DNA,将患儿的DNA与母亲的DNA以1∶0、1∶1、1∶3、1∶7、1∶15、1∶31及0∶1混合,对包含该突变位点的片段进行PCR扩增后,进行变性高效液相色谱(dHPLC)技术分析、常规测序及焦磷酸测序(pyrosequencing)。结果:常规测序仅能检测出1∶0及1∶1混合样本的突变,而dHPLC及焦磷酸测序均能检测出低至1∶15混合样本的突变,且后者能对突变进行定量。结论:利用dHPLC结合焦磷酸测序的方法能有效快速地检测出低至3%左右的突变,可以避免绝大多数SCN1A基因嵌合突变的漏检。

两种蚊虫钠通道基因kdr突变点附近序列的研究

目的分析白纹伊蚊和致倦库蚊钠离子通道基因kdr突变位点附近的核苷酸序列,为进行抗药性监测奠定基础。方法根据文献报道的两种蚊虫钠离子通道基因序列设计引物,分别以白纹伊蚊和致倦库蚊基因组DNA为模板进行PCR扩增,获得包含击倒抗性突变位点和一个内含子的钠通道基因片段,将其核苷酸序列与蚊虫钠通道基因cDNA序列进行比较,确定内含子的位置及序列。结果两种蚊虫的内含子序列变异较大,它们在kdr突变位点附近的序列很保守。结论该内含子序列的变异并不影响用PCR方法检测这两种蚊虫的拟除虫菊酯抗性。

用PCR-RFLP法对三带喙库蚊钠通道基因L1014F突变快速检测与分型

目的建立PCR-RFLP方法对三带喙库蚊钠通道基因L1014F(TTA-TTT)突变进行快速检测与分型。方法根据三带喙库蚊钠通道基因DNA序列,合成PCR引物,在上游引物3'端第二个碱基引入突变位点"C",构建酶切位点,扩增后对PCR产物酶切,在电泳结果读取分型结果并统计基因频率与基因型频率。结果建立的PCR-RFLP方法能够对三带喙库蚊钠通道基因L1014F突变进行快速检测与分型,灵敏度和特异度均达到98%以上。结论本研究建立的PCR-RFLP方法灵敏度和特异度较高,实现了对三带喙库蚊钠通道L1014F(TTA-TTT)突变的快速分型,可以推广使用。

上皮细胞钠通道α亚单位基因4种单核苷酸多态性与新疆哈萨克族人原发性高血压的相关性

目的研究上皮细胞钠通道(ENaC)基因启动子区G2139A、G3091A、第13外显子区T663A及第2内含子区T3593C位点的单核苷酸多态性(SNPs)及其构成的单体型与新疆哈萨克族人原发性高血压(EH)的相关性。方法采用病例-对照研究的方法,选择牧区哈萨克族EH患者(EH组)252例和血压正常者(NT组)254例,采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性的方法,鉴定不同个体上述4个位点的基因型及等位基因的类型,分析4种SNPs基因型及等位基因在该民族人群的分布特征及其在EH与NT组分布频率的差异,分析4个位点连锁不平衡关系,观察4种SNPs组成的单体型与新疆哈萨克族人EH的相关性。结果新疆哈萨克族αENaC基因存在上述4个位点的SNPs,在总体人群中,G2139A位点AA、AG、GG基因型的频率分别为26.2%、52.3%和21.5%,A、G两种等位基因的分布频率分别为52.37%和47.63%;G3091A位点AA、AG、GG基因型的频率分别为19.0%、52.5%和28.5%,A、G两种等位基因的分布频率分别为45.56%和59.44%;T663A位点AA、AG、GG基因型的频率分别为15.6%、49.9%和34.5%,A、G两种等位基因的分布频率分别为40.53%和59.47%;T3593C位点TT、TC、CC基因型的频率分别为88.5%、10.5%和1.0%,T、C两种等位基因的分布频率分别为93.77%和6.23%。4个位点基因型的分布均符合Hardy-weinberg平衡(P>0.05)。4种SNPs基因型及等位基因的分布频率在EH和NT组差异均无显著性(P>0.05)。4个位点间不存在连锁不平衡关系。单体型分析显示由2139G、3091A、663G和3593T等位基因构成的单体型在EH组显著高于NT组(P<0.01),由2139A、3091A、663A和3593C等位基因构成的单体型在NT组显著高于ET组(P<0.05)。结论虽然αENaC基因G2139A、G3091A、T663A及T3593C SNPs作为单个位点可能不足以引起个体EH的发生或者仅对EH的发生产生极其微效的作用,但其所构成的单体型可能对新疆哈萨克族人EH的发病发挥重要作用,其中2139G、3091A、663G和3593T等位基因构成的单体型可能与该民族EH的发生相关,而2139A、3091A、663A和3593C等位基因构成的单体型可能是该民族EH发生的保护因子,可降低该民族EH的患病风险,ENaC基因是新疆哈萨克族高血压发生的重要易感基因。

心脏钠通道SCN5A基因突变与致心律失常性疾病

致心律失常性疾病患者死后尸检时心脏没有发现病理学异常的证据,过去都将其归为原因不明的猝死,近年研究显示,很多致心律失常性疾病与心脏钠通道基因(SCN5A)突变相关。本文对钠通道SCN5A基因的基本结构、SCN5A基因突变与几种相关的致心律失常性疾病的相关性等进行了综述,旨在为原因不明猝死的研究提供新思路。

心脏钠通道基因（SCN5A）基因突变与扩张型心肌病有关

近日，由上海复旦大学附属中山医院葛均波教授带领的研究小组在对一个扩张型心肌病（DCM）伴进行性心脏传导障碍（PCCD）家系的成员进行心脏钠通道（SCN5A）基因测序的研究中发现，所有患者均存在A1180V突变，此突变与DCM伴PCCD有关。此项成果发表在近期出版的Circulation上。

菊酯类杀虫剂抗性棉铃虫para型钠离子通道基因的部分序列测定与突变

昆虫神经系统 para型钠离子通道是菊酯类杀虫剂的主要靶标 ,对 10多种昆虫的研究表明 ,钠离子通道基因发生点突变与昆虫对菊酯类杀虫剂的抗性密切相关 .通过RT PCR扩增的方法 ,我们获得了编码溴氰菊酯抗性和敏感品系棉铃虫钠离子通道域II IV的cDNA片段 .核苷酸序列及推导的氨基酸序列分析结果表明 ,溴氰菊酯抗性品系棉铃虫钠离子通道基因不存在其它昆虫中报道的kdr和super kdr抗性突变 ,但是我们发现了一个甲硫氨酸 (M )到亮氨酸 (L)的新突变 ,该突变位于域II和III之间 .由于昆虫钠离子通道高度保守 ,因此 ,该突变很可能与棉铃虫对溴氰菊酯的抗性有关 .另外 ,通过PCR扩增的方法 ,克隆了棉铃虫钠离子通道域II IV的基因片段 ,该片段全长 7334bp,包含有 13个外显子和 12个内含子 ,与果蝇和烟蚜夜蛾相比 ,内含子在基因中的位置基本一致 ,进一步表明昆虫钠离子通道基因在进化过程中高度保守 .图 5表 1参 2

野桑蚕钠离子通道蛋白基因Bmmpara的克隆与选择性剪接

昆虫的钠离子通道蛋白是许多神经毒性药物的作用靶标。根据家蚕钠离子通道蛋白基因(GenBank登录号:EU688970)序列设计引物,分段RT-PCR克隆了野桑蚕钠离子通道蛋白基因Bmmpara(GenBank登录号:EU688972)。序列分析表明,Bmmpara基因的cDNA长5553bp,编码1851个氨基酸,与家蚕基因组序列比对,存在34个外显子,其中第2、22、27外显子存在选择性剪接。根据Bmmpara序列和家蚕基因组序列设计引物,采用PCR方法克隆到3段野桑蚕基因组序列,长度分别为1632、536和3220bp。进一步将Bmmpara编码氨基酸序列与野桑蚕基因组比对,发现有a(ENDLGRTKKKK)、b(GL-KAALCGRCVSS)、c(SLINFVAALCGAGGIQAFKTMRTLRALRPLRAMSRMQGMRV)3个选择性微外元,可能存在6种选择性剪接,构成野桑蚕钠离子通道蛋白不同亚型。

钠离子通道基因SCN1A突变及其相关癫综合征

癫痫是多种原因引起的慢性脑功能障碍综合征,是由脑神经元过度同步化放电所导致。近10年来,国际上已发现许多离子通道编码基因是癫的致病基因,故癫又被称为＂离子通道病＂。编码电压门控Na＋通道α1亚单位的基因SCNIA是与癫痫发病相关的最重要的基因之一。

钠离子通道基因SCN1A、SCN2A、SCN1B突变与癫痫

癫痫是一种常见神经系统慢性疾病，是由脑部神经元过度同步化放电所导致。目前发现多种编码电压门控性钠离子通道的基冈突变与癫痫的发生有关。其中大多数突变是在编码钠离子通道α亚基的基因SCN1A、SCN2A和编码B亚基的基因SCN1B上发现的。不同的基因突变导致的癫痫综合征表型轻重不一。

Dravet综合征患儿临床表型与神经元钠离子通道α1亚单位基因突变的相关性分析

目的探讨神经元钠离子通道α1亚单位(SCN1A)基因突变阳性的Dravet综合征患儿的临床表型特点,从而了解Dravet综合征患儿的病变程度与SCN1A基因突变的相关性。方法回顾性分析2014年1月至2017年1月在海南省农垦三亚医院小儿门诊就诊的43例Dravet综合征患儿及其家系成员的临床资料和SCN1A基因检测结果,以及患儿的心电图、脑电图及核磁共振检查结果。结果 31例Dravet综合征患儿发现SCN1A基因突变阳性,突变类型包括错义突变,移码突变、大片段缺失。SCN1A^+组患儿发病年龄为(4.32±0.84)月,小于SCN1A^-组(t=2.354;P<0.05)。1岁前月发作频率SCN1A^+组为3.24±1.13,而SCN1A^-组为1.77±0.45(t=2.435;P<0.05)。SCN1A^+组患儿1年内发生癫痫持续状态次数明显高于SCN1A^-组(t=2.311;P<0.05)。SCN1A^+组中19例患儿出现不同程度的智力减退,而SCN1A^-组中3例患儿出现智力减退(P<0.05)。SCN1A^+组中16例患儿EEG出现背景弥漫性慢波活动,21例为多棘慢波。SCN1A^-组中,2例患儿EEG出现背景弥漫性慢波活动,3例为多棘慢波,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论本研究表明,相比于SCN1A^-组,SCN1A^+组Dravet综合征患儿发病年龄小,1月前发病次数及平均每年发生癫痫持续状态次数多,智力减退患儿比例大,以及脑电图出现背景弥漫性慢波活动、多棘慢波等异常活动比例大。

柑橘全爪螨钠离子通道基因差异性分析

为弄清钠离子通道基因与柑橘全爪螨Panonychus citri噻螨酮抗性的关系,通过柑橘全爪螨转录组分析鉴定了钠离子通道基因;采用序列比对和Sanger测序,分别对柑橘全爪螨敏感品系和噻螨酮抗性品系钠离子通道基因序列进行单核苷酸多态性分析;进一步采用RPKM法和荧光定量PCR对抗性品系和敏感品系钠离子通道基因进行表达差异分析.从柑橘全爪螨转录组中获得了39条钠离子通道基因,相对于敏感品系,抗性品系中有21条表达上调,17条表达下调,Nav1.8.1和Nav1.6.4分别为上调倍数最高的2个钠离子通道基因[log2Ratio(RS/SS)分别为10.59,10.30],进一步荧光定量PCR分析发现,Nav1.8.1和Nav1.6.4上调倍数分别为3.92和1.68;基因序列比较和Sanger测序发现,抗性品系中,Nav1.9.4在344,441,468位和Nav1.7.3在第786分别有3个和1个SNP位点,进一步分析编码的氨基酸序列发现,Nav1.9.4只有第468位G突变为A导致蛋氨酸突变为异亮氨酸,Nav1.7.3在第786位T突变为C导致亮氨酸突变为色氨酸.钠离子通道基因差异性分析及验证为进一步研究柑橘全爪螨抗性分子机理提供了有价值的基因资源.

上皮细胞钠离子通道ENaC及其基因研究现状

人类上皮细胞钠离子通道（hENaC）由α、β、γ3个亚单位组成，分别由CNN1A、SCNN1B、SCNN1G基因所编码。ENaC负责钠离子的限速重吸收，对于维持钠的自身平衡、细胞外液量和血压起重要作用。功能获得性ENaC基因突变可引起一种罕见的遗传性高血压——Liddle综合征；而功能丧失性ENaC基因突变可引起一种遗传性低血压——假性低醛固酮血症；原发性高血压是受遗传因素和环境因素共同影响的复杂性疾病，由于ENaC的维持钠的自身平衡和血压的重要作用，因此ENaC基因作为原发性高血压的候选基因而备受关注。

通腑醒神胶囊对急性缺血损伤大鼠脑钠离子通道基因表达的影响

目的探讨通腑醒神胶囊对大鼠急性局灶性脑缺血再灌注损伤的神经保护作用是否与调节神经细胞膜上Na离子通道基因表达有关。方法观察通腑醒神胶囊治疗对大脑中动脉阻塞模型大鼠各时间点神经功能缺损评分、脑含水量、脑梗死体积的影响;运用荧光定量RT-PCR技术检测各组动物损伤侧及健侧大脑神经细胞膜上Na离子通道α亚基基因各亚型(Nav1.1、Nav1.2、Nav1.3、Nav1.7、Nav1.8)mRNA在不同时间点的表达水平。结果治疗组在1、2、3、7d时神经功能缺损评分,3d时脑含水量,3、7d时的脑梗死体积均较模型组低,差异显著(P<0.01);治疗组损伤侧脑组织在1、2d时Nav1.1mRNA表达水平高于模型组,其中2d时差异显著(P<0.05),但低于健侧、假手术组及对照组(P<0.05);模型组及治疗组损伤侧Nav1.2、Nav1.3、Nav1.7、Nav1.8mRNA的表达水平与健侧、假手术组及对照组相比,在各时间点均未见显著性差异(P>0.05)。结论通腑醒神胶囊对缺血性神经细胞具有保护作用,可能与调节Nav1.1表达有关。

钠离子通道β1亚单位基因型在隐源性癫痫患者中的分布特征及其与脑电图的相关性

目的:探讨钠离子通道β1亚单位基因3个位点(T185M,R85H,C121W)的单核苷酸多态性(SNP)与癫痫的相关性及其与脑电图的关系.方法:采用等位基因特异性引物PCR技术检测SCN1B3个位点的SNP分布频率,并用SAS统计软件对所得数据进行统计分析.结果:在难治性癫痫组中,SCN1B基因变异的SNP在3个位点中的分布频率分别为为51.4%,39.0%,32.2%;在非难治性癫痫组中分布频率分别为52.0%,34.6%,34.7%.两组中SCN1B的3个位点变异基因型及变异等位基因分布频率均较健康对照组高(P<0.05).典型癫痫波脑电图组与不典型的异常脑电图组的基因型频率分布比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论:SCN1B基因任一位点突变与癫痫易感性均具有相关性,且脑电图呈典型癫痫波,但与癫痫是否发展成为难治性癫痫无关.

埃及伊蚊电压依赖性钠离子通道3′端cDNA的克隆及序列分析

目的扩增埃及伊蚊电压依赖性钠离子通道基因3′末端,并对其核苷酸序列进行分析。方法提取埃及伊蚊雌蚊总RNA,以Trsa为反转录引物反转录成单链cDNA,继而设计阳性与阴性对照,采用巢式聚合酶链反应(PCR)和快速扩增cDNA3′末端(3′RACE)技术,对埃及伊蚊电压依赖性钠离子通道基因3′末端进行PCR扩增、克隆与测序。结果获得钠离子通道基因的3′端核苷酸序列共809bp,包括编码区和非编码区poly(A)尾,编码区共编码208个氨基酸。相似性分析结果显示编码区氨基酸序列与家蝇钠离子通道基因3′端氨基酸序列相似性为65%左右。结论成功获得埃及伊蚊钠离子通道基因3′端,为进一步研究该基因的分子生物学特性奠定了基础。