家福捕鸟蛛毒素-22钠通道活性与基本性质分析

家福捕鸟蛛(Selenocosmia jiafu,S.jiafu)是一种生活在中国广西、云南等地的蜘蛛新种.研究发现其粗毒对大鼠背根神经节(Rat dorsal root ganglion,DRG)细胞河豚毒素不敏感型钠通道(tetrodotoxin-resistant,TTX-R)具有抑制作用.为了筛选得到抑制TTX-R活性的毒素分子,经反相高效液相色谱,从家福捕鸟蛛粗毒中分离得到1种新的毒素分子,命名为家福捕鸟蛛毒素-22(Jiafu toxin-22,JFTX-22).MALDI-TOF质谱分析和氨基酸序列分析表明该多肽毒素分子量为2807.227 Da,全序列为RCLPSGKACAGVTQK IPCCGSCVRGKCS.全细胞膜片钳分析表明JFTX-22对DRG细胞TTX-R通道具有抑制作用.此外,采用生物信息学方法初步分析了JFTX-22的基本理化性质、空间结构预测和同源序列比对等.结果表明JFTX-22的全长cDNA为471bp,编码一个65个氨基酸残基多肽.JFTX-22的二级结构主要以无规卷曲为主,其空间结构主要包含无规卷曲和三段反平行beta-折叠.同源序列比对发现JFTX-22跟Covalitoxin-I序列完全一致,与另外三种蜘蛛毒素JZTX-51、U1-theraphotoxin-Pf3和HWTX-X同源性较高.结果表明JFTX-22是一种潜在的具有镇痛活性的新型毒素分子.

模拟缺血后心外膜心室肌细胞钠通道变化的研究

目的 探讨钠通道在缺血性心律失常发生中的作用及其机制。方法 以酶解法分离兔心外膜心室肌细胞 ,并采用膜片钳全细胞记录技术 ,观察灌流正常细胞外液后以及模拟缺血液后 10、2 0及 3 0min的快钠电流 (INa)的大小及动力学变化。结果 心外膜细胞缺血后INa的I V曲线上移 ,模拟缺血前及缺血后 10、2 0及 3 0min的峰电流密度在外层细胞 (n =2 0个细胞 )依次为 ( 12 60± 2 2 6)、( 7 46± 3 45 )、( 5 5 7± 2 3 2 )、( 4 87± 2 70 )pA/pF ,缺血前后比较有显著差异 (P <0 0 5 )。缺血后失活曲线左移 ,失活半电压在缺血前及缺血后 10、2 0、3 0min于外层细胞 (n =18个细胞 )依次为 ( -97 3 8± 5 42 )、( -115 83± 6 16)、( -12 2 0 0± 5 82 )、( -12 8 83± 3 13 )mV ,缺血前后比较有显著差异 (P <0 0 5 )。缺血后INa灭活后的恢复减慢 ,但无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 缺血时钠通道活性的变化可影响心肌兴奋性和传导性 ,可能为心律失常发生的机制之一。

三种蜘蛛粗毒对NG108-15细胞电压门控钠通道的抑制作用

利用小鼠神经细胞瘤×大鼠神经胶质细胞的杂交细胞 NG1 0 8-1 5,通过全细胞记录 ( whole-cellrecording)模式的膜片钳技术 ,检验了虎纹捕鸟蛛 ( Selenocosmia huwena)、海南捕鸟蛛 ( Selenocosmia hainana)和广西大疣蛛 ( Macrotheleguangxia sp)的粗毒对 NG1 0 8-1 5细胞膜上电压门控 TTX敏感型钠电流和延迟整流钾电流的作用 .结果表明 ,三种蜘蛛粗毒对外向延迟整流钾电流没有明显作用 ,但对 TTX敏感型的快钠电流表现出较强的抑制效应 .抑制效应呈量效关系 .三种粗毒抑制钠电流的 EC5 0 相应约为 :3.4 mg/L;1 .8mg/L和 1 1 .0 mg/L.

兔急性心肌梗死后二月心室肌细胞钠离子通道活性的变化

研究急性心肌梗死 (AMI)后心室肌细胞钠离子通道活性的变化。采用结扎兔冠状动脉左前降支的方法建立AMI动物模型 ,应用膜片钳全细胞记录方法 ,观察AMI后 2个月心外膜梗死区心肌细胞钠通道电流 (INa)的变化。结果 :①正常对照组INa电流密度峰值 (去极化电位 - 30mV时 )为 45 .5± 5 .33pA/pF(n =12 ) ,心肌梗死 (简称心梗 )组为 16 .4± 4.43pA/pF(n =13) ,心梗组较对照组明显下降 ,P <0 .0 1。心梗组INa电流 电压关系曲线较对照组明显下移。②心梗组INa失活曲线较对照组明显左移 (即向超级化方向移动 ) ,对照组半数失活电压 (V0 .5)为 - 76 .2± 5 .3mV(n =5 ) ,心梗组V0 .5为 - 82 .4± 5 .6mV(n =12 ) ,P <0 .0 5。③心梗组钠通道灭活后恢复时程较对照组减慢 ,恢复曲线下移。结论 :AMI可导致梗死区心室肌细胞INa下降、钠通道动力学发生变化 ,引起心肌传导速度下降和不应性延长 ,此可能是导致AMI后出现折返性室性心律失常的原因。