钩藤降压解郁方抑制TLR4/NF-кB信号通路对高血压并发抑郁症大鼠海马小胶质细胞极化的影响

目的探讨钩藤降压解郁方(钩藤、天麻、地龙、葛根等)调控TLR4/NF-кB信号通路对高血压并发抑郁症(HD)大鼠海马小胶质细胞极化的影响。方法将40只原发性高血压大鼠随机分为5组:模型组、阳性药组及中药(钩藤降压解郁方)高、中、低剂量组,每组8只;另取8只SD大鼠作为对照组。采用连续42 d慢性应激(CUMS)结合孤养的方式复制HD模型。造模同时给药干预,中药高、中、低剂量组分别给予钩藤降压解郁方29.61、14.81、7.40 g·kg^(-1)灌胃给药;阳性药组给予左旋氨氯地平0.45 mg·kg^(-1)+氟西汀1.8 mg·kg^(-1)灌胃给药;灌胃体积10 mL·kg^(-1),每天1次,连续42 d。采用无创血压计于给药前及每周最末日上午测量大鼠尾动脉收缩压;造模开始后的第2周和最后1周各进行1次糖水偏好行为学检测;造模结束后进行水迷宫实验;ELISA法测定血清炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-10水平;HE染色法及尼氏染色法观察大鼠海马组织神经元病理变化;免疫荧光双染法检测海马区小胶质细胞M1(CD16)、M2(CD206)型表达情况;Western Blot法检测海马组织中TLR4、NF-κB p65蛋白的表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠第1~6周的尾动脉收缩压均显著升高(P<0.01);糖水偏好率显著下降(P<0.01);逃避潜伏期明显延长(P<0.05,P<0.01),穿越平台次数及目标象限停留时间占比显著降低(P<0.01);血清TNF-ɑ、IL-1β含量显著上升(P<0.01),IL-10含量显著下降(P<0.01);胞核深染,胞质固缩,细胞凋亡明显;海马小胶质细胞CD206/CD16荧光强度比明显降低(P<0.05);海马组织TLR4、NF-κB p65蛋白表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,给药组大鼠第1~6周的尾动脉收缩压均显著降低(P<0.01);糖水偏好率均明显上升(P<0.05);血清TNF-ɑ、IL-1β含量显著下降(P<0.01),IL-10含量显著上升(P<0.01);尼氏体丰富,细胞凋亡明显减少。阳性药组及钩藤降压解郁方高剂量组大鼠的逃避潜伏期明显缩短(P<0.05,P<0.01),穿越平台次数及目标象限停留时间占比明显增加(P<0.05);海马小胶质细胞CD206/CD16荧光强度比明显升高(P<0.05,P<0.01);海马组织TLR4、NF-κB p65蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论钩藤降压解郁方可能通过抑制TLR4/NF-кB通路调节HD大鼠海马小胶质细胞极化状态,调控炎症因子分泌,减轻海马神经元损伤。

钩藤降压解郁方对高血压并发抑郁症大鼠学习记忆能力及海马自噬相关蛋白表达的影响

目的研究钩藤降压解郁方(钩藤、天麻、地龙、葛根、丹参等)对高血压并发抑郁症(Hypertension complicated with depression,HD)大鼠学习记忆能力、海马炎症反应和自噬相关蛋白表达的影响。方法将30只自发性高血压大鼠(SHR)随机分为模型组、阳性对照组(苯磺酸左旋氨氯地平0.45 mg·kg^(-1)+盐酸氟西汀1.80 mg·kg^(-1))及钩藤降压解郁方高、中、低剂量组(25.38、12.69、6.34 g·kg^(-1)),另取6只SD大鼠作空白对照组。采用慢性温和不可预见性应激联合孤养的方法干预SHR大鼠,复制HD大鼠模型。造模同时灌胃给药,每天1次,连续6周。采用无创血压计测量大鼠尾动脉收缩压(SBP)和舒张压(DBP);通过Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力;透射电镜观察大鼠海马神经元超微结构;ELISA法检测海马组织中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18及IL-10含量;免疫组化法检测海马组织中自噬相关蛋白Beclin1、Bcl-2的表达;Western Blot法检测海马组织中自噬相关蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ的表达。结果与空白对照组比较,模型组大鼠第1~6周的SBP、DBP均显著升高(P<0.01);第3、4天的逃避潜伏期显著延长(P<0.01);第1次穿越平台区时间显著延长(P<0.01),穿越平台区次数明显减少(P<0.05),平台区滞留时间显著缩短(P<0.01);海马神经元胞体明显肿胀,嵴破坏,细胞核皱缩,出现大量自噬小体;海马组织中IL-1β、IL-18含量显著增加(P<0.01);海马组织中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达比值和Beclin1蛋白表达明显上调(P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著下调(P<0.01)。与模型组比较,钩藤降压解郁方低剂量组大鼠第1、3、4、5、6周的SBP显著降低(P<0.01),第1、3、4、5周的DBP明显降低(P<0.05,P<0.01);钩藤降压解郁方中剂量组大鼠第1、5、6周的SBP显著降低(P<0.01),第4周的DBP明显降低(P<0.05);钩藤降压解郁方高剂量组大鼠第1周的SBP显著降低(P<0.01)。钩藤降压解郁方高、中剂量组大鼠第3天的逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),钩藤降压解郁方高、低剂量组大鼠第4天的逃避潜伏期明显缩短(P<0.05)。钩藤降压解郁方高、中、低剂量组大鼠第1次穿越平台区时间显著缩短(P<0.01),钩藤降压解郁方中、低剂量组大鼠穿越平台区次数明显增加(P<0.05),平台区滞留时间明显延长(P<0.05)。给药组海马神经元损伤程度减轻,细胞核皱缩情况明显改善,自噬小体减少。钩藤降压解郁方高、中剂量组大鼠海马组织中促炎因子IL-1β、IL-18含量显著降低(P<0.05,P<0.01),钩藤降压解郁方高剂量组大鼠海马组织中抗炎因子IL-10含量显著升高(P<0.01)。钩藤降压解郁方高、中、低剂量组海马组织中的LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达比值显著下调(P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著上调(P<0.01);钩藤降压解郁方高、中剂量组大鼠海马组织中Beclin1蛋白表达明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论钩藤降压解郁方可降低HD大鼠尾动脉压,改善其学习记忆能力,缓解海马神经元损伤,其机制可能与减少促炎因子释放,提高抗炎因子水平,调控海马自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1和Bcl-2的表达有关。

钩藤降压解郁方对高血压并发抑郁症大鼠海马突触超微结构及TLR4、NF-κB p65和NLRP3蛋白表达的影响

目的:研究钩藤降压解郁方对高血压并发抑郁症(HD)大鼠学习记忆功能、海马突触超微结构、海马炎症反应及海马Toll样受体4(TLR4)、核因子κB p65(NF-κB p65)和NOD样受体蛋白3(NLRP3)蛋白表达的影响。方法:将35只自发性高血压大鼠随机分为模型组、阳性对照组[苯磺酸左旋氨氯地平(0.45 mg/kg)+盐酸氟西汀(1.80 mg/kg)]和钩藤降压解郁方低、中、高(6.35、12.69、25.38 g/kg)剂量组,另取7只SD大鼠作空白对照组。采用慢性不可预知应激联合孤养的方法干预自发性高血压大鼠复制HD模型。造模同时灌胃给药,1次/d,连续6周。用无创血压计测量尾动脉收缩压和舒张压;Morris水迷宫检测学习记忆能力;透射电镜观察海马突触超微结构;酶联免疫吸附法检测海马炎症因子白介素-1β(IL-1β)、IL-18的水平;免疫组化法检测海马CA1区中TLR4、NF-κB p65和NLRP3蛋白的表达。结果:给药干预结束后,与空白对照组比较,模型组大鼠尾动脉收缩压和舒张压较高(P<0.01);模型组大鼠逃避潜伏期和第一次跨越平台时间延长,目标象限总时间和目标象限总路程减少(P<0.01);模型组大鼠海马突触超微结构模糊,部分突触结构出现融合,突触内线粒体嵴肿胀断裂,突触小泡明显减少,突触后致密物质厚度较小(P<0.01);模型组大鼠海马组织IL-1β、IL-18含量及TLR4、NF-κB p65、NLRP3蛋白表达均升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,阳性对照组和钩藤降压解郁方低、中剂量组大鼠收缩压和舒张压较低(P<0.05或P<0.01);阳性对照组和钩藤降压解郁方低、中、高剂量组大鼠逃避潜伏期和第一次跨越平台时间较短,目标象限总时间和目标象限总路程增加;钩藤降压解郁方高剂量组大鼠突触结构清晰,突触前膜、后膜存在,突触前膜内突触小泡增多,突触后致密物质厚度增大(P<0.01);阳性对照组和钩藤降压解郁方中、高剂量组大鼠海马炎症因子IL-1β和IL-18含量降低(P<0.05);阳性对照组和钩藤降压解郁方低、中、高剂量组大鼠海马TLR4、NF-κB p65和NLRP3蛋白表达减少(P<0.05)。结论:钩藤降压解郁方能降低HD大鼠尾动脉压,改善其学习记忆功能,缓解认知障碍,其机制可能与抑制TLR4、NF-κB p65和NLRP3蛋白表达,减少炎症因子释放,改善海马突触可塑性有关。

钩藤降压解郁方对高血压并发抑郁大鼠血压及抑郁样行为的改善作用

目的观察钩藤降压解郁方对高血压并发抑郁大鼠血压及抑郁样行为的改善作用。方法40只自发性高血压大鼠(SHR),随机均分为模型组、阳性对照组和钩藤降压解郁方低、中、高剂量(6.345、12.69、25.38 g/kg)组,另取8只SD大鼠为正常组。以慢性不可预知性应激(CUMS)联合孤养大鼠的方法复制高血压并发抑郁模型。造模同时灌胃给药,每天1次,连续42 d。采用无创血压仪检测各组大鼠尾动脉血压,旷场实验、糖水消耗实验、强迫游泳实验检测各组大鼠总活动次数、糖水偏好率、强迫游泳不动时间,HE染色和尼氏染色观察海马区神经元的活性、排列情况以及神经元尼氏小体的数量,ELISA法检测大鼠海马组织单胺递质5-HT、NE、DA与炎性因子COX-2、MCP-1、TNF-α水平。结果造模42 d后,与模型组比较,阳性对照组和钩藤降压解郁方低、中剂量组尾动脉收缩压降低(P<0.01),阳性对照组和钩藤降压解郁方中、高剂量组旷场实验总活动次数、糖水消耗率升高(P<0.01),强迫游泳实验不动时间缩短(P<0.01),海马神经元细胞状态好转,排列整齐,少见凋亡细胞,尼氏小体丰富,海马组织中单胺递质5-HT、NE、DA水平升高(P<0.01),炎性因子COX-2、MCP-1、TNF-α分泌减少(P<0.05,P<0.01)。结论钩藤降压解郁方能通过减少海马组织炎性因子分泌,稳定单胺类神经递质表达,缓解海马神经元损伤,实现对高血压并发抑郁症大鼠血压及抑郁样行为的改善作用。

复方钩藤降压解郁方对高血压并发抑郁症大鼠的药效作用及物质基础

目的:探讨复方钩藤降压解郁方对高血压并发抑郁症大鼠模型的药效作用及物质基础。方法:将20只SHR大鼠按随机数字表法分为模型组和复方钩藤降压解郁方组,每组10只。10只SD大鼠作为正常对照组。除正常对照组外,其余两组大鼠复制高血压并发抑郁症模型。给药干预后,测量各组大鼠血压变化情况,并通过Open-field实验、新奇摄食实验和糖水偏好实验,观察各组大鼠的抑郁症状,采用ELISA法检测大鼠海马组织中IL-1β、IL-6的水平。采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)对复方钩藤降压解郁方的化学成分进行定性分析。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠血压明显升高(P<0.01),自主活动减少、摄食潜伏期延长、糖水偏好程度降低(P<0.05或P<0.01),海马炎症因子IL-1β、IL-6水平明显升高(P<0.05)。与模型组比较,复方钩藤降压解郁方组大鼠血压在给药后明显降低(P<0.01),自主活动能力增多、摄食潜伏期缩短、糖水偏好程度升高(P<0.05或P<0.01),海马炎症因子IL-1β、IL-6水平明显降低(P<0.05)。采用UPLC-Q-TOF-MS鉴定出了复方钩藤降压解郁方中51个化学成分,主要包括黄酮类、糖苷类、苯丙素类、二萜类、生物碱类、酚酸及其酯类等,并对各成分的药材来源进行归属。结论:复方钩藤降压解郁方能明显降低高血压并发抑郁症模型大鼠的血压,改善其抑郁症状,下调其海马炎症因子IL-1β、IL-6的含量。利用UPLC-Q-TOF-MS正负离子流图综合分析了复方钩藤降压解郁方的化学成分,为其药效和物质基础的研究提供了实验依据。