神经病理性痛大鼠脊髓背角钾氯共转运体的表达

目的观察左侧坐骨神经分支选择结扎切断(SNI)模型致神经病理性痛大鼠的脊髓背角钾氯共转运体(KCC2)表达的变化。方法将27只健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为SNI组(18只)和假手术组(9只)。SNI组大鼠暴露坐骨神经及其3个末端分支(腓肠神经、腓总神经和胫神经),结扎并切断腓总神经和胫神经,保留腓肠神经完整;假手术组大鼠仅暴露坐骨神经及其分支,不切断。应用vonFrey纤毛检测SNI术后不同时间段的大鼠机械痛阈值;应用免疫印迹技术观察SNI术后不同时间相应的脊髓腰膨大(L4、L5)节段脊髓背角KCC2的表达。结果术后1、3、5、7d,SNI组大鼠左侧后肢的缩足阈值呈显著下降趋势,分别为(3.23±0.49)、(0.60±0.09)、(0.38±0.07)、(0.21±0.06)g,并且在随后的观察期内一直维持在这一低水平。术后1、3、5d,SNI组大鼠腰膨大节段脊髓的左侧背角KCC2的表达量(即KCC2表达量与内参α-tublin表达量的比值)为0.97±0.09、0.32±0.10、0.53±0.15,分别较右侧的1.27±0.08、0.63±0.09、1.11±0.18显著减少(P值均<0.05);术后3d,右侧的表达量为0.63±0.09,较假手术组的1.15±0.13显著下降(P<0.05);至术后7d,脊髓背角两侧KCC2的表达量基本恢复正常水平。结论 SNI模型可致病理性神经痛早期损伤侧脊髓背角KCC2的表达明显减少,可能在慢性神经病理性痛的发展过程中发挥作用。

钾氯共转运体-2调节机制的研究进展

钾氯共转运体-2(KCC2)是阳离子和氯离子共转运体家族中的一员,广泛分布于中枢神经系统(CNS),主要负责把细胞内的氯离子泵出细胞外,维持抑制性神经元的抑制功能所必需的低氯环境。KCC2的下调参与一些神经系统疾病和疼痛的发生和发展,而KCC2本身亦受多种因素的调节。该文就KCC2的调节机制作一综述。

脑源性神经营养因子-B型酪氨酸激酶受体-钾氯共转运体2信号通路在大鼠糖尿病周围神经痛机制中的作用

目的观察鞘内注射B型酪氨酸激酶受体(TrkB)抑制剂K252a对糖尿病大鼠机械性痛阈、脊髓背角脑源性神经营养因子(BDNF)、钾氯共转运体2(KCC2)表达的影响,以了解BDNF-TrkB-KCC2信号通路在糖尿病神经痛机制中的作用。方法第一部分:22只Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠,10只分别于链脲霉素(STZ)注射前及注射后1、2、4周检测其机械性痛阈;上述时间点各取3只大鼠腰膨大处脊髓背角组织,采用Western印迹法检测BDNF、KCC2的表达。第二部分:取40只SD雄性大鼠,随机分为正常对照组、STZ+0.9%氯化钠溶液组、STZ+K252a组、STZ+K252a溶剂组,每组10只。STZ注射4周后,STZ3组分别予鞘内注射0.9%氯化钠溶液10μL、K252a10μg/10μL、K252a的溶剂(0.01%二甲亚砜)10μL,每天1次,连续4d。分别于给药前30min及末次给药后30min,检测大鼠的机械性痛阈值。行为学检测结束后,采用Western印迹法检测各组大鼠腰膨大脊髓背角BDNF、KCC2的表达。结果第一部分:STZ注射后2周,大鼠的机械性痛阈值较注射前及注射后1周显著降低(P值均<0.05);STZ注射后4周,大鼠的机械性痛阈值较注射后2周显著降低(P<0.05)。STZ注射后2周,大鼠脊髓背角BDNF表达水平较注射前及注射后1周显著升高(P值均<0.05);STZ注射后4周,大鼠脊髓背角BDNF表达水平较注射后2周显著升高(P<0.05)。STZ注射后2周,大鼠KCC2表达水平较注射前及注射后1周显著降低(P值均<0.05);STZ注射后4周,大鼠KCC2表达水平较注射后2周显著降低(P<0.05)。第二部分:鞘内给药后,STZ+K252a组机械性痛阈值较给药前显著增加(P<0.05),与正常对照组的差异无统计学意义(P>0.05),STZ+0.9%氯化钠溶液组及STZ+K252a溶剂组与给药前的差异均无统计学意义(P值均>0.05);STZ+K252a组BDNF表达水平较STZ+0.9%氯化钠溶液组及STZ+K252a溶剂组显著降低(P值均<0.05),与正常对照组的差异无统计学意义(P>0.05);STZ+K252a组KCC2表达水平较STZ+0.9%氯化钠溶液组及STZ+K252a溶剂组显著升高(P值均<0.05),与正常对照组的差异无统计学意义(P>0.05)。结论连续鞘内注射K252a后,糖尿病神经痛大鼠机械性痛阈值及脊髓背角BDNF、KCC2表达水平均可恢复正常,BDNF-TrkB信号通路可能通过调节其下游KCC2蛋白的表达参与糖尿病神经痛的形成。

钠钾氯共转运体在γ-氨基丁酸引起的肠神经元兴奋中的作用

γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid, GABA)是成年个体中枢神经系统(central nervous system, CNS)的一种抑制性神经递质,但对未成熟CNS神经元有兴奋作用。出生后GABA对CNS神经元的作用由去极化逐渐转为超极化,这种转变主要是由于大脑Na^+-K^+-2Cl^-共运体1 (Na^+-K^+-2Cl^-symporter 1, NKCC1)表达逐渐减少和K^+-Cl^-共运体2 (K^+-Cl^-cotransporter 2, KCC2)表达增加。与CNS神经元不同,肠神经系统(enteric nervous system, ENS)中未成熟和成体神经元都可被GABA去极化。GABA激发ENS神经元兴奋的分子机制尚不清楚,但与ENS神经元内的高Cl^-浓度有关。本研究目的是检验一个假设,即ENS神经元的细胞内高Cl^-浓度是由NKCCs活动维持的。结果显示,NKCC2免疫反应性(immunoreactivity, IR)在出生后第1天(P1)大鼠结肠ENS中出现,随后持续升高,在P14达到稳定的高水平,并在成年后保持在这一水平。NKCC1的IR出现在P14大鼠的ENS中,并维持到成年。在任何发育阶段的大鼠ENS中都检测不到KCC2的IR。在ENS神经元中,NKCC1和NKCC2均与GABAA受体共同表达。外源性GABA (1 mmol/L)可引起ENS神经元膜去极化。GABA诱导的去极化逆转电位约为-16 m V。NKCC抑制剂布美他尼(50μmol/L)或速尿(300μmol/L)可显著抑制GABA诱导的去极化。布美他尼(50μmol/L)使GABA诱导的去极化逆转电位向超极化方向移动。无论是KCC抑制剂DIOA (20μmol/L)还是Cl^-/HCO3-交换抑制剂DIDS (200μmol/L)对GABA诱发的去极化都没有明显影响。以上结果提示,ENS表达NKCC1和NKCC2,但是不表达KCC2。NKCC1和NKCC2在GABA引起的肠神经元兴奋中起重要作用。

氯胺酮对瑞芬太尼诱导痛觉过敏大鼠脊髓钾氯共转运体2表达的影响

目的探讨预防性皮下注射氯胺酮对瑞芬太尼诱导大鼠痛觉过敏的治疗作用及对脊髓背角钾氯共转运体．2（K＋／Cl-cotransporter2，KCC2）表达的影响。方法成年雄性Sprague—Dawley（SD）大鼠60只，随机分为5组：对照组（C组），切FI痛组（I组），切口痛＋瑞芬太尼组（I＋R组），切口痛＋氯胺酮组（I＋K组）；切口痛＋瑞芬太尼＋氯胺酮组（I＋R＋K组）。采用yonFrey纤维测定术前1d（TO）及术后2h（T1）、6h（T2）、24h（T3）、48h（T4）时大鼠右后爪机械缩足阈值（MWT），在T4时间点取大鼠脊髓腰膨大部，采用免疫荧光法及Western免疫印迹法测定脊髓背角KCC2的表达。结果与C组[术后2h（14．5±1．7）g、术后6h（14．2±1．1）g、术后24h（13．9±1．8）g、术后48h（14．2±1．1）g]比较，其余各组，术后2h[I组（5．6±0．8）g、I＋R组（3．2±1．0）g、I＋K组（6．8±1．7）g、I＋R＋K组（5．1±1．6）g]、术后6h[I组（6．9±1．0）g、I＋R组（4．3±1．2）g、I＋K组（8．0±1．4）g、I＋R＋K组（6．2±1．5）g]、术后24h[I组（7．6±0．9）g、I＋R组（5．4±1．1）g、I＋K组（10．3±1．2）g、I＋R＋K组（7．1±1．1）g]、术后48h[I组（8．9±1．1）g、I＋R组（7．5±1．4）g、I＋K组（11．3±1．2）g、I＋R＋K组（8．3±1．2）g]MWT值显著降低（P〈0．05），术后48hKCC2表达量显著降低（P〈0．05）；与I组[术后2h（5．6±0．8）g、术后6h（6．9±1．0）g、术后24h（7．6±0．9）g、术后48h（8．9±1．1）g]比较，I＋R组在术后各时间点MWT值[术后2h（3．2±1．0）g、术后6h（4．3±1．2）g、术后24h（5．4±1．1）g、术后48h（7．5±1．4）g]降低、术后48hKCC2表达量显著降低（P〈0．05），I＋K组在术后各时间点MWT值[术后2h（6．8±1．7）g、术后6h（8．0±1．4）g、术后24h（10．3±1．2）g、术后48h（11．3±1．2）g]升高、术后48hKCC2表达量显著增加（P〈0．05）；与I＋R组[术后2h（3．2±1．0）g、术后6h（4．3±1．2）g、术后24h（5．4±1．1）g、术后48h（7．5±1．4）g]比较，I＋R＋K组在术后各时间点MWT值[术后2h（5．1±1．6）g、术后6h（6．2±1．5）g、术后24h（7．1±1．1）g、术后48h（8．3±1．2）g]升高（P〈0．05），术后48hKCC2表达量显著增加（P〈0．05）。结论预防性皮下注射氯胺酮可以减少瑞芬太尼诱发的大鼠机械缩足阈值的降低，减轻大鼠脊髓背角KCC2表达的抑制。

K252a通过下调脊髓背角钾氯共转运体-2的表达缓解大鼠术后持续性痛

目的 察鞘内注射酪氨酸激酶受体B（tyrosinekinasereceptorB，TrkB）抑制剂K252a对皮肤／肌肉切口牵拉术（skin／muscleincisionandretraction，SMIR）诱发的术后持续性痛大鼠脊髓背角钾氯共转运体-2（K＋-CI—cotransporter2，KCC2）蛋白表达的影响。方法采用随机数字表法将52只成年雄性SD大鼠随机分成假手术组（对照组）、SMIR组、SMIR＋-甲基亚砜（dimethylsulfoxide，DMSO）组和SMIR＋K252a组，每组13只。于术前1d及术后3、7、12、22、32d测定大鼠机械缩足反射阈值（mechanicalwithdrawalthreshold，MWT），Westernblot测定术后7d大鼠脊髓背角KCC2蛋白的表达。结果与对照组比较，术后7、12、22d时MWT在sMIR组[（22．5±2．3）、（24．9±1．4）、（29．5±2．4）g]和SMIR＋DMSO组[（24．0±1．9）、（24．8±2．3）、（26．7±2．1）g]明显降低（P＜0．05）；与SMIR组比较，术后7、12、22d时MWT在SMIR＋K252a组[（31．6±1．7）、（36．1±2．0）、（38．1±2．1）g]明显上调（P〈0．05）。与对照组比较，术后7d时SMIR组和sMIR＋DMS0组的脊髓背角KCC2表达明显下调（P〈0．05），SMIR＋K252a组未检测到明显变化（P〉0．05）。与SMIR组比较，SMIR＋K252a组的脊髓背角KCC2表达明显上调（P〈0．05）。结论脊髓背角KCC2的表达变化可能参与了大鼠术后持续性痛的形成。

钠钾氯共转运体1与胶质瘤

钠钾氯共转运体1（NKCC1）在恶性胶质瘤中高表达，其与胶质瘤的恶性程度密切相关。NKCC1蛋白在胶质瘤细胞的体积调节方面起重要作用，NKCC1蛋白使胶质瘤细胞自如地变换体积，穿过狭窄的细胞外间隙向远处迁移播散；NKCC1与肿瘤细胞骨架调节也有密切关系。此外，NKCC1亦与细胞周期、神经能活性等其他生物功能密切相关。总之，NKCC1在胶质瘤中扮演了重要的角色。

钾氯共转运体-2和痛觉过敏关系的研究进展

背景钾氯共转运体-2（K^＋-Cl^- eotransporter 2，KCC2）是阳离子-氯离子共转运体（cation-chloride cotransporters，CCCs）家族中的重要一员，其蛋白表达或离子转运活性下降破坏神经细胞内Cl^-隐定性，引起γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid，GABA）能神经细胞发生去抑制，使机体对伤害性刺激敏感性提高，产生痛觉过敏。脑源性神经营养因子／酪氨酸激酶受体B（brain-derived neurotrophic factor／tyrosine receptor kinaseB，BDNF/TrkB）信号通路可以调节KCC2的蛋白表达和离子转运活性，参与多种病因导致的痛觉过敏的发生。目前发现BDNF／TrkB信号通路阻断剂和KCC2激动剂均能够缓解或者翻转神经病理性疼痛和炎性痛觉过敏。目的探讨KCC2在痛觉过敏发生发展中的作用。内容就KCC2与痛觉过敏的相关性进行综述。趋向为痛觉过敏的防治提供新的思路和治疗策略。

高盐饮食对更年期焦虑小鼠海马钾离子-氯离子共转运体2、钠-钾-氯离子失转运体1表达的影响

目的研究高盐饮食对更年期焦虑症小鼠钾离子-氯离子共转运体2(KCC2)、钠-钾-氯离子共转运体1(NKCC1)表达的影响。方法将大鼠随机分为空白组、模型组、4%高盐饮食组、8%高盐饮食组。其中4%高盐饮食组、8%高盐饮食组经高盐饮食干预1个月后,HE染色观察脑部结构,免疫组织化学观察KCC2、NKCC1表达情况。结果高盐饮食使更年期焦虑小鼠海马区锥体细胞排列紊乱,神经元数目明显减少,细胞轮廓模糊,出现大量的空泡现象,细胞形态不规则,细胞间隙明显增大;模型组KCC2表达的阳性细胞明显减少,高盐饮食组阳性细胞极少;模型组NKCC1表达阳性细胞明显增多,高盐饮食组阳性细胞增多更明显。结论高盐饮食加重更年期焦虑症的发生可能与KCC2及NKCC1之间的动态平衡被打破有关。

星形胶质细胞气压损伤后钠-钾-氯共转运体及促分裂原活化蛋白激酶对AQP4表达的影响

目的探讨大鼠星形胶质细胞气压损伤后,钠-钾-氯共转运体(NKCC)、促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)对水通道蛋白-4(AQP4)表达变化的影响和相关机制。方法原代培养SD大鼠大脑皮质星形胶质细胞。实验分为正常对照组、气压损伤组、布美他尼处理组和p38-MAPK抑制剂(SB203580)处理组。布美他尼和p38-MAPK抑制剂均预处理星形胶质细胞30 min后再进行气压损伤。损伤后3 h观察细胞水肿情况,并对AQP4的表达情况进行Western blot检测。结果光学显微镜下观察到气压损伤后的星形胶质细胞较正常对照组细胞明显肿胀,布美他尼和p38-MAPK抑制剂处理组星形胶质细胞水肿较气压损伤组减轻。Western blot检测发现布美他尼处理组和p38-MAPK抑制剂处理组的AQP4表达均较气压损伤组低(P<0.05)。结论星形胶质细胞气压损伤后,AQP4表达上调受NKCC的影响,以及p38-MAPK信号途径的调节。通过抑制NKCC的活性和p38-MAPK信号途径的激活,可降低气压损伤引起的星形胶质细胞AQP4表达的上调,减轻细胞水肿。

低剂量多巴胺对肉鸡肾脏钠钾氯共转运体表达的影响

为研究低剂量多巴胺对肉鸡肾脏钠钾氯共转运体(NKCC2)表达的影响,按常规条件饲养AA肉鸡40羽,25日龄时随机分为对照组和试验组,对照组肉鸡经静脉注射5μg/kg/min 0.9%生理盐水,试验组肉鸡按相同方法注射等体积低剂量左旋多巴胺,并采用组织形态学观察、血尿生化检测、蛋白质免疫印迹试验和RT-q PCR等方法检测肾组织形态、各生化指标的变化、NKCC2蛋白水平和mRNA水平的变化。结果显示:与对照组相比,试验组在给予低剂量左旋多巴胺后,尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)及平均动脉压(m PAP)水平均未发生明显改变(P>0.05);低剂量左旋多巴胺持续给药后,肉鸡肾小管上皮细胞胞膜NKCC2蛋白水平显著降低(P<0.05),细胞质NKCC2蛋白显著升高(P<0.05);然而NKCC2 mRNA水平未发生明显变化(P>0.05)。结论:在不影响肾小球滤过率及血压前提下,低剂量多巴胺能够引起肉鸡机体持续的利钠利尿作用,其机制与NKCC2蛋白的穿梭作用有关。

成年大鼠小脑Purkinje神经元不表达神经元特异性的钾离子氯离子共转运体2

目的:观察神经元特异性标记物钾离子氯离子共转运体2(KCC2)在成年大鼠小脑皮质的表达。方法:成年SD大鼠,4%多聚甲醛灌注固定,取脑,冷冻切片,KCC2和小脑Purkinje神经元标记物Calbindin-D28K在小脑的免疫荧光双标,激光共聚焦显微镜观察。结果:KCC2在颗粒细胞层神经元有丰富的表达,但在Purkinje神经元表达很弱。结论:神经特异性的KCC2可能不是成年大鼠的Purkinje神经元的离子型γ-氨基丁酸受体发挥抑制性作用的主要因素。

海马钠钾氯共转运体1在七氟醚麻醉致新生大鼠神经行为学损伤中的作用

目的:探讨海马钠钾氯共转运体1(Na+-K+-2C1-cotransporter,NKCC1)在七氟醚致新生大鼠神经行为学损伤中的作用。方法:出生6 d的雄性SD大鼠36只,按随机数字表法分为3组(每组12只):对照组(C组)、七氟醚组(S组)、七氟醚+布美他尼组(SB组)。C组吸入30%O 26 h,S组和SB组吸入2.1%七氟醚+30%O 26 h,SB组在七氟醚吸入前15 min腹腔注射布美他尼1.82 mg/kg.4周后,大鼠行高架十字迷宫实验和前脉冲抑制(prepulse inhibition,PPI)实验。行为学测试结束后1周取海马组织,采用实时荧光定量PCR和Western blot方法分别检测NKCC1 mRNA水平和蛋白含量。结果:高架十字迷宫实验中,3组大鼠总运动距离差异无统计学意义(P>0.05)。与C组比较,S组开放臂停留时间缩短,PP3和PP6对应的PPI指数(PPI%)降低(P<0.05);海马NKCC1 mRNA水平和蛋白含量增加(P<0.05);与S组比较,SB组开放臂停留时间延长,PP3和PP6对应的PPI%增加,海马NKCC1 mRNA水平和蛋白含量减少(P<0.05)。结论:七氟醚可致新生大鼠神经行为学损伤,其机制可能与NKCC1有关。

大鼠视上核和室旁核神经元钾离子氯离子共转运体2表达探讨

目的观察神经元特异性标记物钾离子氯离子共转运体2在成年大鼠下丘脑视上核和室旁核的表达。方法成年SD大鼠,4%多聚甲醛灌注固定,取脑,冰冻切片,下丘脑部进行钾离子氯离子共转运体2和神经细胞核抗原免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜观察。结果钾离子氯离子共转运体2在视上核和室旁核神经元中表达很弱。结论下丘脑视上核和室旁核部分神经元缺少神经特异性的钾离子氯离子共转运体2表达。

背根神经节中TRPV1激活对钠-钾-氯共转运体表达和功能的影响

目的:探讨在急性神经源性炎性痛模型中,用辣椒素激活瞬时感受器电位香草酸受体1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)后对背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)细胞钠-钾-氯共转运体(sodium-potassium-chloride co-transorter 1,NKCC1)及其磷酸化蛋白表达变化及功能的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为:正常组(n=24)、辣椒素组(n=36)和辣椒素+布美他尼组(n=6)。运用免疫荧光和Western blotting技术检测NKCC1和p-NKCC1的蛋白分布及其变化;运用膜片钳技术检测GABA激活电流大小;运用氯离子荧光探针检测DRG细胞内氯离子浓度变化。结果:免疫荧光结果显示TRPV1和NKCC1在正常大鼠DRG细胞共表达,辣椒素组NKCC1和p-NKCC1荧光强度高于正常组;行为学结果显示辣椒素组热缩足反射潜伏期减小、冷缩足反射潜伏期延长,给予NKCC1的抑制剂布美他尼预处理后,则能逆转该效果。Western blotting结果显示辣椒素组NKCC1和p-NKCC1的蛋白表达升高;膜片钳结果显示辣椒素组GABA激活电流明显增加,布美他尼可逆转此作用;荧光探针结果显示辣椒素组DRG细胞内氯离子浓度增加,给予布美他尼后DRG细胞中氯离子浓度降低。结论:外源性激活TRPV1后促进了NKCC1的表达增加和功能变化,提示NKCC1参与了激活TRPV1引起的疼痛。

急性肾衰大鼠肾脏上皮钠通道和钠钾氯共转运蛋白的表达

目的:观察急性肾功能衰竭(ARF)时钠转运蛋白NKCC2和γENaC的水平及细胞定位,探讨ARF时水盐代谢障碍的机制。方法:ARF组大鼠肌注甘油建立ARF模型,对照组(Control)则给等量生理盐水;观察肾组织病理学改变,检测血清及尿液生化指标,应用免疫组化和蛋白印迹方法检测肾脏NKCC2和γENaC表达及胞内定位。结果:肌注甘油后第1、2和3天ARF组大鼠尿量分别为(35.2±8.7)、(47.9±11.0)和(43.2±17.0)mL.d-1,明显高于对照组(P<0.05),第4天开始逐渐恢复到对照组水平[(22.0±5.2)mL.d-1];ARF大鼠血肌酐和尿素氮分别为(53.8±12.2)和(9.5±1.2)mmol.L-1,明显高于对照组[分别为(38.9±9.1)和(7.9±1.5)mmol.L-1](P<0.05);ARF组大鼠肾小管管腔变小,上皮细胞发生脂肪变性,管周有炎细胞浸润;免疫组化检测ARF组大鼠NKCC2和γENaC表达增加;蛋白印迹光密度比值分析,肾小管上皮细胞膜NKCC2和γENaC蛋白增加比例(分别为2.54±0.27和1.83±0.23)明显高于细胞质(分别为1.53±0.17和1.21±1.18)(P<0.05)。结论:ARF时细胞膜及细胞质NKCC2和γENaC表达均增高,以细胞膜增高更为明显,提示AFR时肾组织相对正常肾单位代偿性功能增强,通过钠转运蛋白水平及细胞定位的变化参与水盐代谢的调节。

APP/PS1小鼠嗅球神经元的早期树突分支和长度及钾-氯离子共运转体2蛋白表达异常

目的探讨嗅球(OB)神经元的形态和相关蛋白的变化,探讨导致阿尔茨海默病(AD)嗅觉功能障碍的原因。方法采用高尔基-考克斯(Golgi-Cox)染色技术评估AD模型小鼠(APP/PS1小鼠)的OB和前梨状皮质(aPC)的神经元形态变化;使用Sholl分析对神经元的形态学进行测量;采用Western blotting检测蛋白质表达水平。结果高尔基-考克斯染色结果显示,在3~5月龄,该模型鼠尚未表现出AD的病理特征及认知障碍时,OB已经发生神经元树突长度和分支数量的显著减少。Western blotting检测发现,对神经元形态和突触功能至关重要的钾-氯离子共转运体2(KCC2)蛋白表达在3~5月龄APP/PS1小鼠的OB中显著降低。结论异常的神经元形态和KCC2信号途径改变可能是AD早期嗅觉功能障碍的基础;维持KCC2信号正常有望成为干预AD早期嗅觉异常的有效途径之一。

氯离子转运蛋白NKCC1在老年小鼠术后认知功能障碍中的作用

目的探讨氯离子转运蛋白钠离子钾离子氯共转运体1(NKCCl)在老年小鼠术后认知功能障碍(POCD)中的作用。方法选择老年雄性C57BL/6小鼠40只,18~20月龄,体重28~32 g。将小鼠随机分为四组:对照+生理盐水组(N组),对照+布美他尼(NKCC1抑制剂)组(B组),POCD模型+生理盐水组(M组)和POCD模型+布美他尼组(MB组),每组10只。采用异氟醚麻醉和剖腹探查术建立POCD动物模型,于术后3~7 d行旷场与条件恐惧实验评估认知功能;行为学结束后采用Western blot法检测海马组织NKCC1、钾离子氯离子共转运体2(KCC2)、脑源性神经营养因子(BDNF)及突触后密度蛋白95(PSD95)的蛋白含量,免疫组织荧光检测海马组织CA1、CA3、DG区NKCC1免疫荧光强度。结果与N组比较,M组场景僵直时间明显缩短(P<0.05),海马NKCC1蛋白含量明显升高(P<0.05),BDNF、PSD95蛋白含量明显降低(P<0.05),海马组织CA1、CA3、DG区NKCC1免疫荧光强度明显增强(P<0.05)。N组和B组各指标差异均无统计学意义。与M组比较,MB组场景僵直时间明显延长(P<0.05),海马NKCC1蛋白含量明显降低(P<0.05),BDNF、PSD95蛋白含量明显升高(P<0.05),海马组织CA1、CA3、DG区NKCC1免疫荧光强度明显减弱(P<0.05)。结论NKCC1可能在老年小鼠POCD中发挥关键作用,其机制可能与突触相关蛋白BDNF与PSD95表达水平下调有关。

缺血缺氧中心区星形胶质细胞死亡方式与钠钾ATP酶活性及NKCC1表达的关系

目的通过改良的糖氧剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)模型,探讨缺血缺氧中心区星形胶质细胞损伤后的细胞死亡途径与细胞膜损伤中钠钾ATP酶(Na+-K+-ATPase)活性及钠-钾-氯共转运体1(Na+-K+-2Cl--cotransporter 1,NKCC1)表达的关系。方法取出生24h内的SD大鼠海马星形胶质细胞进行体外培养,鉴定其纯度,应用改良的OGD模型,将星形胶质细胞进行OGD(0、1、2、3、4、6h)处理后检测不同时间点细胞的胀亡率、凋亡率、ATP含量、钠钾ATP酶的活性及NKCC1的表达水平。结果星形胶质细胞存活率随OGD时间的延长而降低,OGD 3h后胀亡细胞率超过凋亡细胞率。ATP含量和钠钾ATP酶活性随OGD时间的延长而下降,NKCC1的表达随着OGD时间的延长先增加后减少,在OGD 3h后明显减少。结论缺血缺氧中心区星形胶质细胞死亡在OGD 3h内以凋亡为主,OGD3h后胀亡是细胞死亡的主要方式,这种转化或许与Na+,K+-ATPase活性及NKCC1表达的激活有关。

加强对创伤性脑损伤后早期癫痫机理的研究

创伤性脑损伤（traumatic brain injury，TBI）是神经外科的常见病、多发病，始于致伤外力作用于头部导致的组织机械形变，进而引起原发性损伤和继发性损伤，引起广泛的临床症状和功能障碍，对人类健康危害极大，已经成为目前社会公共卫生问题。