铅对钾通道亚单位和NMDA受体亚单位的影响

[目的 ]研究低浓度铅对大鼠海马神经元钾通道亚单位和NMDA受体亚单位的影响及其作用机制。 [方法 ]应用全细胞膜片钳技术和原位杂交技术。 [结果 ]铅提高了动作电位的发放频率 ,抑制了K+ 通道电流 ,使IA 电流激活电压升高 ,失活时间常数延长 ;铅抑制了IH 电流的大小 ,使得IH 从超级化方向往去极化方向移动 ;增加了ID 的激活时程。铅暴露组 15d大鼠海马CA1,CA4 ,DG区 ,而 2 1d时海马CA4 ,DG区的NR1mRNA表达增强 ;铅暴露组 2 1d大鼠海马CA1,CA2 ,CA4 和DG区的NR2DmRNA表达增高 ;铅暴露组 15d大鼠海马CA1,CA4 ,DG区 ,而 2 1d时海马CA1,DG区的NR3AmRNA表达水平显著降低 ;没有观察到铅对NR2BmRNA表达的影响。还观察到铅可影响海马CA1、CA3 ,DG区的AMPA受体 ,以及CA1和DG区的Kainate受体。 [结论

基因编码ATP敏感性钾通道亚单位Kir6.2的激活突变与持久性新生儿糖尿病

背景:持久性新生儿糖尿病通常出现在出生后前3 个月的时间里,需要胰岛素治疗。多数情况下,其病因尚不清楚。因为ATP敏感的钾通道(KATP)参与了胰腺β细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌,因此我们推测使这一通道(KCNJ11)基因编码的Kir6.2亚单位激活突变,就可以引起新生儿糖尿病。方法:我们对29例患有持久性新生儿糖尿病患者的KCNJ11基因进行测序。

TRPC1与BK-α的表达对大鼠糖尿病肾病的影响

目的 探究瞬时受体电位C1(transient receptor potential channel 1,TRPC1)蛋白和大电导钙离子激活钾通道α亚单位(large conductance Ca^(2+)-activated K^(+)channel α subunit,BK-α)蛋白对大鼠糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)的影响。方法 将SD大鼠随机分为对照组(n=15)和模型组(n=15)。利用高脂饲料和链脲佐菌素(streptozocin,STZ)构建DKD模型。采用血糖分析仪检测大鼠血糖变化;采用全自动生化分析仪检测大鼠肾功能水平;HE染色检测肾组织的病理变化以确定造模成功。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹分别检测肾组织TRPC1和BK-α的mRNA和蛋白表达水平;免疫组化检测TRPC1和BK-α的分布和表达情况。结果 模型组大鼠空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、尿白蛋白排泄率(urinary albumin excretion rates,UAER)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)和肌酐(creatinine,Cr)均显著高于对照组(P <0.01);模型组大鼠肾小管内壁细胞出现膨胀现象,部分细胞脱离;可见肾小管发生病变或死亡;此外,在许多肾小管及肾间质区域发现有中性白细胞及其残骸;以上HE染色结果提示,DKD模型复制成功。TRPC1和BK-α在肾小球部位最为丰富,且模型组大鼠肾组织中TRPC1和BK-α的mRNA和蛋白水平都显著高于对照组(P <0.05)。结论 大鼠糖尿病肾病影响TRPC1和BK-α在肾组织中的分布和表达。

吗啡诱导大鼠镇痛耐受和脊髓GIRK1-2表达减少

【目的】观察G蛋白门控内向整流钾离子通道(GIRK)亚单位GIRK1和GIRK2在吗啡耐受大鼠脊髓背角的表达变化并探讨其调控机制。【方法】成年雄性SD大鼠连续7 d鞘内注射吗啡(15μg/d)建立吗啡耐受模型。在每天吗啡注射前30 min,鞘内注射蛋白激酶C-ε(PKCε)选择性抑制剂εV1-2(10μg),观察对吗啡耐受以及脊髓背角GIRK1和GIRK2表达的影响。24只大鼠随机平均分成四组:生理盐水组(saline)、吗啡组(morphine)、吗啡+生理盐水组(morphine+saline)和吗啡+εV1-2组(morphine+εV1-2)。所有大鼠在1 d、3 d、5 d和7 d,药物注射前和吗啡注射后30 min后检测热痛阈值,在第7天行为学测试结束后,免疫荧光检测脊髓背角GIRK1和GIRK2的表达。【结果】荧光双染显示,GIRK1和GIRK2主要分布于大鼠脊髓背角I-Ⅱ板层,且与μ阿片受体(MOR)共染。与生理盐水组相比,连续7 d鞘内注射吗啡导致吗啡镇痛效应显著下降(P<0.001),同时导致脊髓背角GIRK1(22.45±10.58vs.62.83±20.80,P<0.001)和GIRK2(23.67±8.78 vs.50.17±11.05,P=0.001)表达显著降低。荧光双染显示,PKCε与GIRK1和GIRK2在脊髓背角共染。鞘内注射εV1-2可以有效抑制吗啡耐受的形成(P<0.001),且抑制吗啡诱导的GIRK1(54.50±10.37 vs.19.33±9.48,P<0.001)和GIRK2(39.83±6.24 vs.15.83±9.58,P=0.001)表达降低。【结论】脊髓背角GIRK1和GIRK2下调与吗啡耐受密切相关,PKCε是吗啡诱导GIRK1和GIRK2下调的重要原因。

甲状腺毒性周期性麻痹临床特征及钾离子内向整流通道蛋白18亚单位基因突变研究

目的:研究甲状腺毒性周期性麻痹(TPP)患者的临床特征及钾离子内向整流通道蛋白18亚单位(KCNJ18)基因突变情况。方法 :收集15例临床诊断为TPP的患者病史资料及相关辅助检查。选取同期25例原发性低钾性周期性麻痹(Hypo PP)患者及200名正常人作为对照。所有研究对象均为汉族人。应用聚合酶链反应和DNA测序技术对KCNJ18基因进行突变检测。结果:15例TPP患者中男14例,女1例。平均起病年龄为(27.9±8.3)岁,平均就诊年龄为(35.4±8.5)岁。患者伴有不同程度的高代谢症状,肌无力发作时伴有低钾血症。KCNJ18基因检测在TPP患者中发现G17A、G116A、G119A、C167A、G576C、G735A、A745G 7种基因变异,且这7种基因变异也发现于正常对照及HypoPP患者。在8名正常对照中发现T1206C 1个同义突变,8种基因变异在健康对照组的基因频率均大于1%。结论:G17A、G116A、G119A、C167A、G576C、G735A、A745G及T1206C 8种KCNJ18基因变异是一种多态性改变而非致病突变。

BK通道在心血管疾病领域的研究进展

大电导钙离子激活钾通道(BK通道)是一种广泛分布于体内多种细胞上的离子通道,结构复杂,能与多种其他亚基和离子通道相结合形成复合体产生新的功能,兼有电压依赖性和机械刺激依赖性,承担着细胞绝大多数钾离子的运输功能,能够调控多种细胞的生物功能。其在心血管系统中的作用尤其重要,可以调节血管平滑肌和心肌细胞的收缩功能,介导细胞间的信号转导,减弱血管平滑肌细胞的迁移能力,参与慢性病对心血管系统的影响过程,参与高血压及梗死后心肌的重构过程等。BK通道在心血管中的作用十分重要,并且机制复杂,需进行深入的研究与探讨。

瑞芬太尼下调大鼠背根神经节和脊髓背角GIRK 2的表达

【目的】观察G蛋白门控内向整流钾离子通道亚单位2(GIRK2)在瑞芬太尼诱导的痛觉过敏大鼠背根神经节和脊髓背角中的表达和分布的变化。【方法】成年雄性SD大鼠尾静脉输注瑞芬太尼4μg/(kg·min)2 h建立痛觉过敏模型。瑞芬太尼注射后6 h、1 d、3 d和5 d,采用免疫荧光化学法观察GIRK2在瑞芬太尼诱导痛觉过敏大鼠的背根神经节(DRG)和脊髓背角中分布的变化。采用免疫印迹法检测大鼠背根神经节和脊髓背角GIRK2总蛋白和膜蛋白的表达。最后,采用行为学评价瑞芬太尼输注后,鞘内注射GIRK2特异性激动剂ML297对痛阈的影响。【结果】免疫荧光结果显示,在背根神经节和脊髓背角I-II板层,GIRK2主要与IB4阳性的小神经元及其神经纤维共定位,而瑞芬太尼注射后GIRK2表达显著降低。免疫印迹结果显示,静脉输注瑞芬太尼1 d后,与对照组相比,背根神经节GIRK2总蛋白(0.47±0.10 vs.1.01±0.17,P<0.001)和膜蛋白(0.47±0.11 vs.1.06±0.12,P<0.001)表达水平均显著减少;与背根神经节结果相一致的是,脊髓背角GIRK2总蛋白水平(0.52±0.09 vs.1.10±0.08,P<0.001)和膜蛋白表达水平(0.54±0.10 vs.1.01±0.13,P<0.001)也显著降低。行为学结果显示,与生理盐水组相比,在瑞芬太尼处理大鼠,ML297延长热撤足潜伏期的作用显著降低(P<0.001)。【结论】持续静脉输注瑞芬太尼可能通过诱导大鼠背根神经节和脊髓背角GIRK2表达下调诱发痛觉过敏。

KCNE1基因多态性与心房颤动易感性关系的Meta分析

目的 探讨心肌钾离子通道β亚单位（KCNE1）基因112 G＞A多态性与心房颤动（房颤）易感性的关系.方法 计算机检索PubMed、Embase、Web ofScience、Google学术、CBM、万方、维普、CNKI等中英文数据库,检索从建库开始至2013年6月,对相关资料进行Meta分析,计算优势比（OR）及其95％ CI.结果 共计纳入9个病例对照研究,包括1 792例房颤患者和1 924例健康对照者.Meta分析显示,KCNE1基因112 G＞A基因多态性与房颤易感性增加显著相关（等位基因模型：OR=0.74,95％ CI为0.67 ～0.82,P＜0.01;显性模型：OR=0.73,95％ CI为0.64 ～0.83,P＜0.01;隐性模型：OR =0.65,95％ CI为0.54 ～0.79,P＜0.01;纯合子模型：OR =0.57,95％ CI为0.46 ～0.70,P＜0.01）.结论 KCNE1基因112 G＞A多态性与房颤易感性增加可能存在相关性,可作为诊断房颤的重要生物标志物.

上海地区胰岛功能不足的2型糖尿病患者钾离子内向整流通道蛋白船KCNJ11基因突变筛查

目的 了解上海地区胰岛功能不足的糖尿病患者钾离子内向整流通道蛋白J亚单位11号成员（KCNJ11）基因突变的发生情况.方法 选取上海市第六人民医院内分泌代谢科住院2型糖尿病患者41例,其中男30例,女11例,平均年龄（57±12）岁,胰岛β细胞自身抗体谷氨酸脱羧酶（GAD）、酪氨酸磷酸酶（IA2）检查阴性且糖耐量试验空腹C肽均≤0.20μg/L.应用聚合酶链反应直接测序法进行基因突变筛查.用卡方检验来比较本实验得出的基因型频率与国际人类基因组单体型图计划（HapMap）中国人数据库是否存在差异.结果 在1例患者中见到1个同义突变（即S274S）.此外,还发现4个变异位点,分别为rs5215、rs5218、rs5219、rs1800854.4个位点的等位基因频率与HapMap中国人数据库比对差异无统计学意义（x2值依次为0.010、0.391、0.025、0.407,均P＞0.05）.结论 KCNJ11基因突变可能不是糖尿病患者胰岛功能低下的主要原因.

黄芪多糖对糖尿病肾病小鼠肾组织血管内皮损伤的影响

目的观察黄芪多糖(APS)对KK-Ay小鼠肾组织血管内皮损伤的影响。方法将C57BL/6J小鼠设为空白组,将KK-Ay小鼠通过喂养高脂高糖饲料建立糖尿病肾病模型,造模后随机分为模型组、对照组(25 mg·kg^(-1)厄贝沙坦灌胃)和低、中、高实验剂量组(100、200、400 mg·kg^(-1)APS灌胃),每日灌胃1次,连续4周。给药干预4周后,心脏取血。用免疫组织化学染色方法测定小鼠肾组织中内皮素-1(ET-1)、血管性血友病因子(vWF)的蛋白表达水平;用蛋白质印迹法分析小鼠肾组织中NT蛋白的表达水平;用实时荧光定量聚合酶链反应法检测小鼠肾组织中SUR亚基2B/内整流钾离子通道亚单位6.1(SUR2B/Kir6.1)mRNA的表达水平。结果空白组、模型组、对照组和低、中、高剂量实验组小鼠的ET-1蛋白表达水平分别为0.25±0.05、0.43±0.02、0.28±0.06、0.39±0.01、0.34±0.03和0.30±0.02;vWF蛋白表达水平分别为0.24±0.04、0.35±0.02、0.26±0.03、0.34±0.03、0.30±0.03和0.28±0.02;NT蛋白表达水平分别为1.00±0.03、1.67±0.06、1.05±0.05、1.39±0.08、1.37±0.07和1.14±0.05;SUR2B mRNA表达水平分别为1.00±0.02、0.18±0.01、0.83±0.02、0.29±0.01、0.46±0.02和0.63±0.02;Kir6.1 mRNA表达水平分别为1.00±0.03、0.13±0.02、0.74±0.02、0.21±0.02、0.33±0.05和0.51±0.02。对照组、高剂量实验组上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论黄芪多糖能够改善DN小鼠肾组织血管内皮损伤,保护微血管结构与功能,延缓DN病情进展。

特发性癫痫基因定位的研究进展

近几年来,特发性癫痫的基因定位研究取得了很大的进展,通过连锁分析已定位了20多个染色体位点,少数致病基因已经被证实并克隆。其中钾离子通道亚单位、钠离子通道亚单位以及烟碱乙酰胆碱受体亚单位的编码基因突变均有报道。这些发现提示了配体门控和电压门控离子通道在特发性癫痫病因学上的重要地位。

KCNJ11基因单核苷酸多态性E23K与2型糖尿病遗传易感性相关性分析

目的探讨钾离子内向整流通道蛋白亚单位11（potassium ion inward rectifying channel protein subunit 11,KCNJ11）基因E23K多态性与2型糖尿病（type 2 diabetes，T2DM）遗传易感性的关系。方法100例确诊T2DM患者为观察组，体检健康者100例为对照组，采用PCR-限制性片段长度多态性检测2组外周血有核细胞基因组DNA中KCNJ11基因E23K位点多态性，比较2组KCNJ11基因频率和等位基因频率，分析T2DM的相关危险因素。结果观察组体质量指数、腰臀比、三酰甘油、总胆固醇、空腹血糖、空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数和非酯化游离脂肪酸高于对照组，高密度脂蛋白胆固醇、胰岛0细胞功能指数低于对照组（P〈0．05）；观察组KCNJ11基因E23K位点EE、EK、KK3种基因频率（38％、44％、18％）和E、K等位基因频率（60％、40％）与对照组（EE为33％、EK为52％、KK为15％，E为59％、K为41％）比较差异均无统计学意义（P〉0．05）；胰岛β细胞功能指数（OR=0．096，95％CI：0．316～0．441，P=0．000）、高密度脂蛋白胆固醇（OR=0．084，95％CI：0．039～0．268，P=0．000）是T2DM的保护因素，三酰甘油（OR=1．382，95％CI：1．082～1．964，P=0．041）、腰臀比（OR：2．765，95％CI：1．182～7．562，P=0．040）是T2DM的危险因素。结论KCNJ11基因E23K多态性与T2DM遗传易感性关系无明显相关性，胰岛β细胞功能指数和高密度脂蛋白胆固醇是T2DM的保护因素，三酰甘油和腰臀比是T2DM的危险因素。