钾离子通道相互作用蛋白1与γ-氨基丁酸能神经元在戊四唑致癫痫大鼠海马部位的改变

目的研究钾离子通道相互作用蛋白1(KChIP1)在癫痫发生过程中的变化及其与γ-氨基丁酸(GABA)能神经元的关系。方法成年大鼠制作急性戊四唑癫痫模型,免疫组织化学法结合激光扫描共聚焦显微镜技术观察大鼠脑中KChIP1免疫阳性神经元与GABA能阳性神经元在海马部位的表达及改变。结果急性戊四唑癫痫大鼠海马部KChIP1阳性神经元数较对照组明显增加(P<0.05),GABA能阳性神经元、KChIP1/GABA双标阳性神经元数与对照组无显著性差异(P>0.05);KChIP1和GABA能阳性神经元在海马部位的共存率约为63.9%。结论KChIP1在癫痫发生中可能起重要作用;KChIP1与GABA能神经元虽有密切的共存关系,但在功能上并不完全一致。

钾离子通道相互作用蛋白1在大鼠脑中的分布及其与GABA能神经元的关系

目的与方法用免疫组织化学法结合激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察钾离子通道相互作用蛋白1(KChIP1)免疫阳性神经元在大鼠脑中的分布及其与GABA能阳性神经元的定位关系,研究钾离子通道相互作用蛋白1(KChIP1)的功能。结果KChIP1免疫阳性神经元在大鼠皮层、海马均可见,海马部位KChIP1阳性神经元主要分布于锥体细胞层、齿状回颗粒细胞层;KChIP1阳性和GABA能阳性神经元在正常大鼠大脑顶叶皮层和海马部位的共存比例分别为63.94%、63.11%。结论在大鼠脑内,KChIP1主要与抑制性GABA能神经元共存发挥其调节神经元兴奋性的功能。

钾离子通道相互作用蛋白与Kv4

钾离子通道为心肌复极的主要离子通道,其中构成Ito的Kv4主要存在于左心室外膜下心肌。但体外表达研究表明,Kv4通道电流与体内存在的Ito性质并不一致,这表明还存在其他一些辅助亚单位与Kv4共同构成Ito,其中一类最重要的β亚单位为钾离子相互作用蛋白(KChIPs)。KChIPs为一类钙离子结合蛋白,现已发现4种KChIPs基因。KChIPs与Kv4在体外共同表达时,KChIPs可增加Kv4在细胞膜上的表达,减慢失活以及加速复活,这样使产生的电流接近于体内存在的心室Ito。

钾离子通道Kv4.2、Kv4.3及其相互作用蛋白KChIP1在电点燃癫模型中的表达变化

目的探讨钾离子通道Kv4.2、KV4.3及其相互作用蛋白KChIP1在杏仁核电点燃模型中的表达变化及可能的作用。方法刺激SD大鼠右侧杏仁核7d以建立电点燃模型,提取杏仁核总RNA进行RT-PCR,研究致后KChIP1、Kv4.2和Kv4.3在mRNA水平表达变化;同时提取杏仁核全细胞蛋白进行Western印迹,观察KChIP1和Kv4.2在蛋白水平表达变化。结果在mRNA表达水平,双侧杏仁核KChIP1在模型组[包括Racine分级的高发作级别组(47.0±3.6)和低发作级别组(41.3±10.2)]明显高于假手术组(20.0±10.6)(P高=0.000,P低=0.001),Kv4.2和Kv4.3在模型组亦升高,在高发作级别组有升高更明显倾向。双侧KChIP1和Kv4.2的蛋白表达水平变化与mRNA表达变化相似。各组点燃刺激侧与非刺激侧相比mRNA及蛋白表达差异均无统计学意义。结论Kv4.2、Kv4.3及KChIP1在电点燃癫模型双侧杏仁核都有不同程度的升高(KChIP1升高更明显,Kv4.2和Kv4.3的变化在发作级别高时升高较明显),这提示钾通道的改变不是癫灶点燃的原因,而可能是机体对发作的保护性反应。

瞬时外向钾电流及通道异常致心力衰竭心律失常的研究进展

慢性心力衰竭恶性心律失常发病率、致死率高,严重影响心力衰竭患者生活质量。心肌细胞离子通道异常导致动作电位时程(APD)延长,进而诱发异常触发活动是心力衰竭心律失常发生的主要机制。瞬时外向钾电流(I to)主要参与心肌细胞动作电位(AP)的1期复极,对心力衰竭时APD延长具有重要作用;钾通道相互作用蛋白2(KChIP 2)是I to通道上的的重要功能亚单位,对I to具有关键性调控作用,KChIP 2基因敲除大鼠心肌细胞I to几乎完全消失,心律失常易感性显著增加。本文对慢性心力衰竭心律失常的钾离子通道机制研究进展进行综述,以期为心力衰竭心律失常的治疗靶点提供思路。

COS-7细胞株中KCNE2与KChIP2c共表达对Kv4.2电流复活的影响

目的探讨当钾通道相互作用蛋白(KChIP2)和KCNE2共表达时对电压依赖性钾通道Kv4.2电流复活的影响。方法采用COS-7株细胞表达系统模拟生理条件,将Kv4.2、KChIP2c和KCNE2 cDNA以3∶1∶1的分子比同时转染至COS-7株细胞,用膜片钳的方法记录全细胞电流,用免疫组化聚焦实验和免疫荧光成像证实细胞表达cDNAs编码的蛋白质。结果 KChIP2c加速了Kv4.2的复活,KCNE2与KChIP2c共表达进一步加速了电流的复活,导致了在Kv4.2电流恢复中的"超射"峰电流,一种人类瞬间外向电流(Ito)特有的现象。结论 Kv4.2与KChIP2c和KCNE2的共表达可产生与人类天然Ito相似的电流,提示KChIP2c和KCNE2同时参与构成心肌细胞Ito的电生理特性。

柴胡疏肝汤对慢性颞叶癫痫大鼠海马Kv4.2及KChIP1通道蛋白表达的影响

目的:观察柴胡疏肝汤对匹罗卡品导致的慢性颞叶癫痫大鼠海马A型钾离子通道电压门控型钾通道4.2(Kv4.2)及钾离子通道相互作用蛋白1(KCh IP1)表达的影响。方法:SPF级Wistar大鼠80只,ip匹罗卡品,经过潜伏期后有自发发作即为成功模型,将成功模型随机分为模型组、钾通道开放剂瑞替加滨组、柴胡疏肝汤低、中、高剂量组,每组10只,另设正常组10只,分别给予瑞替加滨12.5 mg·kg^(^(-1))·d^(^(-1)),柴胡疏肝汤低、中、高剂量2.5,5,10 g·kg^(^(-1))·d^(^(-1)),正常组与模型组对应给予等体积生理盐水,连续干预8周,2次/d。通过视频录像监测系统观察各组癫痫发作次数的变化;通过免疫组化法、蛋白质免疫印迹(Western blot)检测各组大鼠海马Kv4.2通道蛋白和KCh IP1蛋白表达。结果:连续干预8周后,与模型组比较,瑞替加滨、柴胡疏肝汤低中、高剂量组大鼠癫痫发作次数均有不同程度的减少(P<0.05,P<0.01),而F组发作次数最少(P<0.01);与正常组比较,模型组海马区两蛋白的表达均明显降低(P<0.05),瑞替加滨、柴胡疏肝汤低中、高剂量组Kv4.2表达较模型组升高(P<0.05),其中瑞替加滨组与柴胡疏肝汤低高剂量组表达量相近。瑞替加滨、柴胡疏肝汤低高剂量组海马KCh IP1的表达也较模型组升高(P<0.05)。结论:柴胡疏肝汤中、高剂量能减少癫痫发作次数,其可能的机制是上调Kv4.2通道蛋白和KCh IP1蛋白表达。

过表达KCNIP1蛋白对原代培养海马神经元兴奋性的影响

目的 探讨过表达钾离子通道相互作用蛋白I（KCNIP1）对原代培养海马神经元A型钾电流及神经元兴奋性的影响。方法 构建增强型绿色荧光蛋白质粒DNA（pEGFP-KCNIP1），利用脂质体方法转染体外原代培养海马神经元，采用全细胞膜片钳技术记录转染后神经元的钾电流及神经元动作电位发放情况。对照组转染未携带目的基因的质粒载体pEGFP。结果 pEGFP-KCNIP1质粒转染神经元可导致KCNIP1的表达增高。KCNIP1的过表达导致海马神经元瞬时外向钾电流较对照组显著增加[分别为（0．96±0．17）nA、（0．72±0．09）nA]，差异有统计学意义（P〈0．05）；对稳态外向型钾电流无显著影响。与对照组比较过表达KCNIPl的神经元诱发动作电位的发放频率降低，阈下电位反应性降低，膜电阻增加，差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论 KCNIPl表达上升后可通过增加瞬时外向钾电流降低神经元的兴奋性。